本申请是2011年7月14日提交的发明名称为“治疗或预防细菌性阴道病的方法”的中国专利申请201180072322.1的分案申请。
本发明涉及治疗或预防细菌性阴道病、或者减轻或预防细菌性阴道病的一种或多种症状的方法。也描述了预防细菌性阴道病的复发的方法。
背景技术：
细菌性阴道病(bv)是世界上最常见的阴道感染，并且是阴道刺激、排出物和恶臭的最常见原因。据估测，bv在美国的发病率是约30％，在撒哈拉大沙漠以南非洲是44％，在澳大利亚是约10％。bv与严重健康问题有关，所述严重健康问题诸如足月前分娩、手术后感染以及增加的对hiv和其它性传播的感染的易感性。
尽管已经研究了bv许多年，它的原因仍然不明，并且可利用的治疗不是总是有效的。bv的特征在于阴道菌群的失衡，其中在正常情况下丰富的产生过氧化物的乳杆菌属(lactobacillusspp.)是稀少的，并且诸如阴道加德那菌(gardnerellavaginalis)、活动弯曲杆菌属(mobiluncusspp.)、阴道奇异菌(atopobiumvaginae)和普雷沃氏菌属(prevotellaspp.)等其它厌氧性细菌是丰富的。
目前为bv的治疗推荐的治疗包括甲硝唑、克林霉素和替硝唑。但是，这些治疗正在因为抗药菌而效力变小，并且还具有显著的副作用。甲硝唑和替硝唑具有致癌的潜在风险，并且还会造成恶心、腹部痛性痉挛、呕吐、头痛和潮红(如果在治疗期间饮酒)或在治疗后持续达3天。在bv的抗生素治疗期间，也存在诸如白色念珠菌(candidaalbicans)(鹅口疮)的真菌感染的高发病率。此外，克林霉素乳膏剂用矿物油配制，所述矿物油不适合与胶乳避孕套或其它橡胶产品(诸如隔膜)一起使用，并因此可能需要在治疗期间节制性交，以避免妊娠和/或感染性伴侣。需要这样的治疗：其不会被全身吸收，并且也使全身或局部不良作用最小化，并且与诸如避孕套等避孕装置相容。
一些公认的治疗bv的困难是，当前的抗生素治疗并非总是区分在正常情况下存在于健康阴道菌群中的细菌和感染性厌氧菌，并且并非所有存在的厌氧菌一定对同一种抗生素敏感。需要这样的bv治疗：其对不希望的细菌的活性具有某种选择性，并且对正常阴道菌群不具有活性或具有低活性。具体地，需要这样的治疗：其降低有害的革兰氏阴性细菌的水平，同时不会抑制产生过氧化氢的乳酸杆菌的重建。
另一个困难是，在治疗以后，bv经常复发。基于最近的临床试验的结果，约2/3的患者遭受bv的多次发作。由于bv在美国的发病率是约30％，这意味着，20％的美国妇女具有复发性bv。此外，使用抗生素的复发治疗会导致耐抗生素细菌发生率增加和治疗有效性降低。目前没有被美国食品和药品管理局批准用于预防bv复发的推荐治疗剂。因此，需要用于预防bv复发的治疗。
技术实现要素：
本发明至少部分地基于下述发现：树枝状高分子杀微生物剂对厌氧性细菌(诸如阴道加德那菌)具有选择性的抗菌活性，同时对正常阴道乳杆菌属菌群不具有或具有低抗菌活性。还观察到，当以40-100mg/天的量以单次剂量施用时，树枝状高分子杀微生物剂具有特殊活性。
在第一方面，提供治疗或预防个体的bv的方法，所述方法包括：向所述个体施用有效量的大分子，所述大分子包含1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺(polyamidoamine)树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(亚丙基亚胺)(poly(propyleneimine))树枝状高分子和一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至所述树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基，其中所述有效量是40-100mg大分子/天。
在一个特定实施方案中，所述有效量是40-60mg/天。在某些实施方案中，通过阴道给药施用所述大分子。
在本发明的另一个方面，提供减轻或预防个体中的bv的一种或多种症状和/或bv的一种或多种诊断标准的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的大分子，所述大分子包含1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(亚丙基亚胺)树枝状高分子和一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至所述树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基，其中所述一种或多种症状和诊断标准选自：
i)nugent评分，
ii)线索细胞，
iii)胺臭味试验，
iv)阴道排出物，
v)阴道ph，和
vi)恶臭。
在某些实施方案中，两种或更多种症状和/或诊断标准被减轻。在某些实施方案中，三种或更多种症状和/或诊断标准被减轻。
在本发明的另一个方面，提供预防或减少bv在个体中复发的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的大分子，所述大分子包含1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(亚丙基亚胺)树枝状高分子和一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至所述树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基，其中每周施用所述有效量1-7次。
在某些实施方案中，所述施用是3-4天/周，诸如隔日施用。在某些实施方案中，所述施用持续延长的时段，例如，一或多个月或者一或多年，诸如多达25年。例如，在某些实施方案中，施用会持续1、5、10、15或20年。
在另一个方面，提供在治疗bv的过程中或以后降低真菌感染或其它微生物感染在个体中的发病率的方法，所述方法包括：通过向所述个体施用有效量的大分子来治疗所述bv，所述大分子包含1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(亚丙基亚胺)树枝状高分子和一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至所述树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基。
在某些实施方案中，使用其它抗生素时所观察到的鹅口疮(念珠菌病)的发病率被降低。在某些实施方案中，所述有效量是以单次剂量40-100mg/天。在某些实施方案中，通过阴道给药施用所述大分子。
在本发明的另一个方面，提供有效量的大分子在制备用于治疗或预防bv的药物中的用途，所述大分子包含1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(亚丙基亚胺)树枝状高分子和一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至所述树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基，其中所述有效量是40mg至100mg树枝状高分子。
在本发明的另一个方面，提供有效量的大分子在制备用于减轻或预防bv的一种或多种症状和/或一种或多种诊断标准的药物中的用途，所述大分子包含1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(亚丙基亚胺)树枝状高分子和一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至所述树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基，所述bv的一种或多种症状和/或一种或多种诊断标准选自：
i)nugent评分，
ii)线索细胞，
iii)胺臭味试验，
iv)阴道排出物，
v)阴道ph，和
vi)恶臭。
在本发明的另一个方面，提供有效量的大分子在制备用于预防或减少bv的复发的药物中的用途，所述大分子包含1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(亚丙基亚胺)树枝状高分子和一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至所述树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基。
在本发明的另一个方面，提供有效量的大分子在药物制备中的用途，所述大分子包含1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(亚丙基亚胺)树枝状高分子和一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至所述树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基，所述药物用于在治疗bv的过程中或以后降低真菌感染或其它微生物感染的发病率。
具体实施方式
单数形式英文词“a”、“an”和“the”包括复数方面，除非上下文另外清楚地指明。
在本说明书和下面的权利要求书中，除非上下文另外要求，否则词语“包含”和变体诸如“包括”和“含有”应理解为暗示，包括所述的整数或步骤、或者整数或步骤的集合，但是不排除任何其它整数或步骤、或者整数或步骤的集合。
本文中使用的术语“约”表示，相对于参考数量、水平、值、尺寸、大小或量变化多达20％、15％、10％或5％的数量、水平、值、尺寸、大小或量。
在一个方面，本发明提供治疗或预防个体的bv的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的大分子，所述大分子包含1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(亚丙基亚胺)树枝状高分子，且具有一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至所述树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基，其中所述有效量是40mg至100mg树枝状高分子/天。
在某些实施方案中，所述有效量是：40-90mg/天，40-80mg/天，40-70mg/天，特别是40-60mg/天，最特别是约50mg/天。
在一个特定实施方案中，所述大分子被配制为凝胶，特别是被配制成具有4.5-5.5的ph、特别是约ph5的凝胶。有利地，该制剂可以辅助将阴道ph降低至4-5或将阴道ph维持在4-5。在某些实施方案中，所述大分子凝胶制剂包含流变调节剂，特别是
在某些实施方案中，以每天超过一次(例如早晨和晚上)的多次剂量施用所述大分子或大分子制剂。在其它实施方案中，以每天一次(例如，在晚上)的单次剂量施用所述大分子或包含所述大分子的制剂。
在某些实施方案中，经阴道施用所述大分子或包含所述大分子的制剂。在某些实施方案中，可以以下量(volume)施用所述剂量：3.5-5克，特别是4-5克，更特别是约5克，尤其是当在晚上或在所述个体邻睡觉之前施用时。在睡眠过程中假定的不走动且主要为水平的位置有助于将所述大分子制剂保留在阴道中，从而增加暴露时间。
在某些实施方案中，所述给药发生在邻近诸如性交的性活动时，特别是在性交之前或之后24小时内，更特别是在性交之前或之后3小时内。
在某些实施方案中，所述给药发生在月经期间或以后，特别是在月经结束的24小时内，且更特别地，给药在月经结束以后持续2、3、4或5天。
本文中使用的术语“治疗”表示至少部分地达到期望的治疗结果。所述治疗结果可以是在治疗结束(eot)时或在治疗结束以后的后续日期(试验治疗，toc)时的治疗治愈。所述治疗结果可以是在eot或toc时的临床治愈。所述治疗结果可以是bv的一种或多种症状的减轻，诸如阴道气味或阴道排出物的减轻，或者可以是bv的诊断标准(诸如amsel标准所定义的阴道ph、线索细胞的存在或胺臭味试验)的减少或标准化(或维持)，或达到正常的nugent评分(nugent治愈,<3)。
术语“预防”表示阻止或延迟bv在个体中的发作，所述个体处于首次感染bv的风险中，或者处于遭受bv复发性发作的风险中。处于bv风险中的那些个体包括以高频率进行阴道性交的具有多个性伴侣或新性伴侣的女性。但是，一些研究已经证实，性活动并非形成bv所必需的(yen等人,obstet.gynecol.2003,102:927-933；bump等人,am.j.obstet.gynecol.,1988,158:935-939)，因此，不一定将bv视作性传播感染。一些研究还已经证实了bv在与女性发生性关系的女性中的高发病率(marrazzo等人,j.infect.dis.,2002,185:1307-1313)。另外，研究表明，50％的患有有症状的bv并用现有疗法治疗的女性在6个月内发生bv的复发性发作(marrazzo等人,sex.trans.dis.,2010,37(12):732-744)。
在bv发作的急性治疗期间，术语“治疗结束”(eot)表示在已经施用第一剂治疗以后9-12天的时段。
在bv发作的急性治疗期间，术语“试验治疗”(toc)表示，在已施用最后一剂治疗后的、用来评估是否发生复发的时间段。试验治疗的一个例子可以是在已经施用第一剂治疗后的21-30天。
术语“amsel氏标准”表示用于鉴别bv的诊断标准。这些标准包括：
●光滑地包被阴道粘膜层的同质白色排出物；
●线索细胞(附着于阴道上皮细胞的细菌，占湿涂片上的总细胞的≥20％)的存在；
●>4.5的阴道ph；
●阳性胺臭味试验(向阴道流体添加10％氢氧化钾(koh)所产生的鱼腥味)。
为了在临床上诊断bv，必须存在4项amsel氏标准中的3项。
术语“nugent评分”表示，使用革兰氏染色的阴道涂片从微生物学分析得到的0-10的加权评分(nugent等人,1991,j.clin.microbiol.,29(2):297-301)。合成评分是基于：
乳杆菌属形态型-0(丰富)-4(无)
加德那菌属(gardnerellaspp.)/拟杆菌属(bacteroidesspp.)形态型-0(无)-4(丰富)
弯曲的革兰染色不定杆菌(curvedgram-variablerods)-0(无)-2(丰富)
0-3的nugent评分被视作正常的，而4-6的评分(中间)指示被破坏的阴道微环境，且7-10被定义为bv。为了评估治愈的目的，美国食品和药品管理局认为0-3的评分是正常的，4-10是异常的。术语“nugent评分治愈”或“nugent治愈”表示产生0-3的nugent评分的治疗。
本文中使用的术语“临床治愈”表示，所述个体是无症状的且4项amsel标准中的至少3项在eot和/或toc时消退。例如，发生以下中的至少3项：恢复至正常生理排出物，线索细胞盐水湿涂片阴性，阴道ph<4.7，和阴性胺臭味试验。
术语“治疗治愈”表示在治疗以后实现临床治愈和nugent治愈。
本文中使用的术语“治疗消退”表示实现临床治愈和≤6的nugent评分。
在某些情况下，不需要实现临床治愈或治疗治愈，但是在治疗开始时明显的一种或多种症状或诊断标准可以消退。例如，最初的阴道排出物可以恢复至正常，与bv有关的恶臭可以消退，胺臭味试验可以是阴性的，阴道ph可以恢复至正常，线索细胞可以消失，或nugent评分可以变成小于4，同时仍然存在一种或多种其它症状。例如，可以实现治疗消退，因为排出物、恶臭和阴道ph可能消退，但是线索细胞仍然存在，且nugent评分是异常的。
在本发明的另一个方面，提供减轻或预防个体中的bv的一种或多种症状和/或bv的一种或多种诊断标准的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的大分子，所述大分子包含1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(亚丙基亚胺)树枝状高分子，且具有一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至所述树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基，其中所述一种或多种症状和诊断标准选自：
i)nugent评分，
ii)线索细胞，
iii)胺臭味试验，
iv)阴道排出物
v)阴道ph，和
vi)恶臭。
在某些实施方案中，nugent评分恢复至正常范围(0-3)。在某些实施方案中，线索细胞消失。在某些实施方案中，恶臭消失。在某些实施方案中，阴道排出物消失。在某些实施方案中，阴道ph恢复至正常。在某些实施方案中，胺臭味试验是阴性的。
在某些实施方案中，bv的症状或诊断标准中的2、3或4项消退，例如，nugent评分和恶臭；nugent评分和胺臭味试验；nugent评分和线索细胞；nugent评分和阴道排出物；nugent评分和阴道ph；线索细胞和恶臭；线索细胞和胺臭味试验；线索细胞和阴道排出物；线索细胞和阴道ph；恶臭和胺臭味试验；恶臭和阴道排出物；恶臭和阴道ph；阴道排出物和阴道ph；nugent评分、恶臭和线索细胞、nugent评分、恶臭和阴道排出物；nugent评分、恶臭和阴道ph；nugent评分、恶臭和胺臭味试验；nugent评分、线索细胞和阴道排出物；nugent评分、线索细胞和阴道ph；nugent评分、阴道排出物和阴道ph；nugent评分、阴道排出物和胺臭味试验；恶臭、阴道排出物和阴道ph；恶臭、阴道排出物和胺臭味试验；nugent评分、线索细胞、恶臭和阴道ph；nugent评分、线索细胞、恶臭和阴道排出物；nugent评分、恶臭、阴道排出物和阴道ph；nugent评分、恶臭、胺臭味试验和阴道排出物；nugent评分、恶臭、胺臭味试验和阴道ph；nugent评分、线索细胞、阴道排出物和阴道ph；nugent评分、线索细胞、胺臭味试验和阴道排出物；nugent评分、线索细胞、胺臭味试验和阴道ph；线索细胞、恶臭、胺臭味试验和阴道排出物；线索细胞、恶臭、胺臭味试验和阴道ph；以及线索细胞、恶臭、阴道排出物和阴道ph。
在某些实施方案中，所述有效量是：15-1000mg大分子/天，特别是15-500mg/天、15-400mg/天、15-300mg/天、15-150mg/天、30-110mg/天、40-100mg/天、40-90mg/天、40-80mg/天、40-70mg/天，更特别是40-60mg/天，最特别是约50mg/天。
在某些实施方案中，将所述大分子配制在组合物中。合适的剂型包括凝胶、软膏剂、子宫托、卫生栓、泡沫剂、洗剂和乳膏剂。在某些实施方案中，将所述大分子配制在如上所述的凝胶中。
在某些实施方案中，以每天超过一次，例如每天两次(例如早晨和晚上)的多次剂量施用所述大分子或大分子的制剂。在其它实施方案中，以每天一次(例如，在晚上)的单次剂量施用所述树枝状高分子。
在某些实施方案中，经阴道施用所述大分子或包含所述大分子的制剂。在某些实施方案中，可以以下量施用所述剂量：3.5-5克，特别是4-5克，更特别是5克，尤其是当在晚上或在所述个体邻睡觉之前施用时。在睡眠过程中假定的不走动的且主要为水平的位置有辅于将所述大分子制剂保留在阴道中，从而增加暴露时间。
在某些实施方案中，所述给药发生在邻近诸如性交的性活动时，特别是在性交之前或之后24小时内，更特别是在性交之前或之后3小时内。
在某些实施方案中，所述给药发生在月经期间或以后，特别是在月经结束的24小时内，且更特别地，给药在月经结束以后持续2、3、4或5天。
利用当前的治疗，bv的复发是常见的，例如因为最初的治疗不是完全有效的或者个体处于再感染的高危中。
在本发明的另一个方面，提供预防或减少细菌性阴道病在个体中复发的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的大分子，所述大分子包含1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(亚丙基亚胺)树枝状高分子，且具有一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至所述树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基，其中每周施用所述有效量1-7次。
术语“预防或减少复发”包括这样的情况：降低bv的复发频率，和/或降低复发性发作中bv感染的严重性，或防止bv感染复发的发生。
在某些实施方案中，每周施用所述有效量2-3次，例如，每三天一次。在其它实施方案中，每周施用所述有效量3-4次，例如，隔日一次。在某些实施方案中，每天施用所述有效量。在特定实施方案中，所述治疗持续延长的时段，诸如一或多个月或者一或多年，例如，多达25年，诸如1、5、10、15或20年。在其它实施方案中，所述治疗持续1-6个月，特别是2-5个月或3-4个月，特别是约4个月或16周。
在某些实施方案中，所述有效量是：0.1-1000mg/剂，包括0.1-500mg/剂、0.1-400mg/剂、0.1-300mg/剂、0.5-300mg/剂、0.5-200mg/剂、1-200mg/剂、2.5-200mg/剂、5-200mg/剂、10-200mg/剂、15-200mg/剂，特别是30-200mg/剂、40-160mg/剂、40-150mg/剂、40-120mg/剂，特别是诸如约50mg/剂、105mg/剂和150mg/剂的剂量。
在某些实施方案中，特别在治疗持续延长的时段的情况下，所述有效量可以是在有效剂量范围的下端。例如，当治疗持续一或多个月或者一或多年的时段时，所述有效量可以是：0.1-200mg/剂，特别是0.1-100mg/剂、0.1-50mg/剂、0.1-25mg/剂或0.1-15mg/剂。
在某些实施方案中，施用是单次剂量。在某些实施方案中，施用是阴道给药。合适的剂量组合物是凝胶、软膏剂、卫生栓、子宫托、泡沫剂、乳膏剂和洗剂，特别是凝胶，诸如上述的凝胶剂。
在某些实施方案中，经阴道施用所述大分子或包含所述大分子的制剂。在某些实施方案中，可以以下量施用所述剂量：3.5-5克，特别是4-5克，更特别是5克，尤其是当在晚上或在所述个体邻睡觉之前施用时。在睡眠过程中假定的不走动且主要为水平的位置会有助于将所述大分子制剂保留在阴道中，从而增加暴露时间。
在某些实施方案中，所述给药发生在邻近诸如性交的性活动时，特别是在性交之前或之后24小时内，更特别是在性交之前或之后3小时内。在性伴侣是或被怀疑是复发性bv的再感染源的情况下，这样的给药是有利的。
在某些实施方案中，所述给药发生在月经期间或以后，特别是在月经结束的24小时内，且更特别地，给药在月经结束以后持续2、3、4或5天。这样的给药是有利的，因为月经与bv的复发有关。
在另一个方面，提供在治疗bv的过程中降低真菌感染或其它微生物感染在个体中的发病率的方法，所述方法包括：通过向所述个体施用有效量的大分子来治疗所述bv，所述大分子包含1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(亚丙基亚胺)树枝状高分子和一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至所述树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基。
许多当前的bv治疗包括施用抗生素诸如甲硝唑、克林霉素和替硝唑。这些治疗经常不能区分感染性微生物和在正常情况下存在于健康阴道菌群中的细菌，并导致正常菌群的减少。该正常菌群的减少会允许其它感染性微生物(诸如真菌)或其它微生物(诸如性传播的微生物和胃肠道微生物)繁殖，从而导致对真菌感染或微生物感染(诸如性传播疾病)的易感性增加。
在某些实施方案中，所述真菌是白色念珠菌(鹅口疮)或红色毛癣菌(trichophytonrubrum)、须毛癣菌(trichophytonmentagrophytes)和絮状表皮癣菌(epidermophytonfloccosum)，特别是白色念珠菌。在其它实施方案中，所述性传播的微生物感染是人免疫缺陷病毒(hiv)、人乳头瘤病毒(hpv)、单纯疱疹病毒(hsv)、传染性软疣(molluscumcontagiosum)、淋病奈瑟球菌(neisseriagonorrhoeae)(淋病)、沙眼衣原体(chlamydiatrachomatis)(衣原体属)、阴道毛滴虫(trichomonasvaginalis)、软下疳(杜克雷嗜血杆菌(haemophilusducreyi))、肉芽肿杆菌(klebsiellagranulomatis)(腹股沟肉芽肿)或苍白密螺旋体(treponemapallidum)(梅毒)。在其它实施方案中，所述微生物感染可以源自胃肠道菌群诸如埃希氏菌属(escherichiaspp.)例如大肠杆菌(e.coli)、梭状芽胞杆菌属(clostridialspp.)例如难辨梭菌(c.difficile)、梭杆菌属(fusobacterialspp.)、酵母菌属(saccharomycesspp.)和曲霉菌属(asperigillusspp.)。在其它实施方案中，所述微生物感染可以由金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)造成。
在某些实施方案中，所述有效量是：15-1000mg大分子/天，特别是15-500mg/天、15-400mg/天、15-300mg/天、15-200mg/天、15-150mg/天、30-110mg/天、40-100mg/天、40-90mg/天、40-80mg/天、40-70mg/天，更特别是40-60mg/天，最特别是约50mg/天。
在某些实施方案中，以每天超过一次(例如，每天两次(例如早晨和晚上))的多次剂量施用所述大分子或大分子制剂。在其它实施方案中，以每天一次(例如，在晚上)的单次剂量施用所述大分子或大分子制剂。在某些实施方案中，经阴道施用所述大分子或大分子制剂。合适的剂量组合物包括凝胶、软膏剂、子宫托、卫生栓、泡沫剂、乳膏剂和洗剂，特别是凝胶，诸如上述的凝胶剂。
在本发明中有用的树枝状高分子是具有1-5代的聚赖氨酸树枝状高分子、聚酰氨基胺(pamam)树枝状高分子、聚(醚羟胺)树枝状高分子或聚(丙烯酰亚胺)(ppi)树枝状高分子。所述大分子还包含一个或多个含磺酸的部分，所述部分连接至树枝状高分子的最外代的一个或多个表面氨基。
树枝状高分子是由从中央核心部分辐射出的多个支链单体组成的支链聚合物大分子。分支点的数目随着从树枝状高分子核心向它的表面移动而增加，并且通过单体(或结构)单元的连续层或“代”来定义。将结构单元的每一代编号，以指示到核心的距离。例如，第1代(g1)是连接至核心的结构单元层，第2代(g2)是连接至第1代的结构单元层，第3代(g3)是连接至第2代的结构单元层，第4代(g4)是连接至第3代的结构单元层，第5代(g5)是连接至第4代的结构单元层。
结构单元的最外代提供树枝状高分子的表面，并且提供官能团(在本发明的情况下为氨基)，至少一个含磺酸的部分与所述官能团共价键合。所述含磺酸的基团可以直接键合至所述表面氨基官能团，或可以通过连接基连接至所述表面氨基官能团。
所述树枝状高分子包含单一类型的单体单元(在本文中也被称作结构单元)。每个从树枝状高分子的分子的核心伸出的“分支”具有至少一层或代结构单元。本文中使用的术语“分支”表示至少一代与核心上的一个官能团连接的结构单元。在某些实施方案中，每个或任意分支可以具有至少2层或代结构单元。在其它实施方案中，每个或任意分支可以具有至少3或4层或代结构单元。在其它实施方案中，每个或任意分支可以独立地具有5层或代结构单元。
本文所涵盖的树枝状高分子可以通过本领域已知的方法来制备，且可以会聚的方式(其中有效地预形成分支，然后连接至核心)或发散的方式(其中连续地从核心向外构建层或代)来制备。这两种方法是本领域技术人员熟知的。
所述树枝状高分子可以由任意合适的核心和聚赖氨酸、聚酰氨基胺、聚(醚羟胺)或聚(亚丙基亚胺)单体或结构单元组成。
本文中使用的“核心”表示在其上面构建(通过发散方法或会聚方法)连续的单体或结构单元层或代的部分，且可以是具有至少一个反应性的或功能性的位点的任意部分，从所述位点产生连续的单体或结构单元层(或预形成的“分支”与其连接)。本文所涵盖的一些示例性的合适核心包括具有1、2、3或4个反应基团的那些，所述反应基团独立地选自氨基、羧基、硫醇、烷基、炔基、腈、卤代、叠氮基、羟胺、羰基、马来酰亚胺、丙烯酸酯或羟基，结构单元或单体的层或代可以与所述反应基团连接。核心部分可以与结构单元相同或不同。
示例性的核心包括聚氨基烃、含二硫键的多胺、聚(缩水甘油基醚)、氨基乙醇、氨、芳基甲基卤化物、哌嗪、氨基乙基哌嗪、聚(乙烯亚胺)、亚烷基/亚芳基二硫醇、4,4-二硫代丁酸、巯基烷基胺、硫醚烷基胺、异氰脲酸盐、杂环化合物、大环化合物、聚缩水甘油基甲基丙烯酸酯、膦、卟吩、环氧乙烷、硫杂环丙烷(thiorane)、环氧丙烷(oxetane)、氮丙啶、氮杂环丁烷、多叠氮基官能团、硅氧烷、噁唑啉、氨基甲酸酯或己内酯。
本文所涵盖的核心部分的一些非限制性例子包括二氨基c2-c12烷烃诸如乙二胺、1,4-二氨基丁烷和1,6-二氨基己烷。但是，应当理解，所述核心不一定是在每个末端处具有单个反应基团的线性部分。本发明也涵盖非线性的、环状的或分支的核心部分。例如，芳基甲基胺诸如二苯甲基胺(bha)是合适的核心。
树枝状高分子的结构单元是赖氨酸结构单元：
酰氨基胺结构单元：
醚羟胺结构单元：
或亚丙基亚胺(propyleneimine)结构单元：
在一个特定实施方案中，所述树枝状高分子是聚赖氨酸树枝状高分子，特别是具有二苯甲基胺核心的聚赖氨酸树枝状高分子。
所述含磺酸的部分是能够在所述树枝状高分子的表面上提供磺酸基的任意部分。在某些实施方案中，所述含磺酸的部分具有一个磺酸基。在其它实施方案中，所述含磺酸的部分具有超过一个磺酸基，例如2或3个磺酸基，特别是2个磺酸基。在某些实施方案中，所述含磺酸的部分包含芳基，诸如苯基或萘基，特别是萘基。
合适的含磺酸的部分的例子包括但不限于：
-nh-(ch2)nso3-、-(ch2)nso3-、
其中n是0或1-20的整数，m是1或2的整数，且p是1-3的整数。
在某些实施方案中，所述含磺酸的部分选自：
在某些实施方案中，所述含磺酸的部分直接键合至所述树枝状高分子的表面氨基。在其它实施方案中，所述含磺酸的部分通过连接基连接至所述树枝状高分子的表面氨基。
合适的连接基团包括：亚烷基或亚烯基基团，其中一个或多个不相邻的碳原子任选地被氧或硫原子替代以提供醚、硫醚、聚醚或聚硫醚；或-x1-(ch2)q-x2基团，其中x1和x2独立地选自-nh-、-c(o)-、-o-、-s-和-c(s)，且q是0或1-10的整数，且其中一个或多个不相邻的(ch2)基团可以被-o-或-s-替代以形成醚、硫醚、聚醚或聚硫醚。
在一个特定实施方案中，所述连接基是#-o-ch2-c(o)-*，其中#指示与所述含磺酸的部分连接，且*指示与所述树枝状高分子的表面氨基连接。
在本发明中有用的示例性树枝状高分子包括式i(spl-7013)、ii(spl-7320)和iii(spl-7304)或其药学上可接受的盐：
其中r基团由下式表示：
式i、ii和iii的合成描述在wo02/079299中。
合适的药学上可接受的碱加成盐包括但不限于：金属盐，诸如铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌盐，以及从有机胺(诸如n,n′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、乙二胺、二环己胺、葡甲胺(n-甲基葡糖胺)和普鲁卡因)、季胺(诸如胆碱)制成的有机盐，以及锍和鏻盐。
现在参考附随的实施例更完整地描述本发明。但是，应当理解，下面的描述仅仅是示例性的，且不应当以任何方式作为对上述发明的一般性的限制。
实施例
实施例1：式i在厌氧菌中的选择性
试验物
在测定之前，在环境条件储存试验物(式i(也被称作spl-7013)，粉末和凝胶安慰剂)。
进行测定，靶向的spl-7013粉末的试验浓度为1、5、10和30mg/ml。对于这些测定，将spl-7013粉末溶解，并在去离子水中稀释，以达到在不同琼脂培养基中的最终靶向浓度。
比较药物亚胺培南得自美国药典(目录号1337809,lat#hoe040)，并在-20℃储存于ph7.2的缓冲液中，母液浓度为320μg/ml。
生物体
测定的试验生物体是最近的临床分离物或从美国典型培养物保藏中心(atcc；马纳萨斯,va)得到的参照菌株。在测定中包括的质量控制生物体是脆弱拟杆菌(bacteroidesfragilis)0123(atcc25285)。
生长和试验培养基是clinicallaboratorystandardsinstitute(clsi；1,2,3)为厌氧菌的生长和易感性试验推荐的那些培养基。将试验生物体维持在-80℃冷冻。将分离物在用于厌氧菌的补充的布氏琼脂(sba)平板(teknova,hollister,ca)上继代培养。将厌氧细菌在bactronii厌氧室中在35℃温育48小时(5％氢、5％二氧化碳、90％氮的气氛)。
试验培养基
用于厌氧琼脂稀释mic测定的培养基是补充了氯化血红素(stremchemicals,批号07.0830)、维生素k1(pfaltz和bauer，批号9799)和溶胞的绵羊血液(clevelandscientific,批号s03582)的布氏琼脂(bectondickinson,sparks,md#211086，批号7166673)。根据clinicalandlaboratorystandardsinstitute(clsi)指南(1、2、3)，制备所有培养基。对于液体培养基微量稀释测定，以105％正常重量制备培养基，以补偿在最终的微量稀释板/琼脂板中的5％药物溶液体积(10μl药物溶液)。
琼脂稀释最低抑制浓度(mic)测定操作(厌氧菌)
使用以前描述的参照琼脂稀释方法(nccls.methodsforantimicrobialsusceptibilitytestingofanaerobicbacteria；approvedstandard—第六版.nccls文件m11-a6[isbn1-56238-517-8].nccls,940westvalleyroad,suite1400,wayne,pennsylvania19087-1898usa,2004)，测定厌氧细菌。手工制备药物稀释物和补充了药物的琼脂平板。在接种以后，将补充了药物的平板在bactronii的厌氧环境中在35℃温育48小时。按照clsi指南(上面提及的nccls)，读出mic。
在表1中显示了得自易感性试验的mic数据，在所述试验中，以1、5、10或30mg/ml的浓度试验了spl-7013粉末。表1表明，存在几种对30mg/ml(卵形拟杆菌(b.ovatus)、二路普雷沃氏菌(p.bivia))、10mg/ml(卷曲乳杆菌(l.crispatus))或5mg/ml(阴道加德那菌)的spl-7013敏感的厌氧病原体。
从表1可以看出，阴道加德那菌(一种与bv有关的细菌)对5mg/ml的spl-7013敏感，而许多存在于正常阴道菌群中的乳杆菌属种没有受spl-7013影响或在更高浓度(卷曲乳杆菌,10mg/ml)受到影响。
实施例2：
为了评估spl-7013水溶液的抗微生物性能，制备了2种水溶液，一种为5％w/v，第二种为28％w/v。为了试验(challenge)每种溶液在1个月的时段内限制微生物生长的能力，进行了标准的防腐剂有效性试验(根据usp<51>“antimicrobialeffectivenesstest”)。
所有样品都在250mlhdpe螺旋帽管形瓶中制备，且是有菌的。
5％w/w溶液
将spl-7013的样品(7.5402g)溶解在水(150ml)中，搅拌样品以促进溶解。得到的混合物具有计算为5.0268％w/v的浓度。
28％w/w溶液
将spl-7013的样品(42.0012g)溶解在水(150ml)中，搅拌样品以促进溶解。得到的混合物具有计算为28.0008％w/v的浓度。
试验方法
将spl-7013样品溶液按照制备状态使用，并根据usp<51>“antimicrobialeffectivenesstest”进行试验。在这方面，用5种微生物生物体试验溶液，并监测每种微生物的总数，作为时间的函数。
试验微生物如下：
-铜绿假单孢菌(pseudomonasaeruginosa),atcc9027
-金黄色葡萄球菌,atcc6538
-白色念珠菌,atcc10231
-黑曲霉(aspergillusniger),atcc16404
-大肠杆菌,atcc8739
将试验接种物加入每种样品中，使得接种后的终浓度是1x105至1x106cfu/ml产物。基于通过平板计数方法确定的每种标准化接种物中的微生物浓度，估测每个试验制剂中的活微生物的初始浓度。将接种的容器在22.5±2.5℃温育，并在14和28天后取样。在取样时，通过平板计数方法确定每种微生物的浓度。以对数减少的方式表示微生物浓度的变化。将微生物浓度没有增加定义为与以前的测量结果相比不超过0.5log值。
结果和讨论
表2:5％w/v溶液
*<表示“小于”，est表示“估测”
如表2所示，spl-7013的5％w/v溶液在14天的时段内对铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌起杀细菌剂作用，以后没有观察到微生物浓度的增加。相同的试验溶液在14天后表现出对白色念珠菌和黑曲霉接种物减少的杀菌作用，在28天时间点之前微生物浓度逐渐减少(即>0.5log单位下降)。
表3:28％w/v溶液
*<表示“小于”
如表3所示，spl-7013的28％w/v溶液在14天的时段内对铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌起杀细菌剂作用，在28天内也对白色念珠菌起杀细菌剂作用。相同的试验溶液在试验期间阻止了黑曲霉接种物的生长。
通过usp<51>“antimicrobialeffectivenesstest”确定的2种试验溶液(5％和28％w/v的spl-7013在水中的溶液)的抗细菌性能指示，二者都满足局部制剂的试验的通过标准。
实施例3：
进行了一项临床研究，其中将66位在临床上诊断出bv的女性随机分成4组。
1.每晚施用5g3％spl-7013凝胶，持续7晚
2.每晚施用5g1％spl-7013凝胶，持续7晚
3.每晚施用5g0.5％spl-7013凝胶，持续7晚
4.每晚施用5ghec安慰剂凝胶，持续7晚
研究的选择标准是：18-45岁的女性，根据amsel氏标准和≥4的nugent评分在临床上诊断为bv。个体在其它方面是健康的。如果个体具有性传播感染，则排除。
在从治疗开始计算第9-12天(治疗结束,eot)评估每位个体，并在第21-30天之间(试验治疗,toc)再次评估每位个体。
针对在eot和toc时的临床治愈、nugent治愈、治疗治愈和治疗消退，评估每位个体。结果显示在表4中。
使用相同临床研究方案的在其它参与者中的试验的其它结果显示在表5中。
表4中的结果表明，在eot时在62.2％的用spl-7013凝胶治疗的个体中和在toc时在27％的用spl-7013治疗的个体中，实现了临床治愈。令人惊讶地，1％的spl-7013凝胶制剂在eot(83％临床治愈)和toc(55％临床治愈)时的表现显著优于其它spl-7013制剂。
表4中的结果表明，在eot时，在约25％的用3％spl-7013凝胶治疗的个体中、在约33％的用1％spl-7013凝胶治疗的个体中和在14％的用0.5％spl-7013凝胶治疗的个体中，nugent评分降低至正常。在toc时，在0％的用3％spl-7013凝胶治疗的个体中、在27％的用1％spl-7013凝胶治疗的个体中和在约10％的用0.5％spl-7013凝胶治疗的个体中，nugent评分降低至正常。
表4中的结果表明，在用1％spl-7013凝胶治疗的个体中，治疗治愈在eot时是约25％且在toc时是27％。该治愈率高于用其它剂量的spl-7013凝胶所观察到的结果。安慰剂组在eot和toc时的治疗治愈是0％。
同样，表4表明，1％spl-7013凝胶也在amsel氏标准消退方面具有更好表现。在eot时，对于1％spl-7013凝胶而言，阴道排出物的消退是100％,胺臭味试验的消退是92％，阴道ph的消退是50％，线索细胞的消退是92％，与此相比，对于3％spl-7013凝胶而言分别为82％、64％、55％和64％，且对于0.5％spl-7013凝胶而言分别为86％、57％、29％和64％。在toc时，对于1％spl-7013凝胶而言，阴道排出物的消退是64％,胺臭味试验的消退是64％,阴道ph的消退是50％，且线索细胞的消退是73％，与此相比，对于3％spl-7013凝胶而言分别为20％、20％、10％和20％，且对于0.5％spl-7013凝胶而言分别为46％、55％、18％和27％。
在研究过程中，接受spl-7013凝胶的参与者和2位接受hec安慰剂凝胶的参与者在治疗过程中没有发生严重的不良事件(ae)。仅一位参与者发生严重的ae，但是这发生在任何研究产品施用之前。这些数据指示在该研究中非常低的ae水平。
这些结果与上面表4所示的数据相一致，因为1％制剂在eot和toc时在bv的治疗中具有更好的表现。
实施例4:关于预防bv的复发的临床研究
设计了双盲、多中心、随机化、安慰剂对照的剂量范围研究，以确定经阴道施用的spl-7013凝胶用于预防bv的复发的安全性和效力。
该试验评估选自0.5％、1％和3％spl-7013凝胶的2个剂量水平相对于安慰剂凝胶的临床效力，并确定选自0.5％、1％和3％spl-7013凝胶的2个剂量水平的微生物效力和总效力，确定安全性和耐受性，以及确定患者觉察到的症状消退。
主要终点
主要终点是在使用spl-7013凝胶16周结束时，bv是否存在。
次要终点
●在8周的随访(第24周)时，bv存在或不存在。
●从初次甲硝唑治疗结束至bv复发的时间。
●bv的单一标准存在或不存在，所述单一标准包括个体报告的症状、amsel氏标准、nugent评分标准和bv
●使用关于药物治疗的治疗满意问卷调查(tsqm)评估的治疗可接受性。
●非bv阴道感染的发病率。
安全性终点包括ae的发生率以及生殖器刺激的体征和症状的排序评级。
研究群体
年龄为18-45岁的女性个体，包括当前的bv发作和复发性bv历史(定义为在以前12个月中至少3次有记录的发作，包括当前发作)。
持续时间/参与者
大约26周的总持续时间，包括：至多1周筛选期；7天标签公开的使用甲硝唑的治疗期(“急性治疗期”)；16周使用spl-7013凝胶或hec安慰剂凝胶的治疗期(“双盲治疗期”)和8周随访期(“随访期”)。
研究操作
在提供书面知情同意书和最大1周筛选期以后，合格的参与者将接受7天口服施用的甲硝唑疗程(500mgbd)。参与者然后在标签公开的使用甲硝唑的治疗结束以后第4天±1天评估她们的bv。
发现对治疗具有应答(将消退定义为没有临床症状(无症状的)和不超过2/4的amsel氏标准)的女性以及满足第2部分“选择和排除标准”的女性是合格的，进入双盲治疗期。将合格的参与者以1:1:1比例随机化，以接受选自0.5％、1％和3％spl-7013凝胶的2个剂量水平或5g剂量的hec安慰剂凝胶，在每隔一天在晚上(睡前)经阴道施用，持续16个连续周。
在16-周双盲治疗期中，参与者每4周就诊。在第16周结束时，进行治疗结束(eot)就诊。参与者然后继续进入随访期，在这期间，在第20和24周进行就诊。
在表6(研究评估和操作的时间表)中，提供了在研究就诊时要进行的操作的细节。
对1周甲硝唑治疗方案(按照方案定义)没有应答的研究参与者被命名为“甲硝唑无应答者”，并且将从进一步研究评估中排除。
给在双盲治疗期(即，在就诊1(基线)之间)过程中或以后发生bv复发(按照方案定义)的参与者提供挽救疗法，这仅包括符合当地实践的口服地施用的抗生素(例如，甲硝唑、克林霉素)。接受挽救疗法的参与者将停止使用研究药物的进一步治疗，将结束早期终止就诊操作，并且将从研究中排除。
安全性参数
评价不利事件和生殖器刺激的体征和症状，它们由研究人员发现或者被报告给研究人员，或者被记载在个体日志卡上。还评估非bv阴道感染的发病率、伴随的药物使用、和对治疗方案的顺应性。其他安全性参数包括尿分析、体格检查和骨盆/妇科检查、医学史和性史、生命体征、尿妊娠试验和症状评估。
统计分析
主要分析是所选的2种spl-7013凝胶剂量(选自0.5％或1％或3％)相对于hec安慰剂凝胶的对比。
假定在第16周之前没有复发的女性的比例是在65-70％之间(对于spl-7013凝胶)和40％(对于hec安慰剂凝胶)，每个治疗组最少54位可评价的个体的样品大小会提供80％能力来检测具有0.05的α显著性水平的治疗差异。
两种情况呈现12％的甲硝唑治疗失败率和在4个月时12％的参与者排除率。