N-硫辛酸-氨基酸或肽、衍生物以及它们的用途的制作方法

本文所述的实施方案涉及化合物、组合物以及组合物的用途，该组合物包含用于局部给药至受治疗者以治疗或预防与皮肤病症或化妆品病症或皮肤系统的其它障碍相关联的障碍、疾病、症状或综合征的n-硫辛酸-氨基酸或n-硫辛酸-肽、其衍生物。

背景技术：

硫辛酸，也称为α硫辛酸，是最强效的抗氧化剂中的一种，并且已作为补充剂和治疗化合物被广泛用于护肤制剂中。硫辛酸是线粒体能量代谢的必需辅助因子。它减少了其它水溶性和脂溶性维生素诸如维生素c、e和谷胱甘肽，并调节了葡萄糖代谢和炎症。硫辛酸作为抗老化化合物已在皮肤制剂中被广泛使用和宣传。然而，由于其光敏性质和生物活性的损失，硫辛酸具有有限的用途。

硫辛酸是线粒体氧化途径中关键酶的必需辅助因子。它在细胞环境中起着有效的抗氧化剂和金属螯合剂的作用(gomes等人)。它已被广泛用作皮肤制剂的抗氧化剂。硫辛酸具有两种光学对映体，硫辛酸的r型和s型(gomes等人)。硫辛酸用作护肤产品中的抗老化化合物。然而，由于硫辛酸是光敏的，当暴露于紫外光时会损失其生物学效应(wada等人)。因此，更稳定的硫辛酸衍生物对于皮肤防护和抗老化将是理想的。

某些研究表明，硫辛酸具有抗黑色素生成效果，其中硫辛酸抑制黑色素生成途径中关键酶酪氨酸酶的表达(kimjh等人)。其它研究表明，硫辛酸衍生物在黑色素合成途径中清除dopa醌中间体。这些研究表明硫辛酸衍生物通过多于一种机制抑制黑色素合成。然而，由于硫辛酸因其光敏性质而在皮肤中仅具有有限的生物利用率，因此开发更加稳定的硫辛酸衍生物是重要的。

另外，使用高剂量的硫辛酸与某些不良反应有关，诸如瘙痒症和皮肤溃疡(gomes等人)。

技术实现要素：

本发明涉及一种化合物，该化合物为氨基酸或肽的新型衍生物，该化合物包含经由共价酰胺键连接到氨基酸或肽的硫辛酸。在本发明中已经发现，氨基酸或肽的新型衍生物，具体地n-硫辛酸-氨基酸或肽及其衍生物，以及用于局部给药至受治疗者的包含根据本发明的氨基酸或肽的衍生物的组合物在治疗学上对于治疗或预防与皮肤病症或化妆品病症或皮肤系统的其它障碍相关联的障碍、疾病、症状或综合征是有效的。

在一个一般方面，本发明的实施方案涉及一种化合物，该化合物是氨基酸或肽的具有以下通式(i)的新型衍生物：

n-硫辛酸-(x)n-z-r1式(i)

或其异构体、游离酸、碱、盐、内酯、酰胺、羟基酰胺、酰肼、酯或腈，

其中“n-硫辛酸”为一个或多个硫辛酸(lp)基团，附接到氨基酸基团中氨基或亚氨基基团的氮原子

(x)n为具有n个氨基酸残基的肽，氨基酸残基中的每一个；

x独立地选自任何氨基酸残基；

n为0至2的整数；

z为羧基末端氨基酸残基；

氨基酸残基中的每一个独立地选自任何氨基酸；

r1为or2、nhr3或nhnhr4；

r2为h，具有至多9个碳原子的烷基、芳烷基或芳基基团；

r3或r4独立地为h，oh，具有至多9个碳原子的烷基、芳烷基、芳基或酰基基团。

除上述之外，x和z中的每一者的侧链任选地且独立地具有选自以下项的额外官能基团：oh、sh、nhconh2、nhc(＝nh)nh2、nh2、cooh、conh2、咪唑基、吡咯烷基和吲哚基；

额外的官能基团的h任选地被nh2，具有至多9个碳原子的酰基、烷基、芳烷基或芳基基团取代；

nh2、nhnh2、nhoh或nh(c＝nh)nh2中的h任选地被硫辛酸基团取代。

典型的酰基基团包括但不限于乙酰基(ac)、丙酰基(pa)和苯甲酰基(bz)。

附接到羧基末端氨基酸残基的典型基团包括但不限于oh、oet、nh2、nhoh和nhnh2、nhnhac、nhnhpa或cn以取代羧基基团。

在一个实施方案中，硫辛酸氨基酸的衍生物可选自：n-lp-gly-nh2；n-lp-cys-nh2；n-lp-tyr-nh2；n-lp-tyr(oac)-nh2；n-lp-pro-nh2；n-lp-cys-oh；n-lp-cys-oet；n-lp-cys-(sac)-oet；和n-lp-cys-(sac)-nh2。

在另一个实施方案中，硫辛酸肽的衍生物为可选自以下项的硫辛酸二肽：n-lp-gly-cys-nh2；n-lp-pro-cys-nh2；n-lp-cys-gly-nh2；n-lp-tyr-gly-nh2；n-lp-gly-tyr-nh2；n-lp-tyr-cys-nh2；n-lp-tyr-cys-oet；n-lp-gly-cys-oh；和n-lp-gly-cys-oet。

在另一个实施方案中，硫辛酸肽的衍生物为选自以下项的硫辛酸三肽：n-lp-gly-cys-cys-nh2；n-lp-cys-cys-cys-nh2；n-lp-tyr-cys-cys-nh2；n-lp-gly-tyr-cys-nh2；和n-lp-pro-cys-cys-nh2。

在一个优选的实施方案中，硫辛酸氨基酸的衍生物为n-lp-gly-nh2，其具有以下结构

本发明的另一方面涉及一种用于局部给药至受治疗者的组合物，组合物包含治疗有效量的如上所述化合物(包含n-硫辛酸-氨基酸或n-硫辛酸-肽、或其衍生物)，以及任选地药学上或美容上可接受的载体。化合物可以是本公开中描述的任何硫辛酸氨基酸、硫辛酸二肽和硫辛酸三肽。在一个优选的实施方案中，硫辛酸氨基酸为n-lp-gly-nh2，优选地具有如上定义的结构。

本发明还涉及一种用于局部治疗与老化相关联的皮肤变化的药物组合物，该药物组合物包含有效量的如上所述的化合物(包含n-硫辛酸-氨基酸或n-硫辛酸-肽、或其衍生物)，以及任选地适于作为化妆产品局部递送的药学上可接受的载体。化合物可以是本公开中描述的任何硫辛酸氨基酸、硫辛酸二肽和硫辛酸三肽。在一个优选的实施方案中，硫辛酸氨基酸为n-lp-gly-nh2，优选地具有如上定义的结构。在一个实施方案中，组合物包含至少一种不是n-硫辛酸氨基酸或肽的衍生物的化合物；所述化合物选自防晒剂；抗痤疮化合物；抗微生物化合物；抗炎化合物；抗氧化剂；螯合化合物；ph调节剂；润肤剂；增稠化合物；防腐剂；乳化剂；湿润剂；保湿剂；悬浮剂化合物；光学增白剂；稳定剂；渗透增强剂；香料；和着色化合物。

本发明还涉及一种治疗化妆品病症或皮肤障碍的方法，该化妆品病症或皮肤障碍选自角化障碍、炎症以及与内在和外在老化相关联的变化，该方法包括向受治疗者局部给药包含治疗有效量的化合物的组合物，该化合物包含如上所述的n-硫辛酸-氨基酸或n-硫辛酸-肽、其衍生物。

在实施方案中的任一个中，化妆品病症或皮肤障碍选自细纹、皱纹、老年斑以及针对亮肤的障碍。

在另一方面，本发明的实施方案涉及用于局部给药至受治疗者的组合物，组合物包含治疗有效量的根据本发明的氨基酸或肽衍生物，以及任选地药学上或美容上可接受的载体。

在又一方面，本发明的实施方案涉及治疗、预防、减轻或改善有需要的受治疗者的与皮肤病症或化妆品病症或皮肤系统的其它障碍相关联的病症、障碍、疾病、症状或综合征的方法，该方法包括向受治疗者局部给药包含治疗有效量的根据本发明的氨基酸或肽衍生物的组合物。

在又一方面，本发明涉及亮肤化合物，亮肤添加剂包含本公开的氨基酸或肽的新型衍生物。除亮肤之外，本公开的氨基酸或肽的新型衍生物还可具有抑制黑色素和/或诱导前胶原的效果。

在又一方面，本发明涉及一种用于亮肤的化妆品组合物，化妆品组合物包含如上所述的亮肤化合物。

在另一方面，本发明涉及一种用上述化妆品组合物亮肤或治疗老化相关的皮肤变化(包括细纹和皱纹)的方法。

如本文所用，化妆品组合物旨在包括用于局部施用到哺乳动物尤其是人类的皮肤的组合物。此类组合物一般可被分类为免洗型或洗净型，并且旨在包括调理剂或补品、唇膏、有色化妆品和一般局部用组合物，其以某种方式并且最低程度上说降低黑色素对角化细胞的影响。如本文所用的亮肤和美白具有相同含义并且它们包括皮肤的直接美白以及皮肤上斑点如老年斑和雀斑的淡化。

本发明的化妆品组合物可为液体、洗剂、霜剂、乳液、凝胶、皂条或调色剂的形式，或经由面膜或贴剂施用。当皮肤旨在包括面部、颈部、胸部、背部、手臂、手、腿部和头皮上的皮肤时，本发明的组合物为最低程度上说亮肤的一种组合物。

另一个实施方案涉及一种治疗组合物，该治疗组合物包含用于治疗皮肤障碍的化合物(包含n-硫辛酸-氨基酸或n-硫辛酸-肽、或其衍生物)。另一个实施方案涉及化合物(包含n-硫辛酸-氨基酸或n-硫辛酸-肽、或其衍生物)在制造用于治疗皮肤障碍的药物中的用途。

在另一个实施方案中，本发明提供了根据本发明的化合物在制造用于治疗皮肤障碍的药物中的用途。在另一方面，本发明还提供了一种用于制造包含根据本发明的组合物的药物的方法。优选地，本发明的方法包括对药物灭菌的步骤。皮肤障碍可以是本公开所讨论的任何障碍。

附图说明

图1示出n-lp-gly-nh2(l20)显著地阻断正常新生儿表皮黑色素细胞的黑色素合成。

图2示出l20显著地阻断正常成年人类melanoderm3d共培养物的黑色素合成。

图3示出l20显著地诱导正常epiderm3d共培养物的前胶原合成。

具体实施方式

氨基酸是具有一个或多于一个附接在除一碳之外的任何碳原子处的碱性基团(诸如氨基、胍基、亚氨基或肼基)的有机酸。有20种常见的氨基酸，其用化学名称诸如“甘氨酸”，或缩写符号诸如三个字母“gly”或一个字母“g”表示。在本公开中，将会使用一个字母和三个字母两者。除了甘氨酸以外，所有其它常见氨基酸均具有立体异构体，即对映体，d型或l型。大多数天然肽和蛋白质中的氨基酸全部为l型。一些d型氨基酸由微生物产生或存在于抗生素中，并且具有抑制性或拮抗作用。例如，d-丙氨酸、d-天冬氨酸和d-谷氨酸存在于细菌细胞壁中，而d-谷氨酸、d-天冬氨酸和d-苯丙氨酸存在于抗生素杆菌肽中。不常见的氨基酸是不属于常见氨基酸的氨基酸。不常见的氨基酸的示例包括但不限于β-丙氨酸和牛磺酸。不常见的氨基酸可作为d型或l型存在。

用于20种常见氨基酸的一个字母和三个字母的符号如下：丙氨酸(a，ala)、精氨酸(r，arg)、天冬氨酸(d，asp)、天冬酰胺(n，asn)、半胱氨酸(c，cys)、甘氨酸(g，gly)、谷氨酸(e，glu)、谷氨酰胺(q，gln)、组氨酸(h，his)、异亮氨酸(i，ile)、亮氨酸(l，leu)、赖氨酸(k，lys)、蛋氨酸(m，met)、苯丙氨酸(f，phe)、脯氨酸(p，pro)、丝氨酸(s，ser)、苏氨酸(t，thr)、色氨酸(w，trp)、酪氨酸(y，tyr)和缬氨酸(v，val)。

用于不常见氨基酸的字母符号如下：β-丙氨酸(bala)、4-氨基苯甲酸(aba)、2-氨基丁酸(abu)、4-氨基丁酸(4abu)、2-氨基异丁酸(aib)、5-氨基乙酰丙酸(all)、蒜氨酸(ali)、2-氨基己二酸(aad)、3-氨基己二酸(baad)、氨基庚二酸(apa)；3-氨基酪氨酸(atyr)、刀豆氨酸(cav)、副刀豆氨酸(can)、氨乙基磷酸(cil)、磺基丙氨酸(cya)、半胱亚磺酸(csa)、瓜氨酸(cit)；肌氨酸(cre)、肌酸酐(crn)；2,3-二氨基琥珀酸(dsa)；2,4-二氨基丁酸(dbu)；2,3-二氨基丙酸(dpr)；3,4-二羟基苯基-丙氨酸(dopa)；3,5-二碘酪氨酸(dtyr)；高精氨酸(har)、高丝氨酸(hser)、同型半胱氨酸(hcys)、高瓜氨酸(hcit)、羟赖氨酸(hyl)；3-羟脯氨酸(3hyp)；4-羟脯氨酸(4hyp)；2-羟基-4-氨基丁酸(haba)；3-羟基-4-氨基丁酸(hyba)；4-羟基鸟氨酸(horn)；4-羟基天冬氨酸(hasp)；4-羟基苯基-甘氨酸(hpg)；3-碘酪氨酸(ityr)、羊毛硫氨酸(lan)、β-赖氨酸(βlys)；α-甲基丙氨酸(mala)；β-甲基天冬氨酸(mas)、4-甲基脯氨酸(mpro)；2-甲基丝氨酸(mser)；n-甲基组氨酸(mhis)；鸟氨酸(orn)；苯基甘氨酸(pgly)；3-苯基丝氨酸(pser)；肌氨酸(sar)；s-烯丙基-半胱氨酸(sac)；茶氨酸(the)；甲状腺素(thy)；3,5,3’-三碘甲状腺氨酸(tth)；和牛磺酸(tau)。

本专利申请中使用的术语和缩写如下：硫辛酸，lp；甲酰基，fo；乙酰基，ac；丙酰基，pa；苯甲酰基，bz；焦谷氨酰基，pyro；苯乙酰基，phac；苄氧羰基，z；甲基酯，ome；乙基酯，oet；丙基酯，opr；丁基酯，obu；叔丁基酯，otbu；己基酯，ohex；辛基酯，ooc；苄基酯，obzl。

当一个氨基酸的羧基基团在脱水合成反应中与另一个氨基酸的氨基基团反应时，由至少两个氨基酸形成具有酰胺共价键的肽。二肽是包含两个氨基酸残基的肽。三肽是包含三个氨基酸残基的肽。肽可通过取代或衍生进一步修饰。每个肽可具有不同的化学特性和物理特性，并且具有不同的生物学和药理作用。

如本文所用，化合物的“衍生物”被定义为通过取代化合物中的一个或多个官能团形成的化合物分子。其示例包括oh、nh2、nhnh2、nhoh和nh(c＝nh)nh2的酰化，cooh的酯化，从cooh变成酰胺、羟基酰胺、酰肼或腈，或者nh2、nhnh2、nhoh或nh(c＝nh)nh2中h的取代或由硫辛酸基团的取代。

在一个一般方面，本发明的实施方案涉及一种化合物，该化合物是氨基酸或肽的具有以下通式(i)的新型衍生物：

n-硫辛酸-(x)n-z-r1式(i)

或其异构体、游离酸、碱、盐、内酯、酰胺、羟基酰胺、酰肼、酯或腈，

其中“n-硫辛酸”为一个或多个硫辛酸(lp)基团；附接到氨基酸基团中氨基或亚氨基基团的氮原子，

(x)n为具有n个氨基酸残基的肽，

氨基酸残基中的每一个x独立地选自任何氨基酸残基；

n为0至2的整数；

z为羧基末端氨基酸残基，

氨基酸残基中的每一个独立地选自任何氨基酸；

r1为or2、nhr3或nhnhr4；

r2为h，具有至多9个碳原子的烷基、芳烷基或芳基基团；

r3或r4独立地为h，oh，具有至多9个碳原子的烷基、芳烷基、芳基或酰基基团；

x和z中的每一者的侧链任选地且独立地具有选自以下项的额外官能基团：oh、sh、nhconh2、nhc(＝nh)nh2、nh2、cooh、conh2、咪唑基、吡咯烷基和吲哚基；

额外的官能基团的h任选地被nh2，具有至多9个碳原子的酰基、烷基、芳烷基或芳基基团取代；

nh2、nhnh2、nhoh或nh(c＝nh)nh2中的h任选地被硫辛酸基团取代。

典型的酰基基团包括但不限于乙酰基(ac)、丙酰基(pa)和苯甲酰基(bz)。

附接到羧基末端氨基酸残基的典型基团包括但不限于oh、oet、nh2、nhoh和nhnh2、nhnhac、nhnhpa或cn以取代羧基基团。

在另一方面，本发明的实施方案涉及用于局部给药至受治疗者的组合物，组合物包含治疗有效量的根据本发明的氨基酸或肽衍生物，以及任选地药学上或美容上可接受的载体。

根据本发明的另一个实施方案，氨基酸或肽的衍生物也可以是二(硫辛酸)残基，其中附加的硫辛酸残基附接到式(i)中额外的官能团x或z，并且优选地经由共价酰胺键附接到氨基基团。

根据本发明的代表性的n-硫辛酸-氨基酸或肽、它们的衍生物包括但不限于(1)n-lp-(x)n-z-r1。

(1)n-硫辛酸-氨基酸或肽衍生物：n-lp-(x)n-z-r1

代表性的n-硫辛酸-氨基酸衍生物包括但不限于以下项：

n-lp-z-r1，其中z选自包含以下项的任何氨基酸：a；r；d；n；c；g；e；q；h；i；l；k；m；f；p；s；t；w；y；v；bala；aba；abu；4abu；aib；all；ali；aad；baad；apa；atyr；cav；can；cil；cya；csa；cit；cre；crn；dsa；dbu；dpr；dopa；dtyr；har；hser；hcys；hcit；hyl；3hyp；4hyp；haba；hyba；horn；hasp；hpg；ityr；lan；βlys；mala；mas；mpro；mser；mhis；orn；pgly；pser；sar；sac；the；thy；tth；tau。

氨基酸z可为异构体、游离酸、碱、盐、内酯、酰胺、羟基酰胺、酰肼、酯或腈形式，诸如oh、nh2、nhoh、nhnh2、nhnhac、nhnhpa、oet、opr和cn形式。

优选的硫辛酸氨基酸衍生物如下：n-lp-gly-nh2；n-lp-cys-nh2；n-lp-tyr-nh2；n-lp-tyr(oac)-nh2；n-lp-pro-nh2；n-lp-cys-oh；n-lp-cys-oet；n-lp-cys-(sac)-oet；和n-lp-cys-(sac)-nh2。

优选的硫辛酸二肽衍生物如下：n-lp-gly-cys-nh2；n-lp-pro-cys-nh2；n-lp-cys-gly-nh2；n-lp-tyr-gly-nh2；n-lp-gly-tyr-nh2；n-lp-tyr-cys-nh2；n-lp-tyr-cys-oet；n-lp-gly-cys-oh；和n-lp-gly-cys-oet。

优选的硫辛酸三肽衍生物如下：n-lp-gly-cys-cys-nh2；n-lp-cys-cys-cys-nh2；n-lp-tyr-cys-cys-nh2；n-lp-gly-tyr-cys-nh2；和n-lp-pro-cys-cys-nh2。

根据本发明的实施方案的n-硫辛酸-氨基酸或肽及其衍生物可通过本领域技术人员已知的任何方法根据本公开进行制备。

本发明的另一个一般方面涉及一种治疗、预防、缓解或改善与皮肤病症或化妆品病症或皮肤系统的其它障碍相关联的病症、障碍、疾病、症状或综合征的方法。该方法包括向受治疗者局部给药组合物，该组合物包含治疗有效量的根据本发明的氨基酸或肽的衍生物，以及任选地药学上或美容上可接受的载体。

与皮肤系统相关联的可用本发明的组合物治疗的病症、障碍、症状和综合征描述如下。

皮肤系统

可用本发明的组合物治疗的化妆品病症、皮肤病症或皮肤系统的其它病症和障碍包括但不限于与皮肤、指/趾甲和毛发有关的感染、错乱或失调的皮肤或皮肤粘膜组织；口腔、阴道和肛门粘膜；角化障碍；炎症；与内在和外在老化相关联的变化。表现形式包括但不限于油性皮肤；痤疮；红斑痤疮；老年斑；瑕疵皮肤；疹斑；脂肪团；皮肤病；皮炎；皮肤、指/趾甲和毛发感染；头皮屑；皮肤、指/趾甲和毛发的干燥或松弛；干燥症；炎症或湿疹；弹性组织变性；疱疹；角化过度；皮肤色素沉着；鱼鳞病；角化病；雀斑；黑斑；斑点皮肤；假性毛囊炎；光老化和光损伤；瘙痒症；牛皮癣；皮纹；妊娠纹；皮肤、指/趾甲板和毛发变薄；疣；皱纹；口腔或齿龈疾病；刺激、发炎、发红、不健康、受损或异常粘膜、皮肤、毛发、指/趾甲、鼻孔、耳道、肛门或阴道病症；真皮组分的分解、缺陷合成或修复；胶原、糖胺聚糖、蛋白聚糖和弹性蛋白的异常或减弱合成，以及此类组分在表皮中的水平降低；不均匀的肤色；皮肤、指/趾甲和毛发表面粗糙和不均匀；皮肤、指/趾甲和毛发的回弹力、弹性和可卷曲性损失或减少；松弛；缺乏皮肤、指/趾甲和毛发润滑和光泽；指/趾甲和毛发脆性和分叉；皮肤泛黄；反应性、刺激或毛细管扩张的皮肤；以及暗沉且看起来较老的皮肤、指/趾甲和毛发。此外，本发明的组合物可用于皮肤、指/趾甲和毛发的一般护理；改善皮肤肌理和毛孔、发亮和红润；使皮肤柔软、光滑、清新、均衡、明显干净、均匀肤色且更加亮白；增加皮肤填充度和丰满度；以及用于皮肤漂白和增亮以及伤口愈合；减少或防止腋下、裆部、手掌或身体的其它部分出汗或有汗液。

皮肤、指/趾甲和毛发感染可由微生物引起，这些微生物包括细菌、真菌、酵母、霉菌、寄生虫和病毒。更具体地，细菌感染可导致黄菌毛症、窝状角质松解症、红癣、脓疱疮、臁疮、疖病(疖)、痈、烫伤样皮肤综合征、中毒性休克综合症、丹毒、蜂窝织炎、坏死性筋膜炎、类丹毒、猫抓病(亨氏罗卡利马氏体菌(rochalimaeahenselae))、梅毒、莱姆病(博氏疏螺旋体(borreliaburgdorferi))、皮肤炭疽(炭疽杆菌(bacillusanthracis))、淋菌性败血症、接种结核病、皮肤结核、结核疹、硬结性红斑、麻风病(麻风分枝杆菌(mycobacteriumleprae))、利什曼病和急性甲沟炎。病毒感染可导致病毒性疣(人乳头瘤病毒)、水痘(varicella)(水痘(chickenpox))、带状疱疹(水痘带状疱疹)、单纯疱疹(疱疹病毒人型支原体)、传染性软疣、羊痘疮、艾滋病(aids)(获得性免疫缺陷综合征、人类免疫缺陷病毒、艾滋病病毒(hiv))、疱疹性咽峡炎、皮肤粘膜淋巴结综合征(川崎氏病)、丘疹性肢皮炎综合征(肝炎b病毒)、麻疹、风疹和感染性红斑。真菌感染可导致癣、脚癣(香港脚)、甲癣(指/趾甲感染)、手足癣、腹股沟癣、躯干和四肢癣、头癣(头皮)、口腔念珠菌病、念珠擦烂、生殖器念珠菌病、慢性甲沟炎、慢性皮肤粘膜念珠菌病、花斑糠疹、组织胞浆菌病、球孢子菌病、芽生菌病、孢子丝菌病、放线菌病和足菌肿(足分支菌病)。抗生素抗性微生物包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(staphyloccocusaureus(mrsa))和表皮葡萄球菌(staphyloccocusepidermidis(mrse))。

给药途经和一般制剂

包含根据本发明的氨基酸或肽的衍生物的组合物，诸如n-硫辛酸-氨基酸或肽或其衍生物，可通过本领域技术人员已知的局部施用向有需要的受治疗者给药。

对于局部施用，包含本发明的氨基酸或肽的衍生物的组合物可被配制为溶液、凝胶、洗剂、霜剂、水包油乳液、油包水乳液、软膏、洗发剂、喷剂、粘液、粉末、面膜、护垫、口腔清新剂或漱口水、阴道凝胶或栓剂、直肠凝胶或栓剂、尿道凝胶或栓剂，或者其它可接受用于皮肤、指/趾甲、毛发、口腔粘膜、阴道或肛门粘膜、口腔或牙龈的形式。氨基酸或肽的衍生物的浓度可为按总组合物的重量或体积计的约0.001％至约99％。

在另一个实施方案中，组合物还可包含附加的化妆品、药物或其它化合物，以在与皮肤病症或化妆品病症或皮肤系统的其它障碍相关联的疾病、障碍和综合征的治疗或预防中实现协同或协作效应。为制备局部组合组合物，通过将化合物溶解或混合到制剂中，将化妆品、药物或其它化合物掺入上述组合物中的任一种中。本领域技术人员容易认识到用于局部递送本发明的n-硫辛酸-氨基酸或肽或其衍生物的其它形式的组合物。

化妆品

在另一方面，本发明的实施方案涉及一种n-硫辛酸氨基酸或肽的新型衍生物，其用作化妆品组合物中的抗老化和/或亮肤化合物。本发明的化妆品组合物通常包含基于化妆品组合物的总重量，按重量计约0.001％至约99％，并且优选地约0.01％至约20％，并且最优选地约0.1％至约10％的n-硫辛酸氨基酸或肽的新型衍生物，并且包括其中的所有范围。其它优选的范围包括约0.001％至0.05％；约0.001％至0.5％；约0.001％至1％；以及约0.001％至2％。

本发明的组合物的包装可为贴剂、瓶、管、滚珠施用装置、推进剂驱动的气溶胶装置、挤压式容器或封盖广口瓶。

在本发明的任何组合物中，组合物可包含至少一种不是n-硫辛酸氨基酸或肽的衍生物的化合物。该化合物可为例如选自以下项的一种或多种：防晒剂；抗痤疮化合物；抗微生物化合物；抗炎化合物；抗氧化剂；螯合化合物；ph调节剂；润肤剂；增稠化合物；防腐剂；乳化剂；湿润剂；保湿剂；悬浮剂化合物；光学增白剂；稳定剂；渗透增强剂；香料；和着色化合物。

硫辛酸衍生物

在一个优选的实施方案中，n-硫辛酸氨基酸或肽的新型衍生物为硫辛酸的衍生物。

我们开发了各种具有增强稳定性和抗黑色素生成效果的硫辛酸衍生物。在衍生物n-硫辛酸甘氨酰胺(l20)中，在正常人类表皮黑色素细胞和melanoderm模型中表现出显著的黑色素减少。l20的结构如下：

在无毒剂量下，l20完全阻断黑色素合成，其中黑色素细胞不具有任何可测量的黑色素。使用三维皮肤共培养melanoderm模型测试l20的效果。通过显微镜评估观察24h内的被l20抑制的黑色素合成。在无毒剂量下，l20在暗黑色皮肤活检中将角化细胞-黑色素细胞共培养物的黑色素含量降低56％。另外，一周回归研究导致黑色素合成的可逆抑制。使用正常真皮皮肤等同物(epiderm-ft)，l20诱导成纤维细胞-角化细胞共培养物中的前胶原。因此，l20是一种对于皮肤色素沉着过度和抗老化作用(包括细纹和皱纹)很有前景的化合物。

我们合成了各种硫辛酸衍生物，这些衍生物包括n-硫辛酸甘氨酰胺和n-硫辛酸半胱氨酰胺。

这些硫辛酸衍生物比硫辛酸更稳定。因此，有必要对护肤产品使用无毒剂量。

在本公开中，我们合成了n-硫辛酸氨基酸或肽的各种新型衍生物(其为硫辛酸衍生物)，并测试了它们作为抗黑色素生成、抗老化和抗氧化特性的能力。

优选的硫辛酸氨基酸衍生物如下：n-lp-gly-nh2；n-lp-cys-nh2；n-lp-tyr-nh2；n-lp-tyr(oac)-nh2；n-lp-pro-nh2；n-lp-cys-oh；n-lp-cys-oet；n-lp-cys-(sac)-oet；和n-lp-cys-(sac)-nh2。

优选的硫辛酸二肽衍生物如下：n-lp-gly-cys-nh2；n-lp-pro-cys-nh2；n-lp-cys-gly-nh2；n-lp-tyr-gly-nh2；n-lp-gly-tyr-nh2；n-lp-tyr-cys-nh2；n-lp-tyr-cys-oet；n-lp-gly-cys-oh；和n-lp-gly-cys-oet。

优选的硫辛酸三肽衍生物如下：

n-lp-gly-cys-cys-nh2；n-lp-cys-cys-cys-nh2；n-lp-tyr-cys-cys-nh2；n-lp-gly-tyr-cys-nh2；和n-lp-pro-cys-cys-nh2。

以下实施例用于进一步说明本发明的实质。应当理解，以下实施例不限制本发明，并且本发明的范围由所附权利要求书确定。

实施例

实施例1：使用微米卡尺测量皮肤厚度。

在与老化相关联的皮肤变化相关的研究中，如下通过微米卡尺测量皮肤厚度。

用2cm×6cm金属铰链抓紧皮肤；其内部表面用金刚砂布涂覆以防止滑移，并手动挤压至受治疗者不适的阈值。用微米卡尺测量两个整层皮肤的总厚度，包括两个铰链叶片的厚度。减去两个铰链叶片的厚度以确定两个整层皮肤的实际厚度。对用本发明的组合物处理过的部位进行三次重复测量，并且使用平均值来计算皮肤厚度。

实施例2：使用电子数字卡尺测量皮肤厚度。

在与老化相关联的皮肤变化相关的研究中，如下通过电子数字卡尺测量皮肤厚度。

使用直径为17mm的皮肤测试部位，用永久性墨水标记圆形部位。干预对照部位的直径也为17mm。测试部位用本发明的组合物在测试部位处进行处理，并且对照在对照部位进行处理。所有部位的皮肤厚度均直接通过电子数字卡尺进行测量。在此实例中，卡尺的钳口打开至17mm，施加压力至皮肤部位，并且然后闭合以牢固密封。然后从卡尺的屏上读出皮肤厚度。所有部位的测量均进行三次。

实施例3：制剂

根据本发明的包含n-硫辛酸-氨基酸或肽化合物或其衍生物的典型水性溶液组合物如下进行配制。除甘氨酸之外的所有氨基酸或肽均为l型。

将0.1g至1.0g根据本发明的n-硫辛酸-氨基酸或肽化合物或其衍生物溶解于99.9ml至99.0ml溶液中，该溶液由按体积计40份水、40份乙醇和20份丙二醇(以下称为wep442)，或按体积计80份乙醇和20份丙二醇(以下称为ep82)制成。该溶液因此被配制成在溶液组合物中包含0.1％至1％(w/v)的本发明的n-硫辛酸-氨基酸或肽化合物或其衍生物。在类似条件下，易于配制包含不同浓度的本发明的n-硫辛酸-氨基酸或肽化合物或其衍生物的溶液组合物。

据信，由此制备或配制的溶液或其它组合物在治疗学上对于各种医疗障碍(包括神经、血管、肌肉-骨骼或皮肤系统)的治疗是有效的。另外，据信这些溶液和组合物在治疗学上对于炎性疾病(包括湿疹、牛皮癣和老化相关的皮肤变化，包括老年斑、皱纹等)的治疗是有效的。

实施例4：制剂

作为例示，将0.2gn-lp-o-ac-y-nh2溶解于99.8mlep82中。以ph6.7由此配制的溶液组合物包含0.2％(w/v)的n-lp-o-ac-y-nh2。

在类似条件下，将0.2gn-lp-y-nh2溶解于99.8mlep82中。以ph6.7由此配制的溶液组合物包含0.2％(w/v)的n-lp-y-nh2。

在类似条件下，将0.1gn-lp-p-nh2溶解于99.9mlep82中。以ph6.8由此配制的溶液组合物包含0.1％(w/v)的n-lp-p-nh2。

在类似条件下，将0.2gn-lp-g-nh2溶解于99.8mlwep442中。以ph5.9由此配制的溶液组合物包含0.2％(w/v)的n-lp-g-nh2。

在类似条件下，将0.4gn-lp-g-nh2溶解于99.6mlwep442中。以ph5.6由此配制的溶液组合物包含0.4％(w/v)的n-lp-g-nh2。

据信，溶液组合物或其它制剂在治疗学上对于痤疮和与老化相关的皮肤变化(包括皱纹、老年斑和针对亮肤的变化)的治疗是有效的。

实施例5

包含n-硫辛酸氨基酸或肽的溶液形式的典型无水组合物如下进行配制：

将200mgn-lp-tyr-nh2溶解于100ml溶液中，该溶液由按体积计30份丙二醇、40份乙醇和30份油醇乳酸酯(下文称为pao343)制成。

由此配制的组合物在pao343中包含0.2％的n-lp-tyr-nh2。

在与(a)相同的条件下，配制了以下n-硫辛酸氨基酸衍生物的无水组合物。

pao343中0.2％的n-lp-tyr(oac)-nh2。

pao343中0.2％的n-lp-pro-nh2。

pao343中0.2％的n-lp-gly-nh2。

pao343中0.2％的lp-cys-oet。

实施例6

包含n-硫辛酸氨基酸或肽的溶液形式的另一种无水组合物如下进行配制：

将200mgn-lp-tyr-nh2溶解于100ml溶液中，该溶液由按体积计30份丙二醇和70份乙醇(下文称为ep73)制成。

由此配制的组合物在ep73中包含0.2％的n-lp-tyr-nh2。

在与(b)相同的条件下，配制了以下n-硫辛酸氨基酸衍生物的无水组合物。

ep73中0.2％的lp-cys-oet。

ep73中0.2％的lp-cys-oh。

实施例7

包含n-硫辛酸氨基酸或肽的霜剂形式的另一种无水组合物如下进行配制：

将200mgn-lp-pro-nh2溶解于20ml丙二醇中，并将由此制备的溶液与80g熔融混合物混合，该熔融混合物由按重量计20份丙二醇、30份油醇乳酸酯、5份蜂蜡、5份单硬脂酸甘油酯、5份peg-40硬脂酸酯、35份牛油树脂制成。

由此以霜剂形式配制的组合物在无水霜剂中包含0.2％的n-lp-pro-nh2。

在相同的条件下，易于配制在无水霜剂中包含0.2％lp-cys-oet的组合物。

据信，如实施例4至7中所配制的以上组合物在治疗学上对于亮肤和炎性障碍以及年龄相关的皮肤变化(包括湿疹、牛皮癣、老年斑、老年斑、细纹、皱纹等)的局部治疗是有效的。

实施例8：制剂

据信，溶液组合物或其它制剂在治疗学上对于炎性疾病(包括湿疹、牛皮癣、痤疮)和与老化相关的皮肤变化(包括皱纹、老年斑和针对亮肤的变化)的治疗是有效的。

实施例9：l20抑制黑色素并诱导前胶原

l20抑制正常新生儿表皮黑色素细胞中的黑色素合成至不可检测的水平：

l20为硫辛酸的甘氨酰胺衍生物，并且以不同剂量在正常人类表皮黑色素细胞上处理48h。剂量超过0.05％的l20似乎具有中等毒性(图1a)。我们测定了l20抑制黑色素细胞培养物中黑色素合成的能力。以0.001％的无毒剂量使用l20达7天(图1b)，连续几天进行处理。在处理一周之后，使用黑色素标准曲线提取并定量黑色素。与未处理的对照和经dmso处理的对照相比，经l20处理的正常黑色素细胞不具有可检测的黑色素(图1c)。

在3d皮肤等同melanoderm模型中，l20显著地抑制黑色素合成：

melanoderm是角化细胞和黑色素细胞的共培养模型，并用于测试l20作为抗黑色素生成化合物的能力。melanoderm来源于具有暗黑色皮肤的正常成人。用不同剂量的l20将这些组织连续处理两周。一组培养物用于回归研究，处理一周后从中去除l20。处理两周后，测试组织的黑色素含量和细胞活力(图2a)。在视觉上，经0.5％和1％的l20处理的melanoderm具有显著的亮肤效果(图2b)。使用黑色素标准曲线测定黑色素含量。与对照相比，1％的单独l20使黑色素含量减少了60％，并且0.5％的单独l20使黑色素含量减少了56％，并且0.1％的单独l20使黑色素含量减少了44％。用不同剂量的l20观察黑色素的剂量依赖性降低(图2b-d)。曲酸被用作阳性对照，并且使黑色素减少了27％。另外，在0.5％的l20剂量组中执行l20回归，其中l20的去除导致黑色素细胞恢复和黑色素的重新合成(图2b-d)。这些研究表明，0.5％的l20是无毒的，并显著减少了黑色素。显微镜观察显示，在初始处理后，l20在24h使黑色素减少。这些研究综合起来表明，在具有弱角质层的melanoderm模型中，0.5％的剂量足以抑制黑色素合成并且抑制是可逆的。

l20诱导人类epiderm模型中的前胶原合成，并增强抗老化效果：

真皮成纤维细胞在光老化和皮肤稳态中起着重要作用。我们确定了l20是否具有使用真皮成纤维细胞的任何抗老化有益效果。在本研究中使用了正常人类epiderm-ft组织。epiderm-ft由完全分化的表皮和真皮皮肤层组成。它还具有10层至15层角质层，并且还具有基底层、棘层和颗粒层。用溶媒对照和l20(1％)处理组织48h。这些组织用于使用elisa测定法测量前胶原的表达。前胶原的水平被归一化为总蛋白质。

在天然ph下将l20制备为wep溶媒中的1％溶液，其由水、乙醇和丙二醇组成。将测试材料和溶媒(wep)施用到由重组人类表皮(rhe、epidermft^tm)组成的组织培养物模型，该模型是由来源于正常人类的表皮角化细胞(nhek)和在专门制备的组织培养插入物上培养的人类真皮成纤维细胞组成的高度分化的3d组织模型。用25ul的l20(1％)或溶媒处理组织，并保持48小时。使用细胞裂解缓冲液消化组织样品，并测定前胶原蛋白质的表达水平。使用标准elisa技术(takarabioinc.)定量前胶原。如图3所示，与溶媒对照相比，1％的l20显著增加了前胶原生产，p<0.02。

材料和方法：

细胞培养物：正常人类表皮黑色素细胞(lonza,walkersville,ma)在特殊的黑色素细胞培养基mgm4中用补充剂(lonza,walkersville,ma)培养。镀覆细胞并用不同剂量的l20处理48h。l20最初溶解于dmso(100％)中，并且在培养基中进行连续稀释。将原液稀释1000倍，以在最终溶液中具有小于0.001％的dmso。使用10倍放大率拍摄显微镜图像。正常人类真皮成纤维细胞(lonza,walkersville,ma)在特殊的成纤维细胞生长培养基(lonza,walkersville,ma)中生长。在不同剂量下进行l20毒性测定，并且0.001％和以下的剂量被认为是无毒的。为了测试细胞活性，使用celltiteraqueous单溶液细胞增殖检测试剂盒(celltiteraqueousonesolutioncellproliferationassay)，并使用tecan酶标仪在490nm处用比色测定法测量吸光度。

黑色素减少测定法：用对照或l20处理正常人类表皮黑色素细胞达7天，并连续几天更换l20。在第7天收集细胞并在65度下过夜保持于solvable(perkinelmer,akron,oh)中。在solvable中平行制备黑色素(sigma,st.louis,mo)标准品，并且与样品类似地进行处理。然后使用tecan酶标仪在490nm处定量黑色素含量。

melanoderm研究：按照公司说明(mattek,ashland,ma)进行melanoderm研究。melanoderm组织来源于暗黑色皮肤类型。将组织稳定24h，并且然后用不同剂量的l20(25ul)在经wep改性的溶媒中进行处理。将melanoderm连续处理2周。每隔一天拍摄一次显微镜图像。两周后，使用celltiteraqueous单溶液试剂盒(celltiteraqueousonesolution)进行mtt测定，并且如方案中所提及的那样测定黑色素含量。

epiderm研究：将来源于新生儿包皮的epiderm-ft(mattek,ashland,ma)用于本研究。以1％(100ul)的l20处理组织并保持48h。使用剪刀切碎组织并用含有蛋白酶抑制剂的细胞裂解缓冲液进行处理。按照说明使用elisa(takara,shiga,japan)分析细胞裂解液中的前胶原，并归一化为总蛋白质。

本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明的广义的发明构思的情况下，可对上述实施方案作出修改。因此，应当理解，本发明不局限于所公开的特定实施方案，但本发明旨在涵盖符合本发明实质和范围的修改，如所附权利要求书中定义。