本发明涉及一种利用传统草药的未确定结构经菌体发酵制得的药物制剂，特别是涉及一种用于老年性阴道炎的外用药剂。
背景技术：
：老年性阴道炎常见于绝经后的老年妇女，因卵巢功能衰退，雌激素水平降低，阴道壁萎缩，黏膜变薄，上皮细胞内糖原含量减少，阴道内pH值上升呈碱性，局部抵抗力降低，同时，由于阴道粘膜萎缩，上皮菲薄，血运不足，使阴道抵抗力降低，便于细菌侵入繁殖而引起的炎症病变。主要症状为阴道分泌物增多及外阴瘙痒、灼热感。检查见阴道呈老年性改变，上皮萎缩，皱襞消失，上皮变平滑、菲薄。阴道黏膜充血，有小出血点，有时见浅表溃疡。若溃疡面与对侧粘连，阴道检查时粘连可被分开而引起出血，粘连严重时可造成阴道狭窄甚至闭锁，炎症分泌物引流不畅可形成阴道积脓甚至宫腔积脓，目前这种情况少见。治疗方法主要从以下两方面入手：1.增强阴道抵抗力例如：针对病因给予雌激素制剂，可局部用药，也可全身给药。妊马雌酮软膏局部涂抹，每日2次，或雌三醇乳膏，第1周内局部，每天使用1次，然后根据缓解情况逐渐减低至维持量(如每周用2次)。2.抑制细菌生长例如：用1％乳酸或0.5％醋酸液冲洗阴道，每日1次，增加阴道酸度，抑制细菌生长繁殖。阴道冲洗后，局部应用抗生素治疗。但上述方法通常治标不治本，容易反复，甚至直接破坏了阴道内的pH值和正常菌群，导致菌群失调，从而引发其他阴道疾病。技术实现要素：本发明是为了解决以上技术问题而提供了一种治疗老年性阴道炎的外用药剂及其制备方法，该药剂可直接外用，一方面通过调节阴道内的pH值、提高有益菌群数量，利用偏酸性的环境和有益菌对有害菌的拮抗作用，减少有害菌的数量，另一方面利用中草药固(特)有的药性和微生物发酵中药产生的次生代谢产物加强抗病菌作用并对已经损坏的阴道壁进行修复，从而对老年性阴道炎具有显著的治疗效果，从而对老年性阴道炎具有显著的治疗效果，同时，本发明的外用药剂对其他妇科感染性疾病也有很好的治疗效果。本发明涉及一种治疗老年性阴道炎的外用药剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：一、中药培养基的制备：按照质量比分别称取中药1～2份、碳源3～10份、水100～200份，混合后加热至100℃，保持5～30min，冷却至1～45℃，过滤去除药渣后即制得中药培养基；二、接种：将步骤一制得的中药培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的中药培养基中；三、发酵：将培养容器用灭菌后的毛巾或纱布封口后，发酵温度为10～45℃，发酵7～60d，所得发酵液和发酵液上层的菌膜均为本发明的治疗老年性阴道炎的外用药剂；所述步骤一中的中药包括苦参、黄柏、蛇床子中的一种或多种；所述步骤一中的碳源包括白糖、冰糖、麦芽糖、葡萄糖、蜂蜜、木糖醇中的一种或多种；所述步骤二中的菌种包括德氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、醋酸菌、酵母菌和乳酸菌中的一种或多种。其中上述德氏乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckiisubsp)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophylus)、粪肠球菌(Escherichiacoli(Streptococcusfaecalis))属于阴道益生菌，醋酸菌(Acetobactersp)、酵母菌(Candidaalbicans)和乳酸菌(Lactobacillusacidophilus)为红茶菌的主要菌种。优选地，所述步骤一中的中药为苦参、黄柏和蛇床子。优选地，所述中药中苦参、黄柏、蛇床子的质量比为3～6:2～5:1～3。优选地，所述步骤二中的菌种还包括双歧杆菌(Bifidobacterium)和/或BF-839脆弱拟杆菌(B.fragilis-839)。所述菌种中除了包括双歧杆菌和/或BF-839脆弱拟杆菌以外，菌种中还可以包含其他阴道益生菌和/或红茶菌中的菌种。优选地，所述步骤三中封口的毛巾的厚度为2～3层，封口的纱布厚度为5～8层。优选地，所述步骤三中发酵温度为20～35℃。优选地，所述步骤三中发酵结束后将所得发酵液制成冲洗液、水雾状喷剂或泡沫喷剂(摩丝)，或者将所述药剂浸入载体中。还可将持有药液的本发明的菌膜直接置于阴道中使用。本发明还涉及一种治疗老年性阴道炎的外用药剂，所述药剂是由上述的方法制备得到的。本发明的特征和作用原理在于：将在人体阴道易于生存繁殖并处于优势地位而且能够抑制或杀灭阴道致病菌的菌种接种于含有功效性草本植物和碳水化合物的培养基中培养成酸性多元生物菌液，通过最佳方式使之作用于阴道达到抑制或杀灭阴道致病菌并恢复阴道正常的酸性环境从而治疗老年性阴道炎或其他妇科感染性疾病。本发明治疗老年性阴道炎的外用药剂及其制备方法与现有技术不同之处在于：1.本发明的治疗老年性阴道炎的外用药剂含有多种阴道益生菌，可抑制或杀灭阴道致病菌，改变阴道的微生态群。本发明的方法制得的药剂(发酵液)呈酸性并且营养丰富，可降低阴道pH值，恢复阴道酸性环境，改善阴道营养，减少阴道并发症。2.本发明采用对妇科感染性疾病有明确治疗作用的苦参、黄柏、蛇床子做为培养基液的制作原料，可加强治疗作用，而且实践证明它们和碳水化合物做为培养基在发酵过程中菌液表面有较好的成膜性。本发明的生物菌膜具有很高的强度和持水性，滑润柔软易于放取而且生命力顽强不易腐臭，是难得的天然载体。综上所述本发明开辟了老年性阴道炎临床治疗的新途径，治疗原理明确，疗效极佳，用法方便易行，具有突出的先进性。3.本发明为治疗老年性阴道炎和其他妇科感染性疾病提出了一种全新的治疗方案；本发明对老年性阴道炎的发病机理提供了针对性更强的治疗措施，其功效显著而且制备工艺和使用方法简单，易于推广。具体实施方式通过以下实施例和验证试验对本发明的治疗老年性阴道炎的外用药剂及其制备方法作进一步的说明。实施例1本实施例的治疗老年性阴道炎的外用药剂按以下步骤制备：一、中药培养基的制备：按照质量比分别称取中药、碳源和水，混合后加热至100℃，保持5min，冷却至15℃，过滤去除药渣后即制得中药培养基；二、接种：将步骤一制得的中药培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的中药培养基中；三、发酵：将培养容器用灭菌后的纱布封口，封口的纱布厚度为5层，然后发酵30d，发酵温度为15℃，即制得本实施例的治疗老年性阴道炎的外用药剂；本实施例中培养基中中药的选择及其他原料的量见表1，菌种的选择见表2。实施例2本实施例的治疗老年性阴道炎的外用药剂按以下步骤制备：一、中药培养基的制备：按照质量比分别称取中药、碳源和水，混合后加热至100℃，保持30min，冷却至20℃，过滤去除药渣后即制得中药培养基；二、接种：将步骤一制得的中药培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的中药培养基中；三、发酵：将培养容器用灭菌后的毛巾封口，封口的毛巾的厚度为2～3层，然后发酵15d，发酵温度为20℃，即制得本实施例的治疗老年性阴道炎的外用药剂；本实施例中培养基中中药的选择及其他原料的量见表1，菌种的选择见表2。实施例3本实施例的治疗老年性阴道炎的外用药剂按以下步骤制备：一、中药培养基的制备：按照质量比分别称取中药、碳源和水，混合后加热至100℃，保持20min，冷却至1℃，过滤去除药渣后即制得中药培养基；二、接种：将步骤一制得的中药培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的中药培养基中；三、发酵：将培养容器用灭菌后的纱布封口，封口的纱布厚度为8层，然后发酵60d，发酵温度为10℃，即制得本实施例的治疗老年性阴道炎的外用药剂；本实施例中培养基中中药的选择及其他原料的量见表1，菌种的选择见表2。实施例4本实施例的治疗老年性阴道炎的外用药剂按以下步骤制备：一、中药培养基的制备：按照质量比分别称取中药、碳源和水，混合后加热至100℃，保持15min，冷却至45℃，过滤去除药渣后即制得中药培养基；二、接种：将步骤一制得的中药培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的中药培养基中；三、发酵：将培养容器用灭菌后的纱布封口，封口的纱布厚度为5～8层，然后发酵7d，发酵温度为45℃，即制得本实施例的治疗老年性阴道炎的外用药剂；本实施例中培养基中中药的选择及其他原料的量见表1，菌种的选择见表2。实施例5本实施例的治疗老年性阴道炎的外用药剂按以下步骤制备：一、中药培养基的制备：按照质量比分别称取中药、碳源和水，混合后加热至100℃，保持8min，冷却至40℃，过滤去除药渣后即制得中药培养基；二、接种：将步骤一制得的中药培养基转移至培养容器中，将菌种接种于培养容器的中药培养基中；三、发酵：将培养容器用灭菌后的毛巾封口，封口的毛巾的厚度为3层，然后发酵9d，发酵温度为40℃，即制得本实施例的治疗老年性阴道炎的外用药剂；本实施例中培养基中中药的选择及其他原料的量见表1，菌种的选择见表2。表1实施例1-5中中药培养基的原料及量(单位：g)表2实施例1-5中菌种的选择注：上表中未填写即为无。以上表格中，德氏乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckiisubsp)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophylus)、粪球菌(Escherichiacoli(Streptococcusfaecalis))属于阴道益生菌，醋酸菌(Acetobactersp)、酵母菌(Candidaalbicans)和乳酸菌(Lactobacillusacidophilus)为红茶菌的主要菌种。另外还列举了双歧杆菌(Bifidobacterium)、BF-839脆弱拟杆菌(B.fragilis-839)。验证试验1将实施例1中序号1-5制得的产品(发酵液)制成冲洗液，供患者使用。用法用量：验证试验2将实施例2中序号6-10制得的产品(发酵液)制成水雾状喷剂，供患者使用。用法用量：验证试验3以拉线棉球做为载体，浸满实施例3中序号11-15制得的发酵液，供患者使用。用法用量：将浸满发酵液的拉线棉球置于阴道，12-24小时更换一次，用至阴道炎症状消失。验证试验4将实施例4中序号16-20制得的发酵液上层的菌膜(纳塔)取出，剪成所需形状，供患者使用。(菌膜是由生物菌细泡自身产生的多聚物基质(主要为多糖)所包围而形成，且附着于浸有液体的惰性或生物表面的凝胶状膜，具有高持水性、高抗撕拉强度和顽强的生命力。)用法用量：将菌膜剪切成小块穿上拉线做为发酵液中多元菌液的载体，将其置于阴道，12-24小时更换一次，用至阴道炎症状消失。验证试验5将实施例5中序号21-25中采用的培养容器为特定形状的(如套管状的)，即可形成管状的菌膜，供患者使用。用法用量：将管状菌膜内置于阴道使用可获得更佳效果，12-24小时更换一次，用至阴道炎症状消失。验证试验6目的：对比观察本发明与苦参、黄柏、蛇床子洗液治疗老年性阴道炎的效果和复发率。方法：将60例老年性阴道炎患者随机分为本发明观察组和苦参、黄柏、蛇床子洗液对照组，分别采用本发明药剂及使用方法和苦参、黄柏、蛇床子洗液治疗，连用7天，判断总有效率和三个月后复发率。结论：本发明组有效率100％(30/30)，苦参、黄柏、蛇床子洗液有效率67％(30/20)，差异有显著性(p<0.05)。本发明组三个月后复发率6％(30/2)，苦参、黄柏、蛇床子洗液治疗组三个月后复发率40％(30/12)，差异有显著性(p<0.05)。结论：本发明治疗老年性阴道炎，治愈率高，复发率低。1临床资料1.1一般资料患者6人，伴尿频，排尿困难3人，阴道粘膜溃烂5人，平均绝经期7人。对照治疗组年龄最小48岁，年龄最大72岁，平均年龄57+-6岁，平均绝经期8年。两组临床资料经检验p>0.05，差异无显著性。2015年1月至2016年10月实验验证选取老年性阴道炎60例并随机分成观察组，也就是本发明治疗组30例，对照组也就是苦参、黄柏、蛇床子洗液治疗组30例，本发明治疗组年龄最小49岁，年龄最大71岁，平均年龄56+-5岁1.2诊断标准1.2.1病史：绝经、卵巢手术或盆腔放射治疗史。1.2.2临床表现：阴道分泌物增多，质稀薄，呈淡黄色，感染严重呈脓性，伴外因瘙痒，灼热感或性交痛。1.2.3妇科检查：阴道呈老年性改变，上皮皱壁消失萎缩，菲薄，阴道粘膜充血，散在小出血点、出血斑，有的呈浅表溃疡。1.2.4实验室检查：白带常规显示白细胞较多，无滴虫及假丝酵母菌，镜检角化鳞状上皮量少或不见，出现中层细胞、红、白细胞。2治疗方法本发明观察组采用：将含有本发明菌液(基料为苦参9％、黄柏6％、蛇床子3％)的菌膜剪成拇指大小，穿上拉线(无菌操作或剪切穿线后放回原液中浸泡5分钟取出使用)，阴道清水冲洗后置于阴道深处，每24小时更换一次，连续使用7天。苦参9％、黄柏6％、蛇床子3％水煎洗液对照组：每晚临睡前冲洗阴道后，将浸有洗液的拉线棉球置于阴道深部，每日一次，7天为一疗程。用药及随访期间禁用其他药物，复查前三天禁止性生活，停药三天后进行临床检查，记录结果3治疗结果3.1疗效判定：治愈：治疗后临床症状及体征消失，阴道清洁度1度。有效：治疗后临床症状及体征明显好转，清洁度明显改善。无效：治疗后临床症状、体征及阴道清洁度无改变。3.2复发判定：所有患者于治疗三个月后复诊，参照上文诊断标准，重新对观察有效病例进行评定，对每组重新诊断为老年性阴道炎的人数占本组有效病例数的比例为复发率3.3结果3.3.1效果：本发明观察组30例治愈27例，有效3例，总有效率100％；苦参、黄柏、蛇床子水煎洗液对照组30例，治愈12例，有效8例，无效10例，总有效率67％两组总有效率比较差异有显著性(p<0.05)，见表3。表3两组疗效比较组别例数痊愈有效无效有效率本发明观察组302730100％水煎液对照组301281067％p<0.05差异有显著性。3.4.2复发率治疗3个月后随访复发率，本发明观察者30例复发4例，复发率6％，对照组有效30例，复发12例，复发率40％。两组比较，差异有显著性(p<0.05)。见表4。表4两组复发率比较组别随访例数复发例数复发率本发明观察组3026％水煎液对照组301240％p<0.05差异有显著性。以下为采用本发明产品治疗老年性阴道炎个案病例。1、女，56岁，身高164cm，体重67公斤，汉族。主诉：外阴瘙痒剧烈、灼热感，患者近半年来常感外阴轻微灼热伴瘙痒感，自感性交痛，白带少。曾口服雌二醇和阴道给药及外用各种消炎栓剂和外洗也无效果。无冠心病，高血压，糖尿病史，无药物过敏史，否认婚外性生活。月经史：48岁停经。妇科检查：外阴阴道呈老年性改变，阴道干涩，上皮萎缩，皱襞消失，点状充血粘膜松弛、膨出。可见3--5mm溃疡面。有少量淡黄色分泌物。阴道分泌物涂片微生物学检查：阴道菌群失调，微生态改变。白细胞阳性(+)，孢子阳性(+)，类乳酸杆菌阳性(+)。巴氏分级Ⅱ。B超检查：子宫及两侧附件B超显示无明显异常。诊断：老年性阴道炎。患者接受经本发明治疗两周后，外阴瘙痒烧灼症状完全消失，性生活正常无疼痛。涂片检查红细胞白细胞阴性，巴氏分级Ⅰ，类乳酸杆菌阴性，无菌群失调，阴道道微生态正常。妇科检查溃疡面消失，无充血，阴道湿润，皱襞粘膜红润光滑，随访1年没复发。治疗方法：阴道清水冲洗后，将浸有本发明菌液(基料为苦参)的拉线棉球置于阴道深处，每24小时更换一次，连续使用两周。2、女58岁，身高166cm，体重72公斤。主诉：外阴烧灼感伴疼痛，潮湿，小便外阴疼痛，不能过性生活，绝经4年。患者2年来自感外阴部经常瘙痒伴烧灼感，口服或外用过无数的妇科消炎药均无明显效果，性交疼痛，伴有尿频、尿急、尿痛、尿不尽，不敢过性生活。妇科检查：外阴部粘膜皱襞消失，萎缩，呈白色样变，阴道口狭窄，大阴唇消失，阴道内粘膜干涩，膨出，松弛，可见散在红色出血点。阴道分泌物涂片微生物学检查：阴道菌群失调微生态改变，红细胞++，白细胞++，巴氏分级Ⅲ。诊断：老年性阴道炎伴外阴萎缩。患者接受经本发明治疗两周后，外阴疼痛烧灼感完全消失，外阴萎缩症状缓解，外阴部白色样变消失，粘膜皱襞增多，小便尿频、尿急、尿痛，尿不尽症状逐渐改善，半月后可以性生活，妇科检查，随后坚持用药1至2个月，随访半年没复发。达到临床治愈效果。治疗方法：阴道清水冲洗后，将浸有本发明菌液(基料黄柏)的拉线棉球置于阴道深处，每24小时更换一次，连续使用2周。3、女65岁，身高162，体重68公斤，汉族。主诉：外阴烧灼感伴瘙痒，经常尿频尿急尿不尽，伴有小腹部经常不适，有阴道炎病史多年，曾用过甲硝唑、环丙沙星等等各种妇科外用消炎栓剂及中药坐浴熏蒸效果欠佳，口服和外用雌激素类药物无效。患者有冠心病高血压，无糖尿病。妇科检查：外阴呈老年性改变，阴道干涩，上皮粘膜萎缩，皱襞消失，膨出，阴道、宫颈有点状充血，宫颈充血糜烂，可见不超过5mm溃疡面，有淡黄色分泌物流出，有异味。阴道分泌物涂片微生物学检查：白细胞++、红细胞++、菌群失调微生态改变，PH值6，巴氏分级Ⅲ。宫颈活检：糜烂性宫颈炎Ⅲ诊断：老年性阴道炎、宫颈炎。妇科腹部B超：慢性盆腔炎。患者接受经本发明治疗三周后，自觉症状消失，妇科检查阴道干涩症状减轻，宫颈无红肿，溃疡面消失。阴道分泌物涂片微生物学检查：白细胞阴性、红细胞阴性、菌群微生态正常。腹部不适症状完全消失，PH值4，巴氏分级Ⅰ，腹部B超显示，子宫及双侧附件正常。随访半年老年性阴道炎，宫颈炎，盆腔炎症状无复发，达到临床治愈。治疗方法：阴道清水冲洗后，将浸有本发明菌液(基料苦参、蛇床子)的拉线棉球置于阴道深处，每24小时更换一次，连续使用2周。4、女62岁，身高159cm，体重55公斤，汉族。主诉：外阴疼痛难忍伴瘙痒，外阴粘膜溃烂，阴道有脓性及豆腐渣样分泌物流出，既往有阴道炎病史，近一个月病情加重，不能过性生活，50岁绝经。患者有高血压病，无冠心病，无糖尿病史。妇科检查：外阴部粘膜有溃烂，阴道呈绝经后老年性改变，上皮粘膜萎缩，皱襞消失，膨出，白带黄色水样，有大小不等的小红点，宫颈有点状出血点。腹部B超：子宫肌瘤，宫颈活检；宫颈癌前病变Ⅱ。阴道分泌物涂片微生物学检查：红细胞+++，白细胞++，白色念珠菌+++，菌群失调微生态改变，巴氏分级Ⅲ。诊断：老年性阴道炎继发霉菌性阴道炎。患者接受经本发明治疗4周后，自觉症状消失，经妇科检查均正常，随访三个月未复发。治疗方法：阴道清水冲洗后，将浸有本发明菌液(基料苦参、蛇床子、黄柏)的拉线棉球置于阴道深处，每24小时更换一次，连续使用2周。虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式作出多种变更或修改，但这些变更和修改均落入本发明的保护范围。当前第1页1 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