本发明涉及生物复合物
技术领域：
，尤其涉及修复脊髓或脊神经损伤的蛋白胶复合物及制备、使用方法。
背景技术：
：脊髓损伤是指由于外界直接或间接因素导致脊髓或脊神经发生的损伤，发生脊髓损伤的相应节段会出现各种运动功能障碍、感觉功能障碍等的相应改变。脊髓或脊神经损伤是常见的疾病，目前，对于脊髓或脊神经损伤的治疗有外科手术治疗及药物治疗两种。外科手术治疗能够尽早地解除损伤对脊髓、脊神经的压迫，去除机械及化学刺激，进而为脊髓或脊神经功能的恢复创造条件，但是，当脊髓或脊神经损伤严重时，外科手术治疗的预后难以预料。药物治疗能够有效修复脊髓或脊神经的损伤，但传统的给药技术存在药物吸收慢、生物利用度低等的问题。因此，临床医学将两者的优势充分结合用以治疗脊髓及脊神经损伤。神经生长因子(nervegrowthfactor，NGF)是一类由组织和星形胶质细胞产生的、神经元生长与存活所必需的蛋白质分子。神经生长因子在神经系统疾病中具有减轻或改善神经退行性改变、保护神经元的作用，能够有效促进神经元的再生与修复。同时，神经生长因子能够有效抑制脊髓损伤后神经元凋亡，促进神经再生及分化。目前国内外临床上越来越广泛地应用神经生长因子作为各种脊神经损伤的修复，并得到了明显的疗效。然而，在临床使用中，神经生长因子存在半衰期短、给药途径单一、生物活性利用度低等的问题，致使神经生长因子无法达到最佳治疗效果。生物蛋白胶又称纤维蛋白封闭剂、纤维蛋白粘合剂，具有生物止血、封闭组织创面、粘合、促进创伤组织愈合、防止组织粘连、缓释剂等的作用，因而常常用于各种外科手术中。除去上述特点外，生物蛋白胶最大的特点为具有良好的组织相容性和完全的降解吸收性，因此，生物蛋白胶能够用作生物载体，即将其他药物或生物体负载在生物蛋白胶上，进而将其他药物或生物体缓慢释放到人体各个指定部位。目前使用的生物蛋白胶是从人的血液中提取出来的，由于人血液采集来源的限制，造成生物蛋白胶的生产成本很高。技术实现要素：本发明提供一种修复脊髓或脊神经损伤的蛋白胶复合物及制备、使用方法，本发明提供的蛋白胶复合物由动物源性的神经生长因子及生物蛋白胶制备而成，能够有效营养、修复及再生人的脊髓或脊神经。一种修复脊髓或脊神经损伤的蛋白胶复合物，所述蛋白胶复合物包括神经生长因子和动物源性生物蛋白胶，所述动物源性生物蛋白胶包括动物源性血浆纤维蛋白原和动物源性凝血酶原，所述动物源为哺乳动物源。优选地，所述动物源性血浆纤维蛋白原为猪血浆纤维蛋白原，所述动物源性凝血酶原为猪凝血酶原。优选地，所述神经生长因子、所述猪血浆纤维蛋白原和所述猪凝血酶原的配比为每15000-60000a.u.所述神经生长因子加入15-28IU所述猪血浆纤维蛋白原，加入30μg所述猪凝血酶原。优选地，所述神经生长因子为鼠源性神经生长因子或人源性神经生长因子。一种修复脊髓或脊神经损伤的蛋白胶复合物的制备方法，所述制备方法包括：将所述动物源性血浆纤维蛋白原和所述动物源性凝血酶原混合均匀，形成动物源性生物蛋白胶；将所述动物源性生物蛋白胶与所述神经生长因子分别单独封装。一种修复脊髓或脊神经损伤的蛋白胶复合物的制备方法，所述制备方法包括：将所述神经生长因子加入到所述动物源性血浆纤维蛋白原或所述动物源性凝血酶原中，搅拌均匀后分别形成混合包1或混合包2，其中，所述混合包1中含有所述动物源性血浆纤维蛋白原，所述混合包2中含有所述动物源性凝血酶原；将所述混合包1与所述动物源性凝血酶原单独封装，或将所述混合包2与所述动物源性血浆纤维蛋白原单独封装。优选地，所述制备方法还包括：所述动物源性血浆纤维蛋白原或含有所述动物源性血浆纤维蛋白的所述混合包1中加入稳定剂。优选地，所述稳定剂包括白蛋白、枸橼酸钠、氯化钠、蔗糖、组氨酸、精氨酸、甘氨酸、聚山梨酯80、醋酸钠、氨丁三醇、氯化钙或盐酸。一种修复脊髓或脊神经损伤的蛋白胶复合物的使用方法，所述动物源性生物蛋白胶和所述神经生长因子混合均匀后形成蛋白胶复合物，将所述蛋白胶复合物直接覆盖在脊柱外科手术中的脊髓或脊神经损伤部位。一种修复脊髓或脊神经损伤的蛋白胶复合物的使用方法，所述混合包1中的混合物与所述动物源性凝血酶原混合均匀后形成蛋白胶复合物，或所述混合包2中的混合物与所述动物源性血浆纤维蛋白原混合均匀后形成蛋白胶复合物；将所述蛋白胶复合物直接覆盖在脊柱外科手术中的脊髓或脊神经损伤部位。本发明的实施例提供的技术方案可以包括以下有益效果：本发明提供了一种修复脊髓或脊神经损伤的蛋白胶复合物，所述蛋白胶复合物包括神经生长因子和动物源性生物蛋白胶，所述动物源性生物蛋白胶包括动物源性血浆纤维蛋白原和动物源性凝血酶原，所述动物源为哺乳动物源。在本发明提供的蛋白胶复合物中，动物源性生物蛋白胶由血浆纤维蛋白原和凝血酶原制备而成，血浆纤维蛋白原和凝血酶原均从哺乳动物体内提取，从而扩大了血浆纤维蛋白原和凝血酶原的来源，不受血液采集的限制，进而能够大大降低动物源性生物蛋白胶的生产成本、降低脊髓或脊神经损伤治疗的医疗成本。血浆纤维蛋白原和凝血酶原提取所用血浆均经过严格的检疫，不含有致热源，从而能够避免人类免疫缺陷病毒、肝炎等人类血源性疾病，进而使得本发明提供的蛋白胶复合物具有很高的安全性。本发明提供的动物源性生物蛋白胶为神经生长因子的载体，且具有良好的组织相容性和完全的降解吸收性，因而所制备的蛋白胶复合物在修复脊髓或脊神经损伤时能够在脊髓或脊神经周围达到较高浓度，并通过动物源性生物蛋白胶的缓慢降解达到神经生长因子的缓慢释放，进而为脊髓或脊神经功能的修复及再生提供良好神经生长因子支持，大大提高神经生长因子对损伤脊神经的修复及治疗效果。应当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本发明。具体实施方式本发明实施例提供了一种修复脊髓或脊神经损伤的蛋白胶复合物，所述蛋白胶复合物包括神经生长因子和动物源性生物蛋白胶，所述动物源性生物蛋白胶包括动物源性血浆纤维蛋白原和动物源性凝血酶原，所述动物源为哺乳动物源。在本发明提供的蛋白胶复合物中，动物源性生物蛋白胶由血浆纤维蛋白原和凝血酶原制备而成，血浆纤维蛋白原和凝血酶原均从哺乳动物体内提取，从而扩大了血浆纤维蛋白原和凝血酶原的来源，不受血液采集的限制，进而能够大大降低动物源性生物蛋白胶的生产成本、降低脊髓或脊神经损伤治疗的医疗成本。本发明实施例提供的血浆纤维蛋白原和凝血酶原均从经过严格检疫的哺乳动物的血液中提取，经过灭菌消毒、冻干等步骤制备而成。所提取的血浆纤维蛋白原和凝血酶原不含有致热源，从而能够避免人类免疫缺陷病毒、肝炎等人类血源性疾病，进而使得本发明提供的蛋白胶复合物具有很高的安全性。本发明实施例提供的动物源性生物蛋白胶为神经生长因子的载体，且具有良好的组织相容性和完全的降解吸收性，能够很好的脊髓或脊神经周围的组织相融合。通过动物源性生物蛋白胶组织创面封闭、粘合等的作用，神经生长因子能够在修复脊髓或脊神经损伤时直接作用在脊髓或脊神经周围并达到较高浓度，通过动物源性生物蛋白胶的缓慢降解能够使神经生长因子缓慢释放到脊髓或脊神经周围，进而为脊髓或脊神经功能的修复及再生提供良好神经生长因子支持，促进脊髓或脊神经功能的修复及再生，大大提高神经生长因子的有效利用率，且对损伤脊神经的修复及治疗效果显著。进一步，由于人的血浆纤维蛋白原和猪的血浆纤维蛋白原较为相近，因此，本发明实施例提供的动物源性血浆纤维蛋白原优选为猪血浆纤维蛋白原，动物源性凝血酶原优选为猪凝血酶原。进一步，本发明实施例提供的神经生长因子为鼠源性神经生长因子或人源性神经生长因子。更进一步，为更好地实现蛋白胶复合物对脊髓或脊神经损伤的修复，本发明实施例提供的神经生长因子、猪血浆纤维蛋白原和猪凝血酶原的配比为每15000-60000a.u.神经生长因子加入15-28IU猪血浆纤维蛋白原，加入30μg猪凝血酶原。猪凝血酶原需要经过钙离子的激活才能使用。本发明实施例还提供了修复脊髓或脊神经损伤的蛋白胶复合物的制备方法，该制备方法分为分开制备和混合制备两种方法。其中，分开制备的制备方法为：将动物源性血浆纤维蛋白原和动物源性凝血酶原混合均匀，形成动物源性生物蛋白胶；将动物源性生物蛋白胶与神经生长因子分别单独封装，形成两个单独的包装，在使用时将两个单独包装内的物质混合即可得到蛋白胶复合物。混合制备的制备方法为：将神经生长因子加入到动物源性血浆纤维蛋白原或动物源性凝血酶原中，搅拌均匀后分别形成混合包1或混合包2，其中，混合包1中含有动物源性血浆纤维蛋白原，混合包2中含有动物源性凝血酶原；将混合包1与动物源性凝血酶原单独封装，或将混合包2与动物源性血浆纤维蛋白原单独封装，形成两种两个均独立的包装。在使用时，仅需将混合包1中的混合物与动物源性凝血酶原混合均匀或将混合包2中的混合物与动物源性血浆纤维蛋白原混合均匀即可得到蛋白胶复合物。进一步，在混合制备的过程中，为使动物源性血浆纤维蛋白原保持其原有的蛋白质活性，需要在动物源性血浆纤维蛋白原或含有所述动物源性血浆纤维蛋白的混合包1中加入稳定剂。本发明实施例提供的稳定剂包括白蛋白、枸橼酸钠、氯化钠、蔗糖、组氨酸、精氨酸、甘氨酸、聚山梨酯80、醋酸钠、氨丁三醇、氯化钙或盐酸。本发明实施例提供的蛋白胶复合物在使用时，仅需要将蛋白胶复合物直接涂抹或覆盖在脊柱外科手术中的脊髓或脊神经损伤部位即可。本发明实施例提供的蛋白胶复合物的制备方法及使用方法简单、易于操作，能够节省手术时间。为验证本发明实施例提供的蛋白胶复合物能够有效修复脊髓或脊神经损伤，本发明实施例还以SD大鼠(Sprague-Dawley)坐骨神经挤压损伤的修复作为模型进行试验。试验的具体内容为：将SD大鼠随机分为数量均等的4组，即正常组、对照组、NGF组和试验组，其中，正常组仅做坐骨神经显露，不做周围神经挤压；其余三组均做坐骨神经显露及周围神经挤压。在给药方面，对照组为每天经腹膜内注射生理盐水；NGF组为每天经腹膜内注射等量的NGF；试验组为在周围神经挤压处注射蛋白胶NGF复合物1次。在手术治疗后的4周内分别对4组SD大鼠进行SFI测定(sciaticnervefunctionalindex，即坐骨神经功能指数)和电生理检查，具体测试结果如下。1、SFI测定表1列出了正常组、对照组、NGF组和试验组在手术治疗4周内的SFI测定的具体数据。表1：正常组、对照组、NGF组和试验组SFI测定的数据结果周数正常组对照组NGF组试验组1-28.12±2.64-92.98±5.38*-95.13±5.64*-94.18±5.61*2-28.14±2.56-84.23±4.72*-79.25±4.92*#-74.23±4.72*#^3-28.23±2.59-68.54±4.83*-59.14±4.71*#-51.23±4.32*#^4-28.13±2.52-47.12±3.23*-36.18±3.31*#-30.19±2.51*#^其中，表中各符号的表示为：*与正常组比较，p<0.05；#与对照组比较，p<0.05；^与NGF组比较，p<0.05，下述的表2中的*、#和^的表示同表1。从表1中能够看出，在手术治疗1周后，对照组、NGF组和试验组的SFI测定数值分别为-92.98±5.38，-95.13±5.64和-94.18±5.61，三者之间无明显差异；在手术治疗2-4周后，NGF组和试验组的SFI测定数值明显高于对照组的SFI测定数值，且试验组的SFI测定数值明显高于NGF组的SFI测定数值，基本与正常组的SFI测定数值相持平，由此说明，NGF能够促进大鼠运动功能的恢复，尤其是本发明实施例提供的蛋白胶复合物更加有利于大鼠运动功能的恢复，且大鼠运动功能的恢复基到正常水平。2、电生理检查在进行手术治疗4周后，手术侧坐骨神经进行了动作电生理检查，具体检测结果请参考表2。表2：正常组、对照组、NGF组和试验组的电生理检查结果从表2中能够看出，在手术治疗4周后，NGF组和试验组的神经传导速度、CMAP(Mixedmuscleactionpotential，即混合肌肉动作电位)振幅峰值和CMAP潜伏期均好于对照组的神经传导速度、CMAP振幅峰值和CMAP潜伏期，并具有统计学差异，其中，试验组的神经传导速度、CMAP振幅峰值和CMAP潜伏期最优，且接近于正常水平，因此能够说明，本发明实施例提供的蛋白胶复合物能够很好的对损伤后的大鼠坐骨神经进行修复。通过上述试验描述可知，本发明实施例提供的蛋白胶复合物通过以动物源性生物蛋白胶为神经生长因子的载体，使其具有良好的组织相容性和完全的降解吸收性，进而所制备的蛋白胶复合物在修复脊髓或脊神经损伤时能够在脊髓或脊神经周围达到较高浓度，通过动物源性生物蛋白胶的缓慢降解达到神经生长因子的缓慢释放，进而为脊髓或脊神经功能的修复及再生提供良好神经生长因子支持，大大提高神经生长因子对损伤脊神经的修复及治疗效果。本领域技术人员在考虑说明书及实践这里发明的公开后，将容易想到本发明的其它实施方案。本申请旨在涵盖本发明的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本发明的一般性原理并包括本发明未公开的本
技术领域：
中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的，本发明的真正范围和精神由下面的权利要求指出。当前第1页1 2 3