本发明涉及一种具有补肾健骨功能，能抗骨质疏松的牛大力中药组合物及其具体的制备方法。
背景技术：
骨质疏松(op)是一种以低骨量和骨组织微结构破坏为特征，导致骨质脆性增加和易于骨折的全身性骨代谢性疾病。在多数骨质疏松中，骨组织的减少主要由于骨质吸收增多所致。以骨痛及腰背痛、驼背、易发骨折为三大主要症状，随着人口老龄化的日趋明显，骨质疏松症的患病率日益升高，故如何防治骨质疏松症已经成为近几年医药界研究的热点。目前，西药治疗骨质疏松症的方法主要有抗吸收疗法、合成代谢疗法和促进骨矿化法，但西药治疗在不同程度上存在着远期疗效不理想，副作用大，药品价格昂贵等缺点，而中药治疗效果明显且副作用小，故近年来，中药治疗骨质疏松症越来越引起人们的重视。
中药的一般提取方法为饮片直接煎煮或粗粉碎后溶剂提取，这些提取方法对设备要求低，但提取所需时间较长，且胞壁内的成分较难提取出来，导致有效成分提取率低，而药材经过超微粉碎后则可以改善上述情况。超微粉碎是近年来国际上发展非常迅速的一项新技术，与一般粉碎相比，颗粒更小，粒径能达到0.1～10μm。中药材经过超微粉碎后，粒度均匀细密，细胞壁破碎，细胞破壁率能达到95％以上，有利于药材中有效成分的溶出，使药材有效成分的提取率大大增加，同时能缩短提取时间，减少溶剂的使用和浪费。
本发明提供的是一种具有补肾健骨功能的牛大力中药组合物及其制备方法。目前能有效缓解或治疗骨质疏松症的药物或保健食品并不多，而本发明组合物在中医药理论的指导下，科学配方，能明显缓解患者的痛苦，提高中老年人的生活质量，值得应用推广。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种具有补肾健骨功能的中药组合物及其制备方法，该组合物由下列重量份的原料药制成：
牛大力10-30份、杜仲10-30份、淫羊藿5-25份、菟丝子5-25份、丹参5-25份、葛根5-15份、低聚果糖5-10份、葡萄糖酸钙0.05-2.0份。
本发明组合物的原料药的重量份比优选为：
牛大力10份、杜仲10份、淫羊藿5份、菟丝子5份、丹参5份、葛根5份、低聚果糖5份、葡萄糖酸钙0.05份。
本发明组合物的原料药的重量份比还优选为：
牛大力20份、杜仲20份、淫羊藿15份、菟丝子15份、丹参15份、葛根10份、低聚果糖7份、葡萄糖酸钙1.0份。
本发明组合物的原料药的重量份比还优选为：
牛大力30份、杜仲30份、淫羊藿25份、菟丝子25份、丹参25份、葛根15份、低聚果糖10份、葡萄糖酸钙2.0份。
本发明中药组合物主要由以下几个步骤组成：
(1)将牛大力、杜仲、淫羊藿、菟丝子、丹参和葛根净选，干燥，按所需原料药重量比例称取；
(2)将称量好的中药材放入超微粉碎机中粉碎，收集微粉(过300目)，备用；
(3)将步骤(2)所得微粉放入中药多功能提取罐中，加入8-10倍量的水，加热提取1-3次，每次0.5-2h，过滤，收集滤液，合并；
(4)将滤液加热浓缩成稠浸膏，减压干燥成块(水分≤5％)，粉碎，收集细粉；
(5)将步骤(4)所得细粉与所需的低聚果糖、葡萄糖酸钙混合均匀，即得。
其中，本发明组合物的剂型为口服粉末、片剂、胶囊剂或颗粒剂。
现代中医从辨证角度分析骨质疏松，认为本病的病因、病机归纳为肾虚、脾虚与血瘀，所以临床上对骨质疏松症的治疗应以温补肾阳、强筋壮骨、填精生髓为主，兼以益气养血、祛风散寒除湿、通络止痛为主。
牛大力，为豆科蝶形花亚科崖豆藤属植物美丽崖豆藤的干燥根，又称山莲藕、血藤、甜牛大力、大力薯等，味甘性平，具补虚润肺、强筋活络之效。牛大力在两广地区被广泛用作煲汤原料、制作药膳、药酒等，补腰肾、强筋骨功效显著。临床上对腰肌劳损、风湿性关节炎、肺结核、慢性支气管炎等慢性疾病和铁打损伤、遗精、白带等均有一定疗效。
杜仲，是杜仲科杜仲属多年生落叶乔木杜仲树的干燥树皮，具有补肝强肾、强筋健骨的功效，其含有的化学成分主要为木脂素类、环烯醚萜类、黄酮类、苯丙素类、萜类和多糖类等。现代药理研究证明杜仲具有降血压、降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗炎、抗氧化、保肝护肾、抗骨质疏松等作用。其抗骨质疏松机制为刺激成骨细胞增殖、分化和成熟并抑制破骨细胞生长；促进骨髓间充质细胞的增殖；促进矿物质化，增加骨密度，改善骨小梁微体结构。
淫羊藿，性温，味甘、辛，以补肾阳、强筋骨、祛风湿为主要功效，为传统的补肾壮阳类中药。其主要有效成分为多糖和黄酮，具有广泛的药理作用，能促进造血功能，抑制心肌收缩力，改善脑缺血缺氧，提高免疫功能和调节骨代谢等。其抗骨质疏松症作用的主要机制是抑制破骨细胞的活性，促进成骨细胞功能，使机体骨代谢处于骨形成大于骨吸收的正平衡状态，从而抑制骨量丢失，而达到治疗和预防骨质疏松症的目的。
菟丝子，为一年生寄生性草本，旋花科，属植物的成熟种子，又称为龙须子、吐丝子，辛、甘，平，归肝、肾、脾经，具有补肾益肝、固精缩尿、安胎、明目、止泻等功效。主要含黄酮类、多糖类、生物碱类、挥发油类和氨基酸类等化学成分，对生殖系统，免疫系统，肝脏，血糖血脂，骨和软骨具有一定的调节作用。细胞实验已证实用菟丝子提取液体外培养成骨细胞，能提高成骨细胞的基质钙，促进增殖和提高碱性磷酸酶的活性，同时抑制破骨细胞的生存率并可诱导其凋亡，起到抑制骨质疏松的作用。
丹参，性微寒，味苦、辛，具有活血化瘀、凉血消痈、除烦安神等功效，是中医临床传统的活血调经药。丹参常作为辅助药物出现在治疗骨质疏松症的处方中，依据中医理论主要应用其活血化瘀的功效，在补肾健脾的基础上进行活血化瘀，通络止痛，能更好地治疗由于肾虚而导致的瘀血，同时缓解因骨质疏松症产生的骨痛症状。其成分主要为脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹酚酸类，现代药理学实验结果表明，丹参能促进骨细胞样细胞成熟，加速骨折愈合，并增加骨干重量。
葛根，系豆科植物野葛或粉葛的干燥根，始载于《神农本草经》，甘、辛，凉，有解肌退热，透疹，生津止渴，升阳止泻之功。葛根中含有一种异黄酮类成分，称为葛根素，是一种植物雌激素，能够刺激碱性磷酸酶(alt)活性，提高丝裂原活化蛋白激酶(mapk)水平，对破骨细胞骨吸收功能具有直接抑制作用，防止骨密度和骨矿含量降低，具有一定的抗骨质疏松的作用。
低聚果糖是一种典型的益生元，具有优良的理化特性和生理功效，可增殖肠道中的双歧杆菌，改善肠道菌群；润肠通便；降低血液中的脂质和胆固醇的含量，改善脂质代谢；抑制肠道中腐败物质的产生，促进钙镁等矿质元素的吸收；增强机体免疫力，降低患癌风险，在食品、保健品、饲料等行业中得到了广泛应用。
葡萄糖酸钙，为无臭，无味，白色晶体或颗粒性粉末，主要用作食品的钙强化剂与营养剂和鳌合剂等。能防止低血ca2+，控制手足搐搦病的发作，也可用于荨麻疹、急性湿疹、皮炎等的止痒，保持机体内钙离子的平衡。
本发明组合物主要由牛大力、杜仲、淫羊藿、菟丝子、丹参、葛根等组成，是在中医药传统理论的基础上，结合民间用药经验和科学的理论配制而成。组方严谨、药少力专，诸药合用能发挥中药复方的整体调节优势，具有补肾、强健筋骨的功效，对骨质疏松、腰膝酸痛、病后虚弱、酸软无力等症状有良好的疗效。
具体实施方式
下面结合实施例，进一步说明本发明的技术方案。
以下实施例中所使用的原料购自广州市清平药材市场。
实施例1
处方：
牛大力10份、杜仲10份、淫羊藿5份、菟丝子5份、丹参5份、葛根5份、低聚果糖5份、葡萄糖酸钙0.05份。
制备方法：
(1)将牛大力、杜仲、淫羊藿、菟丝子、丹参和葛根净选，干燥，按所需原料药重量比例称取；
(2)将称量好的中药材放入超微粉碎机中粉碎，收集微粉(过300目)，备用；
(3)将步骤(2)所得微粉放入中药多功能提取罐中，加入8-10倍量的水，加热提取1-3次，每次0.5-2h，过滤，收集滤液，合并；
(4)将滤液加热浓缩成稠浸膏，减压干燥成块(水分≤5％)，粉碎，收集细粉；
(5)将步骤(4)所得细粉与所需的低聚果糖、葡萄糖酸钙混合均匀，即得。
实施例2
处方：
牛大力20份、杜仲20份、淫羊藿15份、菟丝子15份、丹参15份、葛根10份、低聚果糖7份、葡萄糖酸钙1.0份。
制备方法：
(1)将牛大力、杜仲、淫羊藿、菟丝子、丹参和葛根净选，干燥，按所需原料药重量比例称取；
(2)将称量好的中药材放入超微粉碎机中粉碎，收集微粉(过300目)，备用；
(3)将步骤(2)所得微粉放入中药多功能提取罐中，加入8-10倍量的水，加热提取1-3次，每次0.5-2h，过滤，收集滤液，合并；
(4)将滤液加热浓缩成稠浸膏，减压干燥成块(水分≤5％)，粉碎，收集细粉；
(5)将步骤(4)所得细粉与所需的低聚果糖、葡萄糖酸钙混合均匀，即得。
实施例3
处方：
牛大力30份、杜仲30份、淫羊藿25份、菟丝子25份、丹参25份、葛根15份、低聚果糖10份、葡萄糖酸钙2.0份。
制备方法：
(1)将牛大力、杜仲、淫羊藿、菟丝子、丹参和葛根净选，干燥，按所需原料药重量比例称取；
(2)将称量好的中药材放入超微粉碎机中粉碎，收集微粉(过300目)，备用；
(3)将步骤(2)所得微粉放入中药多功能提取罐中，加入8-10倍量的水，加热提取1-3次，每次0.5-2h，过滤，收集滤液，合并；
(4)将滤液加热浓缩成稠浸膏，减压干燥成块(水分≤5％)，粉碎，收集细粉；
(5)将步骤(4)所得细粉与所需的低聚果糖、葡萄糖酸钙混合均匀，即得。
为了证实本发明中药组合物具有补肾健骨的疗效，用按实施例1方法制得的微粉，进行了一下试验研究：
1实验材料
1.1实验动物：采用6月龄wistar大鼠60只，雌性，spf级，体重(300±20)g，由广东省实验动物中心提供。
1.2实验药品：供试品：牛大力中药组合物微粉制成灌胃所需剂量的溶液，戊酸雌二醇(浙江仙琚制药股份有限公司)，盐酸四环素(上海刘氏医药科技有限公司)，10％水合氯醛溶液，青霉素(80万u/支，华北制药股份有限公司)。
2实验方法
2.1动物分组实验前所有动物适应性喂养10d，将60只大鼠按照随机数字表法分为两组：一组为空白对照组10只，另一组为造模组50只。造模成功后再将其随机分为5组，即模型对照组10只，补肾健骨组合物高剂量组10只，补肾健骨组合物中剂量组10只，补肾健骨组合物低剂量组10只，雌激素组10只。
2.2动物造模造模组50只大鼠均以10％水合氯醛溶液3ml/kg腹腔注射麻醉后，俯卧位固定在实验手术台上，在背部手术切口处脱毛，用碘伏局部消毒皮肤后，经背部正中切口入路切除双侧卵巢后，逐层关闭，缝合切口。酒精消毒后，术后连用3d臀肌注射青霉素预防感染，术后继续常规喂养3个月。术后第2天连续3d做阴道细胞涂片，经证实卵巢切除完全，去卵巢大鼠骨质疏松模型成功建立。
2.3动物给药造模成功后4d开始，进入灌胃阶段，补肾健骨组合物低剂量组用成人常规剂量按人鼠体型系数换算成等效剂量的1倍，中剂量组以2倍计算，高剂量组以4倍计算，以1ml/100g的量计算出灌胃液体剂量，制成浓缩液于相应组灌胃；雌激素组给予戊酸雌二醇按人鼠等效剂量按每天90μg/kg灌胃。正常对照组和模型对照组以等剂量生理盐水灌胃。所有大鼠在处死前15d进行第1次荧光标记，盐酸四环素每天30mg/kg，腹腔注射，连续2d。处死大鼠前3d，进行第2次标记，方法同上。各药物剂量均按照人鼠体表面积换算法进行折算。
3指标检测
3.1骨密度(bmd)测定用双能x线bmd测量仪测定大鼠股骨及腰椎bmd。
3.2骨生物力学测定股骨三点弯曲试验：采用三点弯曲法测定股骨骨生物力学，测定时跨度20mm，以10mm/min加载速率下压胫骨中段，直至股骨发生断裂。由力学实验测试机自带软件记录载荷变形曲线和分析数据，记录载荷-位移曲线，计算弹性模量、最大载荷、屈服强度等骨生物力学指标。
3.3骨矿物盐含量测定将大鼠股骨放入烤箱，105℃烤干至恒重后称量为干重，烤干后的样品放入灰化炉650℃灰化36h，取出称量为灰分重量，矿盐含量为灰分重量与干重之比。
3.4统计学方法应用spss17.0统计软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差
4实验结果
4.1各组大鼠左侧股骨bmd值和骨矿盐含量比较与空白对照组相比，模型对照组股骨bmd值有明显下降，说明去除卵巢后大鼠bmd及骨矿盐含量明显下降，差异有统计学意义(p＜0.05)。与模型对照组相比，补肾健骨组合物中高剂量组与雌激素组的bmd及骨矿盐含量均有明显提高，补肾健骨组合物高剂量组与雌激素组差异无统计学意义(p＞0.05)。见表1。
表1各组大鼠左侧股骨bmd值和骨矿盐含量比较
4.2各组大鼠右侧股骨生物力学指标测定结果比较模型对照组与空白对照组相比，大鼠股骨的弹性模量、最大载荷、屈服强度下降，差异有统计学意义(p＜0.05)。这说明大鼠切除卵巢后，生物力学性能均有下降。补肾健骨组合物中高剂量组和模型对照组相比，各项生物力学指标均有不同程度的改善，差异有统计学意义(p＜0.05)，与空白对照组相比差异无统计学意义(p＞0.05)。这说明大鼠在切除卵巢后随着骨质含量的不断减少，骨生物力学性能下降；应用补肾健骨组合物进行治疗后，可使其骨生物力学性能得到改善。见表2。
表2各组大鼠右侧股骨生物力学指标测定结果比较
5实验结论
实验结果表明，去卵巢后大鼠的骨密度、骨矿盐含量、弹性模量、最大载荷和屈服强度均有明显下降，但灌胃给予补肾健骨组合物后，上述指标均有所上升。给予中高剂量组合物的组别，其指标甚至与空白对照组无显著性差异，说明补肾健骨组合物在一定程度上可阻止去卵巢大鼠骨量丢失，其机制与降低骨转换水平，抑制骨吸收的同时促进骨形成进而维持骨量有关，有良好的抗骨质疏松的作用。