本发明公开了一种广谱蛇毒解毒剂的制备方法，属于医药合成领域。
背景技术：
地球上有蛇类1000种左右，其中对人类有危害的约占15%，其分布极广，除南极洲，大西洋纬度400以上的冷水中，和少数岛屿如爱尔兰、冰岛、加勒比海和太平洋种的大部分海岛外，在高至5000米的高山，冷至北极环，都有毒蛇存在。因此毒蛇咬伤是世界性问题，只是发病率不同而已。其中最多的热带和亚热带山区，特别是发展中国家。毒蛇虽危害人类，但蛇也是人类的朋友，对环境的生态平衡起着重要作用，毒蛇还可以开发为治疗某些疾病的特效药。据最近的蛇伤流行病学研究表明，全球每年发病率在5/106以上，中毒率为50%。尽管有抗蛇毒血清治疗，但每年仍有125000人死于蛇伤，100000人留下严重后遗症。
随着多年来的应用和生产工艺的改进，抗毒血清已被公认为蛇伤的最有效治疗药物。到1991年初，全世界已生产不同种类的抗毒蛇血清168种。但抗毒蛇血清并非十全十美，在应用中暴露出许多缺点，（1）抗毒血清专一性强，用药前必须鉴定蛇种，这往往不易做到；（2）必须在咬伤后立即用药才能取得最好疗效，这在交通不变的山区很难做到；（3）毒蛇毒液中的小肽能引起休克，其抗原性差，血清中的抗体达不到有效的治疗浓度；（4）抗毒血清易发生过敏，因此有些临床专家强调不要将抗毒血清作为蛇伤的常规用药，要在出现明显全身中毒症状时才用；（5）抗毒血清价格昂贵，有效期不长，一般医院不可能经常储备。
技术实现要素：
本发明主要解决的技术问题：针对传统蛇毒解毒剂使用抗毒血清专一性强，用药前需要鉴定蛇种，且易发生过敏，有效期不长，导致中毒者无法及时接受治疗的问题，提供了一种广谱蛇毒解毒剂的制备方法，本发明首先取奶汁树叶研磨后用酶解，得滤液，再取鲜柿经洗涤后粉碎成果浆，经果胶酶水解后用柠檬酸调节pH，再加入葡萄酒酵母密闭发酵，使柿子中有效成分分散于发酵产生的酒精中，再取雄黄，粉碎后用盐酸除杂，经干燥后将其与柿子发酵滤液，奶汁树叶酶解滤液按比例混合，经旋蒸浓缩后封装得广谱蛇毒解毒剂。本发明充分利用植物提取物对蛇毒中酶的抑制作用，配合除杂后的雄黄与蛇毒中酶蛋白分子上的巯基和羟基结合形成稳定的络合物或环状化合物，使其失活，达到快速解毒的效果，且使用后不会发生过敏现象，封装后可长期存放，可大规模推广使用。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
（1）采集新鲜奶汁树叶300～500g，经人工用去离子水反复清洗3～5次后，加入石磨中研磨，在研磨过程中混入800～1000mL去离子水，收集得绿色浆液，将其转入烧杯中，再加入0.3～0.5g纤维素酶和0.2～0.4g果胶酶，随后将烧杯转入水浴磁力搅拌器中，于温度为42～45℃，转速为600～800r/min条件下，恒温搅拌反应30～45min，抽滤，去除滤饼，得奶汁树叶酶解滤液，备用；
（2）称取新鲜柿子600～800g，经人工用质量浓度为0.05～0.07%高锰酸钾溶液反复清洗去除表面污物，再用去离子水洗涤3～5次，随后人工去除柿子果柄和花盘，再将柿子转入植物组织粉碎机中，粉碎成果浆，将所得果浆转入烧杯中，再加入0.3～0.5g果胶酶，随后将烧杯转入水浴磁力搅拌器中，于温度为42～45℃，转速为540～600r/min条件下，恒温搅拌反应1～3h；
（3）待反应结束，静置，待烧杯中果浆自然冷却至室温，滴加浓度为0.5～0.7mol/L柠檬酸溶液调节pH至4.4～4.6，将烧杯中物料转入盛有2～3L去离子水的发酵罐中，再加入20～30g葡萄酒酵母，于温度为28～30℃条件下，密闭发酵5～7天，过滤，除去滤渣，收集得柿子发酵滤液，备用；
（4）称取雄黄200～300g，加入万能粉碎机中，粉碎后过120～180目筛，得雄黄粉，并将其加入烧杯中，再加入300～400mL质量浓度为37%盐酸，用玻璃棒搅拌混合10～15min后，静置18～24h，过滤，除去滤液，用去离子水洗涤滤饼至中性，再将滤饼转入烘箱中，于80～85℃条件下，干燥4～5h，得除杂雄黄粉；
（5）按重量份数计，在混料机中依次加入100～120份步骤（3）备用柿子发酵滤液，8～12份上述所得除杂雄黄粉，4～6份步骤（1）备用奶汁树叶酶解滤液，以450～500r/min转速搅拌混合40～60min，再将混料机中物料转入旋转蒸发仪中，于温度为65～70℃条件下，旋蒸浓缩至原体积的1/2，出料，自然冷却至室温，封装，即得广谱蛇毒解毒剂。
本发明的应用方法：被毒蛇咬伤后，迅速用清水冲洗伤口，并用力按压住伤口周围，随后将本发明所得广谱蛇毒解毒剂涂抹于伤口处，待4～6min后，挤压伤口，用清水清洗除去伤口血液，用本发明所得解毒剂再次涂抹于伤口处，再用纱布包扎，每隔6～8h换药一次，重复给药3～5天，本发明所得解毒剂携带和使用方便，使用后患者中毒现象立刻缓解，经重复给药后毒性可彻底解除，且对使用者皮肤无刺激，无毒副作用，可大规模推广使用。
本发明的有益效果是：
（1）本发明所得解毒剂携带和使用方便，对人体皮肤无毒副作用，可作为蛇伤的常规用药推广使用；
（2）本发明所用原材料来源广泛，廉价易得，成品可长期存放，疗效好，使用前无须鉴定蛇种，具有广谱抗毒效果，具有广阔的市场前景。
具体实施方式
采集新鲜奶汁树叶300～500g，经人工用去离子水反复清洗3～5次后，加入石磨中研磨，在研磨过程中混入800～1000mL去离子水，收集得绿色浆液，将其转入烧杯中，再加入0.3～0.5g纤维素酶和0.2～0.4g果胶酶，随后将烧杯转入水浴磁力搅拌器中，于温度为42～45℃，转速为600～800r/min条件下，恒温搅拌反应30～45min，抽滤，去除滤饼，得滤液，备用；称取新鲜柿子600～800g，经人工用质量浓度为0.05～0.07%高锰酸钾溶液反复清洗去除表面污物，再用去离子水洗涤3～5次，随后人工去除柿子果柄和花盘，再将柿子转入植物组织粉碎机中，粉碎成果浆，将所得果浆转入烧杯中，再加入0.3～0.5g果胶酶，随后将烧杯转入水浴磁力搅拌器中，于温度为42～45℃，转速为540～600r/min条件下，恒温搅拌反应1～3h；待反应结束，静置，待烧杯中果浆自然冷却至室温，滴加浓度为0.5～0.7mol/L柠檬酸溶液调节pH至4.4～4.6，将烧杯中物料转入盛有2～3L去离子水的发酵罐中，再加入20～30g葡萄酒酵母，于温度为28～30℃条件下，密闭发酵5～7天，过滤，除去滤渣，收集得发酵滤液，备用；称取雄黄200～300g，加入万能粉碎机中，粉碎后过120～180目筛，得雄黄粉，并将其加入烧杯中，再加入300～400mL质量浓度为37%盐酸，用玻璃棒搅拌混合10～15min后，静置18～24h，过滤，除去滤液，用去离子水洗涤滤饼至中性，再将滤饼转入烘箱中，于80～85℃条件下，干燥4～5h，得除杂雄黄粉；按重量份数计，在混料机中依次加入100～120份备用发酵滤液，8～12份上述所得除杂雄黄粉，4～6份备用滤液，以450～500r/min转速搅拌混合40～60min，再将混料机中物料转入旋转蒸发仪中，于温度为65～70℃条件下，旋蒸浓缩至原体积的1/2，出料，自然冷却至室温，封装，即得广谱蛇毒解毒剂。
实例1
采集新鲜奶汁树叶300～500g，经人工用去离子水反复清洗3～5次后，加入石磨中研磨，在研磨过程中混入800～1000mL去离子水，收集得绿色浆液，将其转入烧杯中，再加入0.3～0.5g纤维素酶和0.2～0.4g果胶酶，随后将烧杯转入水浴磁力搅拌器中，于温度为42～45℃，转速为600～800r/min条件下，恒温搅拌反应30～45min，抽滤，去除滤饼，得滤液，备用；称取新鲜柿子600～800g，经人工用质量浓度为0.05～0.07%高锰酸钾溶液反复清洗去除表面污物，再用去离子水洗涤3～5次，随后人工去除柿子果柄和花盘，再将柿子转入植物组织粉碎机中，粉碎成果浆，将所得果浆转入烧杯中，再加入0.3～0.5g果胶酶，随后将烧杯转入水浴磁力搅拌器中，于温度为42～45℃，转速为540～600r/min条件下，恒温搅拌反应1～3h；待反应结束，静置，待烧杯中果浆自然冷却至室温，滴加浓度为0.5～0.7mol/L柠檬酸溶液调节pH至4.4～4.6，将烧杯中物料转入盛有2～3L去离子水的发酵罐中，再加入20～30g葡萄酒酵母，于温度为28～30℃条件下，密闭发酵5～7天，过滤，除去滤渣，收集得发酵滤液，备用；称取雄黄200～300g，加入万能粉碎机中，粉碎后过120～180目筛，得雄黄粉，并将其加入烧杯中，再加入300～400mL质量浓度为37%盐酸，用玻璃棒搅拌混合10～15min后，静置18～24h，过滤，除去滤液，用去离子水洗涤滤饼至中性，再将滤饼转入烘箱中，于80～85℃条件下，干燥4～5h，得除杂雄黄粉；按重量份数计，在混料机中依次加入100～120份备用发酵滤液，8～12份上述所得除杂雄黄粉，4～6份备用滤液，以450～500r/min转速搅拌混合40～60min，再将混料机中物料转入旋转蒸发仪中，于温度为65～70℃条件下，旋蒸浓缩至原体积的1/2，出料，自然冷却至室温，封装，即得广谱蛇毒解毒剂。
被毒蛇咬伤后，迅速用清水冲洗伤口，并用力按压住伤口周围，随后将本发明所得广谱蛇毒解毒剂涂抹于伤口处，待4min后，挤压伤口，用清水清洗除去伤口血液，用本发明所得解毒剂再次涂抹于伤口处，再用纱布包扎，每隔6h换药一次，重复给药3天，本发明所得解毒剂携带和使用方便，使用后患者中毒现象立刻缓解，经重复给药后毒性可彻底解除，且对使用者皮肤无刺激，无毒副作用，可大规模推广使用。
实例2
采集新鲜奶汁树叶300～500g，经人工用去离子水反复清洗3～5次后，加入石磨中研磨，在研磨过程中混入800～1000mL去离子水，收集得绿色浆液，将其转入烧杯中，再加入0.3～0.5g纤维素酶和0.2～0.4g果胶酶，随后将烧杯转入水浴磁力搅拌器中，于温度为42～45℃，转速为600～800r/min条件下，恒温搅拌反应30～45min，抽滤，去除滤饼，得滤液，备用；称取新鲜柿子600～800g，经人工用质量浓度为0.05～0.07%高锰酸钾溶液反复清洗去除表面污物，再用去离子水洗涤3～5次，随后人工去除柿子果柄和花盘，再将柿子转入植物组织粉碎机中，粉碎成果浆，将所得果浆转入烧杯中，再加入0.3～0.5g果胶酶，随后将烧杯转入水浴磁力搅拌器中，于温度为42～45℃，转速为540～600r/min条件下，恒温搅拌反应1～3h；待反应结束，静置，待烧杯中果浆自然冷却至室温，滴加浓度为0.5～0.7mol/L柠檬酸溶液调节pH至4.4～4.6，将烧杯中物料转入盛有2～3L去离子水的发酵罐中，再加入20～30g葡萄酒酵母，于温度为28～30℃条件下，密闭发酵5～7天，过滤，除去滤渣，收集得发酵滤液，备用；称取雄黄200～300g，加入万能粉碎机中，粉碎后过120～180目筛，得雄黄粉，并将其加入烧杯中，再加入300～400mL质量浓度为37%盐酸，用玻璃棒搅拌混合10～15min后，静置18～24h，过滤，除去滤液，用去离子水洗涤滤饼至中性，再将滤饼转入烘箱中，于80～85℃条件下，干燥4～5h，得除杂雄黄粉；按重量份数计，在混料机中依次加入100～120份备用发酵滤液，8～12份上述所得除杂雄黄粉，4～6份备用滤液，以450～500r/min转速搅拌混合40～60min，再将混料机中物料转入旋转蒸发仪中，于温度为65～70℃条件下，旋蒸浓缩至原体积的1/2，出料，自然冷却至室温，封装，即得广谱蛇毒解毒剂。
被毒蛇咬伤后，迅速用清水冲洗伤口，并用力按压住伤口周围，随后将本发明所得广谱蛇毒解毒剂涂抹于伤口处，待5min后，挤压伤口，用清水清洗除去伤口血液，用本发明所得解毒剂再次涂抹于伤口处，再用纱布包扎，每隔7h换药一次，重复给药4天，本发明所得解毒剂携带和使用方便，使用后患者中毒现象立刻缓解，经重复给药后毒性可彻底解除，且对使用者皮肤无刺激，无毒副作用，可大规模推广使用。
实例3
采集新鲜奶汁树叶300～500g，经人工用去离子水反复清洗3～5次后，加入石磨中研磨，在研磨过程中混入800～1000mL去离子水，收集得绿色浆液，将其转入烧杯中，再加入0.3～0.5g纤维素酶和0.2～0.4g果胶酶，随后将烧杯转入水浴磁力搅拌器中，于温度为42～45℃，转速为600～800r/min条件下，恒温搅拌反应30～45min，抽滤，去除滤饼，得滤液，备用；称取新鲜柿子600～800g，经人工用质量浓度为0.05～0.07%高锰酸钾溶液反复清洗去除表面污物，再用去离子水洗涤3～5次，随后人工去除柿子果柄和花盘，再将柿子转入植物组织粉碎机中，粉碎成果浆，将所得果浆转入烧杯中，再加入0.3～0.5g果胶酶，随后将烧杯转入水浴磁力搅拌器中，于温度为42～45℃，转速为540～600r/min条件下，恒温搅拌反应1～3h；待反应结束，静置，待烧杯中果浆自然冷却至室温，滴加浓度为0.5～0.7mol/L柠檬酸溶液调节pH至4.4～4.6，将烧杯中物料转入盛有2～3L去离子水的发酵罐中，再加入20～30g葡萄酒酵母，于温度为28～30℃条件下，密闭发酵5～7天，过滤，除去滤渣，收集得发酵滤液，备用；称取雄黄200～300g，加入万能粉碎机中，粉碎后过120～180目筛，得雄黄粉，并将其加入烧杯中，再加入300～400mL质量浓度为37%盐酸，用玻璃棒搅拌混合10～15min后，静置18～24h，过滤，除去滤液，用去离子水洗涤滤饼至中性，再将滤饼转入烘箱中，于80～85℃条件下，干燥4～5h，得除杂雄黄粉；按重量份数计，在混料机中依次加入100～120份备用发酵滤液，8～12份上述所得除杂雄黄粉，4～6份备用滤液，以450～500r/min转速搅拌混合40～60min，再将混料机中物料转入旋转蒸发仪中，于温度为65～70℃条件下，旋蒸浓缩至原体积的1/2，出料，自然冷却至室温，封装，即得广谱蛇毒解毒剂。
被毒蛇咬伤后，迅速用清水冲洗伤口，并用力按压住伤口周围，随后将本发明所得广谱蛇毒解毒剂涂抹于伤口处，待6min后，挤压伤口，用清水清洗除去伤口血液，用本发明所得解毒剂再次涂抹于伤口处，再用纱布包扎，每隔8h换药一次，重复给药5天，本发明所得解毒剂携带和使用方便，使用后患者中毒现象立刻缓解，经重复给药后毒性可彻底解除，且对使用者皮肤无刺激，无毒副作用，可大规模推广使用。