本发明属于化学医药领域，具体涉及抗HIV整合酶抑制剂德特格韦与糖皮质激素联合使用，增强糖皮质激素抗炎效应及治疗急性呼吸窘迫综合症治疗中糖皮质激素长期使用导致的耐受。
背景技术：
：糖皮质激素(Glucocorticoid，GC)是由肾上腺皮质分泌的一类甾体激素。糖皮质激素有快速、强大而非特异性的抗炎作用。对各种炎症均有效。在炎症初期，GC抑制毛细血管扩张，减轻渗出和水肿，又抑制白血细胞的浸润和吞噬，而减轻炎症症状。在炎症后期，抑制毛细血管和纤维母细胞的增生，延缓肉芽组织的生成。而减轻疤痕和粘连等炎症后遗症。糖皮质激素为治疗急性呼吸窘迫综合症和哮喘的常用药物，但在长期使用或者大剂量应用时，出现糖皮质激素的疗效下降的现象，称为糖皮质激素耐受。糖皮质激素结合糖皮质激素受体(GR)，活化的GR迅速转位到细胞核内，转录激活或转录抑制减少基因的表达。转录激活的GR结合糖皮质激素反应元件(GRE)，诱导抗炎靶基因的转录，如lipocortin-1的合成。糖皮质激素治疗建议不超过14天[SteinbergKB,HudsonLD,GoodmanRB,etal.Efficacyandsafetyofcorticosteroidsforpersistentacuterespiratorydistresssyndrome.NEnglJMed2006；354:1671-1684]，原因是大剂量糖皮质激素长期使用导致糖皮质激素耐受，即糖皮质激素不能有效地与其受体糖皮质激素受体α(GRα)有效结合，即细胞浆中GRα下降。GRα的转录活性则被抑制，不能抑制炎症相关基因的转录，导致抗炎效果减弱、耐受。急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorydistresssyndrome,ARDS)是指非心源性的各种肺内外致病因素导致严重的急性缺氧性呼吸衰竭，临床上以呼吸窘迫、顽固性低氧血症和非心源性肺水肿为特征。ARDS肺部的最基本病理改变是肺血管内皮和肺上皮急性弥漫性损伤及透明膜。ARDS发病危险因素既可来自肺的直接损伤，亦可来自间接损伤[TheARDSDefinitionTaskForce,RanieriVM,RubenfeldGD,ThompsonBT,FergusonND,CaldwellE,FanE,CamporotaL,SlutskyAS:AcuteRespiratoryDistressSyndrome:TheBerlinDefinition2012,307:2526–2533]。在美国，成人ARDS患者发病率为每年10万人中有7人发病，虽然ARDS的管理有了重大进展，根据近3年的临床研究显示28天内有20-40％死亡，另外，还有15-20％的患者在12个月内死亡[Rosuvastatinforsepsis-associatedacuterespiratorydistresssyndrome.NEnglJMed2014；370:2191–200.；SweeneyRM,McAuleyDF.Acuterespiratorydistresssyndrome.Lancet.2016,388(10058):2416–2430.]。寻找与糖皮质激素联合使用的药物以改善糖皮质激素的耐受很有必要。德特格韦(dolutegravir，)是美国FDA批准的整合酶抑制剂，剂量为50mg，每日1次，能快速抑制HIV复制，是HIV整合酶抑制剂，旨在与其他抗逆转录病毒制剂联合用于既往已治疗过、或初治HIV-1成人和12岁及以上体重至少40千克儿童感染者。抗HIV整合酶抑制剂德特格韦与糖皮质激素联合使用，预防或治疗糖皮质激素长期使用导致的耐受的药理作用未见报道。本发明人通过大量的研究发现抗HIV整合酶抑制剂德特格韦与糖皮质激素联合使用，可以明显抑制靶细胞细胞浆中GRα的下降，减少糖皮质激素长期使用导致的耐受，增强ARDS治疗中糖皮质激素的抗炎效应。基于此，本发明人发明了抗HIV整合酶抑制剂德特格韦与糖皮质激素联合使用，减少糖皮质激素长期使用导致的耐受，从而增强糖皮质激素的疗效，延长糖皮质激素的使用。技术实现要素：本发明提供了抗HIV整合酶抑制剂德特格韦与糖皮质激素联合使用，治疗急性呼吸窘迫综合症治疗中糖皮质激素长期使用导致的耐受，增强糖皮质激素的抗炎作用的药物中的应用。本发明提供的抗HIV整合酶抑制剂德特格韦与糖皮质激素联合使用，抑制在急性呼吸窘迫综合症治疗中靶细胞细胞浆中GRα的下降治疗糖皮质激素长期使用导致的耐受。本发明提供的糖皮质激素包括中效糖皮质激素和长效糖皮质激素。本发明提供的长效糖皮质激素包括可以为地塞米松、丙酸氟替卡松。本发明提供的中效糖皮质激素可以为甲泼尼龙琥珀酸钠(甲强龙)，泼尼松龙本发明提供的中效糖皮质激素优选甲泼尼龙琥珀酸钠(甲强龙)。本发明提供的德特格韦的使用剂量范围是25mg～500mg。具体实施例实验例1抗HIV整合酶抑制剂德特格韦对LPS刺激肺微血管内皮细胞的GRα和磷酸化NF-κB的影响1.1药品与试剂DMEM培养基为Gibco公司产品，新生牛血清为杭州四季青公司产品LPS(Sigma公司产品，购买于大连美仑生物技术有限公司)德特格韦(纯度99.5％，购买于上海翰香生物科技有限公司)GRα抗体(GlucocorticoidReceptor(D8H2)RabbitmAb，cellsignal公司，货号：3660s)人肺微血管内皮细胞(中科院细胞库)甲强龙(注射用甲泼尼龙琥珀酸钠，辉瑞制药生产，500mg/瓶)1.2实验方法与结果当肺微血管内皮细胞生长融合至70％-80％，换新鲜培养液，将传代的人肺微血管内皮细胞分组包括：(1)阴性对照组；(2)甲强龙处理组(30μM作用时间96h)；(3)甲强龙处理组(30μM作用时间96h)+德特格韦(1μM作用时间96h)；(4)甲强龙处理组(30μM作用时间96h)+德特格韦(3μM作用时间96h)；(5)甲强龙处理组(30μM作用时间96h)+德特格韦(10μM作用时间96h)；培养的细胞裂解，以总蛋白提取试剂及细胞核提取试剂提取总蛋白和细胞核组分，BCA蛋白测定试剂盒(Pierce公司)测定蛋白浓度后，取50μg样品蛋白进行10％的十二烷基磺酸钠2聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶变性电泳、然后转至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜，分别加入GRα抗体，β-actin作内参，Westernblot检测细胞胞浆中GRα蛋白表达。以LPS未刺激组作为对照，计为相应蛋白的100％，分析抗HIV整合酶抑制剂+甲强龙与单纯甲强龙处理组对GRα蛋白的表达差异，组间进行T检验。表1德特格韦对LPS刺激肺微血管内皮细胞的GRα的影响(n＝5)组别GRα(％)正常对照组100±13LPS刺激组23±5LPS+甲强龙组16±4*LPS+甲强龙+德特格韦1μM组28±5**##LPS+甲强龙+德特格韦3μM组51±6**##LPS+甲强龙+德特格韦10μM组57±8**##*，p<0.05，**，p<0.01，与LPS刺激比较；#，p<0.05，##，p<0.01，与LPS+甲强龙组比较实验例2抗HIV整合酶抑制剂德特格韦对LPS导致的急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)模型大鼠的影响2.1药品与试剂LPS(Sigma公司产品，购买于大连美仑生物技术有限公司)德特格韦(纯度99.5％，购买于上海翰香生物科技有限公司)甲强龙(注射用甲泼尼龙琥珀酸钠，辉瑞制药生产，500mg/瓶)GRα抗体(GlucocorticoidReceptor(D8H2)RabbitmAb，cellsignal公司，货号：3660s)实验动物：SPF级SpragueDawley大鼠，雄性，体重150g-200g，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，动物合格证号为：SYXK(鲁)20030020。2.2实验方法与结果2.2.1内毒素二次打击ARDS大鼠模型制备、分组及给药雄性大鼠70只，体重180-220g，取60只腹腔注射LPS2mg/kg，16小时后10％水合氯醛麻醉，分离气管，气管内滴入LPS生理盐水溶液，体积0.2mL/只，剂量：5mg/kg。随机分为6组，即模型组、甲强龙肌肉注射20mg/kg组，甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药2.5mg/kg组、甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药10mg/kg组、甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药25mg/kg组、甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药50mg/kg组。另外10只大鼠作为对照组。气管内滴入LPS24小时开始给药，连续给药5天，每日给药1次，末次给药结束24小时，处死动物，取肺，称重，测定肺系数，取一叶肺，HE染色制备病理片，进行病理评分，病理评分根据参考文献[Matute-Bello,G.etal.AcuteLungInjuryinAnimalsStudyGroup.AnofficialAmericanThoracicSocietyworkshopreport:featuresandmeasurementsofexperimentalacutelunginjuryinanimals.AmJRespirCellMolBiol44,725-738(2011).]进行评分。比较德特格韦加甲强龙组与模型组及单纯甲强龙组的差异。组间进行T检验。2.2.2实验结果表2结果显示甲强龙肌肉注射20mg/kg组可明显减少ARDS模型大鼠的肺系数，降低肺病理评分(与模型组比较，p<0.05或p<0.01)；甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药2.5mg/kg组、甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药10mg/kg组、甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药25mg/kg组、甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药50mg/kg组明显减少ARDS模型大鼠的肺系数，降低肺病理评分(与模型组比较，p<0.01)；与甲强龙肌肉注射20mg/kg组比较，甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药2.5mg/kg组、甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药10mg/kg组、甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药25mg/kg组、甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药50mg/kg组明显减少ARDS模型大鼠的肺系数，降低肺病理评分(与甲强龙组比较，p<0.05或p<0.01)，说明德特格韦与甲强龙联合使用，明显增强甲强龙的抗ARDS作用。甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药25mg/kg组减少ARDS模型大鼠的肺系数，降低肺病理评分与甲强龙肌肉注射20mg/kg+德特格韦灌胃给药50mg/kg组比较，无显著性差异。表2德特格韦对ARDS模型大鼠肺系数和肺病理的影响(n＝10)组别肺系数肺病理评分对照组0.49±0.04---模型组1.04±0.080.83±0.07甲强龙组0.91±0.06*0.73±0.05*甲强龙+德特格韦2.5mg/kg组0.77±0.08**#0.61±0.06**#甲强龙+德特格韦10mg/kg组0.71±0.09**##0.53±0.11**##甲强龙+德特格韦25mg/kg组0.65±0.08**##0.38±0.08**##甲强龙+德特格韦50mg/kg组0.64±0.08**##0.37±0.07**##*，p<0.05，**，p<0.01，与模型组比较；#，p<0.05，##，p<0.01，与甲强龙组比较。当前第1页1 2 3