本发明涉及阴道炎药物制备
技术领域：
，尤其是一种阴道凝胶及其制备方法。
背景技术：
：阴道炎是妇女的常见病和多发病，包括细菌性阴道炎、霉菌性阴道炎和滴虫性阴道炎。阴道炎的临床症状主要表现为阴道分泌物增多且伴有异味、外阴瘙痒，并引起宫颈、子宫体感染及盆腔炎症性疾病。阴道干燥症或萎缩性阴道炎的主要人群是绝经后妇女，据调查统计半数左右的绝经后妇女存在阴道干涩问题。阴道黏膜由含丰富糖原的非角化复层鳞状上皮和含丰富纤维的基底膜组成。生育期时复层鳞状上皮富含糖原，阴道黏膜滋润有弹性。在绝经后由于雌激素减少，上皮萎缩，鳞状细胞层消失，只保留了营养不良且绒毛易掉的基底层和副基底层细胞，这种情况下阴道黏膜易受细菌感染和有毒代谢物渗透，而且容易形成小裂伤造成感染。在正常情况下阴道上皮具有平衡机制能够使阴道内足够的水化和润滑，保证阴道组织柔软而又弹性。在女性绝经后由于阴道分泌物减少，阴道润滑不足，不能形成生理保护层，上皮细胞易于损伤或凋亡，而引起阴道干涩等症状。现阴道炎或阴道干燥症的治疗产品分为三类：1.西药，如甲硝唑、洗必泰、咪康唑和酮康唑等实现杀菌抗菌，西药见效快但容易产生耐药性且有副作用；2.中药，如蛇床子、苦参、黄柏、白矾、甘草、冰片和地肤子等具有清热解毒、杀虫止痒功效成分，单纯使用中药见效慢不能及时缓解症状；3.器械类，分为两种，一是用臭氧或红光等理疗设备治疗，需要病人定期去医院做治疗或自行购买治疗设备成本较高，二是壳聚糖、银离子等阴道抑菌凝胶，采用生物抑菌原料，即时、方便、快捷、经济的治疗阴道炎，凝胶的使用和疗效得到广泛认可。而目前的阴道凝胶产品抑菌、润滑、保湿效果不够理想。技术实现要素：本发明的目的是为了解决上述技术的不足而提供一种能安全、有效地治疗阴道炎和缓解女性阴道干燥萎缩症状的阴道凝胶及其制备方法。为了达到上述目的，本发明所设计的一种阴道凝胶，其主要成分为：透明质酸钠、维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸、egf(即表皮细胞生长因子)、维生素c、氯化钙、戊二醇、甘油、透明汉生胶和以磷酸氢二钠-柠檬酸作为凝胶的缓冲体系。所述的主要成分的质量浓度如下：透明质酸钠：0.2-2％；维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸：0.1-1％；egf：0.001-0.005％；维生素c：0.003-0.006％；氯化钙：0.01-0.02％；戊二醇：2-10％；甘油：5-10％；透明汉生胶：1-2％。所述的维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸分子式为其中r为或-h。作为优选：所述透明质酸钠分子量为40-100万道尔顿。上述阴道凝胶的制备方法，在搅拌下将透明质酸钠、维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸、egf、维生素c和氯化钙加入到去离子水中，混合至溶解；在搅拌下再加入戊二醇、甘油和透明汉生胶混合至溶解，得到均匀体系；加离子水，搅拌均匀，最后用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲体系将混合物凝胶ph调至4.5±0.5，得到成品。所述的维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸由如下方法制得：a.ves活化：将维生素e琥珀酸酯(简称ves)溶于二甲基亚砜(简称dmso)中，加入与ves羧基等摩尔比例的二羰基咪唑(简称cdi)，ves的羧基被cdi活化，生成ves-cdi中间产物；b.ves-ha生成：分子量范围为5000da-20kda的小分子透明质酸钠溶于无水甲酰胺中，加入4-二甲氨基吡啶(简称dmap)作为催化剂，常温下搅拌溶解，缓慢滴加(a)所得ves-cdi，常温下搅拌20h-32h，透明质酸钠的羟基与ves羧基发生酯化反应得到维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸(简称ves-ha)聚合物；c.透析、冻干：加入反应液体积2-3倍的丙酮进行沉淀，抽滤，得沉淀，加水复溶沉淀，纯水透析2d-3d,对透析液进行冷冻干燥，得到维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸(简称ves-ha)冻干粉末。透明质酸(简称ha)，又名玻璃酸或玻尿酸，1934年由美国哥伦比亚大学眼科教授karlmeyer和johnpalmer从牛眼玻璃体中提取分离得到的一种大分子多糖。ha在细胞内的内质网上由透明质酸合成酶所合成，然后分泌到细胞外，成为细胞外基质成分发挥作用。ha是一种线性糖胺聚糖，由重复的二糖单元葡萄糖醛酸和n-乙酰葡萄糖胺组成，葡萄糖醛酸和n-乙酰葡萄糖胺以1-4糖苷键分子内连接，重复的二糖单元以β(1-3)连接。在正常生理条件下，ha分子内重复的二糖单元有2000-25000个，分子量约为106-107da，ha分子量较大，且分子内部具有大量的无规则卷曲结构，所以ha分子具有优异的粘弹性能。ha具有抗感染和抗炎作用，具体的作用方式为：1.ha具有高粘弹性，通过调节降低细胞异常的高通透性，从而阻止细菌等病原微生物入侵；2.ha可诱导成纤维细胞和角质细胞等分泌一系列细胞因子，作为前炎症因子而在免疫应答中发挥作用；3.ha影响中性粒细胞和巨噬细胞功能，对其迁移、黏附、吞噬和杀伤入侵病原物方面均有调控作用；4.ha可作为金属蛋白酶等炎症相关分子的清除剂，从而抑制炎症反应发展。由于ha分子量大且有好的粘弹性能，应用后会补充或增加组织的润滑性，另外ha分子表面基团有很强的亲水性，可吸收保留水分，应用后能发挥保湿作用。ha分子具有理想的生理和生物学特性，例如生物相容性好、良好的生物降解性和非免疫原型。在本阴道凝胶中加入两种不同分子量的ha：40kda-100kda的大分子ha，发挥保湿润滑的作用；5000da-20kda的小分子ha，具有修复小损伤，恢复阴道生理保护层的作用，且大小分子ha有不同的消炎抑菌作用。ha在脊椎动物体内代谢速度非常快，人体中每天约有30％的ha会被代谢替换，当然体内不同部位ha半衰期差异较大，人体皮肤中ha半衰期为1天左右，关节内ha半衰期可达到20天。现在透明质酸多采用微生物发酵的方法生产，在生产过程中会使用钠盐来增加离子强度或调节酸碱度，因此大部分ha成品是以钠盐形式存在，即透明质酸钠，所以大分子ha采用透明质酸钠形式添加。由于ha在皮肤组织中半衰期短、非常不稳定，特别是小分子ha极容易被代谢掉，故考虑用维生素e琥珀酸酯对小分子ha进行分子修饰提高其稳定性。维生素e和其衍生物除具有抗氧化作用外，还具有抗炎功效，其抗炎作用机制：1.抑制tnf-α等炎性细胞因子反应；2.调节单核细胞和巨噬细胞反应；3.通过阻止内皮细胞表面表达黏附分子影响单核细胞黏附能力。维生素e琥珀酸酯(ves)是维生素e的衍生物，ves相较于维生素e化学稳定性明显提高，应用范围更广。ves的羧基可以被活化剂所活化，然后在催化剂的作用下ves的羧基可以与ha分子的羟基缩合发生酯化反应，形成ves修饰的ha分子，由于ves的引入一方面提高了小分子ha的稳定性，另一方也增加了阴道凝胶的抗炎特性和抗氧化性能。ves修饰的ha(ves-ha)是一种两亲性透明质酸衍生物，具有亲水性，疏水端的存在能以物理包埋的方式增溶体系中的疏水物质，避免有机溶剂的使用。ves-ha在提高小分子ha稳定性的同时集合了ves和ha的双重优势，抗炎效果倍增，能有效的对抗各种不同类型阴道炎症。通过酯化反应生成的ves-ha分子结构较为简单，具有优良的生物相容性、稳定性和生物降解性，用ves修饰ha是一种有效、经济、简单、易产业化的方法。本发明所得到的一种阴道凝胶及其制备方法，有抗炎活性，可提高阴道湿润度，用于治疗阴道炎症、缓解阴道干燥症状或作为人体润滑剂，同时具有促进阴道黏膜鳞状上皮细胞层修复的作用，可改善阴道黏膜层变薄和修复阴道内小的损伤，使阴道黏膜恢复弹性和柔软，适用于阴道炎和阴道干燥症人群。具体实施方式下面通过实施例对本发明作进一步的描述。实施例1：本实施例描述的一种阴道凝胶及其制备方法，包括以下质量浓度的各组分：1.大分子透明质酸钠：0.2％2.ves-ha：0.5％3.egf：0.001％4.维生素c：0.003％5.氯化钙：0.01％6.戊二醇：2％7.甘油：10％8.透明汉生胶：1％所述大分子透明质酸钠分子量在40-100万道尔顿之间。制备时在搅拌下将透明质酸钠、维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸、egf、维生素c和氯化钙加入到总水量约98％的去离子水中，混合至溶解；在搅拌下再加入戊二醇、甘油和透明汉生胶混合至溶解，得到均匀体系；加离子水，搅拌均匀，最后用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲体系将混合物凝胶ph调至4.5±0.5，得到成品。所述的维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸由如下方法制得：a.ves活化：将维生素e琥珀酸酯(ves)溶于二甲基亚砜(dmso)中，加入与ves羧基等摩尔比例的二羰基咪唑(cdi)，ves的羧基被cdi活化，生成ves-cdi中间产物；b.ves-ha生成：小分子透明质酸钠(分子量范围5000da-20kda)溶于无水甲酰胺中，加入4-二甲氨基吡啶(dmap)作为催化剂，常温下搅拌溶解，缓慢滴加(a)所得ves-cdi，常温下搅拌24h，透明质酸钠的羟基与ves羧基发生酯化反应得到维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸(ves-ha)聚合物；c.透析、冻干：加入反应液体积2-3倍的丙酮进行沉淀，抽滤，得沉淀，加水复溶沉淀，纯水透析2d,对透析液进行冷冻干燥，得到维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸(ves-ha)冻干粉末。得到的维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸分子式为其中r为或-h。抗炎作用评估：根据本发明阴道凝胶针对的细菌性阴道炎、霉菌性阴道炎和滴虫性阴道炎，选择白色念珠菌和大肠杆菌为实验菌株。样品液制备：将本发明阴道凝胶和水按照1:1、1:2、1:4和1:8稀释配置成4个浓度备用。方法：制备两种培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基和胰酪大豆胨琼脂培养基各25ml，在层流罩下分别倒入直径15cm的培养皿，待凝固。分别取0.4ml白色念珠菌和大肠杆菌混悬液，白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基，大肠杆菌接种于胰酪大豆胨琼脂培养基。涂布菌液待干燥后，在层流罩下用灭菌刀片将平皿分成大小相等的4部分，用无菌器具分装入不同培养皿。将高压灭菌过的滤纸小片浸入待测样品，后用灭菌镊子分别夹起放入分好平皿中，盖上平皿盖子，bod培养箱32℃下培养40h，然后分别测定抑菌圈大小。结果：本发明阴道凝胶对白色念珠菌和大肠杆菌抑菌效果见表1表1.阴道凝胶的抑菌效果菌株1:1稀释样品液1:2稀释样品液1:4稀释样品液1:8稀释样品液白色念珠菌43.0mm40.5mm32.6mm25.3mm大肠杆菌42.7mm41.8mm40.2mm30.8mm结论：从表1可以看出本发明阴道凝胶对白色念珠菌和大肠杆菌有明显抑菌效果。混合物凝胶的持久保湿作用评估：三组凝胶样品：第一组普通阴道凝胶，第二组本实施例制得的凝胶。方法：取2组样品分别称重并记录样品初始重量，置于湿度35％、温度28℃的恒温培养箱中，分别在放置24h、48h和72h时称量样品失水重量，并按照如下公式计算失水率：失水率＝(样品初始重量-样品失水重量)/样品初始重量*100％结果：样品的失水率检测见下表2表2.不同样品的失水率结论：本实施例的阴道凝胶的长期锁水能力高。本发明的主要成分的质量浓度可在如下范围：透明质酸钠：0.2-2％；维生素e琥珀酸酯修饰的透明质酸：0.1-1％；egf：0.001-0.005％；维生素c：0.003-0.006％；氯化钙：0.01-0.02％；戊二醇：2-10％；甘油：5-10％；透明汉生胶：1-2％。当前第1页1 2 3