本发明涉及医药，特别是辛夷水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用。
背景技术：
雌激素是女性体内关键性的激素，女性进入更年期后，随着卵巢功能的衰退和体内雌激素水平的下降，女性患骨质疏松、老年痴呆、心血管等疾病的发病率也随之上升。虽然雌激素替代疗法可以有效预防上述疾病的发生与发展，但长期应用雌激素易产生高血压、水肿、高血凝状态等副作用，并增加女性患乳腺癌及子宫内膜癌等妇科肿瘤的发病危险。植物雌激素是来源于植物，与哺乳动物的类固醇激素-17β-雌二醇有相似结构的多羟基化合物。因植物雌激素无人工合成雌激素替代疗法所引起的副作用而引起人们的广泛关注。
辛夷为木兰科植物望春花magnoliabiondiipamp的干燥花蕾。性温味辛，归肺与胃经，具有发散风寒，通鼻窍的功效。临床常用于风寒感冒，鼻塞，鼻渊。且辛夷的挥发油常用于化妆品中，具有良好的美容功效，但辛夷提取过挥发油之后剩余的药材被当作药渣丢弃，造成了资源的浪费，目前对辛夷水提物雌激素的研究还未见公开报道。
技术实现要素：
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种辛夷水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用，可有效解决辛夷水提物的制备及其治疗雌激素缺乏症的用药问题。
本发明解决的技术方案是，一种辛夷水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用，所述的辛夷水提物是，将辛夷每次加10倍药物重量的水煎煮3次，第一次先加10倍重量的水浸泡30min，煎煮1h，过滤，得第一次滤液；药渣再加药物10倍重量的水，煎煮1h，过滤，得第二次滤液；第二次药渣再加药物10倍重量的水，煎煮1h，过滤，得第三次滤液，合并三次滤液，减压浓缩，真空干燥得辛夷水提物。
本发明辛夷水提物具有雌激素样活性，作为唯一活性成分有效用于制备雌激素类药物，开拓了辛夷的药用价值和商业价值，有良好的经济和社会效益。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
实施例1
本发明在具体实施中，一种辛夷水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用，所述的辛夷水提物是，将辛夷100g每次加1000ml的水煎煮3次，第一次先加1000ml的水浸泡30min，煎煮1h，过滤，得第一次滤液；药渣再加1000ml的水，煎煮1h，过滤，得第二次滤液；第二次药渣再加1000ml的水，煎煮1h，过滤，得第三次滤液，合并三次滤液，减压浓缩，真空干燥得辛夷水提物，提取率7.9％。
实施例2
本发明在具体实施中，一种辛夷水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用，所述的辛夷水提物是，将辛夷50g每次加500ml的水煎煮3次，第一次先加500ml的水浸泡30min，煎煮1h，过滤，得第一次滤液；药渣再加500ml的水，煎煮1h，过滤，得第二次滤液；第二次药渣再加500ml的水，煎煮1h，过滤，得第三次滤液，合并三次滤液，减压浓缩，真空干燥得辛夷水提物，提取率7.7％。
实施例3
本发明在具体实施中，一种辛夷水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用，所述的辛夷水提物是，将辛夷200g每次加2000ml的水煎煮3次，第一次先加2000ml的水浸泡30min，煎煮1h，过滤，得第一次滤液；药渣再加2000ml的水，煎煮1h，过滤，得第二次滤液；第二次药渣再加2000ml的水，煎煮1h，过滤，得第三次滤液，合并三次滤液，减压浓缩，真空干燥得辛夷水提物，提取率8.1％。
本发明提取物作为唯一活性成分经实验和实际应用，具有雌激素样活性和有效用于制备雌激素药物，有关试验资料如下：
本发明首先通过小鼠子宫增重实验对辛夷水提物进行雌激素样活性的筛选，接着采用mcf-7细胞增殖实验对辛夷水提物进行体外雌激素样活性的筛选，并且分析辛夷水提物对未成熟雌性小鼠的体重增长率、血清e2(雌二醇)、lh(促黄体生成素)、fsh(卵泡刺激素)的影响，初步探讨其作用特点。
1实验材料
1.1实验药物
本发明辛夷水提物。
1.2实验动物与细胞株
清洁级昆明种小鼠，雌性，出生21天(刚断乳)，体重9～12g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司(许可证号：scxk(京)2016-0011)。人乳腺癌细胞(mcf-7)购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。
1.3试剂
dmem高糖培养基(gibcoinvitrogen)；去雌激素胎牛血清(广州四季青)；无酚红dmem高糖培养基、葡聚糖-活性炭去激素胎牛血清(hyclone)；17β-雌二醇(17β-estrogen，e2)、氨苄青霉素、tris碱(sigma)；戊酸雌二醇片(拜耳医药)；edta、mtt及dmso(amresco)；e2、fsh、lhelisa试剂盒(r&d)。
1.4仪器
倒置显微镜(nikoneclipsets100)；二氧化碳培养箱(stik)；sorvallst16rcentrifuge高速低温冷冻离心机(thermofisherscientific公司)；酶标仪(bio-rad680)；超净工作台(江苏苏净集团)；90-3磁力搅拌器(上海振捷实验设备有限公司)；rd-7080全自动新型鼓风干燥箱(上海智城分析仪器制造有限公司)；微量加样器(nichipetexplus)；ab204-n电子读数分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产品)；10cm培养皿、96孔培养板、冻存管(corning)；普通手术器械。
2实验方法
2.1小鼠子宫增重实验
将小鼠按体重均衡和随机的原则分组，持续给药7天。正常组每日蒸馏水0.02ml/g灌胃；阳性对照组隔日灌胃戊酸雌二醇(0.33mg/kg/d)灌胃；辛夷水提物按药典规定人用药量的20倍量×提取率，配成混悬液，每日按0.02ml/g灌胃。最后一次给药24h后，摘眼球取血，脱颈椎处死小鼠，立即摘取子宫称重，计算子宫系数(子宫湿重×(体重)-1×100％)。实验平行重复三次。结果与正常组相比，计算p值，考察有无统计学意义。
2.2mcf-7细胞增殖实验
mcf-7细胞经含5％去雌激素胎牛血清的无酚红dmem培养基培养1周后，选取对数生长期细胞，pbs洗两次，用0.05％胰蛋白酶消化后，加入无酚红dmem培养基吹打均匀，以2×104个/ml的浓度接种于96孔板内，每孔培养总体积为200μl。培养24h待细胞贴壁后，换为含药培养液继续培养。37℃、5％co2培养48h后，每孔加入mtt溶液(5mg/ml)20μl，37℃继续培养4h，小心吸净培养液，每孔加入150μldmso，震荡5-10min，使紫色结晶完全溶解。用酶标仪在490nm下测定各孔吸光度值(a)，计算平均a值和细胞活力。实验平行重复三次。
细胞活力＝各组od值/正常组od值
2.3elisa法检测血清e2、lh、fsh
小鼠摘眼球取血，血液室温静置1h后，3000转离心10min，取上清。按照elisa试剂盒说明书仔细操作。
2.4统计处理
实验数据以
3实验结果
3.1辛夷水提物对性未成熟雌性小鼠子宫系数的影响
与正常组相比，辛夷水提物能显著诱导性未成熟雌性小鼠子宫系数的增加(p<0.05)。提示辛夷水提物在体内具有雌激素样作用。见表1。
表1辛夷水提物对性未成熟雌性小鼠子宫系数的影响(
注:与正常组比较，表示p<0.05，表示p<0.0
3.2辛夷水提物对mcf-7细胞促增殖作用
辛夷水提物在10-2mg/ml时与正常组比，对mcf-7细胞有显著的促增殖作用(p<0.05)。提示辛夷水提物在体外具有雌激素样作用。见表2。
表2辛夷水提物对mcf-7细胞增殖的影响(
注:与正常组比较，表示p<0.05，表示p<0.01
3.3辛夷水提物对血清e2、lh、fsh的影响
与正常组相比，辛夷水提物能显著增加小鼠血清e2、lh的水平，但基本不影响血清fsh的水平(p<0.05)。提示辛夷水提物在体具有雌激素样作用，可能与其增加体内e2以及lh的水平有关。见表3。
表3辛夷水提物对血清e2、lh、fsh的影响(
注:与正常组比较，表示p<0.05，表示p<0.01
四结论
子宫中含有大量的雌激素受体(ers)，雌激素类物质通过与该受体结合，可诱导子宫靶蛋白(ips)含量增加，表现为子宫组织增生等，因此可以通过测定外源雌激素对性未成熟小鼠子宫促增长作用来评价药物的雌激素样活性。本实验采用性未成熟雌性小鼠子宫湿重与体重之比(子宫系数)作为评价雌激素样活性的指标。实验结果表明，辛夷水提物可显著增加性未成熟小鼠子宫系数，提示辛夷水提物在体内具有雌激素样作用。
mcf-7细胞是雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞株，能特异地受雌激素或雌激素样活性物质调节而增殖，是最常用的检测雌激素样活性的细胞株。实验结果发现，辛夷水提物在浓度为0.01mg/ml时对mcf-7细胞有显著的促增殖作用。提示辛夷水提物在体内、体外均有一定的雌激素样作用。
雌二醇是体内主要由卵巢成熟滤泡分泌的一种天然雌激素，能促进和调节女性性器官及副性征的正常发育。促黄体生成素由垂体产生的一种激素在在女性中刺激卵巢分泌女性雌激素。卵泡刺激素是垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种激素，主要作用为促进卵泡成熟，促进整个卵巢长大。研究发现，辛夷水提物可以显著性增加未成熟雌性小鼠的血清e2以及lh的水平，但对fsh的影响不大。推测辛夷水提物增加小鼠子宫系数发挥雌激素样活性可能与其增加体内e2以及lh的水平有关。
实验证明，辛夷水提物作为唯一活性成分有效用于制备雌激素药物，实现辛夷水提物作为唯一活性成分在制备雌激素药物中的应用，开拓了制备雌激素类药物的新途径，提高了辛夷的药用价值和商业价值，有良好的经济和社会效益。