本发明涉及兽用生物制品领域，具体一种用于预防治疗鸡心包积液-肝炎综合征的复合卵黄抗体及其制备方法。
背景技术：
鸡心包积液-肝炎综合征是由鸡I群腺病毒引起的以心包积液和肝脏出现点状坏死为主要病变特征的病毒性传染病，目前研究报道证实，引起该病的病原主要是鸡I群腺病毒血清4型毒株，近两年来对我国家禽养殖造成不小的经济损失。
目前针对上述疾病的防治主要依赖于疫苗和抗生素，以及常规型的腺病毒卵黄抗体。卵黄抗体虽对病毒有靶向杀灭作用，但对腺病毒感染所造成的心肌损伤及心包积液等症状没有对症治疗的效果；抗生素可以抑制动物机体内的继发感染，但使用不当会导致药物残留和产生抗药性。因此发明一种既能靶向杀灭腺病毒，又能有效治疗腺病毒造成的心包积液及心肌损伤，并且无抗生素残留的，对腺病毒心包积液-肝炎综合征起到标本兼治的复方卵黄抗体具有重要意义。
申请公布号为CN106075427 A名称为“1型禽腺病毒疫苗、蛋黄抗体的制备方法”提供了一种鸡心包积液-肝炎综合征卵黄抗体的制备方法，但是并未考虑到对腺病毒感染所造成的心肌损伤和心包积液等症状的对症治疗的效果，申请公布号为CN106065030 A名称为“鸡包涵体肝炎的卵黄抗体及其制备方法”也是如此。因此需要一种既能靶向杀灭腺病毒，又能有效治疗腺病毒造成的心包积液及心肌损伤，并且无抗生素残留的，对腺病毒心包积液-肝炎综合征标本兼治的复方卵黄抗体具有重要意义。
技术实现要素：
有鉴于此，针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种用于预防治疗鸡心包积液-肝炎综合征的复合卵黄抗体的技术方案，采用本方法制备的复合卵黄抗体，其特点是所制备的抗体效价高，可显著修复发病鸡心肌损伤，促进心包液吸收，并提高机体免疫力，防止机体继发感染，显著降低发病鸡群的死亡率。
为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种用于预防治疗鸡心包积液-肝炎综合征的复合卵黄抗体，所述复合卵黄抗体由包括如下原料制备得到：中药提取物10-50g、腺病毒卵黄抗体400-2000ml和苯甲酸钠2g-10g。
进一步，所述复合卵黄抗体由包括如下原料制备得到：中药提取物20-40g、腺病毒卵黄抗体800-1600ml和苯甲酸钠4g-8g。
进一步，所述复合卵黄抗体由包括如下原料制备得到：中药提取物30g、腺病毒卵黄抗体1200ml和苯甲酸钠6g。
进一步，所述中药提取物由包括如下重量份数的原料制备得到：附子6-30份，黄连6-30份，黄芪8-40份，甘草3-15份，藿香4-20份，佩兰4-20份，苍术4-20份，厚朴6-30份，白豆蔻4-20份。
进一步，所述中药提取物由包括如下步骤的方法制备得到：
(1)称取中药原料附子、黄连、黄芪、甘草、藿香、佩兰、苍术、厚朴和白豆蔻，(洗净后用冷水浸泡60min，再加入原料重量15倍的纯化水)然后将附子加入纯化水中进行煎煮，(快速)加热至纯化水沸腾，沸后继续保持煎煮(2小时)，随后加入黄连、黄芪、甘草、苍术、厚朴和白豆蔻，继续煎煮(20分钟)，最后加入藿香和佩兰煎煮(10分钟)，煎煮过程中每5分钟搅拌一次；
(2)弃去所述步骤(1)中得到中药煎煮液的药渣，收集药液，于室温中冷却，离心，弃去沉淀，收集上清；
(3)将所述步骤(2)中得到的上清进行10倍浓缩，制得中药浓缩液；
(4)将所述步骤(3)中得到的中药浓缩液进行真空冷冻干燥即得到中药提取物。
进一步，所述步骤(2)中的离心条件为：4000rpm离心20分钟。
进一步，所述腺病毒卵黄抗体由包括如下步骤的方法制备得到：
(1)选择未经人工免疫的已开产且产蛋正常，经检测鸡新城疫病毒、禽流感病毒、法氏囊病毒和鸡I群腺病毒均为阴性的母鸡；
(2)用鸡新城疫病毒、禽流感病毒、法氏囊病毒和鸡I群腺病毒的四联灭活疫苗对所述步骤(1)得到的母鸡进行免疫；其中，免疫包括：首次免疫、二次免疫和强化免疫；
(其中，所述鸡新城疫病毒、禽流感病毒、法氏囊病毒和鸡I群腺病毒的四联灭活疫苗选用青岛易邦生物工程有限公司产品。)
(3)取所述步骤(2)免疫母鸡(7日后)所生产的鸡蛋，(利用自来水洗去蛋壳表面的污物后浸入体积浓度0.5％的新洁尔灭溶液进行消毒30min，取出自然晾干后用酒精棉球擦拭蛋壳进行表面消毒，去除蛋壳)无菌条件下分离得到蛋黄；
(4)将所述步骤(3)收集到的蛋黄充分搅拌，使蛋黄呈均匀膏状；
(5)将所述步骤(4)中得到的蛋黄液与蒸馏水(以1:4的体积比)充分混合均匀，利用1mol/L HCl调节pH至5.2-5.4，于4℃条件下温育(6小时)，离心后取上清液；
(6)在所述步骤(5)得到的上清液中加入正辛酸，使正辛酸在体系中的体积比为0.2％，混匀；
(7)将所述步骤(6)得到的溶液进行过滤至澄清，并利用0.45μm滤膜进行除菌处理。
进一步，所述步骤(2)中，首次免疫为每只鸡肌内注射所述四联灭活苗1ml/只；二次免疫为首次免疫14天后，每只鸡按照1ml/只的剂量肌内注射所述四联灭活苗；强化免疫为加强免疫7天后，每只鸡按照1ml/只的剂量肌内注射所述四联灭活苗。
进一步，所述步骤(5)中的离心条件为：4000rpm离心20分钟。
本发明还提供了一种用于预防治疗鸡心包积液-肝炎综合征的复合卵黄抗体的制备方法，该方法包括如下步骤：
(1)取处方量中药提取物；
(2)取处方量腺病毒卵黄抗体；
(3)取处方量苯甲酸钠；
(4)将所述步骤(1)中的中药提取物和步骤(3)中的苯甲酸钠加入到步骤(2)中的腺病毒卵黄抗体中，并充分搅拌至均匀，静置、过滤、灌封。
相对于现有技术，本发明所述的用于预防治疗鸡心包积液-肝炎综合征的复合卵黄抗体及其制备方法具有以下优势：
本发明制备的复合卵黄抗体在制备得到腺病毒卵黄抗体的基础上还添加了包括附子、黄连、黄芪、甘草、藿香、佩兰、苍术、厚朴和白豆蔻等的中药提取物。其中附子能增强心肌收缩力，加快心率，增加心输出量和心肌耗氧量，正确的煎煮方法和适量的甘草配伍，能有效减缓附子的毒性，减少损伤；黄连具有正性肌力的作用，能够兴奋心脏、增强心肌收缩力；此两味中药对于强心和修复心机损伤具有显著的效果。藿香、佩兰、苍术、厚朴、白豆蔻等中药，气味芳香，性质温燥，具有宣化湿浊、疏畅气机、健脾醒胃等作用，适用于湿浊内阻、脾为湿困、运化失常所致的病症，能够显著促进对心包积液的吸收。黄芪提取物其中的黄芪多糖可大幅度提高了机体的免疫力，防止继发感染，减少乃至杜绝抗生素的使用。因此本发明对腺病毒引起的心包积液-肝炎综合征起到一个标本兼治的作用，可快速降低死亡率，大大提高了出栏鸡的出栏质量。
具体实施方式
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下面结合实施例来详细说明本发明。
实施例1
一种用于预防治疗鸡心包积液-肝炎综合征的复合卵黄抗体，由包括如下原料制备得到：中药提取物10g、腺病毒卵黄抗体400ml和苯甲酸钠2g。
所述中药提取物由包括如下步骤的方法制备得到：
(1)称取中药原料附子15份，黄连15份，黄芪20份，甘草8份，藿香10份，佩兰10份，苍术10份，厚朴15份和白豆蔻10份，洗净后用冷水浸泡60min，再加入原料重量15倍的纯化水，然后将附子加入纯化水中进行煎煮，快速加热至纯化水沸腾，沸后继续保持煎煮2小时，随后加入黄连、黄芪、甘草、苍术、厚朴和白豆蔻，继续煎煮20分钟，最后加入藿香和佩兰煎煮10分钟，煎煮过程中每5分钟搅拌一次；
(2)弃去所述步骤(1)中得到中药煎煮液的药渣，收集药液，于室温中冷却，经4000rpm离心20分钟，弃去沉淀，收集上清；
(3)将所述步骤(2)中得到的上清进行10倍浓缩，制得中药浓缩液；
(4)将所述步骤(3)中得到的中药浓缩液进行真空冷冻干燥即得到中药提取物。
所述腺病毒卵黄抗体由包括如下步骤的方法制备得到：
(1)选择未经人工免疫的已开产且产蛋正常，经检测鸡新城疫病毒、禽流感病毒、法氏囊病毒和鸡I群腺病毒均为阴性的母鸡；
(2)用青岛易邦生物工程有限公司生产的鸡新城疫病毒、禽流感病毒、法氏囊病毒和鸡I群腺病毒的四联灭活疫苗对所述步骤(1)得到的母鸡进行免疫；其中，免疫包括：首次免疫、二次免疫和强化免疫；
首次免疫为：每只鸡肌内注射所述四联灭活苗1ml/只；
二次免疫为：首次免疫14天后，每只鸡按照1ml/只的剂量肌内注射所述四联灭活苗；
强化免疫为：加强免疫7天后，每只鸡按照1ml/只的剂量肌内注射所述四联灭活苗；
(3)取所述步骤(2)免疫母鸡7日后所生产的鸡蛋，利用自来水洗去蛋壳表面的污物后浸入体积浓度0.5％的新洁尔灭溶液进行消毒30min，取出自然晾干后用酒精棉球擦拭蛋壳进行表面消毒，去除蛋壳，无菌条件下分离得到蛋黄；
(4)将所述步骤(3)收集到的蛋黄充分搅拌，使蛋黄呈均匀膏状；
(5)将所述步骤(4)中得到的蛋黄液与蒸馏水以1:4的体积比充分混合均匀，利用1mol/L HCl调节pH至5.2-5.4，于4℃条件下温育6小时，然后4000rpm离心20分钟，离心后取上清液；
(6)在所述步骤(5)得到的上清液中加入正辛酸，使正辛酸在体系中的体积比为0.2％，混匀；
(7)将所述步骤(6)得到的溶液进行过滤至澄清，并利用0.45μm滤膜进行除菌处理。
一种用于预防治疗鸡心包积液-肝炎综合征的复合卵黄抗体的制备方法，该方法包括如下步骤：
(1)取处方量中药提取物；
(2)取处方量腺病毒卵黄抗体；
(3)取处方量苯甲酸钠；
(4)将所述步骤(1)中的中药提取物和步骤(3)中的苯甲酸钠加入到步骤(2)中的腺病毒卵黄抗体中，并充分搅拌至均匀，静置、过滤、灌封。
实施例2
一种用于预防治疗鸡心包积液-肝炎综合征的复合卵黄抗体，由包括如下原料制备得到：中药提取物20g、腺病毒卵黄抗体800ml和苯甲酸钠4g。
其中，中药提取物的制备方法、腺病毒卵黄抗体的制备方法以及该复合卵黄抗体的制备方法均与实施例1相同，在此不再赘述。
实施例3
一种用于预防治疗鸡心包积液-肝炎综合征的复合卵黄抗体，由包括如下原料制备得到：中药提取物30g、腺病毒卵黄抗体1200ml和苯甲酸钠6g。
其中，中药提取物的制备方法、腺病毒卵黄抗体的制备方法以及该复合卵黄抗体的制备方法均与实施例1相同，在此不再赘述。
将实施例1、实施例2和实施例3得到的复合卵黄抗体分别进行如下试验：
取250只25日龄发病白羽肉鸡，病料经实验室检测确实为鸡I群腺病毒血清4型导致的鸡心包积液-肝炎综合征，将该250只白羽肉鸡随机分为空白组、对照组、试验组1、试验组2和试验组3，每组50只。其中，空白组不用药物，对照组口服腺病毒卵黄抗体，试验组1口服实施例1制备的复合卵黄抗体，试验组2口服实施例2制备的复合卵黄抗体，试验组3口服实施例3制备的复合卵黄抗体，剂量均为1.5ml/只，分别观察记录各组的死亡情况以及出栏重，结果见表1。
表1白羽鸡死亡情况以及出栏重情况表
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改等同替换改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。