本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物、制备方法及其用途。
背景技术：
引起肝损伤的原因有多个：1、病毒感染：由多种肝炎病毒引起，具有传染性强，传播途径复杂，流行面广泛，发病率高等特点。2、药物或化学毒物：许多药物和化学毒物都可引起肝脏损伤，发生药物性肝炎或中毒性肝炎。3、酗酒：酒精对肝脏的损害是很严重的，损害的后果包括酒精性肝炎、酒精性脂肪肝、酒精性肝硬化，主要是由于酒精(乙醇)及其代谢产物乙醛的毒性对肝细胞直接损害造成的。4、其他原因：原发和继发的肝脏肿瘤、心功能不全导致肝脏淤血、某些先天性肝脏疾病、静脉高价营养等，都可以造成不同程度的肝损害，这些肝损害的早期表现往往是ALT(转氨酶)或胆红素的升高，不祛除病因，肝脏的损害会进一步加重。目前在我国由于上述原因每年发生肝损伤的人数众多，形势不容乐观。急需研发高效低毒的防治肝脏损伤药物。
肝脏损伤的治疗目前已有的药物存在毒性大、安全性低的问题，从天然产物中寻找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的潜在药物具有重要价值。
本发明涉及的化合物I是一个2009年发表(Sheng Yin et al.,2009.Harrisotones A–E,five novel prenylated polyketides with a rare spirocyclic skeleton from Harrisonia perforata.Tetrahedron 65(2009)1147–1152)的化合物，我们对化合物I进行了结构修饰，获得了两个新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制备了组合物并对该组合物抗肝脏损伤活性进行了评价，其具有抗肝脏损伤活性。
技术实现要素：
本发明公开了一个新的组合物，该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物中化合物III和化合物IV的质量百分数分别为15％和85％。
本发明公开的组合物可以制成药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。
药效学实验表明，本发明的组合物具有较好的抗肝脏损伤作用。本发明的药学上可接受的盐具有同样的药效。
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
具体实施方式
实施例1 化合物Harrisotone A的制备
化合物Harrisotone A(I)的制备方法参照Sheng Yin等人发表的文献(Sheng Yin et al.,2009.Harrisotones A–E,five novel prenylated polyketides with a rare spirocyclic skeleton from Harrisonia perforata.Tetrahedron 65(2009)1147–1152)的方法。
实施例2 Harrisotone A的O-溴乙基衍生物(II)的合成
将化合物I(472mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化铵(TBAB)(0.08g)，1,2-二溴乙烷(3.760g，20.00mmol)和6mL的50％氢氧化钠溶液。混合物在35摄氏度搅拌3h。3h之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取两次，合并有机相溶液。然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤2次，再用无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物II的黄色粉末(602mg，76％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.18(s,2H),4.56(s,2H),3.93(d,J＝16.7Hz,4H),3.79(s,2H),3.62(d,J＝0.9Hz,4H),3.15(s,2H),2.48(s,2H),2.41(d,J＝9.4Hz,4H),2.27(s,1H),1.95(s,1H),1.88–1.80(m,8H),1.77(d,J＝15.5Hz,7H),1.68(s,1H),1.61(s,1H),1.51(s,1H),1.25(d,J＝58.1Hz,1H),1.15–0.75(m,6H).13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.46(s),198.24(s),195.44(s),190.27(s),135.27(s),120.09(s),115.02(s),84.45(s),76.58(s),74.12(s),63.67(s),62.76(s),60.36(s),50.96(s),45.22(s),39.69(s),36.61(s),34.40(s),32.63(s),30.81(d,J＝8.9Hz),28.77(s),25.30(s),24.09(d,J＝19.2Hz),22.77(s),18.20(s).
HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for C34H50Br3O6:793.1137；found 793.1134.
实施例3 Harrisotone A的O-(吗啉基)乙基衍生物(III)的合成
将化合物II(396mg，0.5mmol)溶于25mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾(345mg，2.5mmol)，碘化钾(84mg，0.5mmol)和吗啉(3484mg，40mmol)，混合物加热回流2h。反应结束后将反应液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有机相。依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:0.4，v/v)，收集浅棕色集中洗脱带，浓缩即得到化合物III的黄色固体(312.2mg,77％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ5.14(s,2H),4.20(s,2H),3.58–3.49(m,16H),3.10(d,J＝70.7Hz,2H),3.03(s,2H),2.88(s,1H),2.55(d,J＝5.4Hz,4H),2.46(d,J＝9.0Hz,13H),2.38(d,J＝17.5Hz,5H),1.87(s,1H),1.83–1.72(m,8H),1.67(s,6H),1.64(s,1H),1.53(s,1H),1.48(d,J＝6.5Hz,2H),1.10(d,J＝9.0Hz,7H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.22(s),197.98(s),195.20(s),190.01(s),135.03(s),119.83(s),114.78(s),84.19(s),76.34(s),66.67(d,J＝6.0Hz),62.50(s),60.12(s),59.89(s),54.29(s),53.60(s),52.84(s),50.70(s),44.98(s),39.43(s),36.37(s),30.55(d,J＝8.9Hz),28.53(s),25.04(s),23.85(d,J＝19.2Hz),22.51(s),17.96(s).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C46H74N3O9:812.5425；found:812.5422。
实施例4 Harrisotone A的O-(1H-四氮唑基)乙基衍生物的合成
将化合物II(396mg，0.5mmol)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾(690mg，5.0mmol)，碘化钾(252mg，1.5mmol)和1H-四氮唑(2802mg，40mmol)，混合物加热回流1h。反应结束后将反应液倒入15mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有机相。依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。因为互变异构作用，在反应条件下会生成1H-四氮唑基和2H-四氮唑基两种取代产物。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:0.8，v/v)，收集黄色集中洗脱带，再将洗脱带浓缩，用硅胶柱层析纯化(流动相为：石油醚/丙酮＝100:0.2，v/v)，依次收集两个淡黄色的洗脱带，浓缩前1个洗脱带即得到化合物IV的淡黄色固体(83.6mg,22％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.55(s,1H),10.25(s,1H),10.16(s,1H),5.08(s,2H),4.56–4.27(m,8H),3.85(d,J＝8.1Hz,4H),3.18(s,2H),2.67(s,1H),2.40(d,J＝69.7Hz,2H),2.30–2.31(m,3H),2.21(s,1H),1.83(d,J＝8.5Hz,2H),1.77(d,J＝5.0Hz,7H),1.65(d,J＝15.5Hz,7H),1.61(s,1H),1.54(s,1H),1.52(s,1H),1.42(s,1H),1.10(s,6H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ206.21(s),197.97(s),195.19(s),190.00(s),145.03(s),135.02(s),119.82(s),114.77(s),84.18(s),76.33(s),62.46(d,J＝8.0Hz),60.11(s),58.40(s),50.69(s),46.77(s),46.61(s),44.97(s),39.42(s),36.36(s),30.54(d,J＝8.9Hz),28.54(s),25.03(s),23.84(d,J＝19.2Hz),22.50(s),17.95(s).HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C37H53N12O6:761.4211；found:761.4207。
实施例5 组合物防治肝损伤的作用
(一)组合物对D-氨基半乳糖胺(D-galactosamine，D-GalN)诱导的小鼠急性肝损伤的防护作用
组合物的制备：将研磨之后过200目网的15mg化合物III的粉末和研磨之后过200目网的85mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用涡轮搅拌仪混合即得到100mg组合物，使用时用水溶解这100mg的组合物即得到组合物的溶液。
小鼠分5组。对照组以生理盐水灌胃(0.3mL·d-1)，连续7d；且于第7d还要腹腔注射生理盐水(0.15mL·10g-1)，腹腔注射16h后取血，测AST及ALT活力。D-GalN组、组合物3.0mg·kg-1组、化合物III组和化合物IV组分别以生理盐水、组合物、化合物III和化合物IV灌胃(0.3mL·d-1)，连续7d；且于第7d还要腹腔注射D-GalN(800mg·kg-1，0.15mL·10g-1)，腹腔注射16h后取血，测AST及ALT活力。
表1 组合物对D-GalN诱导的急性肝损伤的防护作用
注：1)p<0.01vs对照组，2)p<0.01vs D-GalN组
由表1可知，组合物能有效抑制D-GalN引起的小鼠AST及ALT活性的显著上升。化合物III和化合物IV无此作用。
(二)组合物对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的防护作用
小鼠分5组，对照组以生理盐水灌胃(0.3mL·d-1)，连续5d，第6d腹腔注射植物油每只0.1mL·10g-1；CCl4组及组合物、化合物III和化合物IV给药组(3.0mg·kg-1)分别以生理盐水及组合物、化合物III和化合物IV灌胃(0.3mL·d-1)，连续5d，于第6d腹腔注射0.1％CCl4 0.1mL·10g-1。24h后处死动物，取血清测AST及ALT活力。
表2 组合物对CCl4诱导的急性肝损伤的防护作用
注：1)p<0.01vs对照组，2)p<0.01vs CCl4组
由表2可知，组合物能抑制CCl4引起的小鼠AST及ALT活性的显著上升。化合物III和化合物IV无此作用。
结论：组合物能有效保护D-GalN引起的小鼠肝损伤，组合物能有效保护CCl4引起的小鼠肝损伤，可以用来制备抗肝损伤药物。化合物III和化合物IV不能有效保护D-GalN引起的小鼠肝损伤，不能有效保护CCl4引起的小鼠肝损伤，不可以用来制备抗肝损伤药物。
实施例6 本发明所涉及组合物片剂的制备
取2克组合物，加入制备片剂的常规辅料18克，混匀，常规压片机制成100片。
实施例7 本发明所涉及组合物胶囊的制备
取2克组合物，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉18克，混匀，装胶囊制成100粒。