一种酸枣叶黄酮提取物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物提取物的制备，特别涉及酸枣叶提取物，具体属于一种酸枣叶黄 酮提取物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 酸率叶为鼠李科植物酸率Ziziphus jujuba Spinosa(Bunge)Huex H. F. Chow 的叶 子。我国民间广泛将其加工成茶叶，具有利尿、促进胆酸合成、消炎等多种保健功能，且用酸 枣叶泡水代茶饮有一定镇静作用之说。酸枣叶中含有丰富的黄酮类和三萜酸类化合物等药 用成分。现代药理研究表明酸枣叶中黄酮类化合物对防治高血压、动脉粥样硬化、冠心病及 脑溢血等疾病都有较好的疗效，对治疗神经衰弱也有很好的作用。
[0003] 黄酮类化合物广泛分布于植物界，其主要类型有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、双黄酮 和异黄酮等，具有广泛的生物活性，包括抗氧化，抗衰老，抗菌，抗肿瘤等。尤其是此类化合 物结构中含有大量的酚羟基，具有较强的抗氧化作用。
[0004] 国内对酸枣叶的研究多集中在酸枣叶茶的加工技术及营养保健茶的研制方 面。关于工艺方面的研究鲜见报道。李凤英等（酸枣叶黄酮的提取及其抗氧化作用的 研究，中国食品科学技术学会第四届年会论文摘要集）探讨了酸枣叶乙醇浸提最佳提 取工艺，黄酮得率为21. lmg/g。王迎进（超声提取酸枣叶中总黄酮，食品与发酵工业， 2012, 38(2) :229-232)采用响应曲面法优化超声辅助提取酸枣叶中总黄酮工艺（总黄酮得 率5. 382% )。现有技术中，酸枣叶黄酮的提取方法属于粗制的方式，存在溶剂用量大，能耗 高，效价低等缺点，粗制酸枣叶黄酮难于开发成高品质的抗氧化保健食品，药品或新食品原 料。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种高纯度、工艺简单、绿色安全的酸枣叶黄酮提取物的 制备方法；本发明的另一目的是提供酸枣叶黄酮提取物在制备抗氧化保健食品，药品或新 食品原料中的应用。
[0006] 为实现上述目的，本发明提供的一种酸枣叶黄酮提取物制备方法，包括以下步 骤：
[0007] 1)取酸枣叶粉碎，加乙醇浸泡，加热回流提取，滤过，收集提取液；
[0008] 2)将步骤1)的提取液进行浓缩，浓缩至无醇味，浓缩液通过预处理好的大孔树脂 层析柱进行吸附；
[0009] 3)将步骤2)吸附后的大孔树脂层析柱，先用水、10%~20%乙醇溶液依次洗脱除 杂，再用20 %~70 %乙醇溶液洗脱（优选50 %乙醇溶液），收集洗脱液；
[0010] 4)将步骤3)的洗脱液浓缩，喷雾干燥，得到酸枣叶黄酮提取物。
[0011] 步骤1)中所述酸枣叶粉碎的粒度为10目~65目；所述乙醇的浓度为10%~ 90%乙醇溶液；所述乙醇的用量按料液比计为酸枣叶质量的10~20倍；所述浸泡的时间 为lh~lOh ;所述回流提取时间为0. 5h~2h，所述提取次数为1~3次。
[0012] 步骤2)中所述大孔树脂为非极性或弱极性苯乙烯系大孔树脂，弱极性大孔树脂 优选为AB-8型，非极性大孔树脂优选为D101型。
[0013] 步骤2)中所述浓缩液的浓度控制为0. 2~1. 25g/mL，浓缩液PH值为3~8 (优选 PH4. 5 ~6. 5)，吸附流速为 0· 3 ~3BV/h (优选 0· 5 ~1. 5BV/h)。
[0014] 步骤3)中所述洗脱流速为0. 5~5BV/h (优选1~2BV/h)，用量为1-8BV (优选 3 ~6BV)。
[0015] 步骤4)中所述喷雾干燥的条件：进风口温度120-160°C，出风口温度80-1KTC。
[0016] 所述树脂的使用次数为1~5次（优选4次）。
[0017] 本发明同时对各工序提取物抗氧化作用进行了考察。结果表明，各提取物样品对 H202和02'自由基均有一定程度清除能力。其中50%乙醇精制提取物的抗氧化活性强于其 它提取物，表明精制提取物是其抗氧化活性的主要部位，可以根据使用需要应用于不同的 保健食品，药品或新食品原料中。
[0018] 本发明所述的酸枣叶黄酮精制提取物可以被制成各种剂型，如胶囊剂、片剂、颗粒 剂、滴丸、软胶囊剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、分散片、袋茶、口服液、保健饮料等。
[0019] 本发明制备的酸枣叶提取物具有如下优点和效果：
[0020] (1)本发明选用酸枣地上叶片为药材原料，该部分为酸枣生物量最大部分，扩大和 丰富了酸枣植物资源应用范围，实现了药用资源的有效综合利用。
[0021] (2)本发明对影响浸膏得率及总黄酮含量的各个提取工艺参数进行优化。对大孔 树脂静态、动态吸附纯化工艺各参数、抗氧化作用各条件进行了考察。采用优选的提取工艺 及大孔树脂梯度洗脱工艺，成功获得了总黄酮纯度大于80%的成品。
[0022] (3)本发明采用HPLC-DAD-CL在线抗氧化方法评价了酸枣叶黄酮提取物的抗氧化 活性，结果表明，精制提取物对H202和0 2 '自由基清除能力最强，抗氧化活性最好。
【附图说明】
[0023] 图1酸枣叶中黄酮类化合物在300nm检测波长处清除H202和0 2 '的HPLC色谱图 和生物色谱图，图中：(A)紫外色谱图出)氏02在线清除效果图（C)02'在线清除效果图。
[0024] 图2酸枣叶20 %乙醇提取物中化合物在300nm检测波长处清除H202和(V的HPLC 色谱图和生物色谱图，图中：(A)紫外色谱图出)氏02在线清除效果图（C)02'在线清除效果 图。
[0025] 图3酸枣叶50%乙醇精制提取物中化合物在300nm检测波长处清除H20 2和02'的 HPLC色谱图和生物色谱图，图中：(A)紫外色谱图出)氏02在线清除效果图（C)02'在线清 除效果图。
【具体实施方式】
[0026] 实施例1 :
[0027] 大孔吸附树脂纯化工艺的优化
[0028] (1)静态吸附与解吸附实验筛选树脂：
[0029] 选取AB-8、D301、D750、D101、HPD417和DM301型大孔树脂，将酸枣叶提取液75mL 加入锥形瓶中，于恒温振荡箱内振荡24h，使其达到饱和吸附。然后抽滤出酸枣叶提取液， 滤液待测。将饱和吸附后的树脂水洗三次，抽滤除去水分，放入锥形瓶中，加入90 %乙醇 5〇mL，置恒温震荡器振摇24h，使之充分解吸，抽滤出解吸液，溶液待测。分光光度法测定总 黄酮含量，比较不同树脂的吸附与解吸附能力。
[0030] 分别通过计算吸附量与解吸率来评价树脂。吸附量（1. 1)和解吸率计算公式 (1.2)为：
[0033] 式（1. 1)中，I为饱和吸附量（mg)，C。溶液初始浓度，C』及附饱和后溶液浓度，V i 为样品体积。式（1.2)中D为解吸率，CdS解吸附后洗脱液待测成分的浓度，VdS洗脱液 体积，(^、(^^与上同。
[0034] 结果：六种树脂对酸枣叶黄酮有不同程度的吸附与解吸附作用。综合比较，弱极性 树脂AB-8和非极性树脂D101的吸附和解吸率较好。实验结果参见表1。
[0035] 表1各型号树脂对酸枣叶总黄酮的最大吸附量和解吸率
[0038] (2)动态法优化最佳纯化工艺：
[0039] 根据静态法实验结果，取预处理好的AB-8或D101型大孔树脂5mL装柱，加入酸枣 叶提取液（〇.5g生药/mL)20mL进行动态吸附后，用蒸馏水洗脱至α-萘酚反应为阴性，依 次用10 %、20 %、30 %、50 %、60、70 %、90 %的乙醇进行梯度洗脱5BV，收集洗脱液，分光光 度法测定并计算总黄酮在各洗脱部位的含量。
[0040] 结果：当乙醇浓度为50%时，大部分总黄酮可被洗脱。综合考虑，选用水-10%乙 醇除杂，选用30-50%乙醇洗脱总黄酮组分。
[0041] 实施例2:
[0042] 取酸枣叶300g，粉碎至24目，加入50 %乙醇溶液3000mL，浸泡6h，加热回流提取3 次，保持微沸，每次lh，滤过，合并3次提取液，减压浓缩（浓度为lg/mL)，测定和计算酸枣 叶黄酮提取物收率为4. 7%。精密量取预处理过的D101型大孔树脂600ml，湿法装入大孔 树脂柱中。将酸枣叶浓缩液300mL(PH5. 5)以lBV/h的速度进行动态吸附，吸附完成后，先 用水以4BV/h流速洗脱4BV至α -萘酚反应为阴性，20%乙醇以4BV/h流速洗脱4BV除杂， 再用70%乙醇以4BV/h流速洗脱4BV，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，浓缩液喷雾干燥（进风 口温度160°(：，出风口温度100°(：)，即得酸枣叶总黄酮产品358，纯度达81%。
[0043] 实施例3 :
[0044] 取酸枣叶300g，粉碎至50目，加入70 %乙醇溶液1000mL，浸泡lh，加热回流提取2 次，保持微沸，每次2h，滤过，合并2次提取液，减压浓缩（浓度为0. 2g/mL)，测定和计算酸 枣叶黄酮提取物收率为4. 2 %。精密量取预处理过的AB-8型大孔树脂2000ml，湿法装入大 树脂柱中。酸枣叶浓缩液1500mL(PH6. 0)以3BV/h的速度进行动态吸附，