本发明属于天然药物提取领域，具体涉及一种从毛鸡骨草叶或鸡骨草叶中提取酰胺酸类成分的方法。
背景技术：
鸡骨草为豆科植物相思子属鸡骨草(Aburs cantoniensis Hance)和毛鸡骨草(Abrus mollis Hance)的干燥全株。是我国特有品种之一，其性凉味甘淡，功能利湿退黄，清热解毒，疏肝止痛；用于湿热黄疸，胁肋不舒，胃脘胀痛，乳痈肿痛，临床用于治疗急慢性肝炎等病症。两广民间历来用鸡骨草来治疗黄疸病以及制作护肝茶用于日常保健饮用，主要分布于广东、广西、湖南、福建和海南等地。
我国学者对鸡骨草化学成分的研究始于20世纪60年代。研究表明，毛鸡骨草叶或鸡骨草叶除了富含黄酮类、皂苷类和生物碱等成分外，还含有一类酰胺酸类成分：N-(羟基肉桂酰)酪氨酸及其[2+2]环合加成的众多的不同构象的二聚体(吐昔酰双酪氨酸或吐星酰双酪氨酸)等化学成分。酰胺酸类成分具有良好的保肝护肝和抗炎镇痛作用，能促进人肝细胞的增殖和抗肝损伤作用，N-(羟基肉桂酰)酪氨酸还具有一定的抗细菌、抗病毒、抗感染以及抗幽门螺杆菌粘附性等作用。此外，酰胺酸类成分还具有其他对人体有益的特性，具有较高的药用价值，因此，从毛鸡骨草叶或鸡骨草叶中提取分离纯化酰胺酸类成分具有较高的开发前景和应用价值。
目前，未见有针对毛鸡骨草叶或鸡骨草叶中酰胺酸类成分部位提取纯化工艺的方法，只有相关单体化学成分的提取分离研究，但方法复杂，提取率低，所涉及溶剂毒性大，不适用于工业化生产。
技术实现要素：
为解决现有技术中存在的技术问题，本发明目的在于提供一种酰胺酸类成分提取纯化方法，该方法提取纯化得率高，安全稳定，步骤简便，成本低，可用于工业化生产。
本发明提供一种从毛鸡骨草叶或鸡骨草叶中提取酰胺酸类成分的方法，其包括以下步骤：
(1)取毛鸡骨草叶或鸡骨草叶，加入醇溶液进行提取，然后往提取液中加入酸，制成含醇量低于50％以下的酸性溶液；
(2)将步骤(1)中制得的酸性溶液上聚酰胺柱，待全部溶液通过后，用含醇的酸性水溶液洗脱至洗脱液滴加氨水颜色不加深为止，弃去洗脱液，再用不同体积比的稀氨水-醇的混合溶液或水-醇混合溶液洗脱至无色，收集洗脱液至无色，减压回收浓缩至干，得粗提物；
(3)往步骤(2)中制得的粗提物加入适量的醇溶液进行提取，滤过，回收滤液，浓缩，干燥，即得纯化的酰胺酸类成分部位。
进一步地，所述步骤(1)中的醇溶液为甲醇或乙醇，所述提取方式为加热回流、超声、浸提中的一种，所述酸为甲酸、乙酸、盐酸中的一种。
进一步地，所述步骤(1)具体为：取毛鸡骨草叶或鸡骨草叶，加入药材重量10～100倍浓度为20～100％的甲醇或乙醇溶液，超声提取或回流提取或浸泡提取2～3次，每次0.5～3小时，滤过，合并滤液；取滤液或使其醇浓度控制在50％以下后，加入乙酸或甲酸或盐酸溶液，制成含酸体积比为0.1～10％的酸性溶液。
优选地，所述步骤(1)具体为：取毛鸡骨草叶或鸡骨草叶，加入药材重量10～100倍浓度为20～100％的乙醇溶液，超声提取2～3次，每次0.5～3小时，滤过，合并滤液；取滤液或使其醇浓度控制在50％以下后，加入乙酸溶液，制成含乙酸体积比为0.1～10％的酸性溶液。
进一步地，所述步骤(2)中的含醇的酸性水溶液为含醇量为30～60％的含酸体积比为0.1～10％的酸性溶液，其中，醇为甲醇或乙醇，酸为甲酸、乙酸或盐酸。
进一步地，所述步骤(2)中的稀氨水-醇混合溶液的体积比为0:100～100:0，水-醇混合溶液的体积比为0:100～30:70，所述的稀氨水的体积百分浓度为0.1～5％，醇为甲醇或乙醇。
进一步地，所述步骤(2)中的聚酰胺柱采用湿法装柱，目数为60～200或200以上。
进一步地，所述步骤(2)具体为：将步骤(1)制得的酸性溶液上聚酰胺柱，待全部溶液通过后，用含醇量为30～60％的含酸体积比为0.1～10％的酸性溶液洗脱至洗脱液滴加氨水颜色不加深为止，弃去洗脱液，再用体积百分浓度为0.1～5％稀氨水-醇的混合溶液或水-醇混合溶液洗脱至无色，其中，所述的体积百分浓度为0.1～5％稀氨水与醇以0:100～100:0体积比混合，所述的水与醇以0:100～30:70体积比混合，所述的醇为甲醇或乙醇，收集洗脱液至无色，减压回收浓缩至干，得粗提物。
优选地，所述步骤(2)具体为：将步骤(1)制得的酸性溶液上聚酰胺柱，待全部溶液通过后，用含乙醇量为30～60％的含乙酸体积比为0.1～10％的酸性溶液洗脱至洗脱液滴加氨水颜色不加深为止，弃去洗脱液，再用体积百分浓度为1％稀氨水-乙醇的混合溶液洗脱至无色，其中，所述的体积百分浓度为1％稀氨水与乙醇以0:100～100:0体积比混合，收集洗脱液至无色，减压回收浓缩至干，得粗提物。
进一步地，所述步骤(3)具体为：往步骤(2)制得的粗提物中加入其重量10～50倍甲醇或乙醇提取3～5次，滤过，合并滤液，浓缩，干燥，即得纯化的酰胺酸类成分部位。
与现有技术相比，本发明的优势在于：
(1)本发明利用酸性环境能较好地去除其他类成分的同时能使酰胺酸类成分易吸附于吸附材料而被完整保留，再利用碱性环境将酰胺酸类成分完全洗脱，产物得率高。
(2)本发明方法稳定性好，步骤简便，且所用溶剂毒性低。
(3)本发明提供的方法成本低，周期短，制备量大，效率高，可应用于工业化生产。
具体实施方式
以下通过具体实施方式进一步描述本发明，但本发明不仅仅限于以下实施例。
实施例1
(1)取毛鸡骨草叶1000g，加药材重量50倍浓度为40％乙醇溶液，超声提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液，往滤液中加入乙酸溶液，制成含乙酸体积比为1％的酸性溶液；
(2)将步骤(1)制得的酸性溶液上聚酰胺柱，待全部溶液通过后用含乙醇量为40％的含乙酸体积比为1％的酸性溶液洗脱至洗脱液滴加氨水颜色不加深为止，弃去洗脱液，再用1％氨水溶液-乙醇溶液(体积比100:0)洗脱，收集洗脱液至无色，减压回收浓缩至干，得粗提物；
(3)往步骤(2)制得的粗提物中加入其重量20倍乙醇提取4次，滤过，合并滤液，浓缩，干燥，即得纯化的酰胺酸类成分部位3.98g。
实施例2
(1)取毛鸡骨草叶1000g，加药材重量40倍浓度为70％乙醇溶液，回流提取2次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，往滤液中加水稀释至含乙醇量为40％，再加入乙酸溶液，制成含乙酸体积比为1.5％的酸性溶液；
(2)将步骤(1)制得的酸性溶液上聚酰胺柱，待全部溶液通过后用含乙醇量为50％的含乙酸体积比为1.5％的酸性溶液洗脱至洗脱液滴加氨水颜色不加深为止，弃去洗脱液，再用2％氨水溶液-乙醇溶液(体积比50:50)洗脱，收集洗脱液至无色，减压回收浓缩至干，得粗提物；
(3)往步骤(2)制得的粗提物中加入其重量15倍乙醇提取5次，滤过，合并滤液，浓缩，干燥，即得纯化的酰胺酸类成分部位4.02g。
实施例3
(1)取鸡骨草叶1000g，加药材重量30倍浓度为100％甲醇溶液，浸泡提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，往滤液中加水稀释至含甲醇量为40％，再加入乙酸溶液，制成含乙酸体积比为3％的酸性溶液；
(2)将步骤(1)制得的酸性溶液上聚酰胺柱，待全部溶液通过后用含甲醇量为30％的含乙酸体积比为3％的酸性溶液洗脱至洗脱液滴加氨水颜色不加深为止，弃去洗脱液，再用1.5％氨水溶液-甲醇溶液(体积比70:30)洗脱，收集洗脱液至无色，减压回收浓缩至干，得粗提物；
(3)往步骤(2)制得的粗提物中加入其重量50倍甲醇提取3次，滤过，合并滤液，浓缩，干燥，即得纯化的酰胺酸类成分部位4.11g。
实施例4
(1)取鸡骨草叶1000g，加药材重量35倍浓度为25％甲醇溶液，超声提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，往滤液中加入甲酸溶液，制成含甲酸体积比为1％的酸性溶液；
(2)将步骤(1)制得的酸性溶液上聚酰胺柱，待全部溶液通过后用含甲醇量为40％的含甲酸体积比为1％的酸性溶液洗脱至洗脱液滴加氨水颜色不加深为止，弃去洗脱液，再用1％氨水溶液-甲醇溶液(体积比90:10)洗脱，收集洗脱液至无色，减压回收浓缩至干，得粗提物；
(3)往步骤(2)制得的粗提物中加入其重量25倍甲醇提取4次，滤过，合并滤液，浓缩，干燥，即得纯化的酰胺酸类成分部位3.86g。
实施例5
(1)取鸡骨草叶1000g，加药材重量80倍浓度为20％乙醇溶液，回流提取3次，每次3小时，滤过，合并滤液，往滤液中加入乙酸溶液，制成含乙酸体积比为0.5％的酸性溶液；
(2)将步骤(1)制得的酸性溶液上聚酰胺柱，待全部溶液通过后用含乙醇量为40％的含乙酸体积比为0.5％的酸性溶液洗脱至洗脱液滴加氨水颜色不加深为止，弃去洗脱液，再用3％氨水溶液-乙醇溶液(体积比30:70)洗脱，收集洗脱液至无色，减压回收浓缩至干，得粗提物；
(3)往步骤(2)制得的粗提物中加入其重量10倍乙醇提取5次，滤过，合并滤液，浓缩，干燥，即得纯化的酰胺酸类成分部位3.82g。
实施例6
(1)取毛鸡骨草叶1000g，加药材重量20倍浓度为40％甲醇溶液，回流提取3次，每次3小时，滤过，合并滤液，往滤液中加入甲酸溶液，制成含甲酸体积比为3％的酸性溶液；
(2)将步骤(1)制得的酸性溶液上聚酰胺柱，待全部溶液通过后用含甲醇量为30％的含甲酸体积比为3％的酸性溶液洗脱至洗脱液滴加氨水颜色不加深为止，弃去洗脱液，再用水-甲醇混合溶液(体积比30:70)洗脱，收集洗脱液至无色，减压回收浓缩至干，得粗提物；
(3)往步骤(2)制得的粗提物中加入其重量30倍甲醇提取4次，滤过，合并滤液，浓缩，干燥，即得纯化的酰胺酸类成分部位3.84g。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。