生长因子组合物及在化妆品上去皱再生用途的制作方法

文档序号:12952655阅读:434来源:国知局
本发明涉及化妆品领域,具体涉及生长因子组合物及在化妆品上去皱再生用途。
背景技术
:现代科学技术的飞速发展和广泛应用,给美容化妆品行业带来了全新的发展机遇,化妆品已经从化学美容、植物美容向生物美容、基因美容发展。细胞生长因子虽然在机体内含量极低,但是它们生物活性极高,对多种细胞生理功能和代谢活动发挥生物调节作用,直接或间接地影响多种类型细胞的生长、分裂、分化、增殖和迁移,在美容护肤、整形外科等方面有重要作用。皱纹是指皮肤受到外界环境影响,形成游离自由基,自由基破坏正常细胞膜组织内的胶原蛋白、活性物质,氧化细胞而形成的小细纹、皱纹。皱纹产生的因素有衰老、紫外照射、动作习惯、体重波动等,其中衰老和紫外照射时影响最大的两个因素。本发明从这两大因素出发,着力于提供皮肤细胞和组织新陈代谢所需要的营养物质,修复细胞由于紫外线等外界因素带来的损伤;其中,生长因子中表皮细胞生长因子能促进表皮细胞生长,修复表皮;成纤维细胞生长因子能促进成纤维细胞生长,加速胶原生成;角化细胞生长因子能促进角质细胞分泌纤维蛋白,维持细胞弹性。不同生长因子组合后进一步促进了皮肤新陈代谢,起到了祛斑除皱的效果。技术实现要素:本发明的目的在于提供一种富含生长因子的化妆品。为了实现此目的,本发明采用了以下的技术方案:本发明公开了一种生长因子组合物,所述生长因子组合物包含成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、转化生长因子、角化细胞生长因子中的多种。优选地,所述生长因子组合物为碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的混合物,其中碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的质量比为(1-3):(1-3),更优选为1:1。本发明还公开了一种化妆品,包括上述生长因子组合物,所述生长因子组合物在化妆品中的含量为2-7wt%。所述化妆品包括以下原料:生长因子组合物2-7wt%、江南卷柏提取物0.5-5wt%、小麦胚芽油1-5wt%、五谷虫提取物5-15wt%、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠4-10wt%、吐温-202-3wt%、类胡萝卜素0.1-2wt%、丙酸肉豆蔻醇酯3-7wt%、甘油8-15wt%、乳酸钠0.4-2wt%、海藻糖1-3wt%、防腐剂0.1-0.3wt%、余量为水。所述江南卷柏提取物的制备过程为:将江南卷柏去根,用流动的水冲洗3-5分钟,去除泥沙等杂质;将江南卷柏于60-70℃干燥5-8小时后,粉碎过20-40目筛,得到江南卷柏粉末;将江南卷柏粉末与体积分数为80-95%的乙醇以固液比1:(6-8)(g/ml)混合均匀,于85-90℃提取3-4小时,得到提取液;将提取液于50-60℃、真空度-0.07~-0.06mpa的条件下浓缩至相对密度为1.20-1.25的稠膏;将稠膏于40-50℃、真空度-0.08~-0.06mpa的条件下干燥16-24小时,粉碎,过80-100目筛,得到江南卷柏提取物。江南卷柏的主要活性成分有黄酮、木脂素、酚、有机酸、糖、生物碱等,其中穗花杉双黄酮是其主要成分之一。在化妆品中添加江南卷柏提取物,可以有效消除面部浮肿,起到抗氧化、抗病毒的作用。在现有技术当中,五谷虫常用于治疗感染以及坏死比较严重的慢性创面以及溃疡。发明人经过研究发现,当五谷虫提取物和生长因子组合物配合使用时,可以进一步提供皮肤的抗皱功能。基于此,本发明人制备得到一种具有祛皱抗衰老功能的化妆品。所述五谷虫提取物为五谷虫虫体提取物和/或五谷虫排泄物提取物。所述五谷虫虫体提取物的制备过程为:将五谷虫用质量分数为2-5%的双氧水溶液浸泡3-5分钟,五谷虫与双氧水溶液的固液比为1:(100-300)(g/ml);取出五谷虫,用质量分数为3-5%的盐酸水溶液浸泡5-8分钟,盐酸水溶液与双氧水溶液的体积比为(2-3):1;取出五谷虫,用蒸馏水洗涤,蒸馏水与盐酸水溶液的体积比为(3-5):1,得到消毒处理后的五谷虫;将消毒处理后的五谷虫与ph7.5的磷酸盐缓冲液以固液比1:(1.5-2)(g/ml)混合均匀,于23-25℃放置10-20分钟,使五谷虫排出分泌物,形成空腹状态;取出空腹的五谷虫,将含有五谷虫排泄物的混合液于0-2℃保留备用;将空腹的五谷虫置于-85~-80℃放置10-12小时后,取出,在无菌条件下,采用冰冻切片机将其切成厚度为4-5μm的薄片;将薄片加入ph7.5的磷酸盐缓冲液,薄片与磷酸盐缓冲液的固液比为1:(1-1.5)(g/ml),以300-500转/分钟的转速搅拌10-15分钟,使五谷虫细胞裂解,得到五谷虫浆液;将五谷虫浆液与石油醚以体积比1:(5-8)混合均匀,于60-70℃提取1-2小时,得到提取液;将提取液以3000-5000转/分钟的转速离心10-15分钟,取上清液;将上清液于40-60℃、真空度-0.08~-0.07mpa的条件下干燥24-36小时,得到所述五谷虫虫体提取物。所述五谷虫排泄物提取物的制备过程为:将含有五谷虫排泄物的混合液以2000-3000转/分钟的转速离心15-30分钟,弃上清液,取沉淀;向沉淀中加入蒸馏水,沉淀与蒸馏水的固液比为1:(3-5)(g/ml),以400-600转/分钟的转速搅拌5-15分钟后,以3000-4000转/分钟的转速离心10-20分钟,取底部固体;将底部固体于30-40℃、真空度-0.07~-0.06mpa的条件下干燥24-36小时,得到所述五谷虫排泄物提取物。作为进一步的改进,所述类胡萝卜素为采用耐辐射奇球菌发酵培养获得的类胡萝卜素。采用耐辐射奇球菌发酵培养获得β-胡萝卜素的过程为:将耐辐射奇球菌菌种活化后,以1.8-2%(v/v)的接种量转入培养基中,(即每升培养基中接种18-20ml的耐辐射奇球菌),于28-30℃、ph6.0的条件下以120-170转/分钟的转速摇床培养30-36小时,得到菌液,其中所述培养基的组成为:豆饼粉28-30g/l、葡萄糖3g/l、硝酸钠1.5g/l,余量为水;将菌液以3000-4000转/分钟的转速离心10-15分钟,取沉淀ⅰ;向沉淀ⅰ中加入蒸馏水,沉淀ⅰ与蒸馏水的固液比为1:(60-80)(g/ml),以4000-5000转/分钟的转速离心10-15分钟,取沉淀ⅱ,得到洗涤后的菌体;向洗涤后的菌体中加入甲醇,菌体与甲醇的固液比为1:(50-100)(g/ml),于23-25℃以200-300转/分钟的转速搅拌25-30分钟,得到混合液;将混合液以3000-5000转/分钟的转速离心10-20分钟后,取上清液;向上清液加入氯仿和水进行萃取,上清液:氯仿:水的体积比为5:(2-3):1,取下层萃取液;将下层萃取液于50-60℃、真空度-0.07~-0.06mpa的条件下干燥24-36小时,即得。所述防腐剂为山奈酚、川芎嗪、苯氧乙醇、积雪草甙、缬草酸、大豆异黄酮中的一种或多种的混合物。发明人经过探索发现,当所述防腐剂为山奈酚和积雪草甙以质量比(3-4):1混合而成的混合物时,其效果最优。本发明所述化妆品的制剂类型可以为水剂、霜剂、乳剂、凝胶剂或成膜剂。本发明所述化妆品可用于去皱用途。本发明所述化妆品具有用于制备具有去皱再生效果的美容组合物中的用途。本发明还提供了一种化妆品的制备方法,包括以下步骤:(1)将月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、小麦胚芽油、丙酸肉豆蔻醇酯、吐温-20和甘油加热到70-80℃,以300-500转/分钟的转速搅拌6-8分钟,得到混合液a;(2)将江南卷柏提取物、五谷虫提取物、生长因子组合物和类胡萝卜素加入到水中,以200-300转/分钟的转速搅拌3-5分钟,得到混合液b;(3)将混合液a冷却至40-45℃后,将混合液b加入到混合液a中,以200-300转/分钟的转速搅拌3-5分钟,得到混合液c;(4)将乳酸钠、海藻糖和防腐剂加入到混合液c中,以300-400转/分钟的转速搅拌1-3分钟,得到化妆品。本发明所述化妆品内含特别设计补充的活性成分,促进表皮细胞的新陈代谢,修复受损细胞,帮助生成胶原蛋白,给予皮肤重建需要的营养和能量,具有美白、祛皱、抗衰老、抗辐射、保湿的功效。具体实施方式下面通过具体实施方式对本发明做进一步的描述。在本发明中,若非特指,所有设备和原料均可从市场购得或是本行业常用的,下述实施例中的方法,如无特别说明,均为本领域常规方法。碱性成纤维细胞生长因子,购自西安韵禾生物科技有限公司。表皮细胞生长因子,购自广州碧诗生物科技有限公司。江南卷柏,拉丁学名:moellendorf'sspikemossherb,别名石柏、岩柏草、黄疸卷柏,为卷柏科植物江南卷柏(selaginellamoellendorfiihieron)的全草。购自安国市炯远中药材销售有限公司。小麦胚芽油,具体采用上海贺普实业有限公司提供的化妆品级小麦胚芽油。五谷虫,为丽蝇科昆虫大头金蝇或其它近缘昆虫的幼虫。采用购自亳州市好益生药业有限公司的食用五谷虫。月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠,cas:68585-34-2,具体采用合肥天健化工有限公司提供的化妆品级月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠。吐温-20,cas:9005-64-5,具体采用北京华威锐科化工有限公司提供的化妆品级吐温-20。类胡萝卜素,具体采用上海森航实业有限公司提供的β-胡萝卜素。丙酸肉豆蔻醇酯,具体采用北京信诺久恒科贸有限公司提供的化妆品级丙酸肉豆蔻醇酯。甘油,cas:56-81-5,具体采用安徽优雅化工有限公司提供的化妆品级甘油。乳酸钠,cas:312-85-6,具体采用上海邦成化工有限公司提供的化妆品级乳酸钠。海藻糖,cas:99-20-7,具体采用四川海诺威科技有限公司提供的化妆品级海藻糖。耐辐射奇球菌,拉丁学名:deinococcusradiodurans,购自中国普通微生物菌种保藏中心,保藏编号为:1.633,菌种编号为r1。山奈酚,cas号:520-18-3,具体采用郑州栋启广利生物科技有限公司提供的山奈酚。中药粉碎机,购自上海天九机械制造厂,型号为wfj。ph7.5的磷酸盐缓冲液由na2hpo4(0.2mol/l)和nah2po4(0.2mol/l)按体积比21:4混合得到。冰冻切片机,购自上海之信仪器有限公司,型号为zqp-86。豆饼粉,具体采用冀州市盈润商贸有限公司提供的豆饼粉。葡萄糖,具体采用上海勤联化工有限公司提供的葡萄糖。积雪草甙,cas号:16830-15-2,具体采用百灵威科技有限公司提供的积雪草甙。实施例1化妆品的原料配方:生长因子组合物7wt%、江南卷柏提取物4wt%、小麦胚芽油5wt%、五谷虫虫体提取物8wt%、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠8wt%、吐温-203wt%、β-胡萝卜素2wt%、丙酸肉豆蔻醇酯5wt%、甘油10wt%、乳酸钠1wt%、海藻糖2wt%、山奈酚0.15wt%、余量为水。所述生长因子组合物为碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的混合物,其中碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的质量比为1:1。所述江南卷柏提取物的制备过程为:将江南卷柏去根,用流动的水冲洗5分钟,去除泥沙等杂质;将江南卷柏于60℃干燥8小时后,采用中药粉碎机粉碎过30目筛,得到江南卷柏粉末;将江南卷柏粉末与体积分数为95%的乙醇水溶液以固液比1:7(g/ml)混合均匀,于90℃提取3小时,得到提取液;将提取液于50℃、真空度-0.07mpa的条件下浓缩至相对密度为1.23的稠膏;将稠膏于40℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥24小时,粉碎,过80目筛,得到江南卷柏提取物。所述五谷虫虫体提取物的制备过程为:将五谷虫用质量分数为2%的双氧水溶液浸泡5分钟,五谷虫与双氧水溶液的固液比为1:200(g/ml);取出五谷虫,用质量分数为5%的盐酸水溶液浸泡8分钟,盐酸水溶液与双氧水溶液的体积比为2:1;取出五谷虫,用蒸馏水洗涤,蒸馏水与盐酸水溶液的体积比为3:1,得到消毒处理后的五谷虫;将消毒处理后的五谷虫与ph7.5的磷酸盐缓冲液以固液比1:1.5(g/ml)混合均匀,于25℃放置20分钟,使五谷虫排出分泌物,形成空腹状态;取出空腹的五谷虫,将含有五谷虫排泄物的混合液于0℃保留备用;将空腹的五谷虫加入ph7.5的磷酸盐缓冲液,空腹的五谷虫与磷酸盐缓冲液的固液比为1:1(g/ml),以300转/分钟的转速搅拌15分钟,使五谷虫细胞裂解,得到五谷虫浆液;将五谷虫浆液与石油醚以体积比1:5混合均匀,于60℃提取2小时,得到提取液;将提取液以3000转/分钟的转速离心15分钟,取上清液;将上清液于50℃、真空度-0.08mpa的条件下干燥24小时,得到五谷虫虫体提取物。化妆品的制备,包括以下步骤:(1)将月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、小麦胚芽油、丙酸肉豆蔻醇酯、吐温-20和甘油加热到80℃,以500转/分钟的转速搅拌7分钟,得到混合液a;(2)将江南卷柏提取物、五谷虫虫体提取物、生长因子组合物和β-胡萝卜素加入到水中,以300转/分钟的转速搅拌4分钟,得到混合液b;(3)将混合液a冷却至40℃后,将混合液b加入到混合液a中,以200转/分钟的转速搅拌3分钟,得到混合液c;(4)将乳酸钠、海藻糖和山奈酚加入到混合液c中,以300转/分钟的转速搅拌2分钟,得到化妆品。实施例2化妆品的原料配方:生长因子组合物7wt%、江南卷柏提取物4wt%、小麦胚芽油5wt%、五谷虫虫体提取物8wt%、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠8wt%、吐温-203wt%、β-胡萝卜素2wt%、丙酸肉豆蔻醇酯5wt%、甘油10wt%、乳酸钠1wt%、海藻糖2wt%、山奈酚0.15wt%、余量为水。所述生长因子组合物为碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的混合物,其中碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的质量比为1:1。所述江南卷柏提取物的制备过程为:将江南卷柏去根,用流动的水冲洗5分钟,去除泥沙等杂质;将江南卷柏于60℃干燥8小时后,采用中药粉碎机粉碎过30目筛,得到江南卷柏粉末;将江南卷柏粉末与体积分数为95%的乙醇水溶液以固液比1:7(g/ml)混合均匀,于90℃提取3小时,得到提取液;将提取液于50℃、真空度-0.07mpa的条件下浓缩至相对密度为1.23的稠膏;将稠膏于40℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥24小时,粉碎,过80目筛,得到江南卷柏提取物。所述五谷虫虫体提取物的制备过程为:将五谷虫用质量分数为2%的双氧水溶液浸泡5分钟,五谷虫与双氧水溶液的固液比为1:200(g/ml);取出五谷虫,用质量分数为5%的盐酸水溶液浸泡8分钟,盐酸水溶液与双氧水溶液的体积比为2:1;取出五谷虫,用蒸馏水洗涤,蒸馏水与盐酸水溶液的体积比为3:1,得到消毒处理后的五谷虫;将消毒处理后的五谷虫与ph7.5的磷酸盐缓冲液以固液比1:1.5(g/ml)混合均匀,于25℃放置20分钟,使五谷虫排出分泌物,形成空腹状态;取出空腹的五谷虫,将含有五谷虫排泄物的混合液于0℃保留备用;将空腹的五谷虫置于-80℃放置12小时后,取出,在无菌条件下,采用冰冻切片机将其切成厚度为4μm的薄片;将薄片加入ph7.5的磷酸盐缓冲液,薄片与磷酸盐缓冲液的固液比为1:1(g/ml),以300转/分钟的转速搅拌15分钟,使五谷虫细胞裂解,得到五谷虫浆液;将五谷虫浆液与石油醚以体积比1:5混合均匀,于60℃提取2小时,得到提取液;将提取液以3000转/分钟的转速离心15分钟,取上清液;将上清液于50℃、真空度-0.08mpa的条件下干燥24小时,得到五谷虫虫体提取物。化妆品的制备,包括以下步骤:(1)将月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、小麦胚芽油、丙酸肉豆蔻醇酯、吐温-20和甘油加热到80℃,以500转/分钟的转速搅拌7分钟,得到混合液a;(2)将江南卷柏提取物、五谷虫虫体提取物、生长因子组合物和β-胡萝卜素加入到水中,以300转/分钟的转速搅拌4分钟,得到混合液b;(3)将混合液a冷却至40℃后,将混合液b加入到混合液a中,以200转/分钟的转速搅拌3分钟,得到混合液c;(4)将乳酸钠、海藻糖和山奈酚加入到混合液c中,以300转/分钟的转速搅拌2分钟,得到化妆品。实施例3化妆品的原料配方:生长因子组合物7wt%、江南卷柏提取物4wt%、小麦胚芽油5wt%、五谷虫虫体提取物6wt%、五谷虫排泄物提取物2wt%、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠8wt%、吐温-203wt%、β-胡萝卜素2wt%、丙酸肉豆蔻醇酯5wt%、甘油10wt%、乳酸钠1wt%、海藻糖2wt%、山奈酚0.15wt%、余量为水。所述生长因子组合物为碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的混合物,其中碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的质量比为1:1。所述江南卷柏提取物的制备过程为:将江南卷柏去根,用流动的水冲洗5分钟,去除泥沙等杂质;将江南卷柏于60℃干燥8小时后,采用中药粉碎机粉碎过30目筛,得到江南卷柏粉末;将江南卷柏粉末与体积分数为95%的乙醇水溶液以固液比1:7(g/ml)混合均匀,于90℃提取3小时,得到提取液;将提取液于50℃、真空度-0.07mpa的条件下浓缩至相对密度为1.23的稠膏;将稠膏于40℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥24小时,粉碎,过80目筛,得到江南卷柏提取物。所述五谷虫虫体提取物的制备过程为:将五谷虫用质量分数为2%的双氧水溶液浸泡5分钟,五谷虫与双氧水溶液的固液比为1:200(g/ml);取出五谷虫,用质量分数为5%的盐酸水溶液浸泡8分钟,盐酸水溶液与双氧水溶液的体积比为2:1;取出五谷虫,用蒸馏水洗涤,蒸馏水与盐酸水溶液的体积比为3:1,得到消毒处理后的五谷虫;将消毒处理后的五谷虫与ph7.5的磷酸盐缓冲液以固液比1:1.5(g/ml)混合均匀,于25℃放置20分钟,使五谷虫排出分泌物,形成空腹状态;取出空腹的五谷虫,将含有五谷虫排泄物的混合液于0℃保留备用;将空腹的五谷虫置于-80℃放置12小时后,取出,在无菌条件下,采用冰冻切片机将其切成厚度为4μm的薄片;将薄片加入ph7.5的磷酸盐缓冲液,薄片与磷酸盐缓冲液的固液比为1:1(g/ml),以300转/分钟的转速搅拌15分钟,使五谷虫细胞裂解,得到五谷虫浆液;将五谷虫浆液与石油醚以体积比1:5混合均匀,于60℃提取2小时,得到提取液;将提取液以3000转/分钟的转速离心15分钟,取上清液;将上清液于50℃、真空度-0.08mpa的条件下干燥24小时,得到五谷虫虫体提取物。所述五谷虫排泄物提取物的制备过程为:将含有五谷虫排泄物的混合液以2000转/分钟的转速离心30分钟,弃上清液,取沉淀;向沉淀中加入蒸馏水,沉淀与蒸馏水的固液比为1:(3-5)(g/ml),以400转/分钟的转速搅拌15分钟后,以3000转/分钟的转速离心20分钟,取底部固体;将底部固体于40℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥36小时,得到五谷虫排泄物提取物。化妆品的制备,包括以下步骤:(1)将月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、小麦胚芽油、丙酸肉豆蔻醇酯、吐温-20和甘油加热到80℃,以500转/分钟的转速搅拌7分钟,得到混合液a;(2)将江南卷柏提取物、五谷虫虫体提取物、五谷虫排泄物提取物、生长因子组合物和β-胡萝卜素加入到水中,以300转/分钟的转速搅拌4分钟,得到混合液b;(3)将混合液a冷却至40℃后,将混合液b加入到混合液a中,以200转/分钟的转速搅拌3分钟,得到混合液c;(4)将乳酸钠、海藻糖和山奈酚加入到混合液c中,以300转/分钟的转速搅拌2分钟,得到化妆品。实施例4化妆品的原料配方:生长因子组合物7wt%、江南卷柏提取物4wt%、小麦胚芽油5wt%、五谷虫虫体提取物6wt%、五谷虫排泄物提取物2wt%、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠8wt%、吐温-203wt%、采用耐辐射奇球菌发酵培养获得的β-胡萝卜素2wt%、丙酸肉豆蔻醇酯5wt%、甘油10wt%、乳酸钠1wt%、海藻糖2wt%、山奈酚0.15wt%、余量为水。所述生长因子组合物为碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的混合物,其中碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的质量比为1:1。所述江南卷柏提取物的制备过程为:将江南卷柏去根,用流动的水冲洗5分钟,去除泥沙等杂质;将江南卷柏于60℃干燥8小时后,采用中药粉碎机粉碎过30目筛,得到江南卷柏粉末;将江南卷柏粉末与体积分数为95%的乙醇水溶液以固液比1:7(g/ml)混合均匀,于90℃提取3小时,得到提取液;将提取液于50℃、真空度-0.07mpa的条件下浓缩至相对密度为1.23的稠膏;将稠膏于40℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥24小时,粉碎,过80目筛,得到江南卷柏提取物。所述五谷虫虫体提取物的制备过程为:将五谷虫用质量分数为2%的双氧水溶液浸泡5分钟,五谷虫与双氧水溶液的固液比为1:200(g/ml);取出五谷虫,用质量分数为5%的盐酸水溶液浸泡8分钟,盐酸水溶液与双氧水溶液的体积比为2:1;取出五谷虫,用蒸馏水洗涤,蒸馏水与盐酸水溶液的体积比为3:1,得到消毒处理后的五谷虫;将消毒处理后的五谷虫与ph7.5的磷酸盐缓冲液以固液比1:1.5(g/ml)混合均匀,于25℃放置20分钟,使五谷虫排出分泌物,形成空腹状态;取出空腹的五谷虫,将含有五谷虫排泄物的混合液于0℃保留备用;将空腹的五谷虫置于-80℃放置12小时后,取出,在无菌条件下,采用冰冻切片机将其切成厚度为4μm的薄片;将薄片加入ph7.5的磷酸盐缓冲液,薄片与磷酸盐缓冲液的固液比为1:1(g/ml),以300转/分钟的转速搅拌15分钟,使五谷虫细胞裂解,得到五谷虫浆液;将五谷虫浆液与石油醚以体积比1:5混合均匀,于60℃提取2小时,得到提取液;将提取液以3000转/分钟的转速离心15分钟,取上清液;将上清液于50℃、真空度-0.08mpa的条件下干燥24小时,得到五谷虫虫体提取物。所述五谷虫排泄物提取物的制备过程为:将含有五谷虫排泄物的混合液以2000转/分钟的转速离心30分钟,弃上清液,取沉淀;向沉淀中加入蒸馏水,沉淀与蒸馏水的固液比为1:(3-5)(g/ml),以400转/分钟的转速搅拌15分钟后,以3000转/分钟的转速离心20分钟,取底部固体;将底部固体于40℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥36小时,得到五谷虫排泄物提取物。采用耐辐射奇球菌发酵培养获得β-胡萝卜素的具体过程为:将耐辐射奇球菌菌种活化后,以2%v/v)的接种量转入培养基中,(即每升培养基中接种20ml的耐辐射奇球菌),的接种量转入培养基中,于30℃、ph6.0的条件下以150转/分钟的转速摇床培养36小时,得到菌液,其中所述培养基的组成为:豆饼粉28g/l、葡萄糖3g/l、硝酸钠1.5g/l,余量为水;将菌液以4000转/分钟的转速离心15分钟,取沉淀ⅰ;向沉淀ⅰ中加入蒸馏水,沉淀ⅰ与蒸馏水的固液比为1:80(g/ml),以4000转/分钟的转速离心10分钟,取沉淀ⅱ,得到洗涤后的菌体;向洗涤后的菌体中加入甲醇,菌体与甲醇的固液比为1:100(g/ml),于25℃以300转/分钟的转速搅拌25分钟,得到混合液;将混合液以3000转/分钟的转速离心20分钟后,取上清液;向上清液加入氯仿和水进行萃取,上清液:氯仿:水的体积比为5:3:1,取下层萃取液;将下层萃取液于50℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥30小时,即得。化妆品的制备,包括以下步骤:(1)将月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、小麦胚芽油、丙酸肉豆蔻醇酯、吐温-20和甘油加热到80℃,以500转/分钟的转速搅拌7分钟,得到混合液a;(2)将江南卷柏提取物、五谷虫虫体提取物、五谷虫排泄物提取物、生长因子组合物和采用耐辐射奇球菌发酵培养获得的β-胡萝卜素加入到水中,以300转/分钟的转速搅拌4分钟,得到混合液b;(3)将混合液a冷却至40℃后,将混合液b加入到混合液a中,以200转/分钟的转速搅拌3分钟,得到混合液c;(4)将乳酸钠、海藻糖和山奈酚加入到混合液c中,以300转/分钟的转速搅拌2分钟,得到化妆品。实施例5化妆品的原料配方:生长因子组合物7wt%、江南卷柏提取物4wt%、小麦胚芽油5wt%、五谷虫虫体提取物6wt%、五谷虫排泄物提取物2wt%、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠8wt%、吐温-203wt%、采用耐辐射奇球菌发酵培养获得的β-胡萝卜素2wt%、丙酸肉豆蔻醇酯5wt%、甘油10wt%、乳酸钠1wt%、海藻糖2wt%、积雪草甙0.15wt%、余量为水。所述生长因子组合物为碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的混合物,其中碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的质量比为1:1。所述江南卷柏提取物的制备过程为:将江南卷柏去根,用流动的水冲洗5分钟,去除泥沙等杂质;将江南卷柏于60℃干燥8小时后,采用中药粉碎机粉碎过30目筛,得到江南卷柏粉末;将江南卷柏粉末与体积分数为95%的乙醇水溶液以固液比1:7(g/ml)混合均匀,于90℃提取3小时,得到提取液;将提取液于50℃、真空度-0.07mpa的条件下浓缩至相对密度为1.23的稠膏;将稠膏于40℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥24小时,粉碎,过80目筛,得到江南卷柏提取物。所述五谷虫虫体提取物的制备过程为:将五谷虫用质量分数为2%的双氧水溶液浸泡5分钟,五谷虫与双氧水溶液的固液比为1:200(g/ml);取出五谷虫,用质量分数为5%的盐酸水溶液浸泡8分钟,盐酸水溶液与双氧水溶液的体积比为2:1;取出五谷虫,用蒸馏水洗涤,蒸馏水与盐酸水溶液的体积比为3:1,得到消毒处理后的五谷虫;将消毒处理后的五谷虫与ph7.5的磷酸盐缓冲液以固液比1:1.5(g/ml)混合均匀,于25℃放置20分钟,使五谷虫排出分泌物,形成空腹状态;取出空腹的五谷虫,将含有五谷虫排泄物的混合液于0℃保留备用;将空腹的五谷虫置于-80℃放置12小时后,取出,在无菌条件下,采用冰冻切片机将其切成厚度为4μm的薄片;将薄片加入ph7.5的磷酸盐缓冲液,薄片与磷酸盐缓冲液的固液比为1:1(g/ml),以300转/分钟的转速搅拌15分钟,使五谷虫细胞裂解,得到五谷虫浆液;将五谷虫浆液与石油醚以体积比1:5混合均匀,于60℃提取2小时,得到提取液;将提取液以3000转/分钟的转速离心15分钟,取上清液;将上清液于50℃、真空度-0.08mpa的条件下干燥24小时,得到五谷虫虫体提取物。所述五谷虫排泄物提取物的制备过程为:将含有五谷虫排泄物的混合液以2000转/分钟的转速离心30分钟,弃上清液,取沉淀;向沉淀中加入蒸馏水,沉淀与蒸馏水的固液比为1:(3-5)(g/ml),以400转/分钟的转速搅拌15分钟后,以3000转/分钟的转速离心20分钟,取底部固体;将底部固体于40℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥36小时,得到五谷虫排泄物提取物。采用耐辐射奇球菌发酵培养获得β-胡萝卜素的具体过程为:将耐辐射奇球菌菌种活化后,以2%(v/v)的接种量转入培养基中,(即每升培养基中接种20ml的耐辐射奇球菌),于30℃、ph6.0的条件下以150转/分钟的转速摇床培养36小时,得到菌液,其中所述培养基的组成为:豆饼粉28g/l、葡萄糖3g/l、硝酸钠1.5g/l,余量为水;将菌液以4000转/分钟的转速离心15分钟,取沉淀ⅰ;向沉淀ⅰ中加入蒸馏水,沉淀ⅰ与蒸馏水的固液比为1:80(g/ml),以4000转/分钟的转速离心10分钟,取沉淀ⅱ,得到洗涤后的菌体;向洗涤后的菌体中加入甲醇,菌体与甲醇的固液比为1:100(g/ml),于25℃以300转/分钟的转速搅拌25分钟,得到混合液;将混合液以3000转/分钟的转速离心20分钟后,取上清液;向上清液加入氯仿和水进行萃取,上清液:氯仿:水的体积比为5:3:1,取下层萃取液;将下层萃取液于50℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥30小时,即得。化妆品的制备,包括以下步骤:(1)将月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、小麦胚芽油、丙酸肉豆蔻醇酯、吐温-20和甘油加热到80℃,以500转/分钟的转速搅拌7分钟,得到混合液a;(2)将江南卷柏提取物、五谷虫虫体提取物、五谷虫排泄物提取物、生长因子组合物和采用耐辐射奇球菌发酵培养获得的β-胡萝卜素加入到水中,以300转/分钟的转速搅拌4分钟,得到混合液b;(3)将混合液a冷却至40℃后,将混合液b加入到混合液a中,以200转/分钟的转速搅拌3分钟,得到混合液c;(4)将乳酸钠、海藻糖和积雪草苷加入到混合液c中,以300转/分钟的转速搅拌2分钟,得到化妆品。实施例6化妆品包括以下原料:生长因子组合物7wt%、江南卷柏提取物4wt%、小麦胚芽油5wt%、五谷虫虫体提取物6wt%、五谷虫排泄物提取物2wt%、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠8wt%、吐温-203wt%、采用耐辐射奇球菌发酵培养获得的β-胡萝卜素2wt%、丙酸肉豆蔻醇酯5wt%、甘油10wt%、乳酸钠1wt%、海藻糖2wt%、山奈酚0.12wt%、积雪草甙0.03wt%、余量为水。所述生长因子组合物为碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的混合物,其中碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的质量比为1:1。所述江南卷柏提取物的制备过程为:将江南卷柏去根,用流动的水冲洗5分钟,去除泥沙等杂质;将江南卷柏于60℃干燥8小时后,采用中药粉碎机粉碎过30目筛,得到江南卷柏粉末;将江南卷柏粉末与体积分数为95%的乙醇水溶液以固液比1:7(g/ml)混合均匀,于90℃提取3小时,得到提取液;将提取液于50℃、真空度-0.07mpa的条件下浓缩至相对密度为1.23的稠膏;将稠膏于40℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥24小时,粉碎,过80目筛,得到江南卷柏提取物。所述五谷虫虫体提取物的制备过程为:将五谷虫用质量分数为2%的双氧水溶液浸泡5分钟,五谷虫与双氧水溶液的固液比为1:200(g/ml);取出五谷虫,用质量分数为5%的盐酸水溶液浸泡8分钟,盐酸水溶液与双氧水溶液的体积比为2:1;取出五谷虫,用蒸馏水洗涤,蒸馏水与盐酸水溶液的体积比为3:1,得到消毒处理后的五谷虫;将消毒处理后的五谷虫与ph7.5的磷酸盐缓冲液以固液比1:1.5(g/ml)混合均匀,于25℃放置20分钟,使五谷虫排出分泌物,形成空腹状态;取出空腹的五谷虫,将含有五谷虫排泄物的混合液于0℃保留备用;将空腹的五谷虫置于-80℃放置12小时后,取出,在无菌条件下,采用冰冻切片机将其切成厚度为4μm的薄片;将薄片加入ph7.5的磷酸盐缓冲液,薄片与磷酸盐缓冲液的固液比为1:1(g/ml),以300转/分钟的转速搅拌15分钟,使五谷虫细胞裂解,得到五谷虫浆液;将五谷虫浆液与石油醚以体积比1:5混合均匀,于60℃提取2小时,得到提取液;将提取液以3000转/分钟的转速离心15分钟,取上清液;将上清液于50℃、真空度-0.08mpa的条件下干燥24小时,得到五谷虫虫体提取物。所述五谷虫排泄物提取物的制备过程为:将含有五谷虫排泄物的混合液以2000转/分钟的转速离心30分钟,弃上清液,取沉淀;向沉淀中加入蒸馏水,沉淀与蒸馏水的固液比为1:(3-5)(g/ml),以400转/分钟的转速搅拌15分钟后,以3000转/分钟的转速离心20分钟,取底部固体;将底部固体于40℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥36小时,得到五谷虫排泄物提取物。采用耐辐射奇球菌发酵培养获得β-胡萝卜素的具体过程为:将耐辐射奇球菌菌种活化后,以2%(v/v)的接种量转入培养基中,(即每升培养基中接种20ml的耐辐射奇球菌),于30℃、ph6.0的条件下以150转/分钟的转速摇床培养36小时,得到菌液,其中所述培养基的组成为:豆饼粉28g/l、葡萄糖3g/l、硝酸钠1.5g/l,余量为水;将菌液以4000转/分钟的转速离心15分钟,取沉淀ⅰ;向沉淀ⅰ中加入蒸馏水,沉淀ⅰ与蒸馏水的固液比为1:80(g/ml),以4000转/分钟的转速离心10分钟,取沉淀ⅱ,得到洗涤后的菌体;向洗涤后的菌体中加入甲醇,菌体与甲醇的固液比为1:100(g/ml),于25℃以300转/分钟的转速搅拌25分钟,得到混合液;将混合液以3000转/分钟的转速离心20分钟后,取上清液;向上清液加入氯仿和水进行萃取,上清液:氯仿:水的体积比为5:3:1,取下层萃取液;将下层萃取液于50℃、真空度-0.06mpa的条件下干燥30小时,即得。化妆品的制备,包括以下步骤:(1)将月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、小麦胚芽油、丙酸肉豆蔻醇酯、吐温-20和甘油加热到80℃,以500转/分钟的转速搅拌7分钟,得到混合液a;(2)将江南卷柏提取物、五谷虫虫体提取物、五谷虫排泄物提取物、生长因子组合物和采用耐辐射奇球菌发酵培养获得的β-胡萝卜素加入到水中,以300转/分钟的转速搅拌4分钟,得到混合液b;(3)将混合液a冷却至40℃后,将混合液b加入到混合液a中,以200转/分钟的转速搅拌3分钟,得到混合液c;(4)将乳酸钠、海藻糖、山奈酚和积雪草苷加入到混合液c中,以300转/分钟的转速搅拌2分钟,得到化妆品。测试例1对实施例1-6的化妆品的祛皱性能进行评价,以皮肤弹性为测试指标。皮肤弹性的测定采用吸力法,以恒定负压模式,即测试探头在皮肤表面施加负压将皮肤吸入探针孔,负压消失后皮肤形变恢复,皮肤形变随负压和时间变化可通过测试仪中发射光和接受光的装置测得,该装置可反映皮肤被吸入深度,这样可得到皮肤拉伸长度随时间变化的曲线图,用uf表示皮肤最大拉伸量,ue表示恒定负压加到皮肤上0.1秒时皮肤的拉伸量,ur表示无负压0.1s后皮肤恢复量,uv=uf-ue黏弹性部分,ua表示取消负压到下次连续测试再加负压皮肤的恢复量,r2=ua/uf,r2为一个反映皮肤弹力的参数,r2值越大则皮肤弹性越好,越接近1弹性越好。选择年龄40-60岁的受试者,男女各半,随机分成6组,每组30名。受试者具有皱纹、皮肤松弛或者皮肤干燥等皮肤衰老现象。受试者无严重系统疾病,无活动性过敏性疾病,也没有接受过皮肤治疗、美容以及其他可能影响结果的测试。受试者试验部位测试前2天不能使用任何化妆品或者外用药品。受试者在性别、年龄、病情等方面无显著差异(p>0.05),具有可比性。试验方法:在涂抹化妆品前,受试者使用相同的温和清洁剂清洗脸部,在受试者脸部左右两侧对称位置选择5×5cm2大小的方块区域作为试验区域,在脸部左侧涂抹约0.5g本发明的化妆品,在脸部右侧涂抹等量的蒸馏水,早晚各一次,每天使用,避免室外曝晒。在使用本发明的化妆品之前,在试验区域用皮肤弹性测试仪(德国ck公司提供,型号为mpa580)检测试验区域弹性值;在涂抹30天后再次分别检测试验区域弹性值。每个试验区域检测5次弹性r2,并取其平均值。具体测试结果见表1。表1:皮肤弹性测试数据表弹性值使用前0.65实施例10.68实施例20.72实施例30.75实施例40.78实施例50.79实施例60.82测试例2对实施例1-6的化妆品的保湿效果进行评定,参照qb/t4256-2011化妆品保湿功效评价指南进行。测试仪器采用西化仪(北京)科技有限公司提供的型号为ry0-1的皮肤水分测定仪。测试环境条件:20-22℃,湿度40-60%。选择年龄40-60岁的受试者,男女各半,随机分成6组,每组30名。受试者具有皱纹、皮肤松弛或者皮肤干燥等皮肤衰老现象。受试者无严重系统疾病,无活动性过敏性疾病,也没有接受过皮肤治疗、美容以及其他可能影响结果的测试。受试者试验部位测试前2天不能使用任何化妆品或者外用药品。受试者在性别、年龄、病情等方面无显著差异(p>0.05),具有可比性。在受试者两侧脸颊均匀标记5处标记直径为25mm的圆形试验区域,在每个试验区域涂抹化妆品100μl,使用乳胶指套将化妆品均匀涂布于试验区域内。按皮肤分析测试仪的使用说明调整仪器后,进行试验区域的测量,先测量试验区域的初始值(使用化妆品前),然后再测试使用化妆品1小时后受试区域的皮肤水分含量。每个试验区域平行测定3次,测试结果取其平均值。按照下列公式计算皮肤水分含量增长率:φ=(mmvo-mmvt)/mmvo*100%,其中φ为皮肤水分增长率;mmvo为涂抹前皮肤的含水量;mmvt为涂抹1小时后皮肤的含水量。表2:保湿效果试验结果表从上述数据可以看出,实施例2的化妆品抗皱效果和保湿效果优于实施例1,这大概是因为实施例2在五谷虫虫体提取物的制备过程中,将冰冻的虫体切成薄片,能够有效的破坏虫体的细胞壁,使虫体细胞中的大量活性物质能够充分释放,同时冰冻状态下切割保证了虫体中活性物质的活性,提高了虫体提取物修复受损损伤细胞的能力。实施例3将五谷虫虫体提取物和五谷虫排泄物提取物配合使用,达到很好的效果,这可能是因为五谷虫分泌物提取物中含有胶原酶、类胰蛋白酶、类糜蛋白酶,能够促使皮肤表皮的坏死组织分解,此外分泌物中还含有抗菌肽;而虫体提取物含有促损伤修复的细胞因子/生长因子,能够促进成纤维细胞产生胶原和纤维蛋白。实施例4采用从耐辐射奇球菌中获得的类胡萝卜素,该类胡萝卜素具有降低紫外光等放射线对机体组织损伤的能力,同时有效的抑制单线态氧和自由基的活性,保护细胞免受损害,促进上皮细胞代谢,具有抗辐射、防止皮肤氧化衰老的功能。以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解,本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此,凡本
技术领域
中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案,皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。当前第1页12
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