一种化妆品的制作方法

本发明涉及一种化妆品，具体涉及一种用于祛除日晒斑的化妆品。
背景技术：
：日晒斑，主要以紫外线、毒素累积、细胞遭受刺激等因素造成。日晒斑的形状呈现椭圆形突起或者平滑，颜色一深棕色或淡褐色为主。容易出现的位置有前臀外侧、手背、小腿前侧及脸部，出现日晒斑初期会感觉疼痛、发痒、脱皮、最后形成色斑。辨别脸部日晒斑主要看是否出现在鼻梁和面颊外侧，以颗粒点状棕褐色为主的斑点。现有技术中针对日晒斑的保养的化妆品有很多种，比如，CN103655387A公开了一种防治日晒疮植物精华面膜，具有如下的配方(组分及其重量百分比％):当归尾6.0-12.0；银丹草4.0-10.0；滑石粉10.0-15.0；芦荟6.0-15.0；天花粉3.0-6.0；薏苡仁9.0-30.0；冰片3.0-10.0；佩兰6.0-12.0；蜂蜜3.0-10.0。该化妆品精选合理配伍的中草药成份，经特殊工艺配置而成。但是该面膜中添加了大量的中草药成分，结果复杂，制备不容易，并且成本也较为高昂，在经济性上有待于进一步提高。CN104306861A中公开了一种日晒斑的药物，包括双花4-10份、连翘2-5份、罗汉果10-25份、维生素B63-8份、党参5-11份、益母草6-11份、萝卜皮5-10份、西瓜翠衣5-10份、仙人掌6-8份、薄荷5-6份、砂仁5-12份、麸子8-12份、钙片2-5份、红酒12-15和白扁豆5-12份制备而成的。该药物富含大量维生素，而且含有大量有效的修复皮肤胶原蛋白的成分，有利于消除日晒斑和修复皮肤。可以有效的消除日晒斑并且修复肌肤的胶原蛋白层。并且在配伍健康合理，符合皮肤和身体的健康需求。但是，同样的该药物也是使用了大量的中草药，成分特别复杂，对于药效的均一性和稳定性也有待于商榷，而且制备工艺复杂，成本同样比较高昂。CN106265414A中公开了一种祛日晒斑面膜，其有效成分包括以下重量份原料：芦荟提取物5-8份、银杏叶提取物0.5-0.8份、蜂蛹提取物1-2份、红花提取物0.2-0.4份，每张面膜载体载有所述有效成分15-25ml。该发明的面膜针对日晒斑具有显著作用。该发明中使用的银杏叶提取物和蜂蛹提取物都是成本比较高昂的物质，并且提取的工艺也较为复杂，质控并不特别容易实现，并且在效果方面并没有特别显著的效果，因此，有巨大的改进空间。基于现有技术的缺陷，针对治疗日晒斑的化妆品在现有技术中有巨大的需求，因此，基于上述缺陷，本发明提出了如下的技术方案。技术实现要素：本发明提供一种化妆品，可以有效的祛除日晒斑。本发明的一个方面，提供一种能够杀死人黑色素细胞的化妆品，其中包括使用SEQIDNo:1-11任一所述的多肽，所述的多肽分别对应命名为RGT-1～11所示。该多肽是申请人通过前期通过文库筛选获得的。本发明另外提供一种化妆品，该化妆品除了含有SEQIDNo:1-11任一所述的多肽之外，还有有花青素。本发明另外提供一种化妆品，为面霜，包括下述质量百分比含量的组分：SEQIDNo:1-11任一所述的多肽0.01％、羊毛脂7-10％、凡士林5-9％、角鲨烷4-8％、甘油单硬脂酸酯6％、蓖麻油1％、美白剂0.1-0.25％、甘油15-20％、软骨素硫酸钠0.1-0.5％、花青素1％，水余量。本发明另外提供一种制备成人黑色素细胞悬浮液的方法，首先，利用水泡吸附法取得成人的表皮组织。在此步骤中，以酒精将皮肤消毒后，将针筒放置于皮肤上，以200-300毫米汞柱的吸力吸附皮肤长达60-120分钟，使皮肤形成水泡，再将表皮组织剪下，一般而言，表皮组织上含有约86-90％的角质细胞及5-7％的黑色素细胞。接着，将剪下的表皮组织切碎后，先以胰蛋白溶液浸泡，再移入胰蛋白-乙二胺四乙酸(trypsin-EDTA)溶液中，使黑色素细胞从表皮组织分离，最后以离心的方式收集表皮细胞，并于细胞培养皿中培养。其中角质细胞因无法生长而迅速减少，黑色素细胞则持续增生，而得到接近纯黑色素细胞的细胞族群。由于黑色素细胞属于粘附型细胞(adherentcell)，因此需利用胰蛋白酶(Trypsin)分解细胞与培养皿间的附着蛋白，让黑色素细胞脱落下来，这是收集粘附型细胞常用的方法。接着，洗涤取得的黑色素细胞。之后，以约1.2-1.5X106/ml的密度，将黑色素细胞重新悬浮于汉氏培养液(Ham'sF12)中。汉氏培养液(Ham'sF12)为常见的市售培养液，内含氨基酸、糖类、脂肪酸、盐类等基本细胞生长必须物质。除了汉氏培养液(Ham'sF12)外，也可采用DMEM、最低基本培养液(MEM)、磷酸生理食盐水(PBS)、1640培养液、一般生理食盐水(normalsaline)或其它生理兼容溶液来配制。最后，将黑色素细胞悬浮液细胞计数，等量分装入试管中，以进行后续的实验。本发明另外提供一种人黑色素细胞杀死实验方法，将本发明SEQIDNO：1～11任一所述的多肽，添加进入含有黑色素细胞培养液中，加入量为0.01％(m/v)；细胞在37℃中培养5h，10h，12h，分别检测其中活细胞的数量，分析细胞杀死率。技术效果本发明通过提供特异性的黑色素细胞杀死多肽，特异性的杀死局部的黑色素细胞，从而为彻底去除日晒斑提供了最后的保障。另外，在化妆品中通过添加花青素，从而有效的消除皮肤表面的已经形成的日晒斑，二者有机结合，再通过添加美白剂以及其他物质的组合，从而治标治本，从而彻底祛除日晒斑达到不复发的效果。而且本发明的化妆品，营养丰富，滑爽而油润，对提高皮肤张力和抗皱有显著效果，特别还具有美白肌肤的效果。最为重要的是，本发明成本低廉，取材容易，特别适宜大面积的推广使用。附图说明图1是培养人黑色素细胞流程图；图2治疗前面部皮肤的对照图；图3治疗后面部皮肤的对照图。具体实施方式以下实施例说明了本发明的各方面内容。他们仅用以说明，并不限定本发明的范围，本领域技术人员在此基础上进行的常规的改变或者添加，也都属于本发明保护的范围，应加以限制。实施例1人黑色素细胞的批量获得首先，利用水泡吸附法取得成人的表皮组织。在此步骤中，以酒精将皮肤消毒后，将针筒放置于皮肤上，以200-300毫米汞柱的吸力吸附皮肤长达100分钟，使皮肤形成水泡，再将表皮组织剪下，一般而言，表皮组织上含有约86-90％的角质细胞及5-7％的黑色素细胞。接着，将剪下的表皮组织切碎后，先以5％胰蛋白溶液浸泡，再移入胰蛋白-乙二胺四乙酸(trypsin-EDTA)溶液中，使黑色素细胞从表皮组织分离，最后以5000g离心的方式收集表皮细胞，并于细胞培养皿中培养。其中角质细胞因无法生长而迅速减少，黑色素细胞则持续增生，而得到接近纯黑色素细胞的细胞族群。由于黑色素细胞属于粘附型细胞(adherentcell)，因此需利用3％胰蛋白酶(Trypsin)分解细胞与培养皿间的附着蛋白，让黑色素细胞脱落下来。接着，PBS洗涤取得的黑色素细胞。之后，以约1.5X106/ml的密度，将黑色素细胞重新悬浮于汉氏培养液(Ham'sF12)中。最后，将黑色素细胞悬浮液细胞计数，等量分装入试管中，每个试管中细胞的密度为100g/mL左右，以进行后续的实验。实施例2多肽的制备以多肽合成的方式，或者以本领域技术人员常用的原核表达的方式来表达并纯化获得SEQIDNO：1～11所示的多肽，分别命名为RGT-1～11所示。实施例3黑色素细胞杀死实验将本发明SEQIDNO：1～11任一所述的多肽，添加进入含有黑色素细胞培养液试管中，原始细胞浓度为200个/mL，多肽的加入量为0.01％(m/v)；细胞在37℃中培养5h，10h，12h，分别检测其中活细胞的数量，分析细胞杀死率(每一个做3个重复)。结果如下表1所示，每一个结果P值均小于0.05。产品种类5h活细胞剩余量10h活细胞剩余量12h活细胞剩余量PBS对照195183170RGT-1多肽22181RGT-2多肽40232RGT-3多肽43201RGT-4多肽50191RGT-5多肽39304RGT-6多肽40312RGT-7多肽32295RGT-8多肽29304RGT-9多肽55388RGT-10多肽60438RGT-11多肽46325表1从表1的结果可以看出，本发明的多肽具有较好的杀死黑色素细胞的效果，并且杀死的时间较短，具有杀死效果显著的特性。而且，通过电镜检测发现，黑色素细胞的细胞核先溶解导致的细胞死亡。实施例4化妆品的制备分别取SEQIDNo:1所述的RGT-1多肽0.01％、羊毛脂10％、凡士林5％、角鲨烷4％、甘油单硬脂酸酯6％、蓖麻油1％、美白剂0.25％、甘油20％、软骨素硫酸钠0.5％、花青素1％，充分搅拌使完全溶解，混匀，调节溶液的pH至6.5,最后用纯化水补足配方总量，除菌过滤，分装，即为成品化妆品。实施例5化妆品RGT-2～11的制备按照实施例4的方法，将SEQIDNO：2～11多肽分别替换RGT-1多肽，其余组分和制备方法和实施例4相同，制备得到所述化妆品。实施例6安全性验证试验材料和方法动物：普通级实验动物大白兔。体查动物未见异常。环境条件：室温：25℃，相对湿度：68％；试验方法：依据《化妆品卫生规范》(2007年版)急性皮肤刺激性试验，试验前24小时，将试验动物背部脊柱两侧毛剪掉，去毛范围3厘米X3厘米。取受试无原性0.5克直接涂抹在右侧皮肤上，以洁净纱布覆盖，用无刺激性胶布固定2小时。另外一侧为阴性对照。除去受试物后的1小时、24小时、48小时72小时观察受试动物接触部位皮肤反应并做记录。结论：在本试验条件下，受试物含有本发明多肽的化妆品对大白兔急性皮肤刺激试验按皮肤刺激强度分级为无刺激性。对照化妆品也无刺激性。实施例7祛斑效果验证1、患者选择:选择日晒斑患者(签署知情同意书并经伦理委员会审核批准)，均为女性，随机分为两组。治疗组:220例,每个多肽对应20例，平均年龄25岁，病程1个月，采用实施例4和5的多肽化妆品进行治疗；对照组:20例，平均年龄25岁，病程3个月，使用不含有多肽的实施例4的化妆品进行治疗。两组在年龄、性别、病情的轻重、病程等方面比较，具有可比性(P>0.05)。2、治疗方法：治疗组为分别基于实施例4和5制备得到的化妆品，早晚各涂抹在日晒斑患病处1次，疗程1个月；对照组:给予实施例4中不含有多肽的化妆品作为对照，也涂抹在日晒斑患病处1次，疗程1个月。治疗期问，所有患者均停用其它一切功效型化妆品，外出注意防晒。对照组患者需定期监测肝功和血脂，无异常可继续服用。30d为1个疗程。3、疗效判定评分方法:①根据皮损面积评分:无皮损为0分，皮损面积<3cm2为1分，皮损面积3-5cm2为2分，皮损面积>5cm2为3分；②根据皮损颜色深浅评分:正常肤色为0分；若呈浅褐色为1分，深褐色为2分，黑褐色为3分；③总积分为面积积分与颜色积分的总和。指数的计算方法为:(治疗前总积分一治疗后总积分)/治疗前总积分。疗效判定标准:基本治愈:肉眼可见色斑的面积消退超过90％，色斑颜色已基本消失，按照评分法计算，治疗后的下降指数≥0.8；显效；肉眼可见色斑面积消退超过60％，色斑的颜色与治疗前相比明显变淡，按照评分法计算，治疗后的下降指数≥0.5；有效:肉眼可见色斑面积消退超过30％，色斑颜色变淡，按照评分法计算，治疗后的下降指数≥0.3；无效:肉眼可见色斑的面积消退不足30％,且色斑颜色并无明显变化，按照评分法计算，治疗后下降指数小于等于0。总有效率＝(基本治愈十显效十有效)例数/总例数×100％。统计学方法:采用统计学软件SPSS15.0进行资料分析，计数资料与计量资料分别采用χ2检验与t检验的方法，P<0.05具有统计学意义。疗效比较:两组患者均完成治疗观察，治疗组总有效率大于95％，对照组为0％，疗效比较有显著性差异(χ2<2.21,P<0.05)，见表2。表2从表2可以看出，本发明的治疗效果较好，具有较好的应用前景。在使用RGT-1多肽化妆品治疗的一位患者通过拍照，从图2和图3的结果可以看出，治疗后面部斑得到的较好的治疗基本痊愈。其余多肽效果类似，在此不一一贴图。实施例8化妆品保湿度及保湿时间检测MMV(moisturemeasurementvalue)法检测MMV值反映皮肤角质层结合水的能力。采用CM825型皮肤油水酸碱测试仪测试皮肤的水合作用。它的测定原理是由于角质层含有大量的电解质，存在水中的电解质具有导电性，这种现象也产生在皮肤表面，通过测试探头与皮肤接触后，电导率的变化来反映皮肤的水合状态。受试者为健康无皮肤病的志愿者。试验条件为测试期间环境的温度和湿度恒定，温度为25℃±2℃，相对湿度为40％～60％。选取健康无皮肤病的志愿者12名，进行测试。测试方法为：①确定左右前臂4块测试区域，区域面积为4cmX4cm，分别测试该区域的空白值。②将样本涂敷于测试区域，用量为2mg/cm2。③使用后120min进行最终的测试，每块区域测试5个点，取平均值。保湿效果评价的评价公式：相对保湿率/％＝(P样t＝x-P空白)/(P标t＝x-P空白)X100％式中：P样t＝x-使用一定时间后产品的电导率；P空白-未涂样品的电导率；P标t＝x-使用一定时间后参照物的电导率，本发明的化妆品以及甘油比较的保湿率情况(％)结果如下表所示：产品种类保湿率对照0.48RGT-1多肽0.78RGT-2多肽0.75RGT-3多肽0.74RGT-4多肽0.76RGT-5多肽0.74RGT-6多肽0.70RGT-7多肽0.80RGT-8多肽0.76RGT-9多肽0.77RGT-10多肽0.75RGT-11多肽0.76表3从以上表格看，本发明的化妆品的保湿率明显高于甘油的保湿情况，同时也说明本发明的多肽对于提高化妆品的保湿效果具有显著的促进作用。以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进ー步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。序列表〈110〉金鑫〈120〉一种化妆品〈160〉11〈210〉1〈211〉27〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-1RIWPVMDQRDRQQHHPWYQRAPCRNQG〈210〉2〈211〉25〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-2VCCCRSTHKPQFCLQLMINFKQFAP〈210〉3〈211〉24〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-3IMGHREQFPRIPRNRPKWHAHWWW〈210〉4〈211〉26〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-4STRRWPKPSTPQSYLEVEQEEMYQPR〈210〉5〈211〉21〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-5IQIPTKSSSRTFLSKIPLDMP〈210〉6〈211〉20〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-6NAEQLYDHNIQWLYAMYWVE〈210〉7〈211〉23〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-7QHPQRLKRSRPETHSMMQPKVWY〈210〉8〈211〉25〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-8DYGPRVVFQQWMKSNRWNWHMNDVV〈210〉9〈211〉27〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-9GHQWYSQTRFEYDDLKIWGKCTFHELS〈210〉10〈211〉26〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-10WHGTTMWHVQFRSSFWAAWWMTPRLC〈210〉11〈211〉17〈212〉PRT〈213〉人工序列〈400〉RGT-11WHTSHRFKRHPEWHLLI当前第1页1 2 3