千层纸素A在制备防治呼吸系统病毒感染药物中的用途的制作方法

本发明属中药领域，涉及中药单体千层纸素a在制备防治呼吸系统病毒感染药物中的用途。

背景技术：

资料显示，呼吸系统病毒感染传染性强、死亡率高、蔓延迅速、流行广泛，易造成大量人员伤亡、医疗社会保障体系混乱、财产大量损失，引起社会恐慌等。据记载，二十世纪几次大规模的流感爆发和2003年爆发的非典型传染性肺炎(sars)均对社会造成严重后果。呼吸系统病毒感染可以导致机体急性肺损伤(ali)，进一步发展可成急性呼吸窘迫综合症(ards)，其症状主要表现为：咽痛、流涕、鼻塞、咳嗽等呼吸道症状以及肌肉酸痛、发热、畏寒、头痛、恶心、呕吐、高热不退等全身反应症状。呼吸系统病毒变异迅速，易产生高致病的毒株以及耐药病毒的出现都使呼吸系统病毒感染难于控制。流行性感冒是最常见的呼吸系统病毒感染性疾病，其中，甲型流感病毒周期性的在人群中爆发，最常见的流感病毒是h1n1和h3n2。尽管人类认识呼吸系统病毒感染性疾病已有近百年历史，但现有的防御和治疗呼吸系统病毒感染(特别是高致病性呼吸系统病毒)的医药技术仍显得十分薄弱；目前的抗流感病毒药物普遍存在多种毒副作用；病毒变异迅速，疫苗研究周期长，难以及时发挥有效的防御效果。

千层纸素a是中药黄芩中的一种重要的黄酮类化合物，研究发现千层纸素a具有抗过敏、抗肿瘤和抗炎等药理活性。中药黄芩为《中国药典》收载的常用清热解毒类中药，为多年生草本植物黄芩(scutellariabaicalensisgeorgi)的干燥根。黄酮类化合物是黄芩中的主要化学成分和活性成分，主要以苷或苷元的形式存在，有研究发现黄芩提取物、黄芩苷和黄芩素对甲型流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤有治疗作用。但迄今针对千层纸素a对呼吸系统病毒感染性疾病的治疗尚未见报道。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供千层纸素a在制药中的新用途，具体涉及千层纸素a在制备防治呼吸系统病毒感染药物中的用途。

技术实现要素：

本发明的目的是提供千层纸素a在制药中的新用途，具体涉及千层纸素a在制备防治呼吸系统病毒感染药物中的用途。

本发明所述的千层纸素a的分子结构如下：

本发明经整体动物模型实验证实，所述的千层纸素a对流感病毒感染所致小鼠急性肺损伤有很好的治疗作用，其疗效和同等剂量的黄芩总黄酮和苷元黄芩素的疗效相当，且其疗效明显好于同等剂量的黄芩苷(p<0.05)，可进一步用于制备新的防治呼吸系统病毒感染药物。

本发明通过下述方法制备千层纸素a：

取干燥黄芩药材，以80％乙醇加热回流提取，合并提取液，减压浓缩至无醇味，浸膏加水混悬；混悬液经预处理过的大孔吸附树脂吸附，依次用蒸馏水、80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩干燥得黄芩总黄酮；经uplc表征，其中包含黄芩苷、黄芩素和千层纸素a等黄酮类成分。

本发明进行了千层纸素a用于防治病毒性急性肺损伤的体内实验：

本发明进行了整体动物模型实验用以研究千层纸素a对病毒性急性肺损伤小鼠的体重以及肺部病理损伤的影响：

选用5周龄spf雄性balb/c小鼠，静脉给予丙泊酚注射液麻醉后，滴鼻感染流感病毒鼠肺适应株建立小鼠急性肺损伤模型，其中正常对照组给以病毒稀释液，感染后2h后按组别口服灌胃不同浓度的药物；

实验结果显示，所述的千层纸素a能显著减轻小鼠肺部的病理损伤，减轻急性肺损伤；治疗效果和同等剂量的黄芩总黄酮和黄芩素相当，但明显优于同等剂量的黄芩苷(p<0.05)。

经实验证实，本发明所涉及千层纸素a可制备新的治疗呼吸系统病毒感染的药物。

附图说明

图1：千层纸素a对病毒性急性肺损伤小鼠体重的影响。

图2：千层纸素a对病毒性急性肺损伤小鼠肺部病理变化的影响。

具体实施方式

实施例1制备黄芩总黄酮以及千层纸素a

取干燥黄芩药材1.2kg，以80％乙醇加热回流提取三次，第一次用10倍量溶剂提取2h，第二、三次分别用8倍量溶剂提取1.5h，合并三次提取液，减压浓缩至无醇味，得浸膏加水混悬；混悬液经预处理的ab-8大孔吸附树脂吸附，依次用3倍柱床体积的蒸馏水、6倍柱床体积的80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩干燥得黄芩总黄酮，收率25.48％；采用超高效液相色谱法(uplc)，对制得的黄芩总黄酮进行表征，其包含黄酮类化合物黄芩苷、黄芩素和千层纸素a，含量分别为51.79％，3.78％和0.57％。

实施例2千层纸素a对甲型流感病毒诱导急性肺损伤的治疗作用

选用5周龄spf雄性balb/c小鼠48只,按体质量随机分为6组(a、b、c、d、e、f组)：a组为正常对照组，b组为模型组，c、d、e及f组分别为100mg/kg黄芩总黄酮、黄芩苷、黄芩素以及千层纸素a，每组8只；所有小鼠尾静脉注射丙泊酚注射液0.026ml/10g,在小鼠麻醉状态下滴鼻感染h1n1病毒30μl，左右鼻各15μl，其中正常对照组给以病毒稀释液；感染2h后按组别口服给予不同浓度的药物，0.1ml/10g，给药4天，a、b组给予0.5％cmc-na；最后一次给药24h后，即第4天(96h后)取材；常规处理小鼠，取全肺，观察肺部损伤情况，以肺部病变面积进行肺评分，并记录，肺称重后，取右肺上叶泡福尔马林，用于病理切片的观察；

本发明中采用的体重变化是评价药物对病毒性急性肺损伤小鼠有无保护作用的一个宏观指标；正常组小鼠精神良好，行动敏捷有力，毛发有光泽，呼吸，饮食正常，体重自然增长；其它组小鼠在感染三天后开始发病，表现为行动迟缓无力，呼吸不顺畅，畏寒怕冷，以手握之可以明显感觉到小鼠体温骤降，进食减少，体重急剧降低；将小鼠每天体重除以感染当天体重即得体重变化率，以小鼠每天的体重变化率绘制体重变化曲线，结果显示(如图1所示)，模型组小鼠体重第四天下降幅度最大，而给予药物后小鼠体重的下降幅度在一定程度上有所降低，相比其它给药组，黄芩苷(100mg/kg)组体重下降幅度最大；

肺指数是小鼠的肺重与体重的比值，其值越大说明肺病变程度越严重；与正常组相比，模型组小鼠肺指数和肺评分明显升高；给予千层纸素a后小鼠肺指数和肺损伤评分显著降低，与黄芩苷组(100mg/kg)相比，千层纸素a(100mg/kg)可显著降低病毒性急性肺损伤小鼠肺评分(如表1所示)。

表1千层纸素a对小鼠肺炎的影响结果

**与模型组比较p<0.01,***与模型组比较p<0.001；

^#与黄芩苷组比较p<0.05

肺指数＝(小鼠肺重/小鼠体重)×100％

病理检查结果表明，正常组肺泡轮廓清晰，有较完整的肺泡结构，无渗血现象，基本无炎症；模型组病理切片显示肺泡壁明显增厚，肺泡萎缩变形，大量白细胞聚集，炎症严重；100mg/kg黄芩总黄酮、黄芩素以及千层纸素a给药组均可看出清晰的肺泡轮廓，具有完整的肺泡结构，无严重出血现象，炎症症状显著减轻；100mg/kg黄芩苷组肺泡壁局部增厚，炎性细胞浸润等炎症现象有所减轻，可看出清晰的肺泡轮廓(如图2所述)。

本发明经实验表明，所述的千层纸素a对病毒性急性肺损伤有明显的治疗作用，能显著改善病毒性急性肺损伤小鼠的肺部病理损伤，显著改善小鼠体重，显著降低小鼠肺指数和肺部损伤面积；黄芩苷是黄芩中的主要化合物，已有研究显示黄芩苷能有效缓解病毒性急性肺损伤，但本发明实验结果证实，所述的千层纸素a对病毒性急性肺损伤的治疗作用明显好于黄芩苷，所述的千层纸素a可以制备新的防治呼吸系统病毒感染药物。