本发明公开一种用于防止掉发或促进生发的组合物，其含有衍生自乳酸菌的胞外囊泡作为活性成分；及一种用于制备该衍生自乳酸菌的胞外囊泡的方法。
背景技术：
：大部分的动物细胞具有分泌由细胞衍生的各种大小的胞外囊泡及组合物的能力。这些胞外囊泡存在于所有生物流体中，该生物流体包括血液、尿、唾液及细胞培养物的培养基(LoyerX,VionAC,TedguiA,BoulangerCM.Microvesiclesascell-cellmessengersincardiovasculardiseases.CircRes2014；114:345-53；OhnoS,IshikawaA,KurodaM.Rolesofexosomesandmicrovesiclesindiseasepathogenesis.AdvDrugDelivRev2013；65:398-401)。胞外囊泡是直径约20nm至约5μm的膜结构囊泡。它们的大小和组合物不相同，并包括诸如外泌体(约30-100nm)、核外颗粒体、微囊泡(约100-1,000nm)、微粒等各种种类。根据胞外囊泡的来源、直径、蔗糖密度、形状、沉淀率、脂质组合物、蛋白标记、分泌类型(即它们是否由信号诱导或自然产生)等来区分成不同类型的胞外囊泡。例如，微囊泡是范围为约100至1,000nm、具有不规则形状的膜囊泡。微囊泡来源于细胞膜且已知含有整联蛋白、选择蛋白、包含CD40配体等的标志物及包含磷脂酰丝胺酸的磷脂。而且，外泌体是范围约30至100nm(<200nm)、杯状的最小膜囊泡。外泌体来源于胞内体，且已知含有：四次跨膜蛋白，比如CD63及CD9；标志物，包括TSG101和ESCRT；以及脂质，包括胆固醇、鞘磷脂、神经酰胺及磷脂酰丝胺酸。胞外囊泡反映分泌该胞外囊泡的细胞(供体细胞)状态，根据分泌该胞外囊泡的细胞不同而表现出各种生物活性，同时当它们在细胞之间转移遗传物质和蛋白质时在细胞对细胞的相互作用(细胞间通讯)中扮演重要角色。还已知原核细胞及真核细胞分泌胞外囊泡(Camussi,G.,Deregibus,M.C.,Bruno,S.,Cantaluppi,V.,&Biancone,L.(2010).Exosomes/microvesiclesasamechanismofcell-to-cellcommunication.KidneyInternational,78(9),838-848；Bang,Claudia,andThomasThum."Exosomes:Newplayersincell-cellcommunication."TheInternationalJournalofBiochemistry&CellBiology44.11(2012):2060-2064；Kim,D.K.,Lee,J.,Simpson,R.J.,J.,&Gho,Y.S.(2015,April),EVpedia:Acommunitywebresourceforprokaryoticandeukaryoticextracellularvesiclesresearch.SeminarsinCell&DevelopmentalBiology(Vol.40,pp.4-7).AcademicPress；Kim,J.H.,Lee,J.,Park,J.,&Gho,Y.S.(2015,April).Gram-negativeandGram-positivebacterialextracellularvesicles.SeminarsinCell&DevelopmentalBiology(Vol.40,pp.97-104).AcademicPress)。同时，乳酸菌，作为对人类有益的代表性细菌，是通过降解糖(比如葡萄糖或乳糖)来产生有机酸(比如乳酸或乙酸)的细菌。乳酸菌通过由糖产生有机酸的发酵过程用于以制备发酵食品(比如发酵乳、干酪或奶油)，但是关于对由其衍生的胞外囊泡的特定用途的研究很少。公开号为10-2011-0025603的韩国专利中公开了关于细菌衍生的胞外囊泡的现有技术。技术实现要素：技术问题在一方面，本发明指向提供一种用于防止掉发或促进生发的组合物，该组合物包含作为复合生理活性物质的乳酸菌衍生的胞外囊泡作为活性成分。在另一方面，本发明指向提供一种用于制备所述乳酸菌衍生的胞外囊泡的方法。技术方案本发明提供一种用于防止掉发或促进生发的组合物，其包含乳酸菌衍生的胞外囊泡作为活性成分。在一方面，所述乳酸菌可包括选自双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳杆菌属(Lactobacillus)、链球菌属(Streptococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、片球菌属(Pediococcus)及乳球菌属(Lactococcus)中的一种或多种细菌。在另一方面，所述乳酸菌可包括乳杆菌属的细菌。在另一方面，所述乳杆菌属的细菌可包括选自罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)及沙克乳杆菌(L.sakei)中的一种或多种细菌。在另一方面，所述胞外囊泡可从乳酸菌培养物中分离。在另一方面，所述胞外囊泡可为外泌体样囊泡。在另一方面，所述胞外囊泡的直径可为20-500nm。在另一方面，当乳酸菌培养物以100,000xg或更高离心力进行超速离心时可以沉淀所述胞外囊泡。在另一方面，所述活性成分可通过激活毛乳头细胞(DPCs)诱导生发。本发明还提供一种用于制备所述乳酸菌衍生的胞外囊泡的方法，所述方法包括：(1)对乳酸菌培养物进行离心获得上清液的步骤；(2)过滤获得的上清液的步骤；及(3)通过对所得的滤液进行超速离心来获得沉淀物的步骤。在一方面，所述步骤(1)中的离心可以以1,000-20,000xg进行。在另一方面，所述步骤(3)中的超速离心可以以100,000xg或更高离心力进行。在另一方面，所述方法还可包括在所述步骤(3)后的(4)使所得的沉淀物悬浮的步骤。有益效果在一方面，本发明提供的效果为提供用于防止掉发或促进生发的组合物，该组合物包含作为复合生理活性物质的乳酸菌衍生的胞外囊泡作为活性成分。用于防止掉发或促进生发的所述组合物提供防止头皮掉发或头发稀疏的效果。用于防止掉发或促进生发的所述组合物提供如下效果：萌生新发，促进头发萌生，促进生发周期中生长期延迟过渡至退化期，及促进现有头发的健康生长。在另一方面，本发明提供的效果为提供一种用于制备乳酸菌衍生的胞外囊泡的方法。附图说明图1显示根据本发明的示例性实施例从乳酸菌分离胞外囊泡的过程。图2显示根据本发明的示例性实施例测量分离出的乳酸菌衍生的胞外囊泡大小的结果。图3显示根据本发明的示例性实施例测量以低浓度(0.1-20μg/mL)的、乳酸菌衍生的胞外囊泡处理的毛乳头细胞的增殖的结果。图4a及图4b显示根据本发明的示例性实施例测量以高浓度(10-100μg/mL)的、乳酸菌衍生的胞外囊泡处理的毛乳头细胞的增殖的结果。图5显示根据本发明的示例性实施例的在用乳酸菌衍生的胞外囊泡处理毛囊器官培养物之后测量毛干延长的结果。图6显示根据本发明的示例性实施例的在用乳酸菌衍生的胞外囊泡处理毛囊器官培养物之后测量毛干延长的结果。具体实施方式下文详细描述本发明。本发明提供一种用于防止掉发或促进生发的组合物，该组合物包含乳酸菌衍生的胞外囊泡作为活性成分。在一示例性实施例中，所述胞外囊泡可为外泌体样囊泡。所述生发周期可分为三个主要阶段，被称为生长期、退化期及休止期。在生长期中，头发随着毛囊深入皮肤而生长。下一阶段退化期为过渡阶段，其特征在于细胞分裂停止。在此过程中，所述毛囊逐渐收缩且停止生发。在下一阶段休止期，收缩的毛囊含有以毛乳头细胞紧密包裹的胚细胞。从休止期至新生长期的过渡是由细胞在胚细胞中的快速生长、毛乳头的扩张及头发基本成分的合成所诱导的。通常，“生发”发生在生长期且通过诱导从休止期过渡至生长期，或延迟从生长期过渡至退化期而促进。在本发明中，“掉发”指从头皮掉发或头发稀疏的现象，“防止掉发”指防止及抑制该掉发现象，且“促进生发”不仅指新发的萌生或促进头发萌生而且还指促进生发周期中生长期延迟过渡至退化期，及促进现有头发的健康生长。在本发明中，所述“胞外囊泡”指由细胞分泌至胞外空间的囊泡。所述胞外囊泡由脂双层分为内部及外部且含有细菌的质膜脂质、质膜蛋白、核酸、细胞质组分等。通常，胞外囊泡的大小要小于其起源的细菌，虽然不限于此。所述胞外囊泡通过与其他细胞结合并将膜组分、mRNAs、miRNAs等转移至受体细胞而起到介导细胞-细胞通讯的胞外转运蛋白的作用。在本发明中，所述“外泌体样囊泡”指纳米级的胞外囊泡且该术语以最广概念使用，不仅包括纳米级的外泌体且包括纳米级的囊泡结构及组合物与外泌体近似的囊泡。在本发明中，所述乳酸菌可为分离的乳酸菌或市售的乳酸菌。在一示例性实施例中，所述乳酸菌属可包括选自双歧杆菌属、乳杆菌属、链球菌属、明串珠菌属、片球菌属及乳球菌属的一种或多种细菌。具体地，所述乳酸菌可包括选自短双歧杆菌(B.breve)、长双歧杆菌(B.longum)、婴儿双歧杆菌(B.infantis)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)、罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)、植物乳杆菌(L.plantarum)、沙克乳杆菌(L.sakei)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、嗜热链球菌(S.thermophilus)、屎链球菌(S.faecium)、粪链球菌(S.faecalis)、肠膜明串珠菌(L.mesenteroides)、啤酒片球菌(P.cerevisiae)及乳酸乳球菌(L.lactis)中的一种或多种细菌。在一示例性实施例中，所述胞外囊泡可从乳酸菌培养物分离出来。所述胞外囊泡可由现有组织或细胞完整或部分地物理分离。在一方面，所述胞外囊泡的直径可为20-500nm。在另一方面，所述胞外囊泡的直径可为：20nm或更大、30nm或更大、40nm或更大、50nm或更大、60nm或更大、70nm或更大、80nm或更大、90nm或更大、或100nm或更大；及500nm或更小、450nm或更小、400nm或更小、350nm或更小、300nm或更小、250nm或更小、200nm或更小、150nm或更小、或100nm或更小。在另一方面，可通过以100,000xg或更高离心力，特别是100,000-200,000xg、100,000-150,000xg或150,000-200,000xg，对乳酸菌培养物进行超速离心来使所述胞外囊泡沉淀。在另一方面，所述胞外囊泡的膜组分可以进行化学或物理修饰以有效地在靶细胞中执行期望的功能。例如，可以使用硫醇基(-SH)或胺基(-NH2)或者通过使诱导物质、融合剂、聚乙二醇化学结合至胞外囊泡来对胞外囊泡的膜组分进行化学修饰。在一示例性实施例中，可通过一种或多种选自以下的方法分离所述胞外囊泡：离心、超速离心、差速离心、平衡密度离心、密度梯度、过滤、透析及自由流电泳，但不限于此。密度梯度是分离不同密度的材料时最常用的方法。作为具体的示例，可使用诸如Ficoll、甘油、蔗糖、氯化铯、碘克沙醇等密度梯度分离材料，但不限于此。在一方面，所述密度梯度可与超速离心等一起使用。在另一方面，凝胶过滤或超滤可用于分离所述胞外囊泡。在另一方面，可以使用透析代替过滤以除去小尺寸的分子。在另一方面，可使用自由流电泳。在一示例性实施例中，显示有效活性的细菌衍生的胞外囊泡可以通过包含以下步骤的方法获得：(1)通过对乳酸菌培养物进行离心来获得上清液的步骤；(2)过滤所得的上清液的步骤；及(3)通过对所得的滤液进行超速离心来获得沉淀物的步骤。在一示例性实施例中，所述步骤(1)的离心可以以1,000-20,000xg、1,500-20,000xg、1,500-15,000xg或1,500-10,000xg进行30-60分钟。所述离心的速度或时间可依阶段改变。例如，在以1,500-2,000xg低速离心从培养物中分离除去乳酸菌，然后从细胞中分离该培养物上清液后，可进一步以10,000-20,000xg对该培养物上清液进行高速离心以额外除去细胞、细胞碎片等。在一示例性实施例中，所述步骤(2)的过滤可使用0.3-0.5μm大小的过滤器进行。该经离心的培养物的纯度可以通过此过滤过程增加。在另一方面，所述步骤(3)的超速离心可以以100,000xg或更高离心力，特别是以100,000-200,000xg、100,000-150,000xg或150,000-200,000xg进行1-5小时。在另一方面，所述方法还包括在步骤(3)后的(4)使所得的沉淀物悬浮的步骤。在另一方面，本发明提供一种用于防止掉发的方法或一种促进生发的方法，该方法包括将有效量的用于防止掉发或促进生发的乳酸菌衍生的胞外囊泡给药至有需要的受试者。在另一方面，本发明提供用于防止受试者掉发或促进受试者生发的乳酸菌衍生的胞外囊泡。在另一方面，本发明提供一种制备用于防止受试者掉发或促进受试者生发的含有乳酸菌衍生的胞外囊泡的组合物的用途。在一示例性实施例中，可以以药物组合物、化妆品组合物或食物组合物的形式将所述乳酸菌衍生的胞外囊泡施用或给药至受试者。在一示例性实施例中，可将所述乳酸菌衍生的胞外囊泡施用或给药至受试者的皮肤或头皮。在一示例性实施例中，所述组合物可为冷冻干燥制剂。所述组合物可为包含在密封包装材料或容器中的冷冻干燥制剂，因此该组合物可以是易于使用的(即用型)。本发明还提供一种用于防止掉发或促进生发的试剂盒，该试剂盒含有：冷冻干燥组合物，该冷冻干燥组合物含有所述乳酸菌衍生的胞外囊泡作为活性成分；以及无菌水或纯水。所述试剂盒可包含在密封包装材料或容器中，因此该试剂盒可以是易于使用的(即用型)。在一示例性实施例中，所述组合物可为药物组合物。除所述乳酸菌衍生的胞外囊泡外，所述药物组合物可包含药用辅料(比如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化促进剂、控制渗透压的盐和/或缓冲液等)及其他治疗上有用物质，且可根据常用方法制成用于口服或肠胃外给药的各种制剂。所述用于口服给药的制剂可为例如片剂、丸剂、硬胶囊或软胶囊、液体、悬浮液、乳液、糖浆、粉末、粉剂、细颗粒、颗粒、团块等且这些制剂可包含除所述活性成分外的表面活性剂、稀释剂(如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和甘胺酸)、润滑油(如二氧化硅、滑石、硬脂酸及其镁或钙盐以及聚乙二醇)。所述片剂还可包含粘合剂，诸如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶(tragacanth)、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidine)，并且根据场合需要，可以包含药物添加剂，诸如崩解剂(如淀粉、琼脂、或藻酸，或其钠盐)、吸收剂、着色剂、香料、甜味剂等。所述片剂可以通过常规的混合、造粒或涂覆方法制备。所述肠胃外给药的制剂可为经皮给药的制剂，如注射剂(injection)、滴剂(drip)、软膏(ointment)、洗剂(lotion)、凝胶(gel)、霜剂(cream)、喷雾剂(spray)、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、栓剂(suppository)、贴剂(patch)，但不限于此。所述活性成分的给药剂量的确定在本领域技术人员的水平内。每日给药剂量可依据诸如待治疗疾病的阶段、年龄、健康状况、并发症的存在等各种因素而改变。在一方面，所述组合物可以以1μg/kg至200mg/kg、更具体地50μg/kg至50mg/kg的日剂量，一天给药1-3次。然而，所述给药剂量并未以任何方式限制本发明的范围。所述药物组合物可为皮肤外用制剂。所述皮肤外用制剂包含任何可施用于皮肤外部的制剂，并且其中可以包含各种类型的医药制剂。在一示例性实施例中，所述组合物可为化妆品组合物。所述化妆品组合物可含有除所述乳酸菌衍生的胞外囊泡外的功能性添加剂和通常包含在化妆品组合物中的成分。所述功能性添加剂可包含选自水溶性维生素、油溶性维生素、多肽、多醣、神经鞘脂及海藻提取物的成分。而且还可包含油、脂肪、保湿剂、润滑剂(emollient)、表面活性剂、有机或无机颜料、有机粉末、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂(sterilizer)、抗氧化剂、植物提取物、pH值控制剂、乙醇、着色剂、香料、血液循环促进剂、冷却剂、止汗剂、纯净水等。所述化妆品组合物的制剂没有特别限制且可根据目的适当选择。例如，所述化妆品组合物的制剂可制成选自以下的一种或多种制剂：皮肤洗剂(skinlotion)、软肤剂(skinsoftener)、爽肤剂(skintoner)、收敛剂(astringent)、洗剂(lotion)、牛奶洗剂(milklotion)、保湿露(moisturizinglotion)、滋养露(nourishinglotion)、按摩霜(massagecream)、滋养霜(nourishingcream)、保湿霜(moisturizingcream)、护手霜(handcream)、粉底(foundation)、精华液(essence)、滋养精华液(nourishingessence)、面膜(pack)、肥皂(soap)、清洁泡沫(cleansingfoam)、清洁洗剂(cleansinglotion)、清洁霜(cleansingcream)、身体乳液(bodylotion)及身体清洁剂(bodycleanser)，但不限于此。当本发明的制剂为糊剂(paste)、霜剂或凝胶时，动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡(paraffin)、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅橡胶、膨润土、硅胶(silica)、滑石、氧化锌等可用作载体成分。当本发明的制剂为粉剂或喷剂时，乳糖、滑石、硅胶、氢氧化铝、硅酸钙、聚酰胺粉末等可被用作载体成分。特别地，当所述制剂为喷剂时，其还可包含推进剂诸如氯氟烃(chlorofluorohydrocarbon)、丙烷/丁烷或二甲醚。当本发明的制剂为溶液或乳液时，溶剂、增溶剂或乳化剂可用作载体成分。例如，可以使用水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁基二醇油(1,3-butylglycoloil)、甘油脂族酯(glycerolaliphaticester)、聚乙二醇或失水山梨醇的脂肪酸酯。当本发明的制剂为悬浮液时，液体稀释剂(比如水、乙醇或丙二醇)、悬浮剂(比如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯(polyoxyethylenesorbitolester)及聚氧乙烯失水山梨醇酯(polyoxyethylenesorbitanester))、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminummetahydroxide)、膨润土、琼脂、黄蓍胶等可用作载体成分。当本发明的制剂为含表面活性剂的清洁剂时，脂肪醇硫酸盐(aliphaticalcoholsulfate)、脂肪醇醚硫酸盐(aliphaticalcoholethersulfate)、磺基琥珀酸单酯盐(sulfosuccinicmonoester)、羟乙基磺酸盐(isethionate)、咪唑啉衍生物(imidazoliniumderivative)、甲基牛磺酸盐(methyltaurate)、肌氨酸盐(sarcosinate)、脂肪酸酰胺醚硫酸盐(fattyacidamideethersulfate)、烷基酰胺甜菜碱(alkylamidobetaine)、脂族醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、乙氧基化甘油脂肪酸酯等可用作载体成分。在一示例性实施例中，所述组合物可为食品组合物。所述食品组合物可为液态或固态制剂。例如，其可为各种食品、饮料、口香糖、茶、维生素混合物、补充性保健食品等形式，且可制成粉末、颗粒、片剂、胶囊或饮品。根据目的，本领域技术人员可毫无困难地通过将所述活性成分与本领域常用的成分混合来制备所述食品组合物的各制剂。当所述活性成分与其他成分一起使用时，可实现协同效应。除所述活性成分外，可以包含在所述食品组合物中的液态成分没有特别限制。在普通饮品中还可以含有各种香料、天然碳水化合物等。所述天然碳水化合物可为单醣、二醣(诸如葡萄糖、果糖等)、多醣(诸如麦芽糖、蔗糖等)、常用糖类(诸如糊精，环糊精等)、或糖醇(诸如木糖醇、山梨醇、赤藓糖醇等)。可使用天然香料(索马甜、甜菊提取物(如莱鲍迪甙A(rebaudiosideA)、甘草甜素等))或合成香料(如糖精、阿斯巴甜等)作为香料。每100mL的本发明的组合物中可以包含通常为约1-20g，特别是约5-12g的量的所述天然碳水化合物。在一方面，所述食品组合物可含有各种营养、维生素、矿物质(电解质)、香料(比如合成香料及天然香料、着色剂、填充剂(extenders)(奶酪、巧克力等)、果胶酸及其盐类、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH控制剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、碳酸化饮品中使用的碳酸化剂(carbonatingagents)等。在另一方面，可含有用于制备天然果汁及蔬菜饮品的果肉。这些成分可单独使用或组合使用。这些添加剂可以每100重量份的本发明组合物的约0.001-20重量份的量使用，但不限于此。实施例以下通过实施例对本发明进行详细说明。然而，以下实施例仅用于说明目的，且本发明范围不受实施例限制。实施例1.乳酸菌衍生的胞外囊泡的分离从乳杆菌属的乳酸菌中分离包含外泌体样囊泡的胞外囊泡系。作为乳杆菌属的细菌，使用从韩国生命科学和生物技术研究院的韩国典型培养物保藏中心(KoreanCollectionforTypeCulturesoftheKoreaResearchInstituteofBioscienceandBiotechnology)获得的罗伊氏乳杆菌(L.reuteri,KCTC3594)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus,KCTC5033)及沙克乳杆菌(L.sakei,KCTC3603)。(步骤1)将乳杆菌属的乳酸菌培养液以4℃和1,800xg离心20分钟，以便从所述培养液中分离并移除乳杆菌属细菌。也就是说，通过低速离心分离细胞和培养上清液。(步骤2)使用高速离心机将步骤1中离心的培养液以4℃和10,000xg进一步离心20分钟，以便追加除去细胞、细胞碎片等。(步骤3)将步骤2中离心的培养液用0.45μm瓶顶过滤器过滤，以便增加所述培养液的纯度。(步骤4)将步骤3中过滤的培养液以4℃和150,000xg超速离心3小时，以分离外泌体样囊泡。(步骤5)在步骤4的超速离心后，移除上清液，并将剩余的外泌体样囊泡团块重新悬浮于缓冲液中(HEPES缓冲液)。(步骤6)将步骤5的重新悬浮于缓冲液中的外泌体样囊泡储存于-70℃，以用于以下测试中。测试实施例1.乳酸菌衍生的胞外囊泡的大小的测量通过动态光散射分析在实施例1中获得的从乳杆菌属细菌分离的外泌体样囊泡的大小，图2显示了结果。结果，确认从乳杆菌属细菌分离的外泌体样囊泡平均直径为20-300nm且大致为球形。测试实施例2.毛乳头细胞的增殖为了研究乳酸菌衍生的胞外囊泡对毛乳头细胞增殖的影响，用不同浓度的、从实施例1中的乳杆菌属细菌中分离的外泌体样囊泡处理原代人毛乳头细胞(hDPCs)。具体而言，将所述毛乳头细胞(hDPCs，第6、7代)在96孔板中以2×104细胞/孔培养(5％CO2,37℃)24小时，然后用不同浓度(0.1-100μg/mL)的、衍生自乳杆菌属细菌的外泌体样囊泡处理。将该细胞培养48小时后，更换培养基并通过MTT试验评估对增殖的影响(100μg/孔,测量570nm的吸光度)。图3显示测量用低浓度(0.1-20μg/mL)外泌体样囊泡处理的毛乳头细胞的增殖的结果，且图4a及4b显示测量用高浓度(10-100μg/mL)外泌体样囊泡处理的毛乳头细胞的增殖的结果。图3、4a及4b中，纵坐标表示该毛乳头细胞的增殖(相对于阴性对照组(CTL)的％)并用5％FBS阳性对照组进行比较。结果，确认该衍生自乳杆菌属细菌的外泌体样囊泡促进该毛乳头细胞的增殖。测试实施例3.毛干延长用各种浓度的、从实施例1中的乳杆菌属细菌中分离的外泌体样囊泡处理毛囊器官培养物，并研究乳酸菌衍生的胞外囊泡对毛干延长的效果。具体而言，每个试验组测试12个毛囊(从45岁和63岁男性分离出来)2次。在用不同浓度(10-20μg/mL)的衍生自乳杆菌属细菌的外泌体样囊泡处理后培养该毛囊。使用含L-谷氨酰胺(2mM)、胰岛素(10μL/mL)、抗生素(1％)、两性霉素B(Fungizone)(0.1％)及(-)氢化可的松(10ng/mL)的William’sE培养基作为培养基。在每3天更换培养基时测量头发长度。使用对防止掉发及促进生发有效的MNX(米诺地尔)作为阳性对照。图5及图6显示了用乳酸菌衍生的胞外囊泡处理毛囊器官培养物时对毛囊延长的影响。由图5及图6可见用衍生自乳杆菌属细菌的外泌体样囊泡处理会导致头发长度增加。以下将通过制剂实施例详细描述本发明。然而，以下制剂实施例仅用于说明目的，且本发明范围不受制剂实施例限制。[制剂实施例1]软胶囊通过以下方法制备软胶囊：混合50mg实施例1的乳酸菌衍生的外泌体样囊泡、80-140mg的L-肉碱、180mg的大豆油、2mg的棕榈油、8mg的氢化植物油、4mg的黄蜂蜡及6mg的卵磷脂，且按照常用方法每个胶囊填充400mg。[制剂实施例2]片剂通过以下方法制备片剂：混合50mg实施例1的乳酸菌衍生的外泌体样囊泡、200mg的低聚半乳糖(galactooligosaccharide)、60mg的乳醣及140mg的麦芽糖，使用流化床干燥器将混合物颗粒化，加入6mg的糖酯，然后使用压片机压片。[制剂实施例3]颗粒通过以下方法制备颗粒：混合50mg实施例1的乳酸菌衍生的外泌体样囊泡、250mg的无水结晶葡萄糖及550mg的淀粉，使用流化床制粒机将混合物颗粒化，然后填充在袋(pouch)中。[制剂实施例4]饮品通过以下方法制备饮品：混合50mg实施例1的乳酸菌衍生的外泌体样囊泡、10g的葡萄糖、0.6g的柠檬酸及25g的低聚糖糖浆，加入300mL纯化水且每瓶填充200mL。填充在瓶中后，将该饮品于130℃灭菌4-5秒。[制剂实施例5]软膏依照常用方法以表1所述的组合物制备软膏。表1[制剂实施例6]美容液依照常用方法以表2所述的组合物制备美容液。表2成分含量(wt％)实施例1的乳酸菌衍生的外泌体样囊泡2.00羟乙基纤维素(2％水溶液)12.00黄原胶(2％水溶液)2.001,3-丁二醇6.00浓甘油4.00透明质酸钠(1％水溶液)5.00纯净水余量总计100.00[制剂实施例7]香波依照常用方法以表3所述的组合物制备香波溶液。表3[制剂实施例8]洗剂依照常用方法以表4所述的组合物制备洗剂。表4虽然已显示及描述示例性实施例，但是本领域技术人员应理解，在不脱离由本发明所附权利要求范围界定的精神及范围的情况下，可对其进行形式及细节的各种改变。当前第1页1 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