本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种缓解或改善盆腔炎症的益生菌组合物及其制备方法。
背景技术：
盆腔炎性疾病(pelvic inflammatory disease，PID)是由女性上生殖道炎症引起的一组疾病，包括子宫内膜炎、输卵管炎、输卵管卵巢脓肿和盆腔腹膜炎。炎症可局限于一个部位，也可以同时累及几个部位，以输卵管炎、输卵管卵巢炎最为常见。
盆腔炎是危害妇女健康的常见疾病，阴道的微生态失调(dyshiosis)致阴道固有细菌上行而致的内源性机会感染是盆腔炎的主要原因。生殖道内主要的常驻菌有乳杆菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、棒状杆菌、粪链球菌、支原体、白色念珠菌、消化球菌、类杆菌等。其中乳杆菌是阴道正常菌群中最重要、数量最多的常驻菌，占95％以上，是正常的优势菌。益生菌不仅与胃肠道健康息息相关，某些特定的益生菌菌株还有利于女性泌尿生殖系统健康，可预防和治疗女性泌尿生殖系统感染如细菌性阴道炎、盆腔炎以及其他相关并发症。健康的盆腔内液体很少，炎症病变时盆腔内液体明显增加，绝大多数盆腔炎系由阴道内的细菌沿黏膜上行感染盆腔器官所致，正常阴道内存在大量厌氧菌，一旦环境改变或条件有利，如局部供血不足；存在损伤或坏死组织；存在异物如子宫内避孕器；外源性微生物生长繁殖造成组织破坏，阴道内的细菌即可沿黏膜上行宫腔、输卵管等部位，如同时伴有需氧菌存在，更给厌氧菌的生长繁殖提供了良好的厌氧条件，引起炎症发生，炎症反应的剧烈程度可以由一些细胞因子的表达量高低反映出来。
细胞因子是由免疫活性细胞等合成和分泌的一类介导炎症和免疫反应的多肽类蛋白，由淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、成纤维细胞等产生，在宿主抵御组织损伤过程中起重要作用，涉及机体内许多生理和病理的复杂过程，能活化淋巴细胞，调节淋巴细胞及其他细胞的生长和分化，增强免疫应答及炎症细胞的代谢和功能，与临床许多重要疾病的发生和转归密切相关。IL-2是具有多种生物学活性的细胞因子，主要由辅助性T细胞和巨噬细胞分泌，具有调节免疫、增加机体抗感染能力的作用。作为一种重要的细胞因子，IL-2与T细胞、B细胞、单核细胞表面的IL-2受体结合，能引起T细胞增殖，促进细胞毒T细胞杀伤作用，增强自然杀伤细胞活性，促进B细胞分泌IgG等免疫球蛋白，因此在免疫调节方面具有重要意义。IL-2水平的高低从一个侧面反映了宿主T淋巴细胞的活化程度以及宿主免疫系统清除自身衰老变性细胞、自体变性和损伤细胞的能力大小。IL-6是一种重要的炎性细胞因子，是炎症反应的主要标志之一，有强烈的致炎活性，炎症时含量增多，能影响B细胞的增殖分化，在急性排斥和炎症反应中起着重要作用。它可直接作用于血管内皮细胞，使其通透性增加，导致大量炎性渗出，可与肿瘤坏死因子α等协同，构成炎症介质网络。过量IL-6的产生会导致剧烈的免疫反应，对机体造成损害。研究表明，高浓度的IL-6可明显抑制T淋巴细胞IL-2和IL-2R的合成。TNF-α作为活化单核—巨噬细胞产生的一种重要细胞因子，在感染性疾病和炎症方面，能刺激血管内皮细胞表达黏附分子、刺激单核—巨噬细胞和其他细胞分泌趋化性细胞因子，引起白细胞在炎症部位聚集，促进炎症反应，适量TNF-α增进机体免疫功能，调节多种免疫细胞共同杀灭和消除入侵的致病原，过度反应的过量TNF-α，则产生剧烈免疫反应，呈现毒性作用，对机体造成损害。
目前对于盆腔炎性疾病的治疗方法主要有：抗生素治疗、中药熏洗疗法和微生态疗法等，其中，抗生素是目前临床上治疗感染性疾病中应用最为广泛的一类药。然而，抗生素在抑制致病菌的同时破坏了阴道正常菌群，使微生物优势发生改变，出现大量具有耐药性的病原微生物，一旦再次感染，将严重影响抗生素的疗效。
中药熏洗疗法通过局部刺激，使药力直接作用于患处，消除症状，解决病灶。后通过皮肤、孔窍、腧穴对药物之气味的吸收、经络调节、脏腑输布及药物刺激所引起的整体药理效应而达到整体调节，使之发挥作用，促进阴阳保持相对平衡。现代医家治疗本病多采用清热除湿化瘀之法，但有些患者素体虚寒，加之长期过用苦寒之品或滥用抗生素等损伤阳气，致阴寒内盛、寒凝血瘀。
微生态疗法：其本质是以扶植正常菌群，拮抗致病或条件致病菌，调整和恢复微生态平衡为目的的一种预防和治疗方法。微生态调节剂是在微生态学理论指导下，纠正微生态的失衡，保持微生态平衡，提高机体健康水平或增进健康状态的益生菌(微生物)及其代谢产物和生长促进物质的制品。
随着对生殖道感染RTI(reproductive tract infection)研究的深入，人们已逐渐认识到维持阴道正常菌群的生态平衡，保持阴道有益菌—乳杆菌的主导地位是防治生殖道感染性疾病的有效方法。当前，随着抗生素的毒副作用以及抗生素的滥用导致大量耐药菌群和二重感染的出现，使得抗生素在治疗感染性疾病方面的霸主地位越来越受到挑战，微生态疗法正引起医药工作者的重视。因此，如果微生态调节剂能广泛应用于临床，必将为防治妇女生殖道感染开辟一条新的途径，也将为广大妇女提供安全有效的保健良药。但目前尚未有关于益生菌具有缓解或改善盆腔炎方面作用的报道。
技术实现要素：
针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种缓解或改善盆腔炎症的益生菌组合物。本发明的益生菌组合物能够增强机体免疫力，并能促进生殖道内生理性正常益生菌群的发育，通过生物拮抗，间接地控制并消灭病原菌，以调节生殖道内的微生态平衡，从而实现缓解或改善盆腔炎症。
本发明的另一目的在于提供缓解或改善盆腔炎症的益生菌中药制剂，通过将益生菌和中药联合应用，协同作用，达到边治边调的目的，显著增强了对盆腔炎的治疗疗效。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一方面，提供一种缓解或改善盆腔炎症的益生菌组合物，由鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌组成；
所述益生菌组合物中，益生菌的总数量为8.0×109-4.0×1010cfu/g。
优选的，所述益生菌组合物中，鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌的质量比为2:1:1。
进一步优选的，所述嗜酸乳杆菌为保藏编号CCTCC NO:M2015129的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)BLCC2-0024；所述植物乳杆菌为保藏编号CCTCC M2010150的植物乳杆菌LP。
本发明还提供上述益生菌组合物的制备方法，步骤如下：
(1)分别将鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌经培养基活化后，接种于发酵培养液中，37℃恒温静置培养，使菌体浓度达到对数生长期4.0×109-8.0×109cfu/ml；
(2)将发酵液分别离心，弃上清，得到鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌的菌泥；
(3)将菌泥与冻干保护剂混合均匀，冷冻干燥，即得。
本发明的第二方面，提供一种缓解或改善盆腔炎症的益生菌中药制剂，由上述益生菌组合物和具有治疗盆腔炎功效的药食同源中药提取物协同组合而成。
所述药食同源中药提取物由以下重量份的原料药制成：
当归2-3份、桃仁2-5份、生山楂6-12份、茯苓10-15份、肉桂2-3份、甘草3-9份、玫瑰花3-10份、蒲公英6-10份、鱼腥草15-30份。
优选的，所述药食同源中药提取物由以下重量份的原料药制成：
当归2份、桃仁3份、生山楂8份、茯苓10份、肉桂2份、甘草6份、玫瑰花6份、蒲公英6份、鱼腥草15份。
本发明还提供上述药食同源中药提取物的制备方法，步骤如下：
将当归、桃仁、生山楂、茯苓、肉桂、甘草、玫瑰花、蒲公英、鱼腥草置于8-10倍水中浸泡30-60min，煎煮，水开后继续煎煮20-40min，过滤得到第一滤液；药渣用6-8倍水进行二次煎煮，水开后继续煎煮20-40min，过滤得到第二滤液与第一滤液混合均匀，浓缩至固形物含量为30％以上，喷雾干燥，粉碎，过筛，即得药食同源中药提取物；
优选的，上述益生菌中药制剂中，所述益生菌组合物和药食同源中药提取物的重量比为(2-10)：(20-30)。
上述益生菌组合物和/或益生菌中药制剂在制备缓解或改善盆腔炎症的产品中的用途也是本发明的保护范围。
上述用途中，所述产品为药物、食品或保健品。
本发明的第三方面，提供一种缓解或改善盆腔炎症的产品，由以下质量百分比的组分组成：
益生菌组合物2-10％、药食同源中药提取物20-30％、益生元50-60％、辅料填充物5-10％。
所述益生元选自低聚异麦芽糖、低聚果糖和低聚木糖中的一种或多种；优选的，所述益生元由低聚异麦芽糖、低聚果糖和低聚木糖按质量比5:3:1组成。
所述辅料填充物选自麦芽糊精、柠檬酸、果粉和糖醇中的一种或多种。
本发明还提供上述缓解或改善盆腔炎症的产品的制备方法，步骤如下：
(1)按上述方法制备益生菌组合物和药食同源中药提取物；
(2)将益生菌组合物、药食同源中药提取物、益生元和辅料填充物混合均匀，即得。
本发明的有益效果：
(1)本发明所提供的具有缓解或改善盆腔炎症功能的益生菌组合物能够增强机体免疫力，并能促进生殖道内生理性正常益生菌群的发育，通过生物拮抗，间接地控制并消灭病原菌，以调节生殖道内的微生态平衡，从而实现缓解或改善盆腔炎症。
(2)本发明所提供的益生菌中药制剂，是由上述的益生菌组合物和具有治疗盆腔炎功效的药食同源中药协同组合而成，其中，药食同源中药的提取物作为一种微生态调节剂从扶正固本及祛邪两方面发挥作用，既促进生殖道内乳杆菌的恢复，提高机体免疫力，又杀灭和抑制致病微生物来调节生殖道失调菌群；益生菌能够将中药提取物更好的分解成小分子物质，有利于肠道的吸收，中药和益生菌合理配伍，经试验验证，可以达到边治边调的目的，起到增强效果的作用，实现了益生菌和中药的完美结合。
(3)本发明提供的缓解或改善盆腔炎症的产品，是由上述的益生菌组合物、药食同源中药、益生元和辅料填充物制备而成，在益生菌、中药协同作用的基础上，又增加了益生元组分，益生元作为一种膳食补充剂，通过选择性的刺激一种或少数种菌落中细菌的生长与活性，而对寄主产生有益的影响。本发明中所添加的益生元组分能够与益生菌组合物产生进一步的协同作用，从而更有利于对盆腔炎症状的改善和缓解作用。
(4)本发明的缓解或改善盆腔炎症的产品，制备工艺简单，中药中的各个有效成分损失较少，安全性高，保证了产品批次之间的稳定性。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
正如背景技术所介绍的，现有技术中缺少能够缓解或改善盆腔炎症的微生态调节剂，为了解决如上的技术问题，本申请提出了一种缓解或改善盆腔炎症的益生菌组合物，该益生菌组合物能够增强机体免疫力，并能促进生殖道内生理性正常益生菌群的发育，通过生物拮抗，间接地控制并消灭病原菌，以调节生殖道内的微生态平衡，从而实现缓解或改善盆腔炎症。
在本申请的一种实施方案中，提供了一种缓解或改善盆腔炎症的益生菌组合物，由鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌组成；所述益生菌组合物中，益生菌的总数量为8.0×109-4.0×1010cfu/g。
作为一种优选的实施方式，所述益生菌组合物中，鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌的质量比为2:1:1。
由于不同来源的同种菌株的性能也会存在较大差异，因此，本申请在试验过程中还对益生菌组合物中的益生菌的种类、同一种但不同分离来源的益生菌及其组合进行了调整，结果发现，相对于其他种类或来源的益生菌组合，以保藏编号为CCTCC NO:M2015129的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)BLCC2-0024、保藏编号为CCTCC M2010150的植物乳杆菌LP和鼠李糖乳杆菌进行复配的效果最好。
所述保藏编号为CCTCC NO:M2015129的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)BLCC2-0024已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，并记载专利“一种降血糖益生菌制剂及其制备方法”(CN105039217A)中，构成现有技术，故不再提供保藏证明。该菌株目前所涉及的功能主要有降血糖和缓解老年人阴虚型便秘，尚未见其用于治疗盆腔炎症的报道。
所述保藏编号为CCTCC M2010150的植物乳杆菌LP已于2010年6月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，并记载专利“一种可用于生物防腐保鲜的乳酸菌及其应用”(CN101914475A)中，构成现有技术，故不再提供保藏证明。该菌株目前所涉及的功能主要为用于水果的防腐保鲜，尚未见其用于治疗盆腔炎症的报道。
所述鼠李糖乳杆菌为常规的市售产品。
本申请所选择的上述三株菌能够促进生殖道内生理性正常益生菌群的发育，通过生物拮抗，间接地控制并消灭病原菌，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等，以调节生殖道内的微生态平衡；同时还能够增强机体的免疫能力和调节肠道系统，发挥保健强身功效，从而实现缓解或改善盆腔炎症。
在本申请的另一种实施方案中，提供了一种缓解或改善盆腔炎症的益生菌中药制剂，由上述益生菌组合物和具有治疗盆腔炎功效的药食同源中药提取物协同组合而成。
所述药食同源中药提取物由以下重量份的原料药制成：
当归2-3份、桃仁2-5份、生山楂6-12份、茯苓10-15份、肉桂2-3份、甘草3-9份、玫瑰花3-10份、蒲公英6-10份、鱼腥草15-30份。
所述药食同源中药提取物的制备方法如下：
将当归、桃仁、生山楂、茯苓、肉桂、甘草、玫瑰花、蒲公英、鱼腥草置于8-10倍水中浸泡30-60min，煎煮，水开后继续煎煮20-40min，过滤得到第一滤液；药渣用6-8倍水进行二次煎煮，水开后继续煎煮20-40min，过滤得到第二滤液与第一滤液混合均匀，浓缩至固形物含量为30％以上，喷雾干燥，粉碎，过筛，即得药食同源中药提取物。
作为一种优选的实施方式，上述益生菌中药制剂中，所述益生菌组合物和药食同源中药提取物的重量比为(2-10)：(20-30)。
中药本身含有糖、脂肪、氨基酸及微量元素，能为机体提供必要的营养物质。动物实验及临床观察证明，部分中草药具有扶植正常菌群生长、调整菌群失调、提高定植抗力的作用，是一种理想的微生态调节剂。中药可能从扶正固本及祛邪两方面发挥作用，既促进阴道内乳杆菌的恢复，提高机体免疫力，又杀灭和抑制致病微生物来调节阴道失调菌群，这可能是其疗效较稳定，不易复发的原因之一。中药制剂作为微生态调节剂与活菌制剂联合应用，达到边治边调的目的，可起到增强效果的作用。
本申请的药食同源中药提取物的组方中：
当归具有补血和血，调经止痛，润燥滑肠、抗癌、抗老防老、免疫之功效，可缓解盆腔炎腹痛之症；桃仁具有活血祛瘀，润肠通便，止咳平喘的功效；山楂具有消食化滞、活血化痰的良药；茯苓具有利水渗湿，健脾，宁心的功效；肉桂具有补元阳，暖脾胃，除积冷，通血脉的功效；甘草功能主治清热解毒、脘腹等症状；玫瑰花性味甘、微苦，温。归肝、脾经。具有行气解郁，和血，止痛之功效；蒲公英具有清热解毒之功效，是妇科疾病的良药；鱼腥草味辛，性寒凉，归肺经。能清热解毒、消肿疗疮、利尿除湿、清热止痢、健胃消食之功效；全方共奏养血化瘀，活血解毒，疏经通络，理气健脾，增强体质的功效，从根本上缓解盆腔炎症状。
而益生菌组合物又能够将中药提取物更好的分解成小分子物质，有利于肠道的吸收，从而实现了益生菌与中药的完美结合。本申请的益生菌中药制剂中，药食同源的中药组分和益生菌组分配伍合理，经试验验证，可以达到边治边调的目的，起到增强效果的作用。
经分析，本发明的益生菌中药制剂缓解或改善盆腔炎症的作用可能通过提高机体免疫能力，调节炎症机体血清细胞因子表达，以及调节盆腔组织局部炎性因子的表达，从而抑制TNF-α和IL-6介导的趋化反应，并通过升高IL-2表达抑制炎症反应，减轻机体组织炎症损伤，从而达到缓解或改善盆腔炎症的效果。
在本申请的再一种实施方案中，提供了一种缓解或改善盆腔炎症的产品，由以下质量百分比的组分组成：
益生菌组合物2-10％、药食同源中药提取物20-30％、益生元50-60％、辅料填充物5-10％。
所述益生元选自低聚异麦芽糖、低聚果糖和低聚木糖中的一种或多种；优选的，所述益生元由低聚异麦芽糖、低聚果糖和低聚木糖按质量比5:3:1组成。
所述辅料填充物选自麦芽糊精、柠檬酸、果粉和糖醇中的一种或多种。
本发明还提供上述缓解或改善盆腔炎症的产品的制备方法，步骤如下：
(1)按上述方法制备益生菌组合物和药食同源中药提取物；
(2)将益生菌组合物、药食同源中药提取物、益生元和辅料填充物混合均匀，即得。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。
本发明实施例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。
实施例1：益生菌的冻干粉的制备
1)分别将三株乳杆菌(保藏编号为CCTCC NO:M2015129的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)BLCC2-0024、保藏编号为CCTCC M2010150的植物乳杆菌LP和鼠李糖乳杆菌)经培养基活化后，接种于发酵培养液中，37℃恒温静置培养，使菌体浓度达到对数生长期4.0×109-8.0×109cfu/ml；
乳杆菌种子液的制备：取出菌种保藏管，用乳酸菌斜面固体培养基分别划线进行复苏，37度培养24-36h。挑取斜面培养基上的菌落结晶紫染色镜检，为短杆菌或长杆菌。挑取菌落接种100mL乳酸菌培养基中，在37度培养箱中培养24h。种子采用2-5％的接种量，接种至3L大三角瓶中，37度培养24-36h，检测其菌液浓度，菌含量超过20亿/毫升，即可作为乳杆菌液体菌种接种。其中所述的MRS培养基：葡萄糖2.0％、柠檬酸铵0.2％、乙酸钠0.5％、磷酸氢二钾0.5％、硫酸锰0.02％、硫酸镁0.05％、蛋白胨1.0％、牛肉膏1.0％、酵母膏0.5％、吐温80 0.1％，调节pH至6.0；固体培养基加1.5％琼脂粉。培养基灭菌条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌20min。
2)将步骤1)中各种发酵液分别离心，弃上清，得到菌泥；
3)配制冻干保护剂；其中冻干保护剂的配方组成为：脱脂奶粉25g、蔗糖8g、食用甘油1g、蒸馏水100mL。
4)将菌泥和冻干保护剂混合均匀，将混合物预冻，再真空冷冻干燥，制成具有包埋层的活性益生菌的冻干粉。
实施例2：药食同源中药提取物的制备
1)按照优选重量份：当归2g、桃仁3g、生山楂8g、茯苓10g、肉桂2g、甘草6g、玫瑰花6g、蒲公英6g、鱼腥草15g；
2)将混合物置于10倍水中浸泡40min，煎煮，水开后继续煎煮30min，过滤得到第一滤液；药渣用8倍水进行二次煎煮，水开后继续煎煮30min，过滤得到第二滤液与第一滤液混合均匀，通过真空减压旋转蒸发仪浓缩中药液，至固形物含量为30％以上，进喷雾干燥器，进风温度控制140℃，出风温度90℃，雾化器转速45转/分钟，进料速度为5ml/分钟，得喷雾干燥粉，粉碎，过100目以上筛子，即得药食同源中药提取物。
实施例3：具有缓解或改善盆腔炎症的益生菌组合物的制备
将实施例1制备的益生菌冻干粉，即鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌3种乳酸菌按照质量比为2:1:1的比例进行科学复配，混合均匀，即得具有缓解或改善盆腔炎症的益生菌组合物。
实施例4：具有缓解或改善盆腔炎症的益生菌中药制剂的制备
将实施例3制备的益生菌组合物和实施例2制备的药食同源中药提取物分别过100目以上筛子，并称量备用，将益生菌组合物和药食同源中药提取物按照质量比为8：30进行配料。将以上各物质在混合机中充分混匀至色泽均匀，无色差，即得到具有缓解或改善盆腔炎症功能的益生菌中药制剂。
实施例5：具有缓解或改善盆腔炎症的产品的制备
将实施例1制备的益生菌的冻干粉和实施例2制备的药食同源中药提取物分别过100目以上筛子，并称量备用；按质量百分比为益生菌干粉8％，中药提取物30％，益生元55％，辅料填充物7％的比例进行配料。将以上各物质在混合机中充分混匀至色泽均匀，无色差，即得到具有缓解或改善盆腔炎症功能的产品。
所述益生元由低聚异麦芽糖、低聚果糖和低聚木糖按质量比5:3:1组成。
所述辅料填充物为柠檬酸。
实施例6：对盆腔炎模型小鼠盆腔炎症状的改善作用
1)盆腔炎小鼠动物模型的建立
动物准备：选用无生殖道疾病的昆明白小鼠，构建小鼠盆腔炎模型。
动物开腹：按照小鼠体重的1％腹腔注射4％水合氯醛，全身麻醉，数分钟后将小鼠置于固定台上，减去腹部毛，75％乙醇消毒皮肤，取灭菌的剪刀镊子，剪开小鼠下腹部皮肤以及肌肉层，约1cm的切口，暴露腹腔。
子宫损伤：暴露出子宫，取无菌针头刺伤子宫一侧子宫角中间位置，约5-6针，完毕后分层关腹，消毒腹部术区。
2)具有缓解或改善盆腔炎症的益生菌组合物对盆腔炎模型小鼠的各内脏指标的影响
选用以上造模的小鼠，于7d后随机分为空白对照组(不做任何处理)、假手术组(只做开腹手术，不处理子宫)、模型组、益生菌组(实施例3制备)(5.0×108cfu/d)、益生菌中药组(实施例4制备)(0.025g/d)、产品组(实施例5制备)(0.03g/d)、市售产品组(0.037g/d)，每组10只；除了空白对照、假手术组和模型组给予等容量的纯水以外，其余均给予相应的受试样品，连续灌胃21d。
停药次日，小鼠称重，取血清并处死，解剖后分别取肝脏、胸腺、子宫称重，且子宫用4％中性甲醛固定液固定，石蜡包埋，常规切片。HE染色，光镜下观察子宫病理形态学变化。
表1：对小鼠内脏指数的益生功能的影响(x±s，n＝10)
注：a，b，c表示差异显著(0.01<P<0.05)。
由表1可知，子宫指数可以看出模型组较空白对照组有明显的肿胀，肿胀程度提高23.6％，说明造模是成功的；受试样品中益生菌中药组、产品组和市售产品组较模型组子宫肿胀程度均具有明显的改善，肿胀程度分别降低12.1％、18.0％和17.5％，说明益生菌和中药组合应用效果较益生菌效果有明显的改善，且实施例5制备的产品效果更好，说明本发明制备的产品对盆腔炎的症状具有一定的改善作用；胸腺指数可以看出模型组较假手术组具有差异显著性，但是与其他各组没有差异显著性，说明模型组的炎症反应在一定程度上影响了胸腺指数，使其较空白对照组增大；肝脏指数可以看出模型组较受试样品组有差异显著性，且受试组肝脏指数降低，说明本发明的益生菌组合物、益生菌中药制剂和产品对肝脏没有损害或毒害作用，是安全的。
3)具有缓解或改善盆腔炎症的益生菌组合物对盆腔炎模型小鼠的子宫病理变化的影响
子宫病理观察指标及积分标准为：(1)宫腔粘连闭锁或扩张：“—”无病变记0分；“+”＜1/3病变记1分；“++”1/3—2/3病变记2分；“+++”2/3以上病变记3分。(2)腔壁结构病变：“—”各层结构正常记0分；“+”黏膜固有层腺体结构消失记1分；“++”肌层与粘膜层分界不清记2分；“+++”分层结构不清记3分。(3)上皮细胞变性坏死：“—”单层柱状上皮记0分；“+”上皮细胞扁平或脱落＜1/3记1分；“++”上皮细胞扁平或脱落1/3—2/3病变记2分；“+++”全层上皮细胞变性坏死记3分。(4)慢性炎细胞浸润：“—”无慢性炎细胞浸润记0分；“+”小数散在或灶性且仅在黏膜固有层内记1分；“++”散在或灶性但深入肌层记2分；“+++”多数散在或层状浸润并累及全层记3分。(5)内膜充血水肿：“—”无内膜充血水肿记0分；“+”固有层轻微充血水肿记1分；“++”明显充血水肿记2分；“+++”全层充血水肿记3分。
表2：对机械损伤所致的小鼠盆腔炎模型子宫病理变化(评分结果)的影响
由表2可知模型成功率可高达90％以上，只给予纯水的模型组子宫的病变程度严重；益生菌组合物、益生菌中药制剂、实施例5制备的产品和市售产品均能明显改善子宫的病变程度，实施例5制备的产品效果最好，可以和以市售产品相媲美，使其病变程度降低65.5％。
4)具有缓解或改善盆腔炎症的益生菌组合物对盆腔炎模型小鼠血清指标细胞因子的影响表3：对机械损伤所致的小鼠盆腔炎模型血清指标细胞因子的影响(x±s，n＝10)
注：a，b，c表示差异显著(0.01<P<0.05)。
由表3可知，IL-2模型组较空白对照组含量降低6.20％；IL-6和TNF-α模型组较空白对照组含量分别提高9.1％和11.2％，且TNF-α的含量两组之间具有差异显著性，说明造模成功。给予受试样品后，IL-2的含量均升高，益生菌组、益生菌中药组、实施例5制备的产品相对于模型组依次提高4.73％、20.6％、26.2％，与市售产品组比较虽然没有差异显著性，但是比市售产品组效果好，；IL-6的含量益生菌中药组和产品组较其他组均具有差异显著性，两组较模型组含量分别降低15.6％和25.7％，并且产品组与市售产品组相比，含量显著降低21.8％，说明实施例5制备的产品效果优于市售产品，对盆腔炎症具有明显改善作用；TNF-α的含量各组均有所降低，实施例5制备的产品组效果最明显，与其他各组相比具有差异显著性，相对于模型组含量降低23.2％；以上数据说明本发明的益生菌组合物对盆腔炎症有改善作用，将益生菌、中药以及益生元配合使用后，具有显著的协同作用，并且在一定程度上效果优于市售产品，表明本发明的益生菌组合物、益生菌中药制剂及产品对血清中细胞因子的含量有积极的影响，能减弱盆腔炎引起的炎症反应，同时增强机体的免疫反应，说明本发明的益生菌组合物、益生菌中药制剂及产品对缓解改善盆腔炎症状是有效果的。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。