本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种从积雪草中提取三萜酸类物质的方法。
背景技术：
积雪草(Centella asiatica(L.)Urban)为伞形科积雪草树植物，因其叶子酷似马蹄状或半个铜钱，所以又名马蹄草、连钱草等，民间也有地方称其为胡薄荷、地钱草等。积雪草在许多国家和地区的传统医药领域中的应用历史悠久，我国中医中药对积雪草的内服和外用已有两千年历史，最早被《神农本草经》一书所收载。据《本草纲目》记载，积雪草味苦、辛，性寒，无毒，归肝、脾、肾、胃经，其功效为活血、消肿止痛，并有清热解毒、利尿等。积雪草的化学成分主要有三萜类、黄酮类、多炔烯类和挥发油类等。三萜类主要有三萜皂苷类，如积雪草苷、羟基积雪草苷等，和三萜酸类，如积雪草酸、羟基积雪草酸等。积雪草的化学成分中，三萜酸类物质是研究最早，生物学活性研究最深入的一大类组分。积雪草三萜酸类物质主要由积雪草酸和羟基积雪草酸组成，它们属于乌苏烷型的五环三萜酸类，具有治疗皮肤创伤，抗炎、抗抑郁、抗肿瘤和修复神经损伤、保护心脑血管等多种药理作用。积雪草三萜酸类一般先用溶剂法提取，然后采用有机溶剂萃取，最后过硅胶色谱柱，用石油醚-丙酮体系洗脱。然而上述方法不仅繁琐，有机溶剂不易分离，目标成分的损耗较大，收率较低，而且提取的三萜酸类物质的纯度也较小。
技术实现要素：
本发明解决的技术问题是提供一种从积雪草中提取三萜酸类物质的方法，该方法提取得到的三萜酸类物质收率大，纯度高。
本发明提供的技术方案是提供一种从积雪草中提取三萜酸类物质的方法，包括以下步骤：
1)将积雪草粉碎，用60～70v％乙醇溶液回流提取，将提取液过滤，滤液回收溶剂，再加40～50℃水溶解，过滤，将滤渣溶于50～60v％乙醇溶液，得到粗提液；
2)往粗提液加入稀土盐混合，搅匀，得到混合液；
3)将混合液上X-5型号大孔树脂柱，先水洗至无色，然后用体积浓度为50～70v％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得到三萜酸类物质。
步骤1)中，乙醇的用量为积雪草重量的10～20倍，回流提取1～3次，每次1～3h。
体积浓度为60～70％的乙醇可充分溶解积雪草中的三萜类物质，包括三萜类皂苷和三萜酸类物质。由于积雪草皂苷的分子中往往结合有多数糖分子，羟基数目多，能表现出一定的亲水性，但是亲水性不强，微溶于水中，而三萜酸类极性较小，不能溶于水中。因此采用40～50℃温水可帮助积雪草总皂苷溶解，积雪草三萜酸类物质不溶于热水中，将滤液过滤，取滤渣溶于乙醇，可达到去除积雪草总皂苷的目的。
步骤2)中，所述稀土盐为稀土氯化物、稀土硫酸盐或稀土硝酸盐。稀土氯化物可以是氯化镧、氯化铈、氯化镨、氯化钕、氯化钐、氯化铕、氯化钆、氯化铽、氯化镝、氯化钬、氯化铒、氯化铥、氯化镱、氯化镥、氯化钪和氯化钇；稀土硫酸盐可以是硫酸镧、硫酸铈、硫酸镨、硫酸钕、硫酸钐、硫酸铕、硫酸钆、硫酸铽、硫酸镝、硫酸钬、硫酸铒、硫酸铥、硫酸镱、硫酸镥、硫酸钪和硫酸钇；稀土硝酸盐可以是硝酸镧、硝酸铈、硝酸镨、硝酸钕、硝酸钐、硝酸铕、硝酸钆、硝酸铽、硝酸镝、硝酸钬、硝酸铒、硝酸铥、硝酸镱、硝酸镥、硝酸钪和硝酸钇。
稀土元素与三萜酸类物质上羟基、羧基上的氧原子形成配位键和，形成化学亲和力，根据软硬酸碱理论，由于稀土是硬酸，积雪草三萜酸类是软碱，因此，两者的结合不是特别稳固。
所述稀土盐的用量为粗提液重量的0.1～0.5％。此时，稀土元素可与三萜酸类物质充分配位。
步骤3)中，X-5型号大孔树脂为非极性树脂，粒径为0.3～1.25mm，比表面积为500～600m2/g，平均孔径为29～30nm。其孔径远远大于三萜酸类物质的分子粒径，孔径越大，截留的物质越少，杂质越少。而稀土的配位数较大，与其进行配位键和的含氧官能团数目往往达不到其最高配位数，因此稀土还会与大孔树脂中的C产生交联，以达到吸附的效果。
为了保证稀土元素与大孔树脂的交联，混合液的上柱速度越小，效果越好，经申请人大量实验，混合液上柱速度为0.5～0.8BV/h，交联效果最好。
由于稀土元素与三萜酸类物质的结合十分不稳固，而三萜酸类物质与乙醇的亲和力极强，采用体积浓度为50～70％乙醇可将三萜酸类物质顺利从树脂柱中洗脱下来，洗脱剂用量为1～2BV,洗脱速度为2～2.5BV/h。
与现有技术相比，本方法针对目标成分进行吸附和解吸附，提取的三萜酸类物质收率高达97％以上，纯度高达99.5％以上。
具体实施方式
以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。
以下百分数为体积百分数。
实施例1
1)将积雪草粉碎，加入积雪草总重10倍的60％乙醇溶液回流提取1次，每次1h，将提取液过滤，滤液回收溶剂，再加40℃水溶解，过滤，将滤渣溶于50v％乙醇溶液，得到粗提液；
2)往粗提液加入其重量0.1％的氯化镧混合，搅匀，得到混合液；
3)将混合液上X-5型号大孔树脂柱，上柱速度为0.5BV/h，先水洗至无色，然后用体积浓度为50％乙醇洗脱，乙醇的用量为1BV,洗脱速度为2BV/h，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得到三萜酸类物质。经HLPC分析，三萜酸类物质的回收率为97.24％以上，纯度高达99.50％以上。
实施例2
1)将积雪草粉碎，加入积雪草总重20倍的70％乙醇溶液回流提取3次，每次3h，将提取液合并，过滤，滤液回收溶剂，再加50℃水溶解，过滤，将滤渣溶于60v％乙醇溶液，得到粗提液；
2)往粗提液加入其重量0.5％的硫酸铈混合，搅匀，得到混合液；
3)将混合液上X-5型号大孔树脂柱，上柱速度为0.8BV/h，先水洗至无色，然后用体积浓度为70％乙醇洗脱，乙醇的用量为2BV,洗脱速度为2.5BV/h，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得到三萜酸类物质。
经HLPC分析，三萜酸类物质的回收率为97.33％以上，纯度高达99.58％以上。
实施例3
1)将积雪草粉碎，加入积雪草总重15倍的65％乙醇溶液回流提取2次，每次2h，将提取液合并，过滤，滤液回收溶剂，再加45℃水溶解，过滤，将滤渣溶于55v％乙醇溶液，得到粗提液；
2)往粗提液加入其重量0.3％的硝酸镨混合，搅匀，得到混合液；
3)将混合液上X-5型号大孔树脂柱，上柱速度为0.6BV/h，先水洗至无色，然后用体积浓度为60％乙醇洗脱，乙醇的用量为1.5BV,洗脱速度为2.5BV/h，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得到三萜酸类物质。
经HLPC分析，三萜酸类物质的回收率为97.18％以上，纯度高达99.55％以上。
实施例4
1)将积雪草粉碎，加入积雪草总重10倍的70％乙醇溶液回流提取3次，每次1h，将提取液合并，过滤，滤液回收溶剂，再加50℃水溶解，过滤，将滤渣溶于50v％乙醇溶液，得到粗提液；
2)往粗提液加入其重量0.1％的氯化铒混合，搅匀，得到混合液；
3)将混合液上X-5型号大孔树脂柱，上柱速度为0.8BV/h，先水洗至无色，然后用体积浓度为50％乙醇洗脱，乙醇的用量为2BV,洗脱速度为2BV/h，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，干燥，得到三萜酸类物质。
经HLPC分析，三萜酸类物质的回收率为97.09％以上，纯度高达99.63％以上。