本发明涉及植物提取物
技术领域：
，具体的说是涉及一种青刺果提取物及其制备方法和应用。
背景技术：
：青刺果，是蔷薇科扁核木属(prinsepiaroyle)植物扁核木(prinsepiautilisroyle)的果实，又名青刺尖，炮筒果、牛奶捶、鸡蛋糕、梅花刺、枪子果、阿那斯、蒙自扁核木。青刺果主要分布在云南、贵州、四川等省区，盛产于云南丽江海拔2000m以上的无污染地带。青刺果的果期是4～5月，成熟的鲜青刺果紫红色，表面光滑，干果为深褐色或黑色，果皮皱缩贴于果核上，果核不易破碎，断面黄白色，种子富含油脂，出油率在30％左右，可供食用和日用。青刺果可入药，云南省纳西族、白族、彝族、摩梭族等少数民族中已有上千年的应用历史。据现代资料记载，青刺果主治目翳多泪，消化不良等。国内外医药工作者已从该植物中分离、鉴定出黄酮类成分左旋-表儿茶精；木脂素类成分刺尖醇；脂肪酸类成分棕榈酸、硬脂酸、花生酸、油酸、亚油酸、亚麻酸等。在上个世纪二十年代，美籍奥地利植物学家josephcharlesfrancisrock博士在云南丽江考察期间，将发现的神奇植物青刺果披露于世，并在哈佛大学阿诺德植物园保存了当年关于青刺果的文献记载和植物标本。青刺果油最早记载于神秘的东巴经文中，具有悠久的护发和护肤方面的传统应用历史和文化，例如青刺果油涂抹在皮肤上，可以防止蚊虫叮咬或消除跌打扭伤形成的肿块，防止皮肤干裂、瘙痒和治愈冻疮；用青刺果油擦头发能抑制头发脱落，有使白发变黑的作用；人体皮肤局部烧伤和烫伤，用青刺果油涂于患处可防止伤口感染，加快伤口愈合且不留疤痕；用青刺果油涂抹新生婴儿的皮肤，使皮肤干爽润滑，并能促进婴儿胎毛的脱落；青刺果被称为吉祥树和百花之王。综合目前青刺果的研究，主要集中于青刺果油的研究，关于青刺果非油类成分的研究较少，目前青刺果在化妆品方面的应用也均以青刺果油为主要研究对象。中国专利cn104523479a公开了青刺尖提取物在美白用品中的应用 及美白用品，其是少有的关于青刺果非油类成分的研究报道，其公开了青刺尖总多酚富集的提取物，特别是其中的青刺尖酯醇在美白用品中的应用；另一个中国专利cn103720635a公开了一种抗皱眼霜，其以野桐提取物、青刺果提取物、灵芝提取物和银杏提取物为组成成分，其中青刺果提取物以丙烷为提取溶剂。但是，在这两个现有技术中，前者仅是提供了青刺果非油类提取物在美白方面的应用，而后者以丙烷为提取溶剂，得到的是青刺果油类非极性成分，并不能将黄酮等极性较大的成分提取出来。目前尚未发现青刺果非油类提取物在化妆品领域中抗老化方面的用途和报道。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于提供一种青刺果提取物及其制备方法和应用，使所述青刺果提取物具有显著的自由基清除活性或/和促进人成纤维细胞增殖的作用，进而能够防止肌肤老化、维持年轻健康的肌肤状态。为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种青刺果提取物的制备方法，包括：步骤1、青刺果加水或乙醇提取，获得青刺果粗提液；步骤2、青刺果粗提液浓缩，上样至大孔吸附树脂，依次用去离子水、30％乙醇溶液、70％乙醇溶液和95％乙醇溶液洗脱，分别收集各洗脱部位后减压蒸馏除去溶剂，相应地得到青刺果水洗脱部位、30％乙醇溶液洗脱部位、70％乙醇溶液洗脱部位和95％乙醇溶液洗脱部位；步骤3、所述青刺果粗提液蒸干获得青刺果粗提物，青刺果水洗脱部位、30％乙醇溶液洗脱部位、70％乙醇溶液洗脱部位、95％乙醇溶液洗脱部位均为所制得的青刺果提取物。本发明所述青刺果提取物可以是其中任意一种，也可以是它们任意种类的混合物。作为优选，所述制备方法步骤1为：青刺果按1g:20ml比例加入去离子水或乙醇，室温超声提取2次，每次1小时，离心，上清液过滤，收集所有滤液，获得青刺果粗提液。本发明所述青刺果粗提液根据提取溶剂的不同，对应分为青刺果水粗提液和青刺果乙醇粗提液，蒸干后仅为青刺果粗提物，对应分为青刺果醇提物和青刺果水提物。作为优选，步骤1所述乙醇为70％乙醇溶液。作为优选，所述大孔吸附树脂为ab-8型大孔吸附树脂。同时，本发明还提供由上述本发明任意一项制备方法提取的青刺果提取物，所述青刺果提取物为非油类青刺果提取物，含有较多的总黄酮，优选地，所述青刺果提取物总黄酮含量为0.04-2.97％。将本发明制备方法获得青刺果提取物进行dpph法自由基清除活性的测定，结果显示所述青刺果提取物具有较高的自由基清除率，而市售的青刺果油的自由基清除率较低，两者相比差别显著；另外，在抗老化活性检测中，即检测对人成纤维细胞增殖的促进作用，结果显示本发明所述青刺果醇提物及其30％乙醇溶液洗脱部位具有促进人成纤维细胞增殖的作用，而市售青刺果油以及其他提取物并无促进作用。基于以上有益效果，本发明提出了所述青刺果提取物在抗衰老和制备抗衰老化妆品中的应用，还有在清除自由基和/或促进人成纤维细胞增殖，以及在制备清除自由基产品和/或促进人成纤维细胞增殖产品中的应用。作为上述应用的具体方式，本发明提供了一种抗衰老的皮肤外用剂，包含由本发明上述任意一项制备方法制备的青刺果提取物。由以上技术方案可知，本发明以青刺果为原材料，经过适宜方法提取获得青刺果非油类提取物，所提取的青刺果提取物具有显著的自由基清除活性和促进人成纤维细胞增殖的作用，能够用于皮肤抗衰老和相关化妆品中。具体实施方式本发明实施例公开了一种青刺果提取物及其制备方法和应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品和应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文所述的产品及方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种青刺果提取物及其制备方法和应用进行详细说明。实施例1：本发明所述青刺果提取物的制备在50g市售青刺果中加入70％乙醇100ml，在室温超声提取2次，每次1小时，合并2次的提取液，获得青刺果乙醇粗提液。将青刺果乙醇粗提液分为两个部分，取50ml直接蒸干得到青刺果醇提物，将剩余的50ml减压浓缩至25ml，用ab-8树脂柱吸附，然后依次用去离子水、30％乙醇、70％乙醇和95％乙醇洗脱，分别收集后减压蒸馏除去溶剂，相应地得到青刺果水洗脱部位a、30％乙醇洗脱部位b、70％乙醇洗脱部位c和95％乙醇洗脱部位d；上述得到的青刺果醇提物与青刺果水洗脱部位a、30％乙醇洗脱部位b、70％乙醇洗脱部位c和95％乙醇洗脱部位d均为本发明所述青刺果提取物。实施例2：本发明所述青刺果提取物的制备在50g市售青刺果中加入去离子水100ml，在室温超声提取2次，每次1小时，合并2次的提取液，获得青刺果水粗提液。将青刺果水粗提液分为两个部分，取50ml直接蒸干得到青刺果水提物，将剩余的50ml减压浓缩至25ml，用ab-8树脂柱吸附，然后依次用去离子水、30％乙醇、70％乙醇和95％乙醇洗脱，分别收集后减压蒸馏除去溶剂，相应地得到青刺果水洗脱部位e、30％乙醇洗脱部位f、70％乙醇洗脱部位g和95％乙醇洗脱部位h；上述得到的青刺果水提物与青刺果水洗脱部位e、30％乙醇洗脱部位f、70％乙醇洗脱部位g和95％乙醇洗脱部位h均为本发明所述青刺果提取物。实施例3：青刺果提取物中总黄酮含量测定以实施例1和实施例2各青刺果提取物为检测对象，按照中华人民共和国药典(2010版)方法，以芦丁为标准品，测定提取物中总黄酮含量。测定步骤为：1)标准曲线制作：精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，各加30％乙醇至6.0ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml。混匀，放置6分钟，再加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟。加氢氧化钠试液10ml，再加30％乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白， 用紫外-可见分光光度法，在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。2)取一定量样品置于25ml容量瓶中，其它按照标准曲线制备步骤，自“加亚硝酸钠溶液1ml”起，依法测定吸光度，同时取供试品溶液3ml，除不加氢氧化钠试液外，其余同上操作，作为空白，计算提取物中总黄酮含量(以芦丁计)。结果见表1。表1青刺果提取物中总黄酮含量样品名称总黄酮含量％青刺果醇提物1.35青刺果溶剂洗脱部位a0.04青刺果溶剂洗脱部位b0.89青刺果溶剂洗脱部位c2.71青刺果溶剂洗脱部位d0.93青刺果水提物1.46青刺果溶剂洗脱部位e0.05青刺果溶剂洗脱部位f0.93青刺果溶剂洗脱部位g2.97青刺果溶剂洗脱部位h1.10由表1可知，在本发明中所述青刺果提取物含有较多的总黄酮，经过大孔树脂分离后，总黄酮含量有明显提高，活性也明显增强。实施例4：抗氧化活性的测定(dpph法自由基清除活性的测定)将实施例1和实施例2制备的各青刺果提取物，用dpph法测定其清除自由基活性。测定步骤为：将样品分别用去离子水配制成水溶液，移取2ml于10ml具塞试管中，加人2mldpph乙醇溶液(2*10-4mol/l)，充分混匀，室温静置，30min后用分光光度计测定517nm波长的吸光度a517(以乙醇为参比)；同时测定2mldpph溶液与2ml乙醇混合后的吸光度ac，以及2ml提 取液与2ml乙醇溶液混合后的吸光度a0。平行测定三次，取平均值，根据以下公式计算自由基清除率，记过见表2。自由基清除率＝(1-(a517-a0)/ac)*100％。表2dpph法自由基清除活性的测定结果样品名称样品浓度mg/ml自由基清除率％青刺果油(市售)525青刺果醇提物0.0574青刺果溶剂洗脱部位a0.0556青刺果溶剂洗脱部位b0.0588青刺果溶剂洗脱部位c0.0584青刺果溶剂洗脱部位d0.0567青刺果水提物0.0581青刺果溶剂洗脱部位e0.0573青刺果溶剂洗脱部位f0.0596青刺果溶剂洗脱部位g0.0591青刺果溶剂洗脱部位h0.0585由表2可知，本发明中所述各青刺果提取物均具有优异的自由基清除作用，可作为抗氧化剂，而且抗氧化活性远远高于市售的青刺果油。因此，可以将各青刺果提取物单独或联合在皮肤外用剂中，作为防止肌肤老化、维持年轻健康的肌肤状态的抗氧化活性物使用。实施例5：抗老化活性的测定(人成纤维细胞增殖的促进作用测定)按照实施例1和实施例2制备的各青刺果提取物用去离子水配制成质量百分比为0.01％溶液，加入到人成纤维细胞培养液中，以不含样品的去离子水为空白对照。培养48小时后，随机取一部分细胞样本，将细胞染色后，用酶标仪测定475nm处吸光度，评估促进人成纤维细胞增殖的作用，空白对照的 增殖率为100％，若增殖率高于100％为对细胞由促进增殖作用，高于120％为对细胞有显著促进增殖作用，结果见表3。表3抗老化活性测试样品名称人成纤维细胞增殖率％青刺果油(市售)99.03±1.69青刺果醇提物104±1.37青刺果溶剂洗脱部位a83.3±6.83青刺果溶剂洗脱部位b138.63±3.71青刺果溶剂洗脱部位c96.77±6.08青刺果溶剂洗脱部位d94.63±5.03青刺果水提物97.35±3.14青刺果溶剂洗脱部位e88.11±2.85青刺果溶剂洗脱部位f89.42±5.58青刺果溶剂洗脱部位g98.82±8.71青刺果溶剂洗脱部位h92.25+7.72空白对照100由表3可知，在本发明中青刺果醇提物以及30％乙醇洗脱部位b对人成纤维细胞具有的促进增殖作用，其中青刺果30％乙醇洗脱部位b促进增殖作用效果更加显著，而对比市售的青刺果油，并无促进人成纤维细胞增殖的作用。因此，可以将青刺果提取物配合在皮肤外用剂中，作为防止肌肤老化、维持年轻健康的肌肤状态的抗老化剂使用。以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。当前第1页12