一种脾脏源转移因子的制备方法与流程

文档序号:17796988发布日期:2019-05-31 20:50阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种脾脏源转移因子的制备方法,其特征在于,步骤如下:

S1、前处理:筛选检疫合格的动物脾脏,然后去杂、清洗、消毒,沥干备用;

S2、绞肉匀浆:

(a)绞肉:对前处理后的脾脏进行绞碎处理,要求绞碎后的脾脏颗粒物的颗粒度达0.5~1.0cm;

(b)匀浆:向绞碎后的脾脏颗粒物中,加入金刚砂、TritonX-100和浓度70~80%的柠檬酸水溶液进行匀浆,得脾脏匀浆液,且每100g脾脏颗粒物添加3~5 g的金刚砂、0.1~0.5 mL的TritonX-100 和4~6 mL的柠檬酸水溶液;其中,柠檬酸水溶液的“%”浓度是指柠檬酸与水以g/mL计量的质量/体积百分比浓度;

S3、酸化:调脾脏匀浆液pH值至3.0~3.5,得脾脏匀浆酸化液;

S4、冷冻、破碎解冻:

(a)、采用液氮冷冻处理脾脏匀浆酸化液,得脾脏匀浆酸化液冰块;

(b)、将脾脏匀浆酸化液冰块打碎,然后再进行解冻作业,解冻温度为30~37℃,作业时间为0.5~1h;

(c)、收集解冻脾脏液,再按S4(a)~(b)重复1~2次;

S5、离心纯化:利用自制离心纯化系统进行离心纯化,该离心纯化系统包括管式离心机、离心液储罐、动力传输组件I、动力传输组件II、动力传输组件III、一级过滤器、二级过滤器、三级过滤器及其外界附属系统;动力传输组件I由动力泵I和止回阀I串连而成;动力传输组件II由动力泵II和止回阀II串连而成;动力传输组件III由动力泵III和止回阀III串连而成;一级过滤器和二级过滤器为常规筒式过滤器;三级过滤器为自制过滤器,其结构包括筒体、中空纤维束组件、基座;筒体底部和顶部分别设有进液口和出液口,筒体外部设有夹层,夹层的上端设有夹层出口、下端设有夹层进口;中空纤维束组件包括均布有多孔的组件外壳、若干条中空纤维,这些中空纤维合并成束置于组件外壳内部;基座为圆柱体,圆柱体上段为中空呈筒状、中下段实心,基座的中下段实心上设有与中空纤维数量及其尺寸相适配的通孔;基座位于出液口下方、紧贴筒体顶壁并与其固定连接;中空纤维的上端敞口并穿设在基座的通孔内,下端封闭并与组件外壳底壁固定连接;三级过滤器的外界附属系统包括动力泵IV、止回阀IV、恒温制冷水箱,夹层出口依次串连止回阀IV、恒温制冷水箱和动力泵IV至夹层进口形成一封闭循环系统;管式离心机通过管路依次串连离心液储罐、动力泵I、止回阀I、一级过滤器、动力泵II、止回阀II、二级过滤器、动力泵III、止回阀III至三级过滤器的进液口;一级过滤器和和二级过滤器的滤芯孔径分别为4.5~5μm、0.2~0.22μm;中空纤维的截留分子量为5000~6000道尔顿;

离心纯化步骤为:

(a)首先将S4获得的脾脏匀浆解冻液输入管式离心机内腔中,启动该设备进行离心工作,离心转速达4000~6000rpm/min,离心20~30min;离心结束后及时将获取的离心清液转入至离心液储罐内,且该罐内温度控制范围为5~10℃;

(b)启动动力泵I将上工序获得的冷却离心液经管路过止回阀I输送至一级过滤器内,输入压力0.2 ~0.6 Mpa,实现第一次粗过滤;

(c)启动动力泵II将经一级过滤器后获得的一级过滤液经管路过止回阀II输送至二级过滤器内,输入压力0.2 ~0.6 Mpa,实现第二次粗过滤;

(d)启动动力泵IV,将恒温制冷水箱内所制得的温度为5~15℃的凉水经管路从夹层进口进入夹层内,并由夹层出口经管路过止回阀IV再循环至恒温制冷水箱内;待筒体内腔温度达到5~15℃时再启动动力泵III将经二级过滤器后获得的二级过滤液经管路过止回阀III由进液口输送至三级过滤器内,输入压力0.2~0.6 MPa,二级过滤液先从组件外壳上的多孔进入组件外壳内部,由于中空纤维的截留作用,二级过滤液中的杂质被挡在中空纤维的外面,而含转移因子的二级过滤液则通过中空纤维并从中空纤维顶口进入基座,然后从出液口出来,即得含转移因子的原液;

S6、干燥得成品:将S5所得含转移因子的原液经真空冷冻干燥或喷雾干燥,即得成品。

2.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,S1的具体过程为:筛选检疫合格的动物脾脏,要求脾脏新鲜、无淤血、无病变和无不良气味;然后在工作环境10万级的条件下去除脾脏的脂肪和结缔组织,同时保证脾脏完整性;再洗净脾脏渗出的血水,沥干水分;最后将脾脏浸入体积百分比浓度0.3~0.6%的甲酚水溶液中进行消毒处理,时间为20~30min,沥干备用。

3.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,S2是将S1消毒沥干的脾脏分别进行绞肉和匀浆处理,操作环境均在洁净度万级的洁净房间中进行,其具体过程为:

(a)绞肉:将消毒沥干的脾脏装入绞肉机机腔内,启动工作电源进行脾脏绞碎作业,工作速率为100~150kg/h,绞碎后脾脏颗粒物的颗粒度达0.5~1.0cm,绞碎后的脾脏颗粒物一并暂存在消过毒的塑料容器内待用;

(b)匀浆:将上步获得的脾脏颗粒物投入至同房间的高速匀浆机的腔体内,再向高速匀浆机的腔体内加入金刚砂、TritonX-100和浓度70~80%的柠檬酸水溶液,每100g脾脏颗粒物添加3~5 g的金刚砂、0.1~0.5 mL的TritonX-100 和4~6 mL的柠檬酸水溶液,启动工作电源进行脾脏匀浆作业,匀浆刀片转速为9000~15000rpm/min,匀浆温度控制在32℃以下,时间为20~30min;其中,该工序中柠檬酸水溶液的“%”浓度是指柠檬酸与水以g/mL计量的质量/体积百分比浓度。

4.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,S3的具体过程为:将脾脏匀浆液pH值调至3.0~3.5,该步骤中所使用的酸化剂为浓度15%的盐酸水溶液和浓度10%的柠檬酸水溶液按体积比2:1~4:1混合的混合液;酸化中酸化剂采用恒流泵添加至脾脏匀浆液中,同时匀速搅拌,酸化剂流加速率和搅拌速率分别为10~20 mL/min、600~800 rpm/min;其中,该工序中盐酸水溶液的“%”浓度是指质量百分比浓度,与柠檬酸水溶液的“%”浓度是指柠檬酸与水以g/mL计量的质量/体积百分比浓度。

5.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,S4的具体过程为:

(a)、将脾脏匀浆酸化液分装至容器内再转至液氮罐罐体腔内,处理时间10~20min;

(b)、将液氮冷冻后形成的脾脏匀浆酸化液冰块投料至碎冰机内将冰块打碎至直径为0.8~1.5cm的颗粒;然后再将获取的颗粒冷冻物投料至连续式微波解冻机的机腔内进行解冻作业,解冻温度为30~37℃,作业时间为0.5~1h;

(c)、收集解冻脾脏液,再按S4(a)~(b)重复1~2次。

6.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,S5还包括步骤(e)反清洗:待过滤工作结束时,可进行该系统的反向清洗作业,手动180°整体调整动力传输组件I、动力传输组件II、动力传输组件III的方向即原先的进口变为出口,再连接相应的管路,同时启动上述动力泵I、动力泵II、动力泵III,将清洁的纯化水经筒体出液口进入筒体内,则清洗水最终从离心液储罐排出,作业中各过滤器压力表指针不得高于0.3 MPa,重复2~3次即可。

7.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于:离心液储罐与动力泵I之间、止回阀I与一级过滤器之间、一级过滤器与动力泵II之间、止回阀II与二级过滤器之间、二级过滤器与动力泵III之间、止回阀III与三级过滤器之间的管路采取活动连接方式。

8.如权利要求7所述的制备方法,其特征在于:所述活动连接方式为卡箍连接。

9.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于:管式离心机为GF-分离型。

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