专利名称：物理改性后的眼镜蛇蛇毒在制备治疗关节炎药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明药物新用途技术领域，具体涉及一种物理改性后的眼镜蛇蛇毒在制备治疗关节炎药物中的用途。
背景技术：
蛇毒是由蛇的毒腺分泌的多种组分构成的复杂混合物。新鲜毒液呈蛋清样粘稠液体，具有特殊的腥味。不同蛇种毒液色泽各异，中华眼镜蛇蛇毒呈淡黄色。蛇毒的干物质中 90%以上是蛋白质，是其毒性和其生物学活性的主要成分。中华眼镜蛇蛇毒成分主要有眼镜蛇蛇毒因子(1% _2%)、心脏毒素(又名细胞毒素40%-50%)、神经毒素(10%)等其它类蛋白质。祖国传统医学认为眼镜蛇及其毒性成分可通经络，祛风湿，并具有强身健体之功效。早在二十世纪初，人们就开始应用蛇毒来缓解恶性肿瘤疼痛、神经痛和关节痛，随后出现一系列关于蛇毒有类似吗啡样镇痛作用的报道。随着研究的不断深入，现在，蛇毒及其制品已应用于临床，除了镇痛作用外，研究发现在抗风湿、抗肿瘤以及在神经系统疾病治疗方面都有很好的疗效。临床上观察发现眼镜蛇蛇毒对类风湿关节炎患者有明显疗效，特别能明显改善晚期类风湿关节炎患者关节疼痛。
发明内容
本发明目的在于提供一种物理改性后的眼镜蛇蛇毒在制备治疗关节炎药物中的应用，提供了一种治疗关节炎的新思路、新方法。为了解决现有技术中的这些问题，本发明提供的技术方案是本发明目的是提供改性中华眼镜蛇蛇毒在制备治疗炎性增生和关损伤药物中的用途。—种物理改性后的眼镜蛇蛇毒在制备治疗关节炎药物中的应用。优选的，所述物理改性后的眼镜蛇蛇毒是将眼镜蛇蛇毒用去离子水溶解后加热变性，加热温度在50 100°C之间，加热时间为Imin 30min后得到的。优选的，所述物理改性后的眼镜蛇蛇毒选自物理改性后的中华眼镜蛇蛇毒或物理改性后的泰国眼镜蛇蛇毒。优选的，所述关节炎包括具有炎性增生或关节损伤的疾病。优选的，所述物理改性后的眼镜蛇蛇毒的给药剂型选自口腔速溶药膜、口服液、胶囊、涂剂、巴布剂、喷雾剂和注射剂。优选的，所述物理改性后的眼镜蛇蛇毒与其他药物活性成分组成复方制剂或物理改性后的眼镜蛇蛇毒与药用辅料形成单方制剂。本发明中眼镜蛇蛇毒为眼镜蛇总毒，将其物理改性后可用于制备治疗炎症性增生和关节损伤药物。所述的眼镜蛇蛇毒为中华眼镜蛇总蛇毒，根据成份和药效的相同性，所述蛇毒还包括泰国眼镜蛇蛇毒。所述药物可以制备成选自以下的剂型口腔速溶药膜、口服液、胶囊、 涂剂、巴布剂、喷雾剂和注射剂。当然，所述药物还包括各种单方和复方制剂。本发明涉及中华眼镜蛇蛇毒在制备治疗炎症性增生和关节炎药物中的用途。本发明经动物实验证实物理改性后的中华眼镜蛇总毒在药学上有效量(如大鼠10-3000 μ g/ kg，人1 ΙΟΟΟμ g/kg)范围内能抑制炎性疼痛、炎性增生，并对佐剂性关节炎有明显的治疗作用，其能减轻关节肿大，疼痛和关节损伤等症状，具有用量小、安全、可口服、可注射、可透过口鼻粘膜和皮肤给药等优点。本发明通过中华眼镜蛇总毒经物理方法处理达到减毒增效目的，物理处理后的眼镜蛇毒有抑制无菌棉球诱导的炎症性肉芽增生、抑制免疫佐剂诱发的关节肿胀，疼痛和关节损伤，因此具有治疗关节炎的作用，其疗效超过未经处理的眼镜蛇毒或纯化的神经毒素 (Cobratoxin)。所述药物包括口服液、口腔速溶药膜、胶囊、涂剂、巴布剂、喷雾剂和注射剂等，所述药物还包括各种单方和复方制剂。中华眼镜蛇蛇毒在临床上已用于治疗风湿和缓解恶性肿瘤疼痛、神经痛和关节痛等，但都用纯化的神经毒素、多种蛇毒的混合制剂或眼镜蛇毒和其它中药的复方制剂。鉴于中华眼镜蛇毒毒性比较大，蛇毒中的药用成分主要是蛋白质，其结构和生物活性可以被理化因素改变。蛇毒在用过氧化氢处理后，二硫键被打开，其毒性大大降低，但是镇痛作用也几乎消失，提示生物学活性被破坏。而蛋白质加热后可发生可逆性变性，变性后空间结构发生了改变，或部分大分子蛋白质因加热部分分解为小分子量蛋白质。小鼠试验证明这种加热变性之后的蛇毒毒性明显减少，而药效增加。本发明人发现加热变性的中华眼镜蛇蛇毒对甲醛引起的炎性疼痛、鸡蛋清引起的肿胀、无菌纸片引起的肉芽肿、完全弗氏佐剂导致的动物关节肿胀、疼痛和关节损伤有明显的缓解作用，提示对风湿、类风湿性关节炎有很好的治疗作用。这一发现，将对炎性疼痛、炎性增生性疾病、风湿类风湿性关节炎的研究和药物开发产生重大的影响，并有临床实用价值，为中华眼镜蛇蛇毒开辟临床新的用途。所述的眼镜蛇总毒是在用去离子水溶解的情况下，加热温度为50 100°C之间， 时间在Imin 30min后得到的。相对于现有技术中的方案，本发明的优点是1.采用经物理改性的中华眼镜蛇总毒，毒性低而药效高。2.中华眼镜蛇蛇毒不仅能改善甲醛所致的炎性疼痛、鸡蛋清所致的足肿胀，还能减轻纸片引起的肉芽肿重量。3.中华眼镜蛇蛇毒不仅能改善原发性关节炎足肿胀，还能提高对机械性痛的阈值。4.中华眼镜蛇蛇毒不仅能改善继发性关节炎关节肿大、足肿胀和疼痛等症状，还能改善软骨和滑膜的病理改变。5.中华眼镜蛇蛇毒不仅能降低继发性关节炎炎性因子肿瘤坏死因子-α水平，还能提高抗炎因子白细胞介素-10的水平。6.中华眼镜蛇蛇毒用量少，有效范围大，从10 3000 μ g/kg都有很好的治疗类风湿性关节炎的作用。人用剂量约为1 ΙΟΟΟμ g/kg。7.加热变性之后的中华眼镜蛇蛇毒组药效优于雷公藤治疗组，并且优于不加热处理组和神经毒素。
本发明公开了中华眼镜蛇蛇毒在制备治疗炎性增生和关节炎药物中的用途。本发明发现改性中华眼镜蛇总毒在(10-3000yg/kg)范围内能抑制炎性疼痛、炎性增生和佐剂性关节炎有明显的治疗作用，其能减轻关节肿大，疼痛和关节损伤等症状，具有用量小、安全、可口服、可注射、可透过口鼻粘膜和皮肤给药等优点。
下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述图1为中华眼镜蛇蛇毒给药Mi后对甲醛致炎致痛添足时间的影响；图2为中华眼镜蛇蛇毒对纸片诱导的肉芽肿重量的影响；图3为各种药物对比治疗类风湿性关节炎大鼠软骨的药效病理切片结果；图4为各种药物对比治疗类风湿性关节炎大鼠滑膜的药效病理切片结果。
具体实施例方式以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解，这些实施例是用于说明本发明而不限于限制本发明的范围。实施例中采用的实施条件可以根据具体实验的条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。实施例物理处理后的中华眼镜蛇毒的动物药效学实验在中华眼镜蛇蛇毒在治疗类风湿性关节炎中的动物实验中，实施例采用灌胃给药，给药剂量在10-3000 μ g/kg，一天一次。本实施例动物实验研究情况如下甲醛致炎性痛模型是化学伤害性刺激引起的持续疼痛的有效模型，广泛应用于疼痛机制的研究及镇痛药的筛选。将KM小鼠随机分为6组(η = 12)雌性各半，体重18-22g: 生理盐水对照组、中华眼镜蛇蛇毒加热小剂量组(30yg/kg)、中剂量组(90yg/kg)、大剂量组(270 μ g/kg)、中剂量不加热组(90 μ g/kg)、Cobratoxin (30 μ g/kg)。单次给予中华眼镜蛇蛇毒他后，于小鼠右侧足底皮下注射5%甲醛溶液20 μ 1致痛，立即放回透明观察容器内，用计时器分别记录小鼠添足时间(秒)，记录两个时相。第I时相为急性期即致痛后的0 5min，第II时相为强直期即致痛后20 30min。蛇毒中剂量和大剂量蛇毒明显减少甲醛所致的炎性疼痛小鼠的添足时间，优于中剂量不加热组和Cobratoxin。结果见图1
为中华眼镜蛇蛇毒给药他后对甲醛致炎致痛添足时间的影响(f ±SD,n=12)；与对照组相比*P < 0. 05, **P < 0. Ol0炎症往往伴有红、肿、热、痛。总体来说炎症分为三个时相。第一个时相是血管渗透性增加引起血管内容物渗入到组织间隙所致，称之为急性阶段。第二个时相是白细胞从血液渗透到组织间隙中，称之为亚急性阶段。第三个时相是肉芽肿形成阶段，称之为慢性修复性阶段。鸡蛋清是含有很多成分的异物，通过足底皮下注射形成急性非特异性炎症，观察给予蛇毒对足肿胀的影响。10%鸡蛋清右足足底皮下注射0. Iml引起足肿胀，于注射之前连续五天灌胃预防给药，在注射蛋清之前测量大鼠右足的足体积为基础值，并连续测量注射蛋清后0. 5h、lh、2h、4h这四个时间点的右足足体积，观察指标为四个时间点的右足足体积与蛋清注射之前的足体积差值。0.证肿胀最为明显，在Ih中剂量和大剂量蛇毒能明显改善足肿胀，在其余的时间点具有改善足肿胀的趋势。结果见表1。
表 权利要求
1.一种物理改性后的眼镜蛇蛇毒在制备治疗关节炎药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述物理改性后的眼镜蛇蛇毒是将眼镜蛇蛇毒用去离子水溶解后加热变性，加热温度在50 100°C之间，加热时间为Imin 30min后得到的。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述物理改性后的眼镜蛇蛇毒选自物理改性后的中华眼镜蛇蛇毒或物理改性后的泰国眼镜蛇蛇毒。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述关节炎包括具有炎性增生或关节损伤的疾病。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述物理改性后的眼镜蛇蛇毒的给药剂型选自口腔速溶药膜、口服液、胶囊、涂剂、巴布剂、喷雾剂和注射剂。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述物理改性后的眼镜蛇蛇毒与其他药物活性成分组成复方制剂或物理改性后的眼镜蛇蛇毒与药用辅料形成单方制剂。
全文摘要
本发明公开了一种物理改性后的眼镜蛇蛇毒在制备治疗关节炎药物中的应用。本发明经动物实验证实物理改性后的中华眼镜蛇总毒在(10-3000μg/kg)范围内能抑制炎性疼痛、炎性增生和佐剂性关节炎有明显的治疗作用，其能减轻关节肿大，疼痛和关节损伤等症状，具有用量小、安全、可口服、可注射、可透过口鼻粘膜和皮肤给药等优点。
文档编号A61K35/58GK102406665SQ20111036192
公开日2012年4月11日 申请日期2011年11月16日 优先权日2011年11月16日
发明者朱扣柱, 秦正红 申请人:苏州人本药业有限公司