五味子丙素在制备改善糖皮质激素性骨质疏松症药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，具体地说，是五味子丙素的医药新用途，即五味子丙素 在制备预防/治疗糖皮质激素性骨质疏松症药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 糖皮质激素（glucocorticoid, GC)是临床上广泛应用的一类药物，用于治疗很 多慢性炎性疾病及自身免疫性疾病，如溃疡性结肠炎、系统性红斑狼疮、哮喘、类风湿性 关节炎等等。然而，长期应用GC常常会引起很多副反应，其中糖皮质激素性骨质疏松症 (glucocorticoid-induced osteoporosis, GI0)是 GC 引起的最严重的副作用之一。GIO 是 最常见的继发性骨质疏松症，可引起骨质疏松性骨折。据估计，在接受GC治疗超过6个月的 患者中，约有30%会发生骨质疏松症；而长期接受GC治疗的成年患者中约有30%~50% 发生骨质疏松性骨折。此外，在相同骨密度的情况下，GIO引起骨折的风险要高于绝经后骨 质疏松症和老年性骨质疏松症。因此，有效防治GIO的药物具有十分广阔的市场前景，对临 床长期接受GC治疗的患者具有极重要的意义，该适应症药物的研发是新药研发的热点之 O
[0003] 五味子丙素 （schisandrin C)(结构式见式1)少量存在于五味子药材中，目前研 究较少。五味子丙素对于成骨细胞的调节，及其在预防/治疗糖皮质激素性骨质疏松症方 面的研究尚未见文献报道。
[0005] 式1.五味子丙素的结构式
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供五味子丙素的医药新用途。
[0007] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：五味子丙素在制备预防或治疗糖皮 质激素性骨质疏松症药物中的应用。
[0008] 所述的糖皮质激素性骨质疏松症是使用糖皮质激素引起的。
[0009] 所述的糖皮质激素是指地塞米松、可的松、氢化可的松、强的松、强的松龙、倍他米 松、倍氯米松、甲强龙、甲基泼尼松、对氟米松、氟泼尼松龙、曲安西龙、氯地米松等所有肾上 腺皮质分泌的留体激素或人工合成的肾上腺皮质激素。
[0010] 所述的五味子丙素制备成药理学上允许的药物剂型。
[0011] 所述的五味子丙素制备成五味子丙素片剂。
[0012] 所述的五味子丙素片剂由以下原料制成：五味子丙素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤 维素、交联羧甲基纤维素钠、乙醇、硬脂酸镁。
[0013] 所述的五味子丙素制备成五味子丙素注射剂。
[0014] 所述的五味子丙素注射剂由以下原料制成：五味子丙素0. lg、注射用磷脂5g、注 射用大豆油50g、甘油22g、注射用水加至总体积1000ml。
[0015] 本发明优点在于：
[0016] 1、本发明发现地塞米松可以显著抑制成骨细胞增殖分化，而五味子丙素可以显著 改善地塞米松对成骨细胞增殖、分化的抑制作用。
[0017] 2、本发明发现地塞米松可以显著诱导成骨细胞凋亡，五味子丙素在体外可以显著 抑制地塞米松诱导的成骨细胞凋亡。
[0018] 3、腹腔注射地塞米松造成的小鼠糖皮质激素性骨质疏松症模型，五味子丙素可以 显著减轻地塞米松引起的小鼠骨皮质变薄，皮质骨含量下降及皮质骨密度，改善地塞米松 引起的骨质疏松症。
[0019] 4、本发明通过体外、体内药理研究证明五味子丙素可以改善地塞米松引起的小鼠 糖皮质激素性骨质疏松症，促进成骨细胞增殖、分化，抑制地塞米松诱导的成骨细胞凋亡。 对于需要长期使用糖皮质激素治疗的患者，比如哮喘、类风湿性关节炎、慢性阻塞性肺病、 间质性肺炎、系统性红斑狼疮、肾病综合症等，具有较好的使用价值，可以降低糖皮质激素 性骨质疏松及骨质疏松性骨折的发生率，减轻病人痛苦，降低医疗成本。
【附图说明】
[0020] 图1是五味子丙素联合地塞米松对小鼠骨密度的影响图（注：ttP〈0. 05vs.地塞米 松组）。
[0021] 图2是五味子丙素联合地塞米松对小鼠骨含量的影响图（注：*P〈0.0 lvs.空白对 照组，#P〈0. 05vs.地塞米松组）。
[0022] 图3是五味子丙素联合地塞米松对小鼠骨面积的影响图（注：*P〈0.0 lvs.空白对 照组，#P〈0. 05vs.地塞米松组）。
[0023] 图4是五味子丙素联合地塞米松对小鼠骨皮质厚度的影响图（注：*P〈0.0 lvs.空 白对照组，#P〈〇. 05vs.地塞米松组）。
[0024] 图5是五味子丙素对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖的调节图（注：MTT法检测地塞 米松与五味子丙素联合作用后小鼠成骨细胞的增殖情况。*P〈〇. Olvs. Control ;>〈0.0 lvs. Dex 组）。
[0025] 图6是五味子丙素对成骨细胞分化相关基因表达的影响（注：*P〈0.01vS. Control ; jiP(C). Olvs.诱导分化组；言 Ρ〈0· Olvs. Dex 组）。
[0026] 图7是五味子丙素对地塞米松体外抗炎作用的影响（注：**P〈0.0 lvs. Control ; ##P〈0.01vs.TNF-a 组）。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0028] 本发明以下实施例中使用的五味子丙素可以按照通常方法从五味子药材中提取， 亦可从商业渠道购买（如上海融禾医药科技发展有限公司，规格为HPLC彡98%，20mg/ 支）。
[0029] 实施例1 (五味子丙素改善地塞米松诱导的小鼠骨质疏松症的研究）
[0030] (一）材料与方法
[0031] (1)实验动物
[0032] 成年雄性ICR小鼠40只（8周龄，平均体重为30±2g)，由第二军医大学实验动物 中心提供。饲养于SPF级动物实验中心，每天12小时的昼夜交替，恒温18~20°C，小鼠均 可自由进食和饮水。所有小鼠预先饲养一周，适应生活环境后开展实验。
[0033] (2)主要试剂的制备
[0034] 1.地塞米松磷酸钠：用0. 9 %氯化钠溶液配置成浓度为0. 25mg/ml溶液；
[0035] 2.五味子丙素：将20mg五味子丙素溶于2100ml无水乙醇中，吹打至完全溶解；将 完全溶解的五味子丙素20mg溶于84ml丙二醇中，终浓度约为0. 24mg/ml (给药浓度为4mg/ kg/d)，并加入2100ml无水乙醇，使乙醇的终浓度均为5%。
[0036] (3)模型制备与分组给药
[0037] 1.将40只成年雄性ICR小鼠称重后编号，并记录。
[0038] 2.然后将小鼠随机分为4组，分别为A.空白对照组；B. Dex组；C. Dex+五味子丙 素低浓度组；D. Dex+五味子丙素高浓度组，每组10只，实验开始前各组小鼠体重无明显差 别。
[0039] 3.给药
[0040] (3. 1)空白对照组：给予0. 9%氯化钠溶液0. 2ml腹腔注射+含5%乙醇的丙二醇 0· 5ml灌胃；
[0041] (3. 2)Dex 组：按照 Dex 2. 5mg/kg 给药，予 Dex 溶液（0· 375mg/ml)腹腔注射 + 丙 二醇0. 5ml灌胃；
[0042] (3. 3) Dex+五味子丙素低浓度组：按照五味子丙素4mg/kg给药，Dex+丙低组给予 Dex溶液（0· 375mg/ml)腹腔注射+五味子丙素溶液（I. 5mg/ml)灌胃；
[0043] (3. 4) Dex+五味子丙素高浓度组：按照五味子丙素8mg/kg给药，Dex+丙高组给予 Dex溶液（0.375mg/ml)腹腔注射+五味子丙素溶液（3mg/ml)灌胃；
[0044] (3. 5)给药每天一次，持续28天。各组动物分笼饲养。
[0045] 4.标本收集：40只ICR小鼠喂养28天后，予颈椎脱白法处死，沿小鼠右后肢股骨 逐层切开皮肤、皮下组织及筋膜，暴露胫骨，仔细分离胫骨周围的肌肉和软组织，尽量剔除 干净，将标本放置于有70%乙醇的EP管内，micro CT检测小鼠骨密度。以胫骨近端为基点 向下2. Omm处作断层扫描。
[0046] (二）实验结果
[0047] 利用显微CT对小鼠胫骨进行骨组织微结构分析后显示：与空白对照组相比，Dex 组的总骨密度降低，总骨含量和骨皮质量减少，骨皮质面积减少以及骨皮质变薄，差异具有 统计学意义（P〈〇. 05)(图1-图4)。与Dex模型组相比，Dex+五味子丙素组的骨皮质面积 增大，骨皮质厚度、骨皮质含量及骨皮质密度均显著提高（P〈〇. 05)，但均低于空白对照组； 而总骨含量、松质骨含量、总骨密度和骨小梁密度，两组无显著差异，说明4mg/kg五味子丙 素主要改善受Dex抑制的胫骨骨皮质相关参数。
[0048] 实施例2 (五味子丙素联合地塞米松对小鼠成骨细胞增殖分化的影响）
[0049] ( -）材料与方法
[0050] 细胞株：小鼠成骨细胞系（MC3T3-E1)购于ATCC。上述细胞株用含有10%胎牛血 清