本发明涉及对癌症的治疗或预防有效的、将alk抑制剂和vegf抑制剂组合形成的药物；和用于治疗或预防癌症的方法；以及产品等。
背景技术：
间变性淋巴瘤激酶(anaplasticlymphomakinase，alk)是属于胰岛素受体家族的受体型酪氨酸激酶之一(非专利文献1、非专利文献2)。
据报道，alk基因异常(易位、点突变和基因扩增)的结果，会引起与其他基因融合的异常激酶的生成，与癌化有关。
作为在日本或海外得到了认可的alk抑制剂，可以列举アレセンサtm(通用名：艾乐替尼盐酸盐、alectinib)、ザーコリtm(通用名：克唑替尼、crizotinib)、zykadiatm(通用名：色瑞替尼、ceritinib)。
通常，在抗癌药的使用中，为了增强效果、扩大可适用的肿瘤种类、或者为了应对或预防已耐药的癌症，而使用作用机理不同的多种抗癌药。
关于作为alk抑制剂的艾乐替尼与其他分子靶向药物的联用已有报道。有报道称：将艾乐替尼和厄洛替尼(egfr(上皮生长因子受体)的酪氨酸激酶选择性抑制剂)或克唑替尼(alk和c-met(肝细胞增殖因子受体)的酪氨酸激酶抑制剂)联用的结果，在移植了艾乐替尼耐性肺癌细胞株的异种移植模型中确认到了肿瘤的退缩效果(非专利文献3：cancerresoctober1,2014,74；3720,aacrannualmeeting2014；april5-9,2014,abstract3720)。
另一方面，血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，vegf)是血管新生的主要调节因子，在大部分的人肿瘤中表达亢进，与肿瘤的增殖・转移有关。通过阻断vegf的信号传递路径，确认到了下述作用：抑制由vegf引起的肿瘤组织中的血管新生，抑制肿瘤的增殖，使脉管结构正常化，降低血管透过性，降低在肿瘤组织中亢进的间质压，作为vegf途径抑制剂，有アバスチンtm(通用名：贝伐单抗、bevacizumab)、ネクサバールtm(通用名：索拉非尼、sorafenib)、ヴォトリエントtm(通用名：盐酸帕唑帕尼、pazopanibhydrochloride)、スーテントtm(通用名：苹果酸舒尼替尼、sunitinibmalate)、インライタtm(通用名：阿昔替尼、axitinib)、スチバーガtm(瑞格非尼水合物、regorafenib)等，作为抗癌药在开发的vegf途径抑制剂，有通用名雷莫芦单抗(ramucirumab)、通用名马来酸卡博替尼(cabozantinibs-malate)、通用名乙磺酸尼达尼布(nintedanibesylate)等作为抗癌药在销售。
关于无法治癒切除的进行・复发的结肠・直肠癌、除扁平上皮癌以外的无法切除的进行・复发的非小细胞肺癌、卵巢癌、无法手术或者复发乳癌，アバスチン(贝伐单抗)与特定的标准化学疗法或者化疗药联用作为疗法在日本得到认可。然而，关于アバスチン(贝伐单抗)与vegf途径抑制剂以外的分子靶向药的联用目前尚未得到认可，但有人报道了vegf途径抑制剂与作为egfr的酪氨酸激酶选择性抑制剂的厄洛替尼联用的效果、以及通过抑制vegf途径和c-met或hgf/c-met途径两者而产生的肿瘤抑制效果。(非专利文献4：lancetoncol2014；15：1236-44；非专利文献5：cancerdiscov.2012march；2(3)：270-287；非专利文献6：molcancerther.2015jan；14(1)：101-110,“combinationstrategytargetingvegfandhgf/c-metinhumanrenalcellcarcinomamodels”)。
然而，迄今为止，关于vegf途径抑制剂与alk抑制剂的联用尚无报道的文献。而且，据报道，给予贝伐单抗有可能降低联用药物向肿瘤中的转移性(非专利文献7：cancercell21,82-91,january17,2012；非专利文献8：cancerres.2013jun1；73(11)：3347-55”bevacizumab-inducednormalizationofbloodvesselsintumorshampersantibodyuptake.”)，抑制血管新生有可能降低联用药的效果。临床上报道了：在将egfr1抗体的帕尼单抗、贝伐单抗、化疗药联用的临床试验中无恶化生存期缩短(非专利文献9：journalofclinicaloncology,27卷,no.5,february10,2009,672-680)。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：procnatlacadsciusa,第101卷,第13306-13311页,2004年；
非专利文献2：nature,第448卷,第561-566页,2007年；
非专利文献3：cancerresoctober1,2014,74；3720,aacrannualmeeting2014；april5-9,2014,abstract3720；
非专利文献4：lancetoncol2014；15：1236-44；
非专利文献5：cancerdiscov.2012march;2(3):270-287；
非专利文献6：molcancerther.2015jan;14(1):101-110；
非专利文献7：cancercell21,82-91,january17,2012；
非专利文献8：cancerres.2013jun1;73(11):3347-3355；
非专利文献9：journalofclinicaloncology,第27卷,no.5,february10,2009,672-680。
技术实现要素：
如上所述，进一步希望开发对癌症的预防・治疗有效且具有优异药效的药物。
本发明的课题在于：提供将多种药物组合形成的新型药物、以及使用了该新型药物的癌症的治疗方法或产品等，以用于治疗或预防各种癌症、或者延长无恶化生存期。
本发明人等将alk抑制剂和vegf抑制剂组合使用的结果，还出乎意料地发现：这些药剂的联用发挥出较单剂给药优异的肿瘤缩小效果，完成了本发明。
即，本发明涉及以下的发明：
[1]用于治疗或预防癌症的药物，该药物是将alk抑制剂和vegf抑制剂组合形成的。
[2][1]所述的药物，其特征在于：上述药物为配方剂。
[3][1]所述的药物，其特征在于：alk抑制剂和vegf抑制剂分开给药。
[4][3]所述的药物，其特征在于：alk抑制剂和vegf抑制剂同时或者依次给药。
[5]药物，其含有alk抑制剂作为有效成分，且与vegf抑制剂联用用于治疗或预防癌症。
[6][5]所述的药物，其特征在于：与vegf抑制剂同时给药。
[7][5]所述的药物，其特征在于：在vegf抑制剂的给药前或给药后进行给药。
[8]药物，其含有vegf抑制剂作为有效成分，且与alk抑制剂联用用于治疗或预防癌症。
[9][8]所述的药物，其特征在于：与alk抑制剂同时给药。
[10][8]所述的药物，其特征在于：在alk抑制剂的给药前或给药后进行给药。
[11][1]～[10]中任一项所述的药物，其特征在于：alk抑制剂为选自艾乐替尼、克唑替尼和色瑞替尼的化合物或其盐。
[12][1]～[11]中任一项所述的药物，其特征在于：alk抑制剂为艾乐替尼或其盐。
[13][12]所述的药物，其特征在于：艾乐替尼或其盐按照1天2次、每1次以游离体换算计为20mg、40mg、60mg、80mg、120mg、160mg、220mg、240mg、300mg、460mg、600mg、760mg或900mg进行给药。
[14][1]～[13]所述的药物，其特征在于：vegf抑制剂选自贝伐单抗、索拉非尼和舒尼替尼。
[15][1]～[13]中任一项所述的药物，其中vegf抑制剂为抗vegf抗体。
[16][15]所述的药物，其中抗vegf抗体具有重链可变区和轻链可变区，
所述重链可变区是包含以下的氨基酸序列而形成的：
evqlvesggglvqpggslrlscaasgytftnygmnwvrqapgkglewvgwintytgeptyaadfkrrftfsldtskstaylqmnslraedtavyycakyphyygsshwyfdvwgqgtlvtvss(seqidno:1)；
所述轻链可变区是包含以下的氨基酸序列而形成的：
diqmtqspsslsasvgdrvtitcsasqdisnylnwyqqkpgkapkvliyftsslhsgvps
rfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqystvpwtfgqgtkveikr(seqidno:2)。
[17][16]所述的药物，其特征在于：抗vegf抗体每1次以1μg/kg～50mg/kg进行给药。
[18][17]所述的药物，其特征在于：抗vegf抗体每1次以5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg进行给药。
[19][16]～[18]中任一项所述的药物，其中抗vegf抗体以每周一次、每2周或每3周进行给药。
[20][1]～[19]中任一项所述的药物，其中癌症选自非霍奇金淋巴瘤、成神经细胞瘤、炎性肌纤维母细胞瘤、肾癌和肺癌。
[21][1]～[20]中任一项所述的药物，其中癌症为alk融合基因阳性的癌症。
[22]治疗或预防癌症的方法，该方法包含：将有效量的alk抑制剂和有效量的vegf抑制剂组合对对象进行给药。
[23][22]所述的方法，其特征在于：alk抑制剂和vegf抑制剂分开给药。
[24][23]所述的方法，其特征在于：alk抑制剂和vegf抑制剂同时或依次给药。
[25]增强alk抑制剂的癌症治疗效果的方法，该方法包含：对对象给予有效量的vegf抑制剂。
[26][25]所述的方法，其特征在于：与alk抑制剂同时给药。
[27][26]所述的方法，其特征在于：在alk抑制剂的给药前或给药后进行给药。
[28]延长肿瘤的无恶化生存期的方法，该方法包含：将有效量的alk抑制剂和有效量的vegf抑制剂组合对对象进行给药。
[29][28]所述的方法，其特征在于：alk抑制剂和vegf抑制剂分开给药。
[30][29]所述的方法，其特征在于：alk抑制剂和vegf抑制剂同时或依次给药。
[31][22]～[30]中任一项所述的方法，其中癌症选自非霍奇金淋巴瘤、成神经细胞瘤、炎性肌纤维母细胞瘤、肾癌和肺癌。
[32][22]～[30]中任一项所述的方法，其中癌症为alk融合基因阳性的癌症。
[33]用于抑制肿瘤增殖的方法，该方法包含：将有效量的alk抑制剂和有效量的vegf抑制剂组合对对象进行给药。
[34][33]所述的方法，其特征在于：alk抑制剂和vegf抑制剂分开给药。
[35][34]所述的方法，其特征在于：alk抑制剂和vegf抑制剂同时或依次给药。
[36][33]～[35]中任一项所述的方法，其中肿瘤选自非霍奇金淋巴瘤、成神经细胞瘤、炎性肌纤维母细胞瘤、肾癌和肺癌。
[37][33]～[35]中任一项所述的方法，其中肿瘤为具有alk融合基因的肿瘤。
[38][22]～[37]中任一项所述的方法，其中alk抑制剂为选自式(i)～(iii)的化合物或其盐：
[化学式1]
[39][22]～[37]中任一项所述的方法，其特征在于：alk抑制剂为选自艾乐替尼、克唑替尼和色瑞替尼的化合物或其盐。
[40][22]～[37]所述的方法，其特征在于：alk抑制剂为艾乐替尼或其盐。
[41][40]所述的方法，其特征在于：艾乐替尼或其盐按照1天2次、每1次以游离体换算计为20mg、40mg、60mg、80mg、120mg、160mg、220mg、240mg、300mg、460mg、600mg、760mg或900mg进行给药。
[42][22]～[41]中任一项所述的方法，其特征在于：vegf抑制剂为贝伐单抗、索拉非尼或舒尼替尼。
[43][22]～[41]中任一项所述的方法，其中vegf抑制剂为抗vegf抗体。
[44][43]所述的方法，其中抗vegf抗体为人源化抗体。
[45][44]所述的方法，其中抗vegf抗体具有重链可变区和轻链可变区，
所述重链可变区是包含以下的氨基酸序列而形成的：
evqlvesggglvqpggslrlscaasgytftnygmnwvrqapgkglewvgwintytgeptyaadfkrrftfsldtskstaylqmnslraedtavyycakyphyygsshwyfdvwgqgtlvtvss(seqidno:1)；
所述轻链可变区是包含以下的氨基酸序列而形成的：
diqmtqspsslsasvgdrvtitcsasqdisnylnwyqqkpgkapkvliyftsslhsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqystvpwtfgqgtkveikr(seqidno:2)。
[46][45]所述的方法，其特征在于：抗vegf抗体为贝伐单抗。
[47][42]～[46]中任一项所述的方法，其特征在于：抗vegf抗体以1μg/kg～50mg/kg进行给药。
[48][47]所述的方法，其特征在于：抗vegf抗体以5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg进行给药。
[49][47]或[48]所述的方法，其中抗vegf抗体以每周一次、每2周或每3周进行给药。
[50]产品，该产品包含：(1)含vegf抑制剂的制剂、(2)容器和(3)使用说明书或标签，所述使用说明书或标签显示将上述vegf抑制剂和至少一种alk抑制剂组合对对象进行给药用于治疗癌症。
[51]产品，该产品包含：(1)含alk抑制剂的制剂、(2)容器和(3)使用说明书或标签，所述使用说明书或标签显示将上述alk抑制剂和至少一种vegf抑制剂组合对对象进行给药用于治疗癌症。
附图简述
图1是显示对于人alk融合基因阳性非小细胞肺癌株nci-h2228，艾乐替尼和(a)顺铂、(b)紫杉醇、(c)吉西他滨、以及(d)贝伐单抗的单独使用以及与艾乐替尼联用所引起的肿瘤体积的变化的曲线图。
具体实施方式
本发明涉及对癌症的治疗有效的、将alk抑制剂和vegf抑制剂组合形成的用于治疗或预防癌症的药物；治疗或预防癌症的方法；或用于抑制肿瘤增殖的方法。
alk抑制剂
本发明中使用的alk抑制剂是指可直接或间接地中和、阻断、抑制、降低或者妨碍alk活性的物质。作为上述alk活性的例子，可以列举：酪氨酸激酶活性。上述物质包含低分子化合物、抗体、反义转录抑制剂、低分子干扰rna(sirna)等。
作为上述低分子化合物的例子，可以列举：wo2010/143664、wo2004/076412、wo2006/021881、wo2008/073687中记载的化合物或其盐等。
作为更具体的例子，可以列举选自下述的化合物或其盐等：艾乐替尼(化合物名：9-乙基-6,6-二甲基-8-[4-(吗啉-4-基)-哌啶-1-基]-11-氧代-6,11-二氢-5h-苯并[b]咔唑-3-腈一盐酸盐)、克唑替尼(化合物名：3-[(1r)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙氧基]-5-[1-(哌啶-4-基)-1h-吡唑-4-基]吡啶-2-胺)和色瑞替尼(化合物名：5-氯-n2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-哌啶-4-基-苯基)-n4-[2-(丙烷-2-磺酰基)-苯基]-嘧啶-2,4-二胺。这些化合物或其盐可以利用wo2010/143664、wo2004/076412、wo2006/021881、wo2008/073687等中记载的方法来制备。这些化合物或其盐还包含：水合物、制药学上可接受的各种溶剂合物或多晶型(多晶型物)等。
艾乐替尼、克唑替尼和色瑞替尼的结构式以式(i)～(iii)的形式如下所示。
[化学式2]
本发明中使用的alk抑制剂的给药途径可适当采用口服给药或胃肠外给药的任一种，但优选适当采用口服给药。作为用于口服给药的剂型，例如可从液体制剂、散剂、颗粒剂、片剂、肠溶剂和胶囊剂等任意剂型中适当选择。具有上述剂型的alk抑制剂通过本领域技术人员所公知的方法制成制剂。例如，将其与药理学上可接受的载体或介质、具体而言与灭菌水或生理盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、香味剂、赋形剂、媒介物、防腐剂、粘合剂等适当组合，以通常认可的制药实施所要求的单位用量方式混和，之后通过冷冻干燥、压片成型等制剂化操作制成制剂。
alk抑制剂以与水或水以外的药学上可接受的液体的无菌溶液或悬浮液剂等注射剂的形式，也可用于胃肠外。这些制剂中的有效成分量可适当选择，使得能够给予所指示的范围的适当用量。用于注射的无菌组合物可使用注射用蒸馏水这样的媒介物，按照通常制剂实施来进行配方。作为注射用水溶液，例如例示生理盐水、含有葡萄糖或其他辅助剂的等渗液(例如d-山梨醇、d-甘露糖、d-甘露醇、氯化钠)，可与适当的助溶剂(例如醇、具体如乙醇、多元醇、例如丙二醇、聚乙二醇)、非离子性表面活性剂(例如聚山梨酯80(tm)、hco-50)适当联用。作为油性液体，例示芝麻油、大豆油，可与作为助溶剂的苯甲酸苄酯、苄醇联用。另外，还可与缓冲剂(例如磷酸盐缓冲液、乙酸钠缓冲液)、止痛剂(例如盐酸普鲁卡因)、稳定剂(例如苄醇、苯酚)、抗氧化剂适当配合。
作为本发明的alk抑制剂的给药量，例如每一次给药可以在每1kg体重0.0001mg～1000mg的范围内选择给药量。或者，例如可以在每位患者0.001mg～100000mg/人的范围内选择给药量。但本发明的alk抑制剂的给药量并不限于上述的给药量。
作为上述艾乐替尼、其盐、或它们的水合物的更具体的给药量，以1天2次、每1次换算成游离体计，可以列举：20mg、40mg、60mg、80mg、120mg、160mg、220mg、240mg、300mg、460mg、600mg、760mg或900mg。
本发明的alk抑制剂的给药期间根据适应症状或副作用的程度来确定，可以在癌症得到治疗或者达到所期望的治疗效果的期间进行给药。具体而言，有如下方法等：可以连续给药7天～3年，或者，在给药期间设定1～14天左右的停药期间，以2天～3个月作为1个周期，给药1～36个周期。优选为如下方法：以14～30天作为1个周期，给药3～24个周期。
vegf抑制剂
本发明中使用的vegf抑制剂是指可直接或间接地中和、阻断、抑制、降低或者妨碍vegf活性的物质。vegf抑制剂通过与一个或多个vegf受体结合，可以中和、阻断、抑制、降低或者妨碍vegf的活性。vegf抑制剂包含：抗vegf抗体及其抗原结合片段、受体分子和与vegf特异性地结合以隔绝其与一个或多个受体结合的衍生物、抗vegf受体抗体和抗vegf受体拮抗剂(例如vegfr酪氨酸激酶的低分子抑制剂)。作为低分子vegf抑制剂的具体例子，可以列举选自下述的化合物、其盐、或者它们的水合物等：索拉非尼(sorafenib、化合物名称：n-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-n’-(4-(2-(n-甲基氨基甲酰基)-4-吡啶氧基)苯基)脲、专利文献：us7235576)、帕唑帕尼(pazopanib、化合物名称：5-[[4-[(2,3-二甲基-2h-吲唑-6-基)甲基氨基]嘧啶-2-基]氨基]-2-甲基苯磺酰胺)、舒尼替尼(sunitinib、化合物名称：n-[2-(二乙基氨基)乙基]-5-[(z)-(5-氟-2-氧代-1,2-二氢-3h-吲哚-3-亚基)甲基]-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺、专利文献：专利3663382、us6573293、us7125905)、阿昔替尼(axitinib、化合物名称：n-甲基-2-({3-[(1e)-2-(吡啶-2-基)乙烯-1-基]-1h-吲唑-6-基}硫烷基)苯甲酰胺)、瑞格非尼(regorafenib、化合物名称：4-(4-(((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酰基}氨基)-3-氟苯氧基)-n-甲基吡啶-2-甲酰胺)、卡博替尼(cabozantinib、化合物名称：n’-[4-[(6,7-二甲氧基-4-喹啉基)氧基]苯基]-n-(4-氟苯基)-1,1-环丙烷二甲酰胺)、尼达尼布(nintedanib、化学名：(z)-甲基3-((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰氨基)苯基氨基)(苯基)亚甲基)-2-氧代吲哚啉-6-甲酸酯、参照wo01/27081)。
本发明中的“抗vegf抗体”是指具有充分的亲和性和特异性与vegf结合的抗体。所选择的抗体通常对vegf具有结合亲和性，例如抗体能够以100nm-1pm之间的kd值与hvegf结合。抗体亲和性可以通过表面等离子体共振基础测定(例如wo2005/012359中记载的biacore测定等)；酶结合免疫吸附测定(elisa)、以及竞争测定(例如ria的测定)来确定。作为其他实施方式，本发明的抗vegf抗体可以以vegf活性有关的疾病或症状为靶向，用作妨碍其活性时的治疗药。另外，例如为了评价其作为治疗药的有效性，可以对抗体施行其他的生物学活性测定。这种测定在该领域中是已知的，取决于靶抗原和抗体所期望的用途。例子有：huvec抑制测定；肿瘤细胞增殖抑制测定(例如wo第89/06692号中记载的测定)；抗体依赖性细胞毒活性(adcc)和补体介导的细胞毒活性(cdc)测定(美国专利第5500362号)；以及激动剂活性或者造血测定(参照wo95/27062号)等。
“抗体”一词以最广泛的意义使用，包含单克隆抗体(包含全长或无损的单克隆抗体)、多克隆抗体、多价抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)，以及只要显示出它们所期望的生物活性即可，还包含抗体片段(参照以下内容)。
在本说明书中，在一实施方式中，“kd”或“kd值”通过以下的测定所示的(chen,等,(1999)j.molbiol293:865-881)、使用抗体的fab型和vegf分子实行的放射性标记的vegf结合测定(ria)来测定：在梯度性效价的非标记vegf的存在下，用最小浓度的(125i)-标记抗原使fab达到平衡，捕获与抗fab抗体包被板结合的vegf，从而测定fab对vegf的溶液结合亲和性。在一个例子中，为了确定测定的条件，将微量滴定板(dynex)在含有5μg/ml的捕获抗fab抗体(cappellabs)的50mm碳酸钠(ph9.6)中包被一夜，之后，使用包含2%(w/v)牛血清白蛋白的pbs在室温(大约23℃)下封闭2～5小时。在非吸附板上(nunc#269620)将100pm或26pm的[125i]vegf(109)与进行了梯度稀释的有价值(兴趣)的fab、例如fab-12(presta等,(1997)cancerres.57:4593-4599)混合。然后，将有价值的fab培养一夜；但培养可以花费65小时直至确实达到平衡状态。之后，将混合物转移到捕获板上，在室温下培育1小时。然后，除去溶液，将板用包含0.1%tween20的pbs清洗8次。在板干燥后，加入150μl/孔的闪光物质(microscint-20;packard)，将板使用topcountγ计测器(packard)计测10分钟。选择最大结合的20%或20%以下的浓度的fab，分别用于竞争结合测定。根据其他实施方式，使用～10反应单位(ru)的固定的hvegf(8-109)cm5芯片，利用25℃的biacoretm-2000或biacoretm-3000(biacore,inc.,piscataway,nj)，采用表面等离子体共振测定来测定kd或kd值。简而言之，按照供者的使用说明书，通过n-乙基-n’-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(edc)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)激活羧甲基化葡聚糖生物传感器芯片(cm5,biacoreinc.)。使用10mm的乙酸钠(ph4.8)将人vegf稀释至5μg/ml(～0.2um)，以5μl/分钟的流量注入，使已结合的蛋白的反应单位(ru)达到约10。注入人vegf后，注入1m的乙醇胺，以阻断未反应的组。为了进行动态测定，将进行了2倍梯度稀释的fab(0.78nm～500nm)在25℃下以大约25μl/分钟的流量注入到包含0.05%tween20(pbst)的pbs中。利用使缔合和解离的传感图同时拟合的单纯一对一朗缪尔结合模型(simpleone-to-onelangmuirbindingmodel)(biacoreevaluation软件3.2版)，算出缔合速度(kon)和解离速度(koff)。以koff/kon比的形式算出平衡解离常数(kd)。例如，参照chen,y.等(1999)j.molbiol293:865-881。当通过上述表面等离子体共振测定得到的结合速度超过106m-1s-1时，可以利用如下的荧光消光技术测定结合速度：使用分光计、例如具备截流的分光光度计(avivinstruments)或者具备搅拌小池(比色杯)的8000系列slm-aminco分光光度计(thermospectronic)，在增加浓度的人vegf截短型(8-109)或者小鼠vegf的存在下，在pbs(ph7.2)、25℃下测定20nm的抗vegf抗体(fab型)的荧光发光强度(激发=295nm；发光=340nm、带域通过=16nm)的增加或减少。
在本发明中，抗vegf抗体或其抗原结合片段可以是单克隆抗体、嵌合抗体、完全人抗体、或者人源化抗体。另外，抗vegf抗体或其抗原结合片段可以是fc部分、f(ab’)2、fab、或者缺少fv结构的抗体。
作为本发明的一实施方式，对抗vegf抗体没有限定，包含通过杂交瘤atcchb10709产生的单克隆抗vegf抗体a4.6.1和与相同表位结合的单克隆抗体；按照presta等(1997)cancerres.57:4593-4599产生的重组人源化抗vegf单克隆抗体。在另一实施方式中，抗vegf抗体是还作为“rhumabvegf”或“アバスチン(注册商标)”而已知的“贝伐单抗(bv)”。アバスチン(注册商标)在特定国家销售。其包含来自阻断人vegf与其受体结合的小鼠抗hvegf单克隆抗体a.4.6.1的抗原结合互补性决定区和发生了突变的人igg1构架区。包含几乎所有的构架区的贝伐单抗的氨基酸序列的约93%由人igg1诱导、而序列的约7%由小鼠抗体a4.6.1诱导。而且，在这里使用时，“贝伐单抗(bv)”这一用语包含：满足在选自美国、欧州和日本的国家组的国家或地区以相同或者生物模拟(仿真)产品获得销售认可所必需的要求的所有对应抗vegf抗体或抗vegf抗体片段。
为了筛选与感兴趣的抗体所结合的抗原上的表位结合的抗体，可以实施常规的交叉阻断测定、例如alaboratorymanual,coldspringharborlaboratory,edharlow和davidlane(1988)中记载的测定。
贝伐单抗和其他的人源化抗vegf抗体还记载在2005年2月26日发行的美国专利第6884879号中。另外，还包含如wo2005/012359号、wo2005/044853号和美国专利申请第60/991302号中记载的g6或b20系列抗体(例如g6-31、b20-4.1)。此外，还包含美国专利第7060269号、同6582959号、同6703020号、同6054297号；wo98/45332号；wo96/30046号；wo94/10202号；欧州专利第0666868b1号；美国专利申请公开第2006009360号、同20050186208号、同20030206899号、同20030190317号、同20030203409号和同20050112126号；以及popkov等,journalofimmunologicalmethods288:149-164(2004)中记载的抗体。作为一实施方式，上述抗体包含与人vegf上的功能性表位结合的抗体，该抗体包含残基f17、m18、d19、y21、y25、q89、i91、k101、e103和c104、或者包含残基f17、y21、q22、y25、d63、i83和q89。
上述“g6系列抗体”是由wo2005/012359的图7、24-26和34-35的任一种g6抗体或g6-诱导抗体的序列诱导的抗vegf抗体。而且，还包含wo2005/044853中记载的抗体。作为一实施方式，g6系列抗体与包含残基f17、y21、q22、y25、d63、i83和q89的人vegf上的功能性表位结合。
上述“b20系列抗体”是由wo2005/012359的图27-29的任一种b20抗体或b20诱导抗体的序列诱导的抗vegf抗体。而且，还包含wo2005/044853和美国专利申请第60/991302号中记载的抗体。作为一实施方式，b20系列抗体与包含残基f17、m18、d19、y21、y25、q89、i91、k101、e103和c104的人vegf上的功能性表位结合。
上述“功能性表位”是指能量性地有助于抗体结合性的抗原的氨基酸残基。因抗原的能量性地有益的残基中的任意一个发生突变(例如由丙氨酸引起的野生型vegf的突变或者同源突变)，抗体的结合性将发生错乱，使抗体的相对亲和性比(ic50突变vegf/ic50野生型vegf)大于5(参照wo2005/012359号的实施例2)。在一实施方式中，相对亲和性比通过溶液结合性噬菌体展示elisa来测定。简而言之，将96孔maxisorp免疫板(nunc)在4℃下用抗体的fab型包被一夜，在pbs中以2μg/ml的浓度进行试验，在室温下用pbs、0.5%的bsa和0.05%的吐温20(pbt)封闭2小时。在pbt中将噬菌体展示hvegf丙氨酸点突变(残基8-109型)或野生型hvegf(8-109)的连续稀释物在室温下于fab-包被板上最初培养15分钟，将板用pbs、0.05%的吐温20(pbst)清洗。在pbt中利用按1：5000稀释的抗m13单克隆抗体辣根过氧化物酶(amershampharmacia)缀合物检测所结合的噬菌体，使之在3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(tmb,kirkegaard&perrylabs,gaithersburg,md)底物中表达约5分钟，用1.0m的h3po4进行淬火，在450nm下进行分光光度性地读取。ic50值的比率(ic50,ala/ic50,wt)表示结合亲和性的降低倍数(相对结合亲和性)。
非人(例如小鼠)抗体的“人源化”型是指包含来自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。在大部分中，人源化抗体是指受体(recipient，接受者)的高频率可变区的残基被来自小鼠、大鼠、兔或者具有所期望的特异性、亲和性和能力的非人灵长类这样的非人种(供体抗体)的高频率可变区的残基取代的人免疫球蛋白(受体抗体)。在几个例子中，人免疫球蛋白的构架区(fr)残基被对应的非人残基取代。而且，人源化抗体也可以包含在受体抗体或供体抗体中也未发现的残基。进行这些修饰以进一步洗练(精炼)抗体的特性。通常，人源化抗体的全部或者实质上全部的高频率可变环区与非人免疫球蛋白的高频率可变环区对应，全部或者实质上全部的fr包含作为人免疫球蛋白序列的fr的至少一个或者典型的是2个可变结构域的实质上的全部。另外，人源化抗体根据情况还包含免疫球蛋白恒定区(fc)的至少一部分、典型的是包含人免疫球蛋白的fc的至少一部分。更详细而言，参照jones等人,nature321:522-525(1986)；riechmann等人,nature332:323-329(1988)；以及presta,curr.op.struct.biol.2:593-596(1992)。
作为其他人源化抗vegf抗体的例子，可以列举雷莫芦单抗(通用名：ramcirumab；商品名：cyamzatm；cas注册号：947687-13-0)。
在本发明的另一实施方式中，抗vegf抗体具有重链可变区和轻链可变区，
所述重链可变区是包含以下的氨基酸序列而形成的：
evqlvesggglvqpggslrlscaasgytftnygmnwvrqapgkglewvgwintytgeptyaadfkrrftfsldtskstaylqmnslraedtavyycakyphyygsshwyfdvwgqgtlvtvss(seqidno:1)；
所述轻链可变区是包含以下的氨基酸序列而形成的：
diqmtqspsslsasvgdrvtitcsasqdisnylnwyqqkpgkapkvliyftsslhsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqystvpwtfgqgtkveikr(seqidno:2)。
vegf抑制剂按照常规方法制成制剂(例如remington’spharmaceuticalscience,最新版,mackpublishingcompany,easton,u.s.a)，同时可以包含药学上可接受的载体或添加剂。例如可以列举：表面活性剂、赋形剂、着色剂、着香剂、保存剂、稳定剂、缓冲剂、悬浮剂、等渗剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、流动性促进剂、矫味剂等，但并不限于这些，可适当使用其他常用的载体。具体而言，可适当列举：海藻糖、轻质硅酸酐、乳糖、结晶纤维素、甘露醇、淀粉、羧甲纤维素钙、羧甲纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇缩醛二乙氨基乙酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、中链脂肪酸三甘油酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、白糖、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐类、聚山梨酯等。
药物和治疗・预防方法
本发明的一个方案为：将alk抑制剂和vegf抑制剂组合形成的、用于治疗或预防癌症的药物。
上述方案中的“将alk抑制剂和vegf抑制剂组合形成的、用于治疗或预防癌症的药物”是指，在癌症的治疗或预防中为了将alk抑制剂和vegf抑制剂同时、分开或者依次进行给药而组合的药物。本发明的药物还可以以同时含有alk抑制剂和vegf抑制剂的配方剂的形式提供。另外，分别提供含有alk抑制剂的制剂和含有vegf抑制剂的制剂，这些制剂可以同时或依次使用。
在本发明中，同时给药是指在同一时期给予alk抑制剂和vegf抑制剂进行联合用药，可以以配方剂的形式进行给药，也可以以在给药时进行用时调制的混合物的形式给药，还可以在同一时期给予其他形态的制剂。在同时给药进行使用时，可以从各自的路径进行给药，也可以从相同路径进行给药，给药剂型可以相同也可以各自不同。
在本发明中，在将alk抑制剂和vegf抑制剂分开给药时，alk抑制剂和vegf抑制剂的给药顺序可以是在给予vegf抑制剂后给予alk抑制剂，也可以同时给予alk抑制剂和vegf抑制剂，还可以在给予alk抑制剂后给予vegf抑制剂。
本发明的alk抑制剂和vegf抑制剂依次给药是指在给予一种药剂后再给予另一种药剂，对alk抑制剂和vegf抑制剂的给药间隔没有特别限定，可以考虑给药途径或剂型等因素来设定。例如，alk抑制剂和vegf抑制剂的给药间隔为0小时～168小时，优选为0小时～72小时，还优选为0～24小时，进一步优选为0小时～12小时。另外，除给药途径及剂型等因素外，还可参考本发明的alk抑制剂和vegf抑制剂各自在对象中的残留浓度。即，在给予vegf抑制剂前给予alk抑制剂的情况下，可以在获得vegf抑制剂的所期望的效果的、检测到对象中的该alk抑制剂的残留浓度的时间点给予vegf抑制剂。通过各种使用了色谱法等的分离装置的本领域技术人员所公知的分析方法分析由对象采集的样品，根据结果即可确定该浓度。
与此相反，在给予alk抑制剂前给予vegf抑制剂的情况下，可以在获得alk抑制剂的所期望的效果的、检测到对象中的vegf抑制剂的残留浓度的时间点给予alk抑制剂。通过本领域技术人员所公知的elisa等免疫测定法分析由对象采集的样品，根据结果即可确定该浓度。
在上述药物中，在将alk抑制剂和vegf抑制剂包含在各自的制剂中进行提供时，这些制剂的剂型可以是相同剂型，也可以是不同剂型。例如，双方可以是口服制剂、非口服制剂、注射剂、点滴剂、静脉内点滴剂中的一种且彼此不同的剂型，双方也可以是口服制剂、非口服制剂、注射剂、点滴剂、静脉内点滴剂中的一种且相同的剂型。另外，在上述药物中还可以组合一种以上的不同的制剂。
在另一观点中，本发明提供：包含alk抑制剂作为有效成分、且与vegf抑制剂联用用于治疗或预防癌症的药物。“包含alk抑制剂作为有效成分、且与vegf抑制剂联用用于治疗或预防癌症的药物”是指，以与vegf抑制剂联用为条件用于治疗或预防癌症的、包含alk抑制剂作为有效成分的药物。包含alk抑制剂作为有效成分的本发明的药物在与vegf抑制剂联用时，可以和vegf抑制剂同时给药，也可以在vegf抑制剂给药前或给药后进行给药。在vegf抑制剂给药前或给药后给予alk抑制剂的情况下，通过测定对象中的该vegf抑制剂的残留浓度或者日本专利第4362225号等中例示的vegf同工型的表达量，可使其给药时期最佳化。该浓度可以通过根据本领域技术人员所公知的后述的elisa等免疫测定法测定由对象采集的样品来确定。
在又一观点中，本发明提供：包含vegf抑制剂作为有效成分、且与alk抑制剂联用用于治疗或预防癌症的药物。本发明中的“包含vegf抑制剂作为有效成分、且与alk抑制剂联用用于治疗或预防癌症的药物”是指，以与alk抑制剂联用为条件用于治疗或预防癌症的、包含vegf抑制剂作为有效成分的药物。在包含vegf抑制剂作为有效成分的药物与alk抑制剂联用时，可以和alk抑制剂同时给药，也可以在alk抑制剂给药前或给药后进行给药。在alk抑制剂给药前或给药后给予vegf抑制剂的情况下，通过测定对象中的该alk抑制剂的残留浓度，可以使其给药时期最佳化。该浓度可以通过按照各种使用了色谱法等的分离装置的本领域技术人员所公知的分析方法测定由对象采集的样品来确定。
上述发明是指将alk抑制剂和vegf抑制剂一同给药或使用(以下仅指称为“给药”。)，给药顺序或给药间隔等并没有限定。另外，本发明的alk抑制剂和vegf抑制剂还可以以组合产品的形式使用。而且，按照本发明，在alk抑制剂和vegf抑制剂联用时，根据需要各自可以以较任一方单独使用的给药量少的给药量进行给药。
癌瘤
本发明的药物对白血病(急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病等)、恶性淋巴瘤(霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤等)、脑瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤、甲状腺癌、骨髓异常增生综合征、头颈部癌、食道癌、胃癌、大肠癌、结肠直肠癌、乳癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、胆嚢癌、皮肤癌、恶性黑色素瘤、肾癌、肾盂输尿管癌、膀胱癌、子宫癌、睾丸癌、前列腺癌这样的各种癌症等疾病的预防或治疗有效。而且，本发明的化合物对固体癌的浸润・转移的预防或治疗有效。
特别是，本发明的药物对alk融合基因阳性的癌症的预防或治疗有效。作为alk融合基因阳性的癌症的例子，可以列举：非霍奇金淋巴瘤、成神经细胞瘤、炎性肌纤维母细胞瘤、肾癌和肺癌等，但并不限于这些。
在本发明中，“alk融合基因阳性”是指存在alk与其他基因的融合基因。作为上述其他的融合基因，可以列举：eml4(棘皮动物微管关联蛋白样蛋白4(echinodermmicrotubule-associatedproteinlikeprotein4),genbanktm注册号nm_019063)、tfg(trk融合基因(trk-fusedgene),genebanktm注册号nm_006070)等，但并不限于这些。
鉴定alk融合基因阳性的癌症的方法记载在wo2008/127248、日本特开2008-295444、“alk基因检查指南”(日本肺癌学会生物标志物委员会)等中。作为用于检测该融合基因的试剂盒，有vysislsialkbreakapartrearrangementprobekittm(abbott公司)、ヒストファインalkiaeptmキット(ニチレイ社)在出售。
在本发明的又一方案中，提供如下的方法：通过使用vegf抑制剂，在利用alk抑制剂对癌症患者进行治疗时增强该alk抑制剂的治疗效果。这里，治疗效果的增强是指治疗奏效率提高、为了治疗而给予的alk抑制剂的量减少、和/或alk抑制剂的治疗期间缩短。另外，在本发明的又一方案中，提供在对象中延长无恶化生存期的方法，该方法包含将alk抑制剂和有效量的vegf抑制剂组合进行给药。另外，在本发明的又一方案中，提供vegf抑制剂的使用方法，该使用方法是将vegf抑制剂用于制备包含alk抑制剂和vegf抑制剂作为有效成分的用于治疗或预防癌症的药物组合物。
在本发明中，包含alk抑制剂和/或vegf抑制剂作为有效成分是指包含alk抑制剂和/或vegf抑制剂作为主要活性成分，对alk抑制剂和/或vegf抑制剂的含量没有限制。另外，“治疗”一词是指，通过对对象给予本发明的药物，癌细胞死亡或其细胞数减少、癌细胞的增殖得到抑制、由癌症引起的各种症状得到改善。另外，“预防”一词是指防止已减少的癌细胞再次增殖所引起的其数量的增加、以及防止增殖已得到抑制的癌细胞再次增殖。
在本发明中，vegf抑制剂的给药方法可通过口服、胃肠外给药的任一种途径来实施。特别优选为胃肠外给药的给药方法，作为所涉及的给药方法，具体而言，适当例示注射给药、经鼻给药、经肺给药、经皮给药等。作为注射给药的例子，例如本发明的治疗用抗体可通过静脉内注射、肌肉内注射、腹腔内注射、皮下注射等进行全身或局部给药。另外，给药方法可根据患者的年龄、症状来适当选择。作为给药量，例如每一次给药可在每1kg体重0.0001mg～1000mg的范围内选择给药量。或者，例如可在每位患者0.001～100000mg/人的范围内选择给药量。但本发明的vegf抑制剂的给药量并不限于上述给药量。
根据疾病的类型和严重程度，例如贝伐单抗这样的抗vegf抗体的优选用量并没有限定，可以是包含5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或者15mg/kg在内的约1μg/kg～约50mg/kg的范围，最优选为约5mg/kg～约15mg/kg的范围。给药频率根据疾病的类型和严重程度而变动。在数日或其以上的重复给药中，根据症状，通过该领域中已知的方法进行测定，维持治疗直至癌症得到治疗或者达到所期望的治疗效果。在一个例子中，抗vegf抗体以每周一次、每2周、或者每3周进行给药，但没有限定，以包含5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或者15mg/kg在内的约5mg/kg～约15mg/kg的用量范围进行给药。但其他用量方案也可以有效。
vegf抑制剂可以以上述每1周、每2周、或者每3週的给药作为1个周期，直至癌症得到治疗或者达到所期望的治疗效果的期间进行给药。具体而言可以持续给药1～36个周期。
在本发明中，“无恶化生存期(pfs)”是指从治疗(或者随机化)到最初的疾病进展或者死亡的时间。在本发明的一个方案中，pfs可以根据固体肿瘤的治疗效果判定标准(recist)进行评价。在本发明的一个方案中，pfs可以根据作为进展的决定因素的ca-125水平进行评价。
在本发明中，作为“延长无恶化生存期”的具体例子，可以列举：与alk抑制剂单独给药时的无恶化生存期相比无恶化生存期有所延长。
在本发明中，“对象”没有限定，是指作为本发明药物的给药对象的人或者非人哺乳动物、例如包含牛、马、狗、绵羊或猫在内的哺乳动物。优选对象为人。对象包含患者(包含人和非人哺乳动物)。
产品
作为本发明的又一方案，提供产品。在一实施方式中，产品是为了治疗或预防对象的癌症而提供的，包含如下的(a)或(b)：(a)(1)含vegf抑制剂的制剂、(2)容器、以及(3)使用说明书或标签，显示将上述vegf抑制剂和至少一种alk抑制剂组合对对象进行给药用于治疗对象的癌症；或者(b)(1)含alk抑制剂的制剂、(2)容器、以及(3)使用说明书或标签，显示将上述alk抑制剂和至少一种vegf抑制剂组合对对象进行给药用于治疗对象的癌症。
产品包含容器，该容器包含含有vegf抑制剂或alk抑制剂的制剂。
产品还可以包含容器上或容器所附带的标签或使用说明书。
在本发明中，“使用说明书”包含关于与制剂的使用有关的适应症、用法、给药量、给药、禁忌症和/或警告的信息，是指制剂的商业用包装中通常所包含的书类。“标签”是指包含含有vegf抑制剂或alk抑制剂的制剂的产品名称、用量、剂型、适应症等内容在内的片状物，其直接贴在容器上。
标签或使用说明书显示用于制剂的适应症、即癌症等选择的疾病的治疗。在一实施方式中，标签或使用说明书显示制剂可用于治疗癌症。标签或使用说明书还可显示制剂可用于治疗其他障碍。
适当的容器例如可以列举ptp、瓶、小瓶、针筒、泡罩包装等。容器可由玻璃或塑料等各种材料形成。这些容器还可打包在印刷有上述标签的内容等的纸制外箱(盒)上。
将alk抑制剂和vegf抑制剂联用时，可通过众所周知的方法确认是否存在副作用。这里，“副作用”是指在接受疾病治疗的患者中观察和/或测定到的临床上、医学上、物理上、生理学上和/或生物化学上的影响，且该影响不是所期望的治疗结果的一部分。通常，关于所治疗的患者的健康状态和/或舒适感、对于所治疗的患者的健康危险性、和/或对于所治疗的患者的治疗宽容性，上述影响并不是所期望的。作为副作用的具体例子，可以列举：中性粒细胞减少、白细胞减少、出血(消化道出血、肺出血、脑出血等)、高血压、神经毒性、疲劳・倦怠感、食欲减退、恶心、口腔炎、脱毛症、血小板减少、尿蛋白阳性、休克、过敏反应、消化道穿孔、瘘、创伤治愈延迟、血栓塞栓症、高血压性脑病、高血压性风险、可逆性后白质脑病综合征、肾病综合征、骨髄抑制、感染症、缺血性心功能不全、间质性肺炎、血栓性微小血管症、间质性肺病、肝功能障碍、血中胆红素增加、味觉异常、起疹、血中肌酸酐增加等。通过将联用时确认到的副作用的频率和等级等与单剂给药时的频率和等级等进行比较，可以确认在联用时副作用是否减轻。
实施例
在本说明书中明示引用的所有专利和参考文献的内容均作为参照而纳入本说明书。
以下，通过实施例的记载来具体说明本发明，但本发明并不解释为限于该记载。
实施例1
对于以1×107个细胞/只移植了人alk融合基因阳性非小细胞肺癌株nci-h2228的重症复合型免疫缺陷(scid)小鼠，在细胞移植后第17天或第20天将艾乐替尼(游离体、3mg/kg、1天1次、口服给药15天)与选自dna交联剂顺铂、微小管抑制剂紫杉醇、dna合成抑制剂吉西他滨和抗人vegf抗体贝伐单抗的抗癌药联用。顺铂(5mg/kg)按每周1次进行静脉内给药(第17、24天)、紫杉醇(12.5mg/kg)按每周1次进行静脉内给药(第20、27天)、吉西他滨(60mg/kg)按每周2次进行腹腔内给药(第17、21、24、27天)、贝伐单抗(5mg/kg)按每周1次进行腹腔内给药(第20、27天)。各给药组的肿瘤体积(平均值±标准偏差)和体重变化率(平均值±标准偏差)见图1。
需要说明的是，在图1中，横轴表示细胞移植后的经过天数，纵轴表示肿瘤体积(tumorvolume)和体重变化率(bodyweightchangerate)，control表示溶剂给药对照组，combo表示联用组。
其结果，各联用组显示出较艾乐替尼单剂组高的抗肿瘤效果。特别是，以血管新生为靶的贝伐单抗单剂在给药中确认到了肿瘤体积的增加，但在艾乐替尼和贝伐单抗的联用组中确认到了肿瘤的缩小，与艾乐替尼单剂组相比，在统计学上显示出显著高的抗肿瘤效果(p=0.008)。细胞毒性抗癌药顺铂、紫杉醇、吉西他滨单剂在给药中没有确认到肿瘤体积的大幅变化。