本发明涉及抗微生物清洁组合物及其用途，特别是在生物被膜、软组织伤口、感染体腔和感染骨骼中的治疗用途。
背景技术：
：感染伤口感染发生在经受关节置换手术或骨折固定的患者的较小但重要的部位，特别是那些具有开放性骨折的患者。一旦建立，感染难以根除，特别是在植入装置上形成细菌生物被膜的情况下。对于患者以及医疗系统而言，伤口是重要的成本来源，特别是并发感染的伤口。整形外科植入物上的生物被膜形成归因于细菌生长的糖萼(glycocalyx)介导的表面模式，并且通常通过涉及冲洗、清创的二次手术和适当使用抗生素或完全除去受感染的植入物来治疗。当伤口被微生物定植时，它们作为包裹在胞外聚合物(EPS)基质内的多微生物群落而存活。这种微生物群落通常表面结合而彼此附着，并形成微生物群落。包裹在自生EPS中并附着在表面(液体或固体)上的微生物群落的组合简单地定义为生物被膜。在具有细菌定植和生物被膜的严重污染、感染或慢性伤口中，清创是促进伤口成功闭合的第一步。感染组织的伤口清创可有助于控制感染和生物负荷。研究表明，对于许多抗生素，杀死或消除细菌生物被膜所需的最低浓度实际上超过了抗生素的最大处方水平。抗生素的广泛使用已经导致形成大量微生物的耐药性。细菌对抗生素的耐药性持续上升是一个严重的问题。因此，对于开发和包括针对感染的平行方法存在未满足的需求，特别是那些因生物被膜的存在而并发的感染。通常，生物灭杀剂(biocide)相比抗生素具有较广谱的活性。抗生素倾向于具有特异性细胞内靶标，而生物灭杀剂或防腐剂(antiseptic)或抗微生物剂(antimicrobial)(在本说明书中可互换的术语)可具有多个靶标。防腐剂通过许多作用机制起效。与抗生素相比，这使得不太可能对它们产生耐药性。认为维持清创和使用局部抗微生物剂(防腐剂)比抗生素疗法有效。近年来，局部抗微生物剂已成为处理细菌负荷(bacterialburden)的一线治疗方法，特别是在慢性伤口中。在伤口处理中使用许多防腐剂必定是对可能的局部毒性和有益的抗菌效果进行的风险-效益评估的主题。简而言之，建议在使用前，应将有益的抗微生物效果和生物利用度与任何可能的细胞毒性之间进行权衡。已经提出了各种抗微生物组合物、制品和方法。然而，这些伤口组合物和方法具有各种缺陷和缺点，因此也妨碍了组合物的长期使用。EP1404311公开了一种用作伤口处理剂的组合物，其适合作为洗涤或沐浴凝胶，用于净化身体表面，用于溶解身体表面的结垢或结痂，或用作敷料的溶解凝胶和用于改变湿敷料。其中公开了使用表面活性剂和双胍盐酸盐，以及使用两性或非离子表面活性剂与双胍盐酸盐(PHMB)的组合。此外，该制剂的优选表面活性剂是甜菜碱(betaine)，特别是脂肪酸的酰氨基烷基甜菜碱。然而，所述制剂不含任何可以增强PHMB的生物灭杀效果的化合物。相反，所述表面活性剂可能降低PHMB的生物灭杀效果，这可能对伤口的进一步治疗产生负面影响。EP2896395公开了用于局部伤口处理的含有聚六亚甲基双胍(PHMB)和非离子表面活性剂及至少一种共表面活性剂的液体或凝胶，其具有或不具有从草药获得的物质。优选的非离子表面活性剂是聚环氧乙烷和聚环氧丙烷的三嵌段共聚物。三嵌段共聚物优选是泊洛沙姆，特别是泊洛沙姆188。通常认为泊洛沙姆在伤口愈合方面无效，但在几种测试系统中可有效减少术后粘连。此外，没有提及使用螯合剂/络合剂与双胍盐酸盐的组合。US2012/0107415公开了组合的消毒去污剂，其包含至少一种维生素、至少一种金属离子、至少一种表面活性化合物和至少一种其它抗微生物活性物质。抗微生物活性物质是醇类活性物质。US2009/0069436公开了包含双胍或四元(quaternary)化合物的抗微生物洗手(皮肤)组合物。还公开了一种用于皮肤涂擦的组合物，在这种情况下，它还可包含至少一种醇、至少一种脂质体凝胶和至少一种油。或者，组合物可以是皮肤洗剂，在这种情况下，它还可包含至少一种清洁剂和至少一种两性表面活性剂。US2002/0022660公开了使用至少一种醇(30-65重量％)和双胍以及表面活性剂组合作为用于皮肤的深穿透抗微生物组合物，如下所述。由于其已知的高细胞毒性，优选避免使用醇。WO2007068938公开了适用于皮肤和伤口的抗微生物组合物，其包含抗微生物剂源和破坏生物被膜的试剂。公开了使用EDTA作为破坏生物被膜的试剂，并且抗微生物剂选自碘、离子银或氧化剂例如次氯酸钠或二氧化氯。这些抗微生物剂已显示出具有较高的细胞毒性。WO2013086181公开了至少一种抗微生物聚合双胍和至少一种抗微生物邻位二醇的组合，以减少或消除生物被膜群落。描述了一种处理表面或外科敷料的方法，以及在牙科治疗中，例如用于牙龈炎。由于该发明的抗微生物单烷基邻位二醇具有低水溶性或可忽略不计的水溶性，因此需要添加表面活性剂。所公开的合适的表面活性剂是阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、两性(amphoteric)和兼性(ampholytic)表面活性剂。然而，这些表面活性剂以高剂量使用，特别是以多种形式和不同应用的阴离子表面活性剂，这导致需要较大量的抗微生物剂，例如聚合双胍，以维持组合物的生物灭杀效果。这引起了对组合物的细胞毒性的关注。尚未研究所述组合物的细胞毒性。EP1139759公开了一种消毒剂和清洁剂溶液，其配制为施用于硬表面上。该组合物包含聚合物双胍、季铵盐、螯合剂和清洁剂。其没有公开该组合物在伤口处理中或在生命表面上的用途。因此，未测试组合物的细胞毒性。在牙科和食品/水行业两者中的共同处理是使用抗生物被膜剂，例如EDTA来控制生物被膜。EDTA组合物在消除现有生物被膜和防止生物被膜形成方面非常有效。已经显示，EDTA在低浓度通过抑制细菌粘附来防止生物被膜。此外，也已经显示减少生物被膜定植和增殖。双胍化合物包含混合物的合成聚合物。防腐剂聚六亚甲基双胍(也称为聚己缩胍或PHMB)已经在从泳池消毒剂到化妆品和隐形眼镜溶液中的防腐剂等广泛应用中使用了60多年。近年来，PHMB已被用作伤口冲洗液。PHMB对浮游细菌和生物被膜中的细菌都有效果。已经显示，PHMB对于临床使用是安全的。在12个针对其它常用疗法的生物相容性测试的标准对比测试中，PHMB已经证明其优于氯己定、聚维酮-碘、三氯生、银和磺胺嘧啶。此外，已经报道了对PHMB的未知耐药性，最可能是由于其快速和非特异性的杀菌活性。通常用于抗菌组合物的成分，例如氯己定、醇和二醇具有不期望的副作用。特别是对于长期治疗，即超过两天，这些成分可能引起副作用，例如细胞毒性。US2013/0150451公开了包含双胍和邻位二醇(单烷基二醇、单烷基甘油或单酰基甘油)的组合物。该组合物可进一步包含螯合剂、表面活性剂等。以下文献讨论了醇例如邻位二醇的毒性：Handler,SIAM22,18-21,2016年4月，第3页，第4-7行，“Hydrophobiclongchainalcohol”。以下文献公开了基于醇的拭手液的其它不良效果，包括吸收到血液中和除去认为对皮肤的完整性至关重要的脂质：Hall等人，www.ajicjournal.org，第37卷，第4期，第326页，左栏，第40-47行。另见SevcikovaPetra等人，EuropeanJ.ofLipidScienceandTechnology，2014年4月，第448页，第35-36行和第455行，左栏，第21-28行，其显示1-单酰基甘油具有从轻度到重度的剂量依赖性细胞毒性。以下文献公开了氯己定在成纤维细胞上在较低浓度诱导细胞凋亡和在较高浓度引起坏死：Yi-ChingLi等人，J.DentalScience(2014),9,130-135在第133页。动物和人体研究表明，乙二醇烷基醚(EGAE)可通过吸入、皮肤吸收和摄入引起不利的生殖、发育和血液学影响(AndrzejStarek等人，ArchToxicol(2008)82:125-136，特别是在第126页，第8-11行)。在第127页右栏第20-21行，他们还证明了由所有四种测试的EGAE产生的其材料中外周血的血液学变化。技术实现要素：本发明涉及抗微生物清洁组合物，其中所述组合物对哺乳动物细胞具有极小的细胞毒性或无细胞毒性。新组合物特别适用于伤口的长期治疗，即治疗超过两天、五天、一周或两周。新组合物降低了医疗保健的成本。本发明涉及组合物，其包含a.聚合双胍，b.离子螯合剂，和g.溶剂其中组合物另外任选可包含一种或多种以下成分c.季铵盐，d.至少一种表面活性剂，e.湿润剂(humectant)，和f.胶凝剂。在一个实施方案中，组合物不含阴离子表面活性剂或醇。在另一个实施方案中，组合物具有4至8的pH。可在组合物中使用缓冲剂。在进一步的实施方案中，溶剂是水。聚合双胍可以是聚六亚甲基双胍。离子螯合剂可以是乙二胺四乙酸(EDTA)的二钠盐、三钠盐、四钠盐或其混合物。在一个实施方案中，离子螯合剂是EDTA二钠。在另一个实施方案中，离子螯合剂是EDTA三钠。在进一步的实施方案中，离子螯合剂是EDTA四钠。在一个实施方案中，离子螯合剂是乙二胺四乙酸二钠盐和乙二胺四乙酸三钠盐的组合。本发明的组合物涉及一种非醇抗微生物组合物，它是一种有效的抗微生物清洁产品，没有或具有可忽略不计的细胞毒性。本发明提供一种抗微生物清洁组合物，其组合了低剂量的已知和有效的生物灭杀剂。认为由于协同相互作用，所述组合物表现出大于所有单独抗微生物剂的作用总和的总体抗微生物作用。实验动物研究的结果表明，含有多种低剂量生物灭杀剂的所述组合物产生有效的抗微生物清洁产品，其没有细胞毒性或具有可忽略的细胞毒性并且与医用蜂蜜相当。新组合物特别适用于在伤口可能感染或发炎的一周、两周或三周期间内进行长期治疗。在一个实施方案中，该组合物包含a.聚合双胍，和b.金属离子螯合剂，和g.溶剂，其中a:b的比例为0.75:2.25至1.25:2.25，或约1:2。在另一个实施方案中，该组合物包含a.聚合双胍，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，b.离子螯合剂，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，和g.溶剂，补足至100重量％，和任选的e.湿润剂，其量为40000至100000ppm，或约50000或85000ppm。认为本发明的组合物提供聚合双胍和金属离子螯合剂之间的协同相互作用，以进一步增强其抗菌、清洁作用和从伤口除去蜕皮和坏死组织。在一个实施方案中，该组合物包含a.聚合双胍，b.金属离子螯合剂，c.季铵盐，和g.溶剂其中a:b:c的比例为0.75:2.25:0.30至1.25:2.25:1.25，或约1:2:1。在另一个实施方案中，该组合物包含a.聚合双胍，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，b.离子螯合剂，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，c.季铵盐，其量为400至1250ppm，或约500或1000ppm，和g.溶剂，补足至100重量％，和任选的e.湿润剂，其量为40000至100000ppm，或约50000或85000ppm。认为本发明的组合物通过添加季铵盐来提供聚合双胍和金属离子螯合剂之间的额外协同相互作用，以进一步增强其抗菌、清洁作用和从伤口除去蜕皮和坏死组织。这允许以低剂量使用各成分来改善愈合，甚至用于长期治疗并且对待治疗组织的细胞没有毒性作用。在一个实施方案中，该组合物包含a.聚合双胍，b.金属离子螯合剂，d.至少一种表面活性剂，和g.溶剂其中a:b:d的比例为0.75:2.25:0.75至1.25:2.25:2.25，或约1:2:2。在另一个实施方案中，该组合物包含a.聚合双胍，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，b.离子螯合剂，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，d.至少一种表面活性剂，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，和g.溶剂，补足至100wt％，和任选的e.湿润剂，其量为40000至100000ppm，或约50000或85000ppm。在进一步的实施方案中，该组合物包含a.聚六亚甲基双胍，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，b.EDTA，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，d1.聚山梨酯60，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，d2.十一碳烯酰胺丙基甜菜碱，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，g.水，补足至100wt％，和e.甘油，其量为40000至100000ppm，或约50000或85000ppm。认为本发明的组合物通过添加至少一种表面活性剂来提供聚合双胍和金属离子螯合剂之间的额外协同相互作用，以进一步增强其抗菌、清洁作用和从伤口除去蜕皮和坏死组织。这允许以低剂量使用各成分来改善愈合，甚至用于长期治疗并且对待治疗组织的细胞没有毒性作用。在一个实施方案中，该组合物包含a.聚合双胍，b.金属离子螯合剂，c.季铵盐，d.至少一种表面活性剂；和g.溶剂其中a:b:c:d的比例为0.75:2.25:0.30:0.75至1.25:2.25:1.25:2.25，或约1:2:1:2。在另一个实施方案中，该组合物包含a.聚合双胍，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，b.离子螯合剂，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，c.季铵盐，其量为400至1250ppm，或约500或1000ppm，d.至少一种表面活性剂，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，和g.溶剂，补足至100wt％，和任选的e.湿润剂，其量为40000至100000ppm，或约50000或85000ppm。在进一步的实施方案中，该组合物包含a.聚六亚甲基双胍，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，b.EDTA，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，c.苯扎氯铵，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，d1.聚山梨酯60，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，d2.十一碳烯酰胺丙基甜菜碱，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，g.水，补足至100wt％，和e.甘油，其量为40000至100000ppm，或约50000或85000ppm。认为本发明的组合物通过添加至少一种非离子表面活性剂来提供聚合双胍、金属离子螯合剂和季铵盐之间的额外协同相互作用，以进一步增强其抗菌、清洁作用和从伤口除去蜕皮和坏死组织。认为本发明的组合物通过添加至少一种两性表面活性剂来提供聚合双胍、金属离子螯合剂和季铵盐之间的额外协同相互作用，以进一步增强其抗菌、清洁作用和从伤口除去蜕皮和坏死组织。在另一个实施方案中，所述至少一种表面活性剂包括至少一种非离子表面活性剂或至少一种两性表面活性剂或其混合物，所述表面活性剂具有8至20、或10至18的亲水-亲油平衡值。在一个实施方案中，非离子表面活性剂可以是聚山梨酯或聚山梨酯60。在进一步的实施方案中，所述两性表面活性剂可以是十一碳烯酰胺丙基甜菜碱或椰油基甜菜碱(cocobetaine)。在进一步的实施方案中，该组合物包含a.聚合双胍，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，b.离子螯合剂，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，和g.溶剂，补足至100wt％，和任选的一种多种以下成分c.季铵盐，其量为400至1250ppm，或约500或1000ppm，d.至少一种表面活性剂，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，e.湿润剂，其量为40000至100000ppm，或约50000或85000ppm，和f.胶凝剂，其量为1.5至2.5wt％，或约1.8wt％。在其它进一步的实施方案中，该组合物包含a.聚合双胍，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，b.离子螯合剂，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，d.至少一种表面活性剂，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，e.湿润剂，其量为40000至100000ppm，或约50000或85000ppm，和g.溶剂，补足至100wt％，和任选的一种多种以下成分c.季铵盐，其量为400至1250ppm，或约500或1000ppm，和f.胶凝剂，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，在上述任何组合物中使用的聚合双胍可以是聚六亚基双胍(PHMB)。在上述任何组合物中使用的离子螯合剂可以是乙二胺四乙酸(EDTA)。在上述任何组合物中使用的季铵盐可以是苯扎氯铵。在上述任何组合物中使用的至少一种表面活性剂可以是聚山梨酯或聚山梨酯60，或十一碳烯酰胺丙基甜菜碱或椰油基甜菜碱。在上述任何组合物中使用的湿润剂可以是甘油。在上述任何组合物中使用的胶凝剂可以是羟乙基纤维素。在上述任何组合物中使用的溶剂可以是水。上述任何组合物中的pH可以是4至8，或5至7，或5.5至6.5。上述任何组合物中的亲水-亲油平衡值可以是8至20或10至18。在一个实施方案中，该组合物包含a.聚六亚甲基双胍，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，b.乙二胺四乙酸，其量为1750至2250ppm，或约2000ppm，d1.一种选自聚山梨酯或聚山梨酯60的表面活性剂，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，d2.一种选自十一碳烯酰胺丙基甜菜碱或椰油基甜菜碱的表面活性剂，其量为750至1250ppm，或约1000ppm，e.甘油，其量为40000至100000ppm，或约50000或85000ppm，和g.水，补足至100wt％，和任选的f.羟乙基纤维素，其量为1.5至2.5wt％，或约1.8wt％，和c.苯扎氯铵，其量为400至1250ppm，或约500或1000ppm，其中组合物的pH是4至8，或5至7，或5.5至6.5。根据本发明的抗微生物清洁组合物涉及消除伤口中的微生物，包括但不限于革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌、病毒、酵母、真菌、原生动物。根据本发明的抗微生物清洁组合物是聚合双胍碱组合物，其显示出与医用蜂蜜类似的可忽略的或无细胞毒性。该组合物不具有细菌耐药性，并且因此可用于改善针对多药耐药性生物体的功效，所述多药物耐药性生物体可感染伤口并导致增加的发病率，包括耐甲氧西林的(methicillin-resistant)金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa)。由于组合物可忽略不计的细胞毒性，该组合物加速伤口愈合，特别是在长期治疗期间。该新组合物可用于哺乳动物(例如人)的伤口愈合，尤其用于除去生物被膜。伤口可存在于哺乳动物体内或存在于哺乳动物的皮肤上。组合物中存在的低剂量成分允许使用对哺乳动物细胞具有最小细胞毒性或无细胞毒性的组合物。这改善了伤口愈合。因此，与已知组合物相比，新组合物改善了伤口愈合的安全性、功效和效率。由于组合物可忽略不计的或低的细胞毒性，该组合物可用于伤口的长期治疗，例如超过2天或5天或10天或14天或21天或更多天的治疗。根据本发明的抗微生物清洁组合物涉及治疗含有伤口的软组织和/或骨骼。该组合物可用作手动或自动使用负压伤口治疗装置的伤口冲洗液。该组合物可以软膏、乳膏、凝胶、溶液和伤口敷料的形式制成。本发明的组合物可以是药物组合物。本发明涉及如本申请所定义的组合物，其用作药物。如本申请所定义的组合物可用于治疗、预防或减少与微生物有关的疾病、障碍或病症，其对细胞具有降低的细胞毒性或无细胞毒性。如本申请所定义的组合物可用于治疗、预防或减少哺乳动物的感染或发炎伤口。感染或炎症可以是急性或慢性的。哺乳动物可以是人或动物例如大鼠。如本申请所定义的组合物可用于伤口的清创和用于除去坏死组织。本发明涉及如本申请所定义的组合物，其用于治疗、预防或减少选自以下的疾病、障碍或病症：急性或慢性感染、急性或慢性炎症例如牙龈炎、糖尿病溃疡、二度部分皮层烧伤、创伤性伤口、棘阿米巴角膜炎等。本发明涉及如本申请所定义的组合物在治疗、预防或减少与微生物有关的疾病、障碍或病症中的用途。本发明还涉及如本申请所定义的组合物用于治疗、预防或减少微生物生长中的用途，尤其是存在于哺乳动物中或哺乳动物上的伤口。本发明尤其涉及如本申请所定义的组合物用于治疗或预防生物被膜或减少生物被膜(例如中耳中的生物被膜)的形成方面的用途。所述生物被膜由微生物产生。本发明进一步涉及如本申请所定义的组合物用于伤口清创和用于除去坏死组织和/或改善伤口愈合中的用途。此外，本发明涉及如本申请所定义的组合物用于治疗、预防或减少哺乳动物体内感染骨骼和/或感染体腔中的用途。本发明还涉及如本申请所定义的组合物的局部施用，其用于哺乳动物，用于治疗、预防或减少与微生物有关的疾病、障碍或病症；或治疗、预防或减少选自以下的疾病、障碍或病症：急性或慢性感染，急性或慢性炎症例如牙龈炎，糖尿病溃疡，二度部分皮层烧伤，创伤性伤口，棘阿米巴角膜炎，坏死性筋膜炎，静脉瘀血病，压力性溃疡例如腿部溃疡，或癌；或治疗、预防或减少急性或慢性感染伤口、或急性或慢性发炎伤口、或生物被膜的形成；或用于清创伤口和除去坏死组织，或上面提到的任何用途。所述疾病、障碍或病症可以是局部感染。该组合物甚至可用于表面的消毒，例如寝具、手术台、管道和可重复使用的医疗设备。该组合物可用于伤口清洁溶液、伤口敷料、隐形眼镜溶液、漱口液、化妆品防腐剂、食品消毒剂、兽医应用、泳池清洁剂和工业水处理。该组合物可用于对抗绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌(也是耐甲氧西林类型，MRSA)、大肠杆菌、白色念珠菌(Candidaalbicans)(酵母)、巴西曲霉(Aspergillusbrasiliensis)(霉菌)、耐万古霉素肠球菌(enterococci)和肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)(耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌)。本发明进一步涉及治疗、预防或减轻与微生物有关的疾病、障碍或病症的方法，该方法包括向有此需要的哺乳动物施用治疗有效量的如本申请所定义的组合物。在一个实施方案中，该方法涉及治疗、预防或减少选自以下的疾病、障碍或病症：急性或慢性感染，急性或慢性炎症例如牙龈炎，糖尿病溃疡，二度部分皮层烧伤，创伤性伤口，棘阿米巴角膜炎，坏死性筋膜炎，静脉瘀血病，压力性溃疡例如腿部溃疡，或癌；或治疗、预防或减少急性或慢性受感染伤口、或急性或慢性发炎伤口、或生物被膜的形成；或用于清创伤口和除去坏死组织。本发明还涉及如本申请所定义的组合物在制备用于哺乳动物的药物中的用途，所述药物用于治疗、预防或减少与微生物有关的疾病、障碍或病症的药物；或用于治疗、预防或减少选自以下的疾病、障碍或病症：急性或慢性感染，急性或慢性炎症例如牙龈炎，糖尿病溃疡，二度部分皮层烧伤，创伤性伤口，棘阿米巴角膜炎，坏死性筋膜炎，静脉瘀血病，压力性溃疡例如腿部溃疡，或癌；或用于治疗、预防或减少急性或慢性受感染伤口、或急性或慢性发炎伤口、或生物被膜的形成；或用于清创伤口和除去坏死组织。本发明还涉及一种适用于伤口愈合的系统，其包括：负压源，用于收集伤口渗出物的罐，含有如上定义的组合物的贮存器，用于转移预定体积的组合物的液体注射器装置，和用于将组合物转移到感染软组织或骨骼和将组合物从感染软组织或骨骼中转移出来的连接管，负压伤口敷料，该系统适于将流体从贮存器抽吸到伤口敷料和在5至60分钟的保持时间后将流体从伤口敷料中抽出。伤口敷料可以用本发明的组合物浸泡。粘合膜或胶带可用于稳定伤口敷料和管子。在一个实施方案中，该系统还包括控制单元，其适于控制组合物从伤口的流入和流出。在进一步的实施方案中，控制单元适于在5至60分钟的保持时间后启动负压源，使得从伤口移除组合物和向伤口添加新鲜组合物。该系统可包括阀门以进一步控制组合物流动通过管子。本发明还涉及如上定义的系统在以下方面的用途，其用于哺乳动物，用于治疗、预防或减少与微生物有关的疾病、障碍或病症；或治疗、预防或减少选自以下的疾病、障碍或病症：急性或慢性感染，急性或慢性炎症例如牙龈炎，糖尿病溃疡，二度部分皮层烧伤，创伤性伤口，棘阿米巴角膜炎，坏死性筋膜炎，静脉瘀血病，压力性溃疡例如腿部溃疡，或癌；或治疗、预防或减少急性或慢性感染伤口、或急性或慢性发炎伤口、或生物被膜的形成；或用于清创伤口和除去坏死组织，或上面提到的任何用途。根据本发明的系统的优点是组合物连续地(周期性地)流入和流出伤口。这可以防止生物被膜形成，改善伤口愈合的功效和效率。该系统尤其适用于伤口的长期治疗。附图说明图1显示了适用于伤口愈合的负压系统。图2显示A(X100)、B(X400)；PHMB组在第7天的溃疡的组织病理学变化显示溃疡、慢性炎症和肉芽组织形成，和C(X100)、D(X400)；同一组在第21天病变的组织病理学变化显示完全再上皮化和新血管形成。具体实施方式定义：伤口可定义为由于皮肤或下层组织/器官的损伤造成的皮肤保护功能的破坏、上皮的连续性的丧失，其具有或没有下层结缔组织(即肌肉、骨骼、神经)的丧失，该皮肤或下层组织/器官的损伤由创伤、烧伤、糖尿病溃疡、严重感染例如坏死性筋膜炎、静脉瘀血病和压力性溃疡引起(但不限于此)，或由于疾病例如腿部溃疡或癌引起。伤口可以定义为具有如感染、炎症(开放性腹部伤口、脓肿、具有或没有植入物的感染关节)的现有病理学的闭合腔，或通过瘘管连接到外部环境的腔。医用蜂蜜或(ComvitaLtd,NewZealand)是一种高级伤口护理敷料，因其具有促进除去坏死组织和促进伤口愈合的临床能力而使用。通过实验动物研究将本发明组合物的细胞毒性与Medihoney进行比较。“生物被膜”可定义为微生物作为包裹在胞外聚合物(EPS)的基质内的多微生物群落的定植。这种微生物群落通常表面结合而彼此附着，并形成微生物群落。包裹在自生EPS中并附着在表面(液体或固体)上的微生物群落的组合可定义为生物被膜。“一个”和“这个”应理解为不仅包括一个，而且包括一个或多个跟随所述“一个”或“这个”之后的对象。因此，应理解一种表面活性剂表示一种或多种表面活性剂。“wt％”是组合物总重量的重量百分比。“ppm”是份每百万份。微生物可以是革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌、病毒、酵母、真菌、原生动物等。本发明涉及伤口愈合制剂，其包含至少一种抗微生物聚合双胍和至少一种金属离子螯合剂，含有或不含有一种抗微生物季铵化合物。聚合双胍与金属离子螯合剂和任选的季铵盐的组合可在低浓度在这些要素之间产生协同作用，以提供有效的生物灭杀剂组合物。本发明不仅基于提供显示出优异的生物灭杀作用的组合物，而且还表现出可忽略的或低的细胞毒性。低浓度活性成分的组合导致混合物具有低细胞毒性和较好的与环境的相容性。术语“长期治疗”具有的含义是治疗超过2天或5天或10天或14天或21天或更多天。聚合双胍优选的聚合双胍是聚六亚甲基双胍(PHMB)，可商购自例如ArchChemicals(CAS号51274-09-0)。众所周知，聚六亚甲基双胍(PHMB)具有广谱杀细菌和杀真菌作用，具有良好的组织耐受性。PHMB已用于伤口清洁溶液、伤口敷料、隐形眼镜溶液、漱口液、表面消毒剂、化妆品防腐剂、食品消毒剂、兽医应用、泳池清洁剂和工业水处理。PHMB已显示可有效对抗绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌(也是耐甲氧西林类型，MRSA)、大肠杆菌、白色念珠菌(酵母)、巴西曲霉(霉菌)，耐万古霉素肠球菌和肺炎克雷伯菌(耐碳青霉烯类的肠杆菌科细菌)。已经对金黄色葡萄球菌进行了测试以研究该细菌形成对PHMB的耐药性的潜在风险。发现风险非常低。对伤口愈合的炎症过程(特别是在感染或严重定植的伤口中)的额外积极影响已经结合炎症参数例如自由基，显示出其抗氧化潜力。在一些不愈合的伤口中使用PHMB的临床效果是有希望的。阳离子季铵化合物本发明的组合物可包含阳离子季铵化合物，其选自具有长烷基链的季铵盐，例如苯扎氯铵(benzalkoniumchloride)、苄索氯铵(benzethoniumchloride)、甲基苄索氯铵(methylbenzethoniumchloride)、西他氯铵(cetalkoniumchloride)、西吡氯铵(cetylpyridiniumchloride)、十六烷基三甲基铵(cetrimonium)，西曲溴铵(cetrimide)、多法氯铵(dofaniumchloride)、溴化四乙铵、二癸基二甲基氯化铵和溴化度米芬(domiphenbromide)，及其混合物。优选使用的季铵化合物是苄索氯铵、甲基苄索氯铵，最优选的是苯扎氯铵，分子式为C21H38ClN，CAS号为8001-54-5。季铵化合物是阳离子洗涤剂，以及消毒剂和表面活性剂，并且因此可用于除去有机物质。季铵化合物通过阴离子洗涤剂失活。某些季铵化合物，尤其是含有长烷基链的季铵化合物，用作抗微生物剂和消毒剂。认为季铵化合物通过破坏细胞膜起作用，并且对抗真菌、变形虫和包膜病毒也是有益的。季铵化合物对除内生孢子、结核分枝杆菌和无包膜病毒之外的众多生物体都是致命的。金属离子螯合剂合适的螯合剂包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)的混合盐，例如EDTA的二钠盐、三钠盐、四钠盐、二钾盐、三钾盐、四钾盐、锂盐、二锂盐、铵盐、二铵盐、三铵盐、四铵盐、钙盐和钙二钠盐，更优选EDTA的二钠盐、三钠盐或四钠盐，优选EDTA二钠和EDTA四钠。EDTA因其抗生物被膜效果而用于本发明。EDTA是一种众所周知的金属螯合剂。EDTA已被用作渗透敏化剂，用于治疗牙科、医疗器械以及兽医和人类医学中的生物被膜相关病症。EDTA的效果及其对细菌细胞壁螯合和增强效能的能力及其通过螯合钙、镁、锌和铁使生物被膜不稳定的能力使其成为适用于预防和管理生物被膜的试剂。EDTA通常通过与其它活性物质(包括醇、抗生素、柠檬酸、聚六亚甲基双胍(PHMB)、季铵化合物、银、碘)、表面活性剂和其它防腐剂组合用于控制微生物和生物被膜。表面活性剂本发明用于清创伤口的抗微生物组合物可包括至少一种非离子表面活性剂或至少一种两性表面活性剂或其混合物。表面活性剂可具有5-25、或8-20、或10-18的HLB(亲水-亲油平衡)值，以保持抗微生物剂的生物灭杀活性。术语表面活性剂来自词汇表面活性试剂。表面活性剂是构成洗涤剂的许多不同化合物之一。添加它们是为了去除皮肤、衣服和家居用品上的污垢。表面活性剂具有疏水部分和亲水部分。疏水部分包含不带电荷的碳水化合物基团，其可以是直链、支链、环状或芳族的。取决于亲水部分的性质，表面活性剂分为离子型、非离子型、阳离子型或两性型。非离子表面活性剂具有不带电荷的亲水部分的表面活性剂，例如，乙氧基化物，是非离子的。这些物质非常适合用于清洁目的。它们在清洁洗涤剂中有广泛的应用，并且包括如脂肪醇多糖苷、醇乙氧基化物等基团。合适的非离子表面活性剂包括化学式为C24H46O6、CAS登记号为1338-41-6的聚山梨醇酯60，脂肪酸的癸基葡糖苷和月桂基葡糖苷聚乙二醇酯，例如椰子(coconut)、聚山梨酯、聚氧乙烯。其它实例可以是以商标20获得的聚山梨酯20，以商标S40获得的聚氧乙烯(40)硬脂酸酯，以商标G2612获得的聚氧乙烯(25)丙二醇硬脂酸酯，和以商标(35)获得的聚氧乙烯(23)月桂基醚。可添加其它非离子表面活性剂，例如泊洛沙姆的环氧乙烷/环氧丙烷嵌段共聚物，和泊洛沙姆。泊洛沙姆和泊洛沙胺是优选的，并且泊洛沙姆是最优选的。泊洛沙姆和泊洛沙胺可从BASFCorp.以和的商标获得。本发明涉及具有两亲性质并且是非离子性的聚山梨酯(特别是聚山梨酯60)与PHMB组合用于治疗患有急性或慢性伤口的人和动物的用途，例如在伤口防腐剂中作为手动伤口冲洗液或作为使用负压伤口治疗设备的自动伤口冲洗液，用在软膏、乳膏、凝胶、溶液和伤口敷料中。两性表面活性剂用于本发明组合物的两性表面活性剂可选自甜菜碱、胺氧化物和咪唑鎓衍生物。在所述表面活性剂中，特别优选烷基甜菜碱、烷基胺氧化物和烷基咪唑鎓衍生物。优选的烷基甜菜碱包括月桂基二甲基甜菜碱(Cas号：683-10-3)、椰油基甜菜碱(Cas号：68424-94-2)、肉豆蔻基甜菜碱(Cas号：2601-33-4)、癸基甜菜碱(Cas号：2644-45-3)、月桂基磺基甜菜碱(Cas号：14933-08-5)、油烯基二甲基甜菜碱(Cas号：871-37-4)、十二烷基甜菜碱(Cas号：55142-08-0)、辛酰基甜菜碱(Cas号：27593-14-2)和山嵛基甜菜碱(Cas号：26920-62-7)。优选的胺氧化物包括月桂胺氧化物(Cas号：1643-20-5)、月桂酰胺丙胺氧化物(Cas号：61792-31-2)、椰油胺氧化物(Cas号：61788-90-7)、椰油酰胺丙胺氧化物(Cas号：68155-09-9)、肉豆蔻胺氧化物(Cas号：3332-27-2)和大豆油酰胺丙胺氧化物(Cas号：223707-70-8)。优选的咪唑啉表面活性剂包括椰油酰两性基二乙酸二钠(Cas号：68650-39-5)、月桂酰两性基二乙酸二钠(Cas号：14350-97-1)、月桂酰两性基乙酸钠(Cas号：26837-33-2)、椰油酰两性基二丙酸二钠(Cas号：68604-71-7)和椰油酰两性基乙酸钠(Cas号：68334-21-4)。对于两性表面活性剂，亲水部分的电荷由溶液的pH控制。这意味着它们可以在碱性溶液中充当阴离子表面活性剂或在酸性溶液中充当阳离子表面活性剂。阴离子表面活性剂表面活性剂的亲水部分包含带负电荷的基团如烷基磺酸盐、烷基硫酸盐或羧酸盐或烷基苯磺酸盐。阴离子表面活性剂中和PHMB的生物灭杀剂作用，因此这两者的组合是不可取的。因此，本发明的抗菌组合物不包括阴离子表面活性剂。湿润剂抗微生物制剂包含至少一种湿润剂。干燥的伤口无法愈合。在制剂中使用湿润剂以增加皮肤的水分含量。湿润剂促进角质层内的水分保留并防止伤口干燥。湿润剂可选自甘油、卵磷脂、二丙二醇、聚乙二醇及其衍生物、1,2-丙二醇、1,3-丁二醇和1,2,6-己三醇、β-谷甾醇、肌醇、硬脂酸甘油酯、泛醇和木糖醇。溶剂溶剂可选自乳酸盐林格溶液、不含乳酸盐的林格溶液、生理盐水和纯化水作为溶剂。在本发明中，通过蒸馏的纯化水是优选选择的溶剂。缓冲剂该组合物的pH优选为4.0至8，特别是5至7，优选5.5至6.5。在伤口愈合期间伤口床pH的作用是显著的，并且已显示伤口床的长时间酸化增加慢性静脉性腿部溃疡的愈合速率。用于调节pH的合适缓冲剂可包括柠檬酸钠、柠檬酸钾和柠檬酸。用于pH调节的另一种优选缓冲剂是乙二胺四乙酸二钠盐和乙二胺四乙酸三钠盐的组合。胶凝剂胶凝剂是在不显著改变其它性质的情况下可增加液体粘度的物质。然而，可单独或与其它胶凝剂组合使用任何纤维素衍生物(例如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素)以获得凝胶形式的组合物。另一种优选的胶凝剂是以商标获得的羧基聚亚甲基。934P型是高纯度产品并且可用于本发明的制剂中。在一个优选的方面，本申请所述的含水抗微生物组合物包括以下浓度范围的生物灭杀聚合双胍：100ppm至10,000ppm，或300ppm至5,000ppm，或1,000ppm至2,000ppm，或750ppm至1,500ppm，或750ppm至1,250ppm，或850ppm至1,150ppm。当存在季铵化合物时，其优选以稀释形式以50ppm至10,000ppm的量存在，更优选以500ppm至5,000ppm的量存在，更优选以1,000至2,000ppm、或750ppm至1,500ppm、或750ppm至1,250ppm、或850ppm至1,150ppm的量存在。金属离子螯合剂的量至少为200ppm。优选的浓度范围为300ppm至10,000ppm，或750ppm至5,000ppm，或1,000至3,000ppm，或1500ppm至2,500ppm，或1750ppm至2,250ppm，或1850ppm至2,150ppm。EDTA将通过螯合维持生物被膜的结构的钙和镁离子提供抗生物被膜能力，并除去对微生物毒力和致病性至关重要的铁。在一个优选的方面，该制剂是包含稀释形式的至少一种非离子表面活性剂或至少一种两性表面活性剂或其混合物的溶液，其浓度为100ppm至10,000ppm，或范围为500ppm至5,000ppm，或范围为2,000ppm至4,000ppm，或范围为1500ppm至2,500ppm，或范围为1750ppm至2,250ppm，或范围为1850ppm至2,150ppm。湿润剂的量为至少5,000ppm。优选的浓度范围为70,000至100,000ppm，或30,000ppm至100,000ppm，更优选40,000ppm至60,000ppm，或75,000ppm至90,000ppm。用于凝胶的制剂包含0.05-10重量％、或0.5-5重量％、或1-3重量％、或1.5-2重量％的胶凝剂，并通过添加溶剂完整至100％。在局部施用中，抗微生物组合物可以不同的形式制备，例如但不限于液体、乳膏、泡沫、洗剂、凝胶和喷雾剂。本发明的组合物可通过使用伤口敷料材料和无纺布、泡沫、海绵、拭子、手术纱布垫、布来施用。如上所述，材料可在任一种本发明组合物中饱和或浸泡在任一种本发明组合物中。在局部施用中，抗微生物组合物产品还可以按液体形式施用于伤口或体腔，用于手动或滴注或与负压伤口治疗装置一起自动冲洗。液体流动系统和伤口敷料利用负压伤口治疗系统，其包括负压源装置和负压伤口敷料和连接管。液体流动系统可通过重力进料系统抽取液体形式的所述组合物。液体流动系统可通过使用电动或机械泵抽取液体形式的所述组合物。图1示出系统或液体流，其包括：负压源N10，用于收集伤口渗出物的罐(C10)，含有如上定义的组合物(F)的贮存器(R10)，用于转移(预定)体积的组合物的液体注射器装置(I10)，和将组合物转移到感染软组织或骨骼(S10)中和将组合物从感染软组织或骨骼(S10)中转移出来的连接管(T10，T20，T30)。可以使用可用本发明组合物浸泡的伤口敷料(W10)。粘合膜或胶带可用于稳定伤口敷料和管子。该系统还可包括控制单元(未示出)，其适于控制组合物从伤口的流入和流出。控制单元可适于在5至60分钟的保持时间之后启动负压源，使得从伤口移除组合物和向伤口添加新鲜组合物。该系统可包括位于管子或贮存器、罐等上的阀门，以进一步控制组合物流动通过管子。该系统可利用控制单元(其可以是计算机化系统)来“启动”和“停止”以控制将一定体积的所述组合物递送至伤口敷料。该系统可在“保持时间”之后启动负压装置以将所述组合物从伤口敷料中抽出。所述保持时间为约5至60分钟，优选10至30分钟，最优选20分钟，以使组合物具有抗菌和清洁效果。制剂、尤其是抗微生物组合物的局部制剂可另外包含稀释剂、赋形剂和药物制剂中常用的其它添加剂，例如乳化剂、胶凝剂、保湿剂(moisturizer)、稳定剂、定时释放剂。制剂的实施例根据本发明的组合物包括双胍和螯合剂。该组合物可进一步包括如上所述的其它成分。已经制备了以下组合物：实施例1试剂量(ppm)1)PHMB10002)EDTA20003)甘油,湿润剂500004)聚山梨酯6010005)椰油基甜菜碱10006)纯化水至100％实施例2试剂量(ppm)1)PHMB10002)EDTA20003)甘油500004)聚山梨酯6010005)十一碳烯酰胺丙基甜菜碱表面活性剂10006)纯化水至100％实施例3试剂量(ppm)1)PHMB10002)苯扎氯铵10003)EDTA20004)甘油500005)聚山梨酯6010006)椰油基甜菜碱10007)纯化水至100％实施例4实施例5试剂量(ppm)1)PHMB10002)EDTA20003)甘油850004)聚山梨酯6010005)椰油基甜菜碱10006)羟乙基纤维素1.8wt.％7)纯化水至100％实施例6试剂量(ppm)1)PHMB10002)EDTA20003)甘油500004)聚山梨酯6010005)十一碳烯酰胺丙基甜菜碱10006)羟乙基纤维素1.8wt.％7)纯化水至100％实施例7实施例8试剂量(ppm)1)PHMB10002)苯扎氯铵5003)EDTA20004)甘油850005)聚山梨酯6010006)十一碳烯酰胺丙基甜菜碱10007)羟乙基纤维素1.8wt.％8)纯化水至100％实验动物研究实验1动物和切除伤口模型该工作遵循国立实验动物保健与利用研究所(NationalInstituteofHealthfortheCareandUseofLaboratoryAnimals)的指南。选择22只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠(平均体重350g)进行该实验工作。将大鼠保持在干净且分开的底部金属丝笼中，并安置于温度受控(22±2℃)和湿度受控(55±15％)的房间内，该房间具有12小时光照:黑暗的光周期。所有大鼠都可自由获取等量的标准动物食物和水。在开始研究之前，使大鼠适应环境一周。在创伤之前，通过肌内注射硫喷妥钠(thiopentalsodium)(40mg/kg；Biochemie，GmbH，Austria)和甲苯噻嗪(xylazine)(10mg/kg；AlfasanInternational，Woerden，Netherlands)麻醉大鼠；然后，在剃掉背部毛发之后，用乙醇溶液对创伤产生部位进行消毒。接下来，使用剪刀和手术钳在每只大鼠的背部产生全层切除圆形皮肤伤口(直径20mm，深度2mm)。为了进行研究，将大鼠随机分为两组(n＝11)：(1)：在伤口表面区域上施用根据本发明的组合物(实施例2)的组(第1组)；(2)：在伤口表面区域上施用ComvitaLtd,NewZealand的组(第2组)。在研究期间，用一次性涂药器每天将上述产品施用于伤口，从而产生完全覆盖伤口表面区域的薄层(在实验中未使用敷料)。两组均随访21天。伤口愈合的摄影评估(PhotographicAssessment)从用12.1兆像素数码相机(PowerShotG9；Canon,Tokyo,Japan)拍摄的每个皮肤伤口的图像以摄影方式监测愈合过程。为了校准照片的放大率，将相机保持在离伤口表面10cm的固定距离处(在垂直视图中)，并在成像时将细线标尺放置在伤口水平线。在伤后第0、7和21天拍摄照片并使用PhotoshopCS程序(AdobeSystems，SanJose，CA，USA)(分析菜单(analysismenu)；记录测量命令(recordmeasurementscommand))进行分析。结果如图2所示。伤口愈合的组织病理学评价在伤后第7天(伤口部位的一半具有2mm的边缘)和第21天(剩余部分具有2mm的边缘)拍摄来自两组大鼠伤口部位的半圆形全层皮肤活检组织。在第7天通过吸入醚麻醉动物，并在第21天用醚使动物安乐死。用无菌生理盐水洗涤组织样品，立即固定在缓冲的甲醛(10％福尔马林)中，并送至使用已建立的技术(苏木精和曙红和Masson三色染色法，和光学显微镜检查)进行组织病理学评估。由Abramov及其同事开发的用于伤口愈合过程的组织病理学评价的评分系统适用于该研究。该评分系统使用以下特征：急性和慢性炎性浸润的量、肉芽组织的量和成熟、新血管形成、胶原沉积和再上皮化。评估组织样本或分析图像的所有研究者都对给定的药剂进行盲选(blinded)。统计学分析结果表示为平均值±标准偏差(SD)。使用Mann-WhitneyU-检验(SPSSStatistics软件，版本16；Chicago，Illinois，USA)进行统计学比较。P值小于0.05被认为是统计学显著的。结果伤口收缩(WoundContraction)使用在伤后第0、7和21天拍摄的图像计算每组的伤口表面积的平均值±SD值(表1)。根据结果，在实验的第0、7和21天，两组的平均伤口表面积之间没有统计学显著差异。在研究期间，大鼠的伤口没有表现出明显的感染迹象。组织病理学检查组织病理学评估的结果总结在表2中。根据该研究，两组之间在急性和慢性炎症、肉芽组织的量和成熟、新血管形成、胶原沉积和再上皮化等因素方面没有统计学显著差异。没有发现坏死。结论已经表明，在新鲜皮肤伤口上每日局部施用根据本发明的组合物(实施例2)具有与用于愈合过程的医用蜂蜜类似的功效。另外，对在使用本发明的组合物(实施例2)之后发生的伤口愈合过程中涉及的参数没有显著的负面影响(即细胞毒性)。当前第1页1 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