粉刺锦鸡儿提取物及其用途的制作方法

本发明涉及医药技术领域，具体涉及是一种粉刺锦鸡儿提取物及其制备与在预防或治疗类风湿性关节炎药物中的应用。

背景技术：

风湿性关节炎(RA)是当前危害人类健康的最重要疾病之一，被称为“不死的癌症”。RA是一种以多关节受累、滑膜炎症、骨与软骨破坏等为主要特征的慢性全身性自身免疫炎性疾病，其发病机理至今尚未完全阐明，普遍认为与遗传、感染和免疫调节等因素紊乱密切相关(Imboden JB.The immunopathogenesis of rheumatoid arthritis.Annu Rev Pathol Mech Dis 2009,4:417-434.)。我国RA的患病率约0.3％-0.4％，约有400万患者，病程5-10年致残率为60％，晚期90％患者丧失社会劳动力和生活自理能力，是成人劳动力丧生的主要原因之一(Dai SM,Han XH,Zhao DB,Shi YQ,Liu Y,Meng JM.Prevalence of rheumatic symptoms,rheumatoid arthritis,ankylosing spondylitis,and gout in Shanghai,China:a COPCORD study.J Rheumatol 2003,30:2245-2251.)，因此造成了很多家庭问题以及巨大的社会负担。现行治疗类风湿性关节炎的方法主要有手术治疗、化学药物治疗和细胞因子类生物制剂的治疗。一般认为外科手术只适用于晚期畸形病例，且费用昂贵，对机体创伤较大；化学药物如非甾体抗炎药、抗风湿药和糖皮质激素等的长期应用会引起胃肠道不适、骨髓抑制、肝损伤、高血压等严重的不良反应；生物制剂在干预病变细胞的同时，对正常细胞也同样会产生一定的作用，干扰机体的固有免疫和适应性免疫，从而产生较大的毒性和破坏机体防御作用的风险(1.张义浜,刘志敏,熊凌霜.类风湿关节炎发病机制及其治疗方法研究进展.细胞与分子免疫学杂志,2005,21(增刊):88-94.2.Doan T,Massarotti E.Rheumatoid Arthritis:An Overview of New and Emerging Therapies.J Clin Pharmacol 2005,45:751-762.)。因此，寻求高效低毒的防治RA的药物仍是世界医学界面临的一项艰巨任务和难题。

粉刺锦鸡儿Caragana pruinosa为豆科(Leguminosae)锦鸡儿属 (Caragana Fabr.)植物，产新疆(昭苏、喀什)，生于干山坡(潘兰,贾新岳,石明辉,贾晓光,力瓦衣丁·买合苏提,郑承剑,陈刚.新疆产四种锦鸡儿的民族植物学调查.中国现代中药,2013,7:578-579.)。粉刺锦鸡儿的根具有活血祛风，利尿消肿的功效(中国药材公司.《中国中药资源志要》,科学出版社,1994,559.)，但有关粉刺锦鸡儿化学成分及药理作用未见报道。

至今也未见粉刺锦鸡儿提取物用于治疗类风湿性关节炎方面的报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种粉刺锦鸡儿提取物及其制备方法；本发明的另一目的在于提供一种粉刺锦鸡儿提取物新的医药用途。

本发明的第一方面，提供了一种粉刺锦鸡儿提取物，所述的粉刺锦鸡儿提取物的制备方法为：

将粉刺锦鸡儿根粉碎后，投入提取罐，用40～90％的乙醇加热提取2～3次，每次溶媒用量约为生药量的8～10倍，每次提取时间为1～2小时，合并提取液后浓缩至干，得粉刺锦鸡儿总浸膏；将粉刺锦鸡儿总浸膏溶于水后上样大孔吸附树脂，收集30～80％乙醇洗脱部分，浓缩干燥，即得粉刺锦鸡儿提取物。

较优的，所述的大孔树脂是AB-8、D-101、ZTC-1、HPD-100或DA201。

较优的，所述的乙醇热提是80℃温度下进行回流提取。

较优的，用80％的乙醇(体积浓度)回流提取2～3次。

较优的，每次溶媒用量约为生药量的10倍，每次提取时间为2小时。

本发明提供了根据上述制备方法得到的粉刺锦鸡儿提取物。

本发明的第二方面，提供了上述的粉刺锦鸡儿提取物在制备预防或治疗类风湿性关节炎药物或食品中的应用。

所述的药物为：粉刺锦鸡儿提取物作为唯一活性成份，或包含粉刺锦鸡儿提取物的药物组合物。

所述药物中，粉刺锦鸡儿提取物的含量为0.1-99wt％，优选含量为0.5-90wt％。

所述的药物组合物可以和药剂学上的常规药用辅料制成药物制剂。

所述的药物制剂可以是片剂、颗粒剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸、注射剂、粉针剂，或气雾剂等。

本发明采用类风湿性关节炎动物模型(Trentham DE,Townes AS,Kang AH.Autoimmunity to type II collagen an experimental model of arthritis.J Exp Med1977,146:857–868；Viji V,Kavitha SK,Helen A.Bacopa monniera(L.)Wettst inhibits type II collagen-induced arthritis in rats.Phytother Res 2010,24:1377–1383)，观察本发明提供的粉刺锦鸡儿提取物灌胃给药的治疗作用。

实验结果显示，本发明的粉刺锦鸡儿提取物可显著降低RA大鼠关节炎指数，下调大鼠血清中炎性细胞因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和C反应蛋白水平，上调白介素10(IL-10)水平，提示粉刺锦鸡儿提取物具有良好的抗RA活性。

本发明寻找到了安全有效的防治RA药物。

附图说明

图1粉刺锦鸡儿提取物对II型胶原诱导RA模型大鼠足关节炎指数的影响(*vs模型组，p<0.05；**vs模型组，p<0.01)。

图2粉刺锦鸡儿提取物对II型胶原诱导RA模型大鼠血清中细胞因子水平的影响(mean±SD,n＝10)(*vs模型组，p<0.05；**vs模型组，p<0.01)；其中A为IL-1β，B为IL-6，C为IL-10，D为TNF-α，E为C反应蛋白(CRP)；NG：空白组；MG：模型组；MTG：甲氨蝶呤组；LCG：低剂量组；MCG：中剂量组；HCG：高剂量组。

具体实施方式

现结合实施例，对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。

本实施例所用的粉刺锦鸡儿Caragana pruinosa为豆科(Leguminosae)锦鸡儿属(Caragana Fabr.)植物，植物采集于新疆乌恰县，取根晒干备用。

实施例1：粉刺锦鸡儿提取物的制备

将粉刺锦鸡儿根粉碎后，投入提取罐，用80％的乙醇80℃回流提取3次，每次溶媒用量约为生药量的10倍，每次提取时间为2小时，合并提取液后浓缩至干，得粉刺锦鸡儿总浸膏，将总浸膏溶于水后上样AB-8大孔吸附树脂，收集30～80％乙醇洗脱部分，浓缩干燥得粉刺锦鸡儿提取物。

实施例2：粉刺锦鸡儿提取物的抗类风湿性关节炎药效学实验

2.1实验材料

成年雄性180～220g SD大鼠(第二军医大学实验动物中心提供)60只，大鼠血清TNF-α、IL-1的ELISA试剂盒(美国Sigma公司)。主要仪器：足趾容积测量仪(YLS-7A，山东省医学科学院设备站)、酶标仪(BIO-RAD 550)、离心机(Labofuge 400R,Heraeus公司)、电子天平(FA 110A型，上海精密科学仪器有限公司)。

2.2实验造模及给药

实验前将60只大鼠称重，按体质量随机分为6组，每组10只，自由饮食、进水。分为空白组、模型组、阳性药组和粉刺锦鸡儿提取物组。空白组：不予任何处理；模型组：将牛II型胶原蛋白醋酸溶液与等容量的弗氏不完全佐剂混合，充分乳化。第0天，SD大鼠尾根进行皮内注射(1mg/ml)，每只0.1ml；7日后，加强免疫，大鼠尾根用0.1ml/只溶液注射作为激发注射，第15日左右造成RA动物模型；阳性药组：甲氨蝶呤，1.0mg/kg,灌胃给药，每周3次；粉刺锦鸡儿提取物组：自造模成功之日起，给予粉刺锦鸡儿提取物，分为高、中、低三个剂量组，灌胃给药，每日1次，剂量为1.2g/kg、2.4g/kg、和4.8g/kg(生药量)，连续给药40d。

2.3观察指标

(1)对大鼠关节肿胀程度进行关节炎指数评分，每5天评分一次。

(2)在实验结束次日，大鼠尾部静脉取血，置冰浴30min后，以2000r/min离心15min，取上清，用ELISA法测定两组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、C反应蛋白水平，按试剂盒说明书进行操作。

2.4实验结果

采用SPSS14.0对两组数据进行两样本t检验统计学分析，P<0.05时认为差异有统计学意义。

(1)大鼠关节炎指数评分

如图1所示，给药第40天，粉刺锦鸡儿高、中、低剂量组足关节炎指数分别为3.7±0.7、4.2±0.6、4.9±0.3，模型组足关节炎指数为5.9±0.4，提示粉刺锦鸡儿提取物可显著降低II型胶原诱导的RA大鼠足关节炎指数，与模型组相比存在显著性差异，表明粉刺锦鸡儿提取物对大鼠类风湿性关节炎模型有较好的治疗作用。

(2)血清学指标

如图2所示，模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、C反应蛋白和IL-10 的水平分别为381.4ng/L、93.2ng/L、194.5ng/L、7.8mg/L和29.1ng/L。与模型组相比，粉刺锦鸡儿提取物高剂量组能显著降低血清中TNF-α(180.1ng/L)、IL-1β(46.6ng/L)、IL-6(120.1ng/L)和C反应蛋白(5.5mg/L)的水平，升高IL-10水平(62.2ng/L)，说明粉刺锦鸡儿提取物灌胃给药能显著降低类风湿性关节炎动物模型血清中的关键促炎细胞因子水平并升高抗炎因子水平，可有效缓解RA大鼠的炎症反应。

鉴于上述药效实验结果，本发明公开的粉刺锦鸡儿提取物具有显著抗类风湿性关节炎活性，因此可用于制备抗类风湿性关节炎药物或食品。

以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。