一种抗氧化作用和抑制黑色素合成的多肽组合物及其应用的制作方法

本发明属于医药化妆用品领域，利用具有抗氧化作用的多肽和抑制黑色素的多肽进行配方组合，并采用复合活性多肽的方法制备各种剂型包括霜剂、精华液、乳液、冻干粉等，用于改善因氧化应激致使的皮肤老化暗黄，修复皮肤的氧化损伤，提亮肤色，并预防各种各样的皮肤疾病如红斑狼疮、多形性日光疹等。

背景技术：

以下描述包含对理解本发明可能有用的背景信息，但既不是承认在此提供的任何信息是目前要求保护的本发明或有关申请的现有技术，也不是承认任何具体或隐含涉及的公开的现有技术。

皮肤是最早反映机体衰老的组织，已引起众多学者对皮肤皱纹、弹性及皮肤含水量等研究的兴趣。皮肤衰老是一个非常复杂的现象，涉及一系列的生物学改变，如皮肤组织细胞、基因和免疫系统的改变，是体内外各种因素(营养、环境污染、精神因素、情绪变化、太阳辐射等)共同作用的结果。根据研究学者从不同的角度以及研究方法对衰老进行探索，总结了许多关于衰老的学说，包括衰老基因学说、端粒缩短学说、自由基学说、免疫机能退化学说等，其中氧自由基学说被大众认为与衰老密切相关。1956年，haman首先提出衰老的自由基代谢理论，认为衰老是细胞成分积累性氧化损伤的结果。

氧化应激(oxidativestress，os)是指在有害刺激因素下，活性氧(reactiveoxygenspecies，ros)产生过多或发生代谢障碍并超过内源性抗氧化防御系统对其清除能力时，ros在体内增多并参与氧化生物大分子的形成，直接或间接氧化或损伤dna、蛋白质和脂质，最终导致细胞的氧化损伤，体现在以下几个方面：

⑴皮肤内细胞的氧化损伤。角质形成细胞(keratinocyte，kc)是中波紫外线作用靶点，受紫外线照射后，细胞内炎症信号传导机制被激活，通过表达或分泌一系列炎症细胞因子如白细胞介素-1(il-1)，参与机体的免疫和炎症反应。此外，紫外线还可引起kc的凋亡，可能为dna直接损伤、诱导ros的形成及活化细胞膜表面死亡受体。黑素细胞(melanocyte)位于表皮中，对于维持皮肤耐受紫外线辐射能力有重要意义，被紫外线照射后发生树突数目增多、细胞肿胀等形态改变。成纤维细胞(fibroblasts)是合成胶原和弹性纤维的主要场所，位于皮肤真皮层，却极易发生氧化损伤。它与kc一样，可被紫外线诱导发生凋亡。

⑵细胞内所有成分包括蛋白质都会受到氧化而损伤。皮肤中氧自由基增多，会产生一系列的反应：氧自由基在体内过量增多，会攻击细胞膜、蛋白质、核酸而造成氧化性损伤，加速皮肤表皮老化。这主要体现在氧自由基与细胞膜上主要成分多不饱和脂肪酸(pufa)反应，生成脂质过氧化自由基和脂质过氧化物(lpo)，分解生成的丙二醛可使膜流动性改变，而脂质过氧化自由基又进一步加速pufa的过氧化，导致pufa间分子重排、交联，细胞膜流动性降低，膜运转功能障碍；氧自由基可与碱基反应使dna链聚集，脂质过氧化物烯醛与核酸反应使dna链烷化断裂，从而使基因改变，基因突变，丧失正常功能引起老化；氧自由基攻击成纤维细胞后导致胶原代谢异常，胶原合成降低，出现异常交联，进一步影响真皮结构，加速皮肤老化。氧化受损的蛋白质一般由蛋白酶作为主要物质负责降解，可由于衰老导致蛋白酶的防御功能日益下降，氧化受损的蛋白质在体内堆积。此外，脂褐素在细胞内的堆积也妨碍蛋白酶的功能。细胞成分的积累性损伤又会导致组织器官机能进一步发生紊乱，引起机体的进一步衰老。

⑶肤色变黄、暗沉。肤色变黄的原因有很多因素，不仅与黑色素、血红素、类胡萝卜素以及高级糖基化终末产物ages(advancedglycationend-products)有关，而且真皮层中胶原蛋白和弹性蛋白的羰基化等也会对肤色黄造成一定的影响。有报道称，真皮中蛋白质分子(如胶原纤维和弹性纤维)中氨基酸易与还原性糖的醛基或酮基发生非酶糖基化反应，产生成熟的糖基化终产物(ages)。随着年龄的增长，ages进行性增加，ages黄棕色沉淀物堆积在真皮层，导致皮肤发黄。胶原蛋白和弹性蛋白的羰基化造成脂褐素逐渐聚积，也会导致皮肤发黄，暗沉。糖类和蛋白质引起的褐色退变的组织变化，人们习惯称为老年斑。此外，皮肤中ages随着年龄增加，使胶原纤维形成分子间交联，不但降低了结缔组织的通透性，使养料及废物的扩散性减弱，组织延伸性和硬度增加，并降低了胶原的可溶性而难以被胶原酶水解，造成皮肤弹性下降，皱纹不易平复且不断加深，促进皮肤的衰老。紫外线诱导的皮肤老化可能与真皮内ages的蓄积有关，有研究证实(wondrakgt，etal，photosensitizedgrowthinhibitionofculturedhumanskincellsmechanismandsuppressionofoxidativestressfromsolarirradiationofglycatedproteins，2002,119：489-498)，紫外线引起的光老化皮肤过氧化反应中，非酶糖基化蛋白质是体内皮肤细胞紫外线过氧化损伤的光感物这一假说。

紫外线已经成为引起皮肤氧化损伤越来越主要的原因。紫外线b能直接与皮肤细胞的dna发生作用，紫外线a则主要通过产生对人体有害的氧自由基而改变核dna和线粒体dna，并激活基质金属蛋白酶(mmps)来损害细胞外基质。mmps主要作用是降解胶原蛋白及弹性蛋白等皮肤细胞质基质成分，使皮肤的真皮层厚度变薄。因此，氧化损伤总是伴随着衰老，并引起皮肤各种各样的问题，如肤色变黄、暗沉。若氧化损伤进一步发展，还会产生皮肤疾病，如多形性日光疹，为最常见的光敏感性疾病之一，其发病可能与皮肤中常见的ros(如氢过氧化物、单线态氧及超氧阴离子等自由基)有关；其他疾病如红斑狼疮、白癜风、银屑病等，其发病可能也与ros诱导的细胞组织损伤有关。

肤色暗沉除了氧化损伤因素外，还有另外一个因素，即紫外线照射下，刺激黑色素细胞产生黑色素，黑色素的沉积对肤色的影响极大，不仅导致皮肤颜色加深，还会产生斑点。前文也阐述，黑素细胞对皮肤耐受紫外线有非常重要的意义，所产生的黑色素可吸收有害的紫外线辐射，以便由紫外线诱导的自由基引起的损害降低到最小化。但是黑色素细胞长期处于氧化应激中，也会产生损伤，可其损伤机理还不清楚。

综合上文所述，研发一些具有抗氧化与抑制黑色素生成功效的产品，清除皮肤自由基，延缓皮肤老化，同时祛除暗黄，提升皮肤颜色，预防各种皮肤病显得非常必要。

技术实现要素：

本发明为解决以上皮肤问题，提供了一种多肽组合物，其特征在于，包含：

(1)、具有抗氧化反应、清除自由基作用的一种或多种多肽，选自肌肽、谷胱甘肽、乙酰肌肽、棕榈酰肌肽、脱羧肌肽；

和

(2)、具有抑制黑色素生成作用的一种或多种多肽，选自九肽-1(nonapeptide-1(l-蛋氨酰-l-脯氨酰-d-苯丙氨酰-l-精氨酰-d-色氨酰-l-苯丙氨酰-l-赖氨酰-l-脯氨酰-l-缬氨酰胺)cas:158563-45-2)、四肽-27(lightenin，tetrapeptide-27(tego-pep-4even))、十肽-12(decapeptide-12(lumixyl^tm,envymedical,inc.,westlakevillage,usa))、六肽-2(hexapeptide-2(dermostatyl^tmis))；

其中以上各多肽成分质量浓度为0.0001％-5％。

本发明的多肽组合物可为肌肽和九肽-1两种肽组合或是肌肽和四肽-27两种组合。

本发明的多肽组合物也可以是肌肽和九肽-1、四肽-27三种肽组合或肌肽、乙酰肌肽和九肽-1三种肽组合。

本发明的多肽组合物也可以是肌肽、谷胱甘肽和九肽-1、四肽-27四种肽组合或者肌肽和九肽-1、四肽-27、十肽-12四种肽组合。

本发明多肽组合物可添加一些其他具有抗氧化作用的成分，如抗坏血酸(维生素c)、维生素e、艾纳香油等。

本发明的组合物用于局部皮肤使用，可添加一些保湿剂，如透明质酸、芦荟胶、甘油等。因为健康皮肤属于弱酸性，较佳的护肤产品ph值为5.0-7.0，因此其组合物需要对其ph进行调节，ph调节剂优选三乙醇胺。

本发明组合物为防止外部环境污染以及细菌的侵入，可添加一些防腐剂，优选辛甘醇；或抗菌物质，优选1,2-已二醇。

本发明的多肽组合物可以制成各种剂型，如开发产品剂型主要有精华液、粉剂(胶囊、冻干粉)、乳剂、霜剂、凝胶、面膜、敷料等；产品可以为面膜、补水精华、乳液、医用敷料等。

本发明多肽组合物，可局部皮肤使用，预防皮肤氧化损伤导致的老化、皱纹，黑色素沉着产生的肤色暗沉、暗斑，和任意组合的皮肤问题。

本发明多肽组合物也可用来改善皮肤暗黄，色素沉着过度、黄褐斑、皱纹、氧化发炎和任意组合的皮肤症状。

本发明的有益之处在于：

本发明人对多肽在皮肤领域的研究探索已经有多年经验，发现多肽对皮肤护理的作用机制明确，并有较好的安全性。多肽是由氨基酸残基通过肽键链接而成的化合物。根据肽链上不同的氨基酸残基数目以及氨基酸残基种类，可形成各种各样的多肽，但其作用机制有所差异。如多肽对黑色素的抑制途径，不同的多肽，其作用途径可能是不太一样的：九肽-1(九个氨基酸残基组成)(poojabains，topicalpeptidesforageing：potentialroleindermatology，2016，5:118-125)和六肽-2(六个氨基酸残基组成)作为mc1-r拮抗剂，抑制黑色素细胞的激活达到抑制黑色素的效果；而十肽-12(十个氨基酸残基组成)则是作为黑色素细胞内的酪氨酸酶抑制剂，通过抑制酪氨酸酶的活性达到抑制黑色素生成的目的(andreat.kassim，etal，open-labelevaluationoftheskin-brighteningefficacyofaskin-brighteningsystemusingdecapeptide-12，2012,14:117-121)。这几种肽从不同的作用位点达到了抑制黑色素的生成，特别是九肽-1也称为美白九肽，被市场上广泛应用于美白祛斑产品上。肌肽为两个氨基酸残基组成的多肽，在一定条件下对皮肤的氧化损伤有较好的保护作用：对age的形成有很好的抑制作用；可清除产生的自由基(ros)以及由ros诱导脂质过氧化作用产生的终产物，特别是hne，后者可攻击nda的核苷酸碱基使其突变；可有效的减缓因ros引起的dna损伤(reddyvp，etal，carnosine:aversatileantioxidantandantiglycatingagent，2005)。近年来，肌肽也被广泛添加到皮肤护理产品中。

目前，市场上提亮肤色的多肽产品侧重为抑制皮肤黑色素生成或是抗氧化作用，作用较为单一。本发明从皮肤的微观结构以及皮肤生理变化的作用机制出发，创新提出将抗氧化作用的多肽(如肌肽)与抑制黑色素生成的多肽(如九肽-1)组合一起，可以有效防止皮肤的老化，并提亮肤色，比单一使用具有更好的效果，表现出较好的协同效应。

附图说明

图1为实施例1-4多肽对皮肤色度的影响图。

图2为实施例1和对比实施例1-2多肽对皮肤色度的影响图。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，下面结合实施例和附图对发明作详细的说明，但并不只限于以下的实施例。

实施例1多肽组合物溶液的制备(抗氧化精华液)

按以下多肽溶液处方，以精华液的形式制备本发明的多肽组合物。

溶液处方(1公斤精华液)：

配置方法：

将配方量的透明质酸钠加入到水中，搅拌使混合均匀，然后加热到80～85℃，保温搅拌使其分散均匀。温度降到40℃以下，加入甘油、芦荟胶、肌肽、九肽-1、维生素c、透明质酸钠、辛甘醇和1，2-己二醇，搅拌均匀。用15％三乙醇胺调溶液的ph值至5.5左右。

实施例2

溶液处方(1公斤精华液)：

配置方法：

将配方量的透明质酸钠加入到水中，搅拌使混合均匀，然后加热到80～85℃，保温搅拌使其分散均匀。温度降到40℃以下，加入甘油、芦荟胶、肌肽、四肽-27、维生素c、透明质酸钠、辛甘醇和1，2-己二醇，搅拌均匀。用15％三乙醇胺调溶液的ph值至5.5左右。

实施例3

溶液处方(1公斤精华液)：

配置方法：

将配方量的透明质酸钠加入到水中，搅拌使混合均匀，然后加热到80～85℃，保温搅拌使其分散均匀。温度降到40℃以下，加入甘油、芦荟胶、肌肽、九肽-1、乙酰肌肽、维生素c、透明质酸钠、辛甘醇和1，2-己二醇，搅拌均匀。用15％三乙醇胺调溶液的ph值至5.5左右。

实施例4

溶液处方(1公斤精华液)：

配置方法：

将配方量的透明质酸钠加入到水中，搅拌使混合均匀，然后加热到80～85℃，保温搅拌使其分散均匀。温度降到40℃以下，加入甘油、芦荟胶、肌肽、九肽-1、谷胱甘肽、四肽-27、维生素c、透明质酸钠、辛甘醇和1，2-己二醇，搅拌均匀。用15％三乙醇胺调溶液的ph值至5.5左右。

对比实施例1多肽溶液的制备(抗氧化精华液)

除不含九肽-1，代之以去离子水之外，按实施例1的溶液配方制备精华液。

溶液处方(1公斤精华液)：

配置方法：

将配方量的透明质酸钠加入到水中，搅拌使混合均匀，然后加热到80～85℃，保温搅拌使其分散均匀。温度降到40℃以下，加入甘油、芦荟胶、肌肽、维生素c、透明质酸钠、辛甘醇和1，2-己二醇，搅拌均匀。用15％三乙醇胺调溶液的ph值至5.5左右。

对比实施例2

除不含肌肽，代之以去离子水之外，按实施例1的溶液配方制备精华液。

溶液处方(1公斤精华液)：

配置方法：

将配方量的透明质酸钠加入到水中，搅拌使混合均匀，然后加热到80～85℃，保温搅拌使其分散均匀。温度降到40℃以下，加入甘油、芦荟胶、九肽-1、维生素c、透明质酸钠、辛甘醇和1，2-己二醇，搅拌均匀。用15％三乙醇胺调溶液的ph值至5.5左右。

实施例5改善皮肤肤色试验研究

选择健康志愿者年龄18-55之间，脸上皮肤暗黄，有明显的色斑，随机分为六组组，每组30人，其中四组分别使用实施例1、实施例2、实施例3、实施例4的产品，另外两组作为对照组，分别使用对比实施1和对比实施例2的产品，连续使用8周。测试期间，志愿者不可改变原有的面部清洁方式和习惯，除此外，不可使用除测试产品外的其他化妆品。在使用产品前，产品使用4周和8周后，对两侧面颊分别进行皮肤颜色测试，从而观察产品对皮肤暗黄和色斑改善的情况。

测试中使用色差计chromameter(cr-400,konicaminolta,日本)测量肤色。本仪器采用国际照明委员会(cie)规定的色度系统(lab色度系统)表示肤色的变化。其中：

l*为亮度，a*为红绿色度，b*为蓝黄色度，三者的综合评价能够反映皮肤色度的变化；ita°值为皮肤个体类型角，是与l*和b*相关的表征皮肤明亮度的数值。ita°值越大皮肤越明亮，反之，皮肤越暗沉。

皮肤颜色测试(chromameter)的测试区域为左右两侧面颊，每个测试区测试3次取平均值。结果见附图1和2。

从实验结果看出来，多肽可以改善皮肤的色度，使用的时间越久，效果越明显；肌肽与九肽-1组合使用效果优于单一肌肽或单一九肽-1的使用效果，侧面推断不同种类的肽组合使用，可以从不同的靶点共同起作用，从而达到改善色素沉着，提亮肤色，祛斑和祛暗黄的效果，具有良好的协同作用。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所做的进一步详细的说明，但是不表示本发明的具体实施是局限于这些说明。对于本发明所属领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或是替换。以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。