基于35u.s.c.§119(e)，本专利申请要求于2016年2月19日提交的美国临时专利申请第62/297,739号以及于2016年9月26日提交的美国临时专利申请第62/399,989的号的权益，其全部内容以引用方式结合于本文。本发明申请总体上涉及具有溶瘤型hsv和tat1/3抑制剂的组合物，以及用溶瘤型hsv和tat1/3抑制剂治疗癌症。
背景技术：
：：溶瘤病毒(ov)已经成为通过溶瘤效应特异性破坏癌细胞的一种治疗选择，溶瘤效应是一种特征在于通过病毒裂解复制的过程实现癌细胞裂解的杀伤机制。除了通过病毒直接杀死细胞之外，还证实了病毒诱导的免疫应答在ov治疗中起到了关键作用。由于ov能够通过区别于常规化疗和放疗的杀伤效应的机制来杀死癌细胞，因而ov对于治疗对常规治疗无响应的癌症可能是理想的。在各种ov中，1型单纯疱疹病毒系ov是最先进的，例如，美国fda已经批准了疱疹病毒系ov(t-vec)用于治疗黑素瘤。最经常研究的用于治疗癌症(例如多形性胶质母细胞瘤(gbm))的溶瘤病毒是具有γ34.5缺失的突变体hsv-1(1型单纯疱疹病毒)。尽管其具有优异的安全性，但许多ohsv-1的临床功效仍然令人失望。本发明克服了目前商业化溶瘤病毒的缺点，并且进一步提供了另外的不可预期的益处。技术实现要素：简言之，本发明提供了治疗癌症的组合物和方法。在某些实施方式中，提供了包括同时或序贯施用溶瘤病毒和stat1/3抑制剂的方法。在实施方式中，癌症是乳腺癌、脑癌(例如，胶质母细胞瘤)、结肠癌、肺癌或前列腺癌。在实施方式中，溶瘤病毒是单纯疱疹病毒，并且在某些实施方式中，hsv是hsv-1。在本发明的在某些实施方式中，溶瘤病毒是具有缺陷型病毒核糖核酸酶还原酶基因的hsv-1，并且可选地，具有完整icp34.5基因。在实施方式中，溶瘤型单纯疱疹病毒基因组中icp34.5基因的所有拷贝经过修饰，以使得该icp34.5基因不能表达功能性icp34.5基因产物。在其他的实施方式中，icp6基因经过修饰，以使得该icp6基因不能表达功能性icp6基因产物。在其他的实施方式中，icp47基因经过修饰，以使得该icp47基因不能表达功能性icp47基因产物。在一些实施方式中，ohsv具有icp34.5和icp47基因二者的修饰。在实施方式中，溶瘤型单纯疱疹病毒是毒株17的突变体。在另外其他的实施方式中，溶瘤病毒是hsv-1hrr3毒株。在实施方式中，stat1/3抑制剂是硝基呋喃；在某些实施方式中，硝基呋喃是硝呋酚酰肼或其衍生物或类似物。在其他的实施方式中，stat1/3抑制剂是c16或其衍生物或类似物。要求保护的技术方案还涉及包含溶瘤病毒和stat1/3抑制剂的药物组合物。在实施方式中，该溶瘤病毒是单纯疱疹病毒，并且在某些实施方式中，hsv是hsv-1。在本发明的在某些实施方式中，该溶瘤病毒是具有缺陷型病毒核糖核酸酶还原酶基因的hsv-1，并且可选地，具有完整icp34.5基因。在实施方式中，溶瘤型单纯疱疹病毒基因组中icp34.5基因的所有拷贝经过修饰，以使得该icp34.5基因不能表达功能性icp34.5基因产物。在其他的实施方式中，icp6基因经过修饰以使得该icp6基因不能表达功能性icp6基因产物。在其他的实施方式中，icp47基因经过修饰以使得该icp47基因不能表达功能性icp47基因产物。在一些实施方式中，ohsv经过icp34.5和icp47基因二者的修饰。在实施方式中，该溶瘤型单纯疱疹病毒是毒株17的突变体。在实施方式中，stat1/3抑制剂是硝基呋喃；在某些实施方式中，硝基呋喃是硝呋酚酰肼或其衍生物或类似物。在其他的实施方式中，stat1/3抑制剂是c16或其衍生物或类似物。要求保护的技术方案还涉及包含预定量溶瘤病毒和与定量化疗剂的试剂盒，其中该溶瘤病毒可以是单纯疱疹病毒，该化疗剂是stat1/3抑制剂。在实施方式中，该溶瘤病毒是单纯疱疹病毒，并且在某些实施方式中，hsv是hsv-1。在本发明的某些实施方式中，溶瘤病毒是具有缺陷型病毒核糖核酸酶还原酶基因的hsv-1，并且可选地具有完整icp34.5基因。在其他的实施方式中，溶瘤型单纯疱疹病毒基因组中icp34.5基因中的所有拷贝经过修饰，以使得该icp34.5基因不能表达功能性icp34.5基因产物。在其他的实施方式中，icp47基因经过修饰以使得该icp47基因不能表达功能性icp47基因产物。在其他的实施方式中，icp6基因经过修饰以使得该icp6基因不能表达功能性icp6基因产物。在一些实施方式中，ohsv经过icp34.5和icp47基因二者的修饰。在实施方式中，该溶瘤型单纯疱疹病毒是毒株17的突变体。在实施方式中，该stat1/3抑制剂是硝基呋喃；在某些实施方式中，硝基呋喃是硝呋酚酰肼或其衍生物或类似物。在其他的实施方式中，该stat1/3抑制剂是c16或其衍生物或类似物。本文披露内容提供了溶瘤病毒和stat1/3磷酸化抑制剂的组合，其在预防、治疗和/或缓解癌症(例如，乳腺癌、脑癌(例如，胶质母细胞瘤)、结肠癌、肺癌或前列腺癌)的影响中尤其有效。在一个方面，提供了改善溶瘤病毒治疗效力的方法，包括以下步骤：(a)向受试者施用溶瘤病毒；以及(b)以有效减少小胶质细胞-或巨噬细胞-介导的溶瘤病毒复制的抑制的量施用stat1/3抑制剂。在一些实施方式中，溶瘤病毒和stat1/3抑制剂一起施用；在其他的实施方式中，溶瘤病毒和stat1/3抑制剂连续施用。在某些实施方式中，stat1/3抑制剂是c16、其盐形式、其前药、或其衍生物。在其他的实施方式中，stat1/3抑制剂是硝基呋喃，并且在具体的实施方式中，硝基呋喃是硝呋酚酰肼或其衍生物或类似物。stat1/3磷酸化抑制剂(例如c16和硝呋酚酰肼)与溶瘤病毒共同施用对于阻止巨噬细胞和小胶质细胞抑制的溶瘤性病毒活性是有效的，从而增强溶瘤病毒的效力。除了本文中所述的组合物之外，还提供了利用这样的组合物的各种方法。例如，提供了改善溶瘤病毒治疗的效力，以及改善癌细胞中溶瘤活性的方法(以及用于阻碍癌细胞中巨噬细胞和小胶质细胞抑制的溶瘤性病毒活性)。参照以下的详细描述和附图将会使得本发明的这些和其他方面变的显而易见。本文提供的简要说明以简化形式引入了某些概念，在下文的具体实施方式部分中将对其进行进一步详细描述。否则除非另有明确描述，该简要说明既不是意在确定所要求保护主题的关键或必需特征，也不是意在限制所要求保护主题的范围。下文的描述提供了一种或多种实施方式的细节。与一种示例性实施方式相关联示出或描述的特征与其他实施方式的特征相组合。因此，能够将本文中任意不同实施方式进行组合以提供其他的实施方式。如果有必要采用如本文中确定的不同专利、申请或公开的概念，则可以改变实施方式的方面以提供另外的实施方式。根据说明书、附图和权利要求书将使得其他特征、目的和优点变得显而易见。序列表的简要描述seqidno1icp4的正向pcr引物。seqidno2icp4的反向pcr引物。seqidno3icp27的正向pcr引物。seqidno4icp27的反向pcr引物。seqidno5β-肌动蛋白的正向pcr引物。seqidno6β-肌动蛋白的反向pcr引物。seqidno7icp8的正向pcr引物。seqidno8icp8的反向pcr引物。seqidno9gc的正向pcr引物。seqidno10gc的反向pcr引物。seqidno11vp5的正向pcr引物。seqidno12vp5的反向pcr引物。seqidno13icp27的正向pcr引物。seqidno14icp27的反向pcr引物。seqidno15β-肌动蛋白的正向pcr引物。seqidno16β-肌动蛋白的反向pcr引物。附图说明基于附图和各种实施方式的如下详细描述将使得本文披露内容的示例性特征、其性质和各种优点变得显而易见。参照附图描述了非限制性实例和非穷尽性实施方式，其中除非另外具体说明，从各种不同角度来看，类似的标记和标号代表类似的部分。附图中元件的尺寸和相对位置不一定是按比例绘制。例如，选择、放大和安置各种元件的形状以改善绘图的清晰度。选择了如所绘制的该元件的特定形状从而易于在附图中进行识别。参照附图来描述下文所述的一种或多种实施方式，其中：图1a-图1b是示出了硝呋酚酰肼的抗-肿瘤效应的图示。(图1a)用指定浓度的硝呋酚酰肼处理细胞72小时。通过利用mtt测定来测量细胞毒性。(图1b)用指定剂量的硝呋酚酰肼对皮下u87荷瘤小鼠进行腹腔注射。在硝呋酚酰肼处理后7天用卡尺测量肿瘤尺寸。图2a-图2b包含示出了硝呋酚酰肼对ohsv-1复制的影响的图表。(图2a)用hrr3病毒以moi为0.1感染指定的细胞。在感染后48小时收获病毒并在vero细胞中进行滴定。数据被表示为平均sd，*p<0.05，相比于相应的溶媒处理。(图2b)用hrr3以moi为1处理u87或胶质细胞(gliocell)，并用指定浓度的硝呋酚酰肼处理48小时。提取总dna并使其经历qpcr以利用icp27引物来检测hsv-1，图中显示出硝呋酚酰肼介导的ohsv-1％增加。图3a-图3b是示出了硝呋酚酰肼和ohsv对肿瘤细胞增殖的影响的图示。用指定的hrr3和硝呋酚酰肼剂量处理u87细胞。(图3a)在治疗后72小时后通过mtt测定来测量细胞毒性。(图3b)通过利用calcusyn软件来确定联合指数(ci)。图4a-图4c示出了硝呋酚酰肼对hsv-1基因表达的影响。(图4a)用hrr3病毒以moi为3以及用指定剂量的硝呋酚酰肼处理u87细胞。感染后24小时，提取总蛋白并使其经历蛋白质印记分析。(图4b)用hrr3病毒以moi为5处理u87细胞，以及用指定浓度的硝呋酚酰肼处理6小时。通过rt-qpcr来检测icp27mrna水平。(图4c)示出了相对mrna水平(2-δδcτ)。数据表示为平均sd，*p<0.05，相比于相应的溶媒处理。图5a-图5c图示出了在ohsv-1感染的肿瘤细胞中硝呋酚酰肼对stats活化的影响。(图5a)用hrr3以moi为5处理u87细胞，并且用指定浓度的硝呋酚酰肼处理6小时。然后使提取的蛋白经历蛋白质印记分析。(图5b)用指定浓度的hrr3或硝呋酚酰肼或stattic或它们的组合处理u87细胞72小时。通过mtt测定来测量细胞毒性。(图5c)示出了相对mrna水平(2-δδcτ)。数据表示为平均sd，*p<0.05，相比于相应的溶媒处理。图6a和图6b示出了通过硝呋酚酰肼引起的体内剂量依赖性hrr3复制增加。用单一剂量的hrr3病毒(n＝2；1×106pfu/ml)对皮下u87荷瘤小鼠进行瘤内注射或腹腔注射指定浓度的硝呋酚酰肼或二者的组合。在处理后10天收获肿瘤。(图6a)从收获的肿瘤提取总基因组dna。通过qpcr检测病毒dna颗粒(icp27)并将其归一化为β-肌动蛋白。(图6b)在收获的肿瘤组织上通过免疫组化分析来确定icp4和stat1表达。然后，利用共聚焦显微镜使经过染色的切片成像。图7a-图7l示出了用硝呋酚酰肼和ohsv-1处理肿瘤细胞的结果。图7a-图7c示出了用硝呋酚酰肼或hrr3或kos处理的肿瘤细胞、ct26、ll2和u87的细胞存活。图7d-图7g示出了用硝呋酚酰肼并且之后用hrr3病毒处理的肿瘤细胞、u87、ct26、4t1和ll2的细胞存活。图7h-图7k示出了单独使用或组合使用不同剂量的硝呋酚酰肼或病毒、hrr3或kos，或vg12tr处理的肿瘤细胞的联合指数(ci)值。图7l是示出了硝呋酚酰肼和hrr3病毒联用的剂量减少指数的表格。图8图示出了硝呋酚酰肼的化学结构。图9a是示出了u87细胞中g207生长的折线图，如通过一步生长实验所确定的。图9b是示出了g207的细胞毒性效应的折线图，如通过本文所述的u87细胞注射后3天的mtt细胞增殖测定所确定的。图9c是示出了仅u87(5×104)细胞中小胶质细胞对g207生长的影响，或者u87(5×104)细胞与不同数量的大鼠原代小胶质(mg)细胞(用g207以感染复数(moi)为1感染细胞)中小胶质细胞对g207生长的影响的柱状图。图9d是示出了用icp6基因突变的ohsv-1hrr3、tk缺失的ohsv-1b17-tk或野生型hsv-1kos(在感染后4天同一步病毒生长测定确定的病毒复制效率(平均值±sd))以moi＝1感染的仅u87(5×104)细胞或u87(5×104)+mg(5×104)共培养物的结果的柱状图。图10a示出了用g207病毒以moi为3或者空白对照制备物感染的大鼠原代小胶质细胞(mg)或bv2细胞的组织学结果(以检测病毒报告子基因表达，在感染24小时后用β-半乳糖苷(箭头)对细胞进行染色)。图10b是示出了用空白对照或g207以指定moi感染bv2细胞24小时的结果的柱状图，随着lacz表达，然后在420nm处测量。图10c示出了用g207以moi为1感染的mg或bv2小胶质细胞以检验g207的复制能力的结果的线形图。在感染后24小时、48小时和72小时收获病毒，并且然后在vero细胞上进行滴定。图11是示出了ohsv-1在小胶质细胞中的基因表达的柱状图。通过rt-qpcr检测g207病毒的不同基因(icp4、icp27、icp8、vp5和gc)的mrna水平。在柱状图中显示了g207的感染的bv2和u87细胞的相对mrna水平(2-δδcτ)之比(bv2/u87)。图12a包含示出了用指定的化合物处理1-2小时并且之后用ohsv-1以moi为1感染的bv2细胞的结果的柱状图。在ohsv-1(g207)和指定化学抑制剂处理48小时后收获病毒。图12b图示出了电泳凝胶，其示出了用1μμ的c16、1μμ的bay11或100μμ的ag处理之后24小时收获自g207感染的小胶质细胞的总蛋白。通过蛋白质印记分析来测量icp27、icp4和β-肌动蛋白表达。用0.5μμ的c16对u87和mg共培养物进行预处理1小时。图12c图示出了显示出在用1μμ的pkr-i(c16)处理24小时后收获自hrr3或kos感染的小胶质细胞的总蛋白的电泳凝胶。通过蛋白质印记分析测量icp27、icp4和β-肌动蛋白表达。用0.5μμ的c16预处理u87和mg共培养物1小时。图12d是示出了在用c16处理的胶质瘤-小胶质共培养物中g207病毒复制增加33％的柱状图。图12e是示出了用指定化合物预处理1-2小时，之后用hrr3或kos以moi为1感染的bv2细胞的结果的柱状图。在hrr3/kos和指定化学抑制剂处理48小时后收获病毒。在用hrr3/kos和c16处理48小时后，收获病毒并且在vero细胞上利用斑块形成测定进行滴定。图12f是示出了用指定化合物预处理1-2小时，并且然后用ohsv-1以moi为1感染的bv2细胞的结果的柱状图。在ohsv-1(g207)感染以及指定化学抑制剂处理48小时后收获病毒。在用ohsv-1(g207)和c16处理48小时后，收获病毒并在vero细胞上通过斑块形成测量来进行滴定。图13a图示出了电泳凝胶，其示出了c16抑制stat1和stat3磷酸化。用溶媒或c16(1μμ)预处理bv2细胞2小时，并且之后与溶媒或ohsv-1(g207)一起孵育(moi为1)，或者ohsv-1和c16联合孵育24小时。收获总蛋白并且经历蛋白质印记分析，β-肌动蛋白表达被用作内参(平均值±se)。图13b是总结了图5a的结果的柱状图。图14a是示出了c16触发在小胶质细胞/巨噬细胞中的ohsv-1蛋白表达以及增强体内胶质母细胞瘤中的病毒浓度的柱状图。在存在或不存在6×106pfu/mlohsv-1(g207)病毒的情况下，用溶媒或5mg/kgc16处理u87异种移植小鼠(n＝2)。总共施用两次g207或溶媒以及4次(每3天或4天)c16。在治疗后第13天收获肿瘤。从收获的肿瘤(n＝2)提取总基因组并且通过qpcr(归一化为β-肌动蛋白)测量病毒dna(icp27)。数据示出为相对2-δδcτ值±se。图14b示出了小鼠u87肿瘤中的浸润的巨噬细胞(f4/80)和可复制hsv-1的免疫染色。图15a：示出了在存在或不存在单一剂量1×108pfu/mlohsv-1(hrr3)病毒(n＝5)的情况下，用溶媒或5mg/kgc16处理的u87异种移植小鼠的肿瘤体积的线形图。每隔一天腹膜内注射(ip)多个剂量的溶媒或c16。(*)图标代表ohsv-1和c16联用相比于溶媒或单独c16或单独ohsv-1处理(±se)的显著性(p<0.05)肿瘤消退。图15b是示出了从收获的器官(n＝3)提取的总基因组dna的柱状图。通过qpcr(归一化为β-肌动蛋白)测量病毒dna(icp27)。数据示出为相对2-δδcτ值±se。图15c是示出了图7a和图7b中总结的实施例的小鼠-受试者kaplan-meier存活分析的线形图。图16示出了数据，该数据示出了c16处理抑制lps诱导的stat1/3活化。用溶媒或者lps(1μg/ml)或者lps(1μg/ml)和c16(1μμ)处理bv2细胞24小时。收获总蛋白并使其经历蛋白质印记分析，β-肌动蛋白表达被用作内参(平均值±se)。图17示出了数据，该数据示出了c16在用ohsv-1感染的不同细胞类型中的eif2α磷酸化抑制效果。用溶媒或1μμc16预处理指定的细胞2小时，之后用g207以moi为1感染。在处理24小时后提取总蛋白，并使其经历蛋白质印记分析。图18示出了数据，该数据示出了c16对不同细胞类型中的g207复制的影响。用溶媒或1μμc16预处理指定的细胞2小时，之后用ohsv-1(g207)以moi为1感染。在24小时提取总蛋白。图19a-图19c示出了nf和ohsv-1联用的stat抑制。图19a和图19b，用指定浓度的hrr3或nf或其组合处理u87细胞(a)或ct26细胞(b)。24小时后提取总蛋白，并使其经历蛋白质印记分析。利用imagej软件测量谱带强度，并且归一化为β-肌动蛋白。样品平行运行三次，并且数据为平均值±s.e。由p<0.05或p<0.01来表示统计学显著性差异。图19c，用单一计量的hrr3病毒(1×106pfu)对皮下荷载u87肿瘤的小鼠进行瘤内注射，和/或如所指出的用多个剂量的nf对其进行腹腔注射。在处理后10天收获肿瘤，并且从每个处理组提取总蛋白，并使其经历蛋白质印记分析，平行进行三组。结果被报告未平均值±s.e。图20示出了nf和ohsv-1联用在体内的增强的抗肿瘤效应。用单一剂量的hrr3(ohsv-1)病毒(2×107pfu)或溶媒处理ct26(结肠癌)肿瘤荷瘤balb/c小鼠，并且给予每日腹腔注射仅50mg/kgnf或者50mg/kgnf与hrr3病毒组合(每组中5只小鼠)。利用卡尺(长×高×宽/2)测量肿瘤尺寸。数据为平均值±s.e.，并且用p值来表示用nf和ohsv-1的组合、仅nf、以及仅ohsv-1进行处理的统计学显著性差异，*p<0.05。图21a-图21b证实了体内nf和ohsv-1联用的安全性。图21a，从收获的肿瘤和其他器官提取总基因组(n＝2)。通过qpcr检测病毒dna(icp27)并将其归一化为β-肌动蛋白。样品平行实验四次，并且数据为2只小鼠±s.e.的平均值。图21b，如材料和方法部分所述，用nf或hrr3单独或者二者组合来处理ct26(结肠癌)肿瘤荷瘤balb/c小鼠。利用量具测量体重，并且从肿瘤体积计算肿瘤重量(1mm3＝1gm)。通过从体重减去肿瘤重量来获得净体重。数据代表三只从每组随机选择的小鼠净体重的平均值±s.e.。具体实施方式通过参考以下本发明的优选实施方式的具体描述和本文中所包括的实施例能够更容易地理解本发明。本文披露内容提供了用于向癌细胞，通常向对癌症治疗有需要的受试者体内施用溶瘤性hsv(ohsv)和stat1/3磷酸化抑制剂，例如硝基呋喃，或c16或其类似物或衍生物的方法、组合物和试剂盒。本文中使用的术语“癌症”是指任意类型和来源的癌症，包括形成肿瘤的细胞、血液癌症和转化的细胞。本文中使用的术语“癌细胞”包括癌症细胞或形成肿瘤的细胞、转化的细胞，或易于变成癌细胞或形成肿瘤的细胞的细胞。癌症的代表性类型包括癌(carcinomas)、肉瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤，以及上述的混合类型。另外的实例包括，但不限于，以下更详细地讨论的那些。相比于仅单独施用ohsv或者stat1/3磷酸化抑制剂，施用ohsv和stat1/3磷酸化抑制剂造成更多的肿瘤细胞死亡。而且，该联合治疗是协同性的，允许施用抑制剂和病毒二者的更小剂量。较小的剂量带来许多优点，例如，减少与每种药剂相关的疾病率以及减少费用。a.stat1/3磷酸化抑制剂信号转导和转录激活因子(stat)蛋白是由7个成员组成的细胞质转录因子家族，包括stat1和stat3。它们在调控多种多样的生物学功能中起到关键作用，包括细胞增殖、分化、细胞凋亡、免疫应答、和血管生成。stat1/3调节各种各样的生物学功能，包括细胞生长、分化和细胞凋亡。另外，stat1/3在调节宿主免疫和炎性应答中以及在许多癌症的发病机制中起到关键作用。stat1/3信号通路在许多癌症中被组成性激活并且已经成为开发stat1/3抑制剂以用于治疗癌症的靶标。总体上，stat被酪氨酸激酶(包括与酪氨酸激酶有关的受体(例如，janus激酶(jaks)))、与酪氨酸激酶活性有关的受体(例如，pdgfr、egfr、flt3)，和非受体蛋白酪氨酸激酶(ptks)(例如，c-srcbcr-abl和brk(乳腺肿瘤激酶))激活。许多不同的stat1/3抑制剂是已知的。抑制剂的实例可在例如，furqan等人(jofhemat.&oncology,6:90,2013；其全文结合于此)中找到。各种商业来源销售stat1/3抑制剂(例如，r&dsystems,mn,usa；invivogen,causa)。可以利用各种测定来鉴定另外的抑制剂(例如，szelag等人,plosone,http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0116688)。本文披露的组合物中使用的stat1/3抑制剂的两个特定实例为硝呋酚酰肼和c16。1、硝基呋喃硝基呋喃是一类特征为呋喃环和硝基的药物。该类药物包括大量的抗菌药物(例如，双呋脒腙、呋喃唑酮、硝呋复啉(nifturfoline)、硝呋酚酰肼、硝呋奎唑、硝呋妥因醇、硝呋噻肼、呋喃西林(也被称为硝基呋喃腙)、硝呋妥因和ranbezolid)和抗微生物药物(例如，呋喃咜酮、呋喃烯啶、呋喃基糖酰胺(furylfuramide)、硝呋太尔和硝呋莫司)。一种尤其适合用于本发明中的药物是硝呋酚酰肼(4-羟基-[(5-硝基-2-呋喃)甲叉]苯酰肼，cas965-52-6，图7)，其经常被用作口服抗生素并且已经在人类和非人类动物中被用于治疗结肠炎和腹泻。已经报告了硝呋酚酰肼作为强效的stat1/3信号通路抑制剂。如实施例中所证实的，硝呋酚酰肼在体外和体内对于肿瘤细胞，以及增强肿瘤细胞中ohsv的复制效率都有活性。硝呋酚酰肼可商购自大量的供应商。也可以使用硝呋酚酰肼衍生物和类似物。衍生物包括杂环化合物，例如5-硝基-杂环硝呋酚酰肼。类似物包括硝基呋喃基被例如苯并呋咱取代以及在苄基环上具有不同取代的其衍生物(fraias等人，bmccancer15:807,2015,其全文结合于此作为参考)、取代的苯甲酸(tavares等人，bollchimfarm136:244,1997；masunariandtavales,bioorganic&medchem15:4229,2007；其全文结合于此作为参考)。另外，可以使用各种盐和前药。2、c16、以及类似物和衍生物c16是一种起到酶双链rna-依赖性蛋白激酶(pkr)的选择性抑制剂以及抑制stat1/3的磷酸化作用的药物。c16也被称作pkri。c16是咪唑并-吲哚酮衍生物，其化学式为6,8-二氢-8-(1h-咪唑-5-基亚甲基)-7h-吡咯并[2,3-g]苯并噻唑-7-酮。c16的化学结构如下所示。在本文披露内容的上下文中，c16还包括盐形式、前药、及其衍生物。b.溶瘤病毒溶瘤病毒是一种使癌细胞裂解(溶瘤效应)的病毒，优选以选择性的方式。本文中使用的术语“溶瘤性”是指肿瘤选择性复制病毒，例如人疱疹病毒，其包括在感染的癌细胞和/或组织中诱导细胞死亡。尽管正常细胞或非肿瘤西都会被感染，但相比于受试者的正常细胞或非癌细胞，癌细胞被感染并且选择性经历细胞死亡。本文中使用的“细胞死亡”包括所有形式的细胞死亡，包括例如细胞裂解和/或细胞凋亡。在分裂细胞的选择性复制大于在非分离细胞的病毒经常是溶瘤性的。适合用于本文中的溶瘤病毒包括单纯疱疹病毒、腺病毒、柯萨奇病毒、麻疹病毒、新城疫病毒病毒、细小病毒,脊髓灰质炎病毒、呼肠孤病毒、塞内加谷病毒、逆转录病毒、牛痘病毒、塔那痘病毒、水疱性口炎病毒、黏液瘤病毒和甲型流感病毒。适合用于本文所述的组合物和方法的溶瘤病毒可以包含野生型病毒、复制病毒及其经修饰的复制-感受态衍生物(replicating-competentderivative)和非复制病毒、cpg-臂病毒、以及给予这样的病毒或衍生物的相关病毒或载体。通常，会使用复制感受态病毒，以使得可通过杀死癌细胞来实现受试者的治疗，即，癌细胞是通过溶瘤病毒的溶瘤性和细胞毒活性被杀死。本文所述的组合物中的以及本文所述的方法中使用的溶瘤病毒可以构成这样的病毒或者，可替代地，被构造成在靶标癌细胞中编码和产生所需溶瘤病毒的病毒载体的活性形式。本文中使用的术语“病毒载体”是指作为溶媒讲一种或多种核酸分子递送至细胞内以使得能够进行重组的核酸分子。病毒载体可以是在癌细胞中编码以及用于产生溶瘤病毒(例如人疱疹病毒)的质粒构建体，或者其可以是溶瘤病毒基因组(例如，非重组的人疱疹病毒基因组)。单纯疱疹病毒(hsv)1和2是感染人类的疱疹病毒科的成员。hsv基因组含有两个独特的区域，其被称作独特长(ul)区和独特短(us)区。这些区域中的每一个成对地位于反向末端重复序列的末端。存在大约75种已知的开放阅读框。病毒基因组已被工程化设计为开发用于例如癌症治疗中的溶瘤病毒。hsvicp34.5(也称作γ34.5)基因的突变赋予了hsv的肿瘤-选择性复制。hsv含有icp34.5的两个拷贝。使得icp34.5基因的一个或两个拷贝失活的突变体被认为缺少神经毒性，即，其是非致病性/非神经毒性的，并且是溶瘤性的。在一些实施方式中，ohsv具有一个γ34.5基因突变或两个γ34.5基因均发生突变，以使得其能够表达功能性icp34.5蛋白。该基因可以通过一个或多个核苷酸的突变、插入、缺失、取代等等来进行修饰。该变化可以是在编码序列、非编码序列(例如，启动子)中或在二者中。在一些实施方式中，γ34.5基因的两个拷贝均是突变的。ohsv可以具有另外的突变，其可以包括失能突变，例如，缺失、取代、插入，其会影响病毒的毒力或其复制的能力。例如，可以在icp6、icpo、icp4、icp27、icp47、icp24、icp56中的任意一个或多个中产生突变。优选地，这些基因(可选地在适合的基因的两个拷贝中)之一中的突变导致hsv不能表达(或能力下降)相应的功能性多肽。在一些实施方式中，病毒基因的启动子可以被在靶细胞中选择性活化的或者可诱导的启动子取代。ohsv也可以具有非hsv来源的基因和核苷酸。例如，ohsv可以包含编码前药的序列、编码细胞因子的序列或其他免疫刺激因子、肿瘤-特异性启动子、可诱导的启动子、增强子、与宿主细胞同源的序列，等等。适合的溶瘤性hsv可来源于hsv-1或hsv-2，包括任何实验室毒株或临床分离物。在一些实施方式中，ohsv可以是或者可以来源于实验室毒株hsv-1毒株17、hsv-1毒株f、或hsv-2毒株hg52之一。在其他的实施方式中，其可以是或者可以来源于非实验室毒株js-1。适合的hsv载体包括在us7,223,593、us7,537,924、us7,063,835、us7,063,851、us7,118,755、us8,277,818和us8,680,068中教导的那些。下表中列出了其他适合的hsv-1病毒。在本发明的某些实施方式中，溶瘤病毒是具有缺陷型病毒核糖核酸酶还原酶基因的hsv-1，并且可选地，具有完整icp34.5基因。在这方面尤其优选的hsv-1突变体包括hrr3(参见kulu等人,cancergenetherapy(2009)16,291-297；doi:10.1038/cgt.2008.83；2008年11月7日线上公开；还参见goldsteindj,wellersk.herpessimplexvirustype1-inducedribonucleotidereductaseactivityisdispensableforvirusgrowthanddnasynthesis:isolationandcharacterizationofanicp6laczinsertionmutant.jvirol1988；62:196-205)。大量的溶瘤病毒是本领域已知的。实例包括：c.治疗组合物提供了可用于预防、治疗或缓解癌症影响的治疗组合物。更具体地，一些治疗组合物包含本文中所述的溶瘤病毒。在优选的实施方式中，该治疗组合物能够包含溶瘤病毒和stat1/3磷酸化抑制剂(c16或硝基呋喃)或pkr抑制剂(例如，c16)，和可药用载体。溶瘤病毒与stat1/3磷酸化抑制剂(例如c16，或类似物或衍生物、或硝基呋喃)或pkr抑制剂(例如，c16或类似物或衍生物)的组合在预防、治疗和/或缓解癌症的影响方面尤其有效。更具体地，以及如下实施例中所证实的，本发明提供了stat1/3磷酸化抑制剂(例如c16和硝基呋喃)与溶瘤病毒的共同施用，其对于阻止巨噬细胞和小胶质细胞抑制的溶瘤性病毒活性，从而增强共递送的溶瘤病毒的效力是有效的。该溶瘤病毒可以是各种溶瘤病毒中的任意类型，包括上文中所述的那些，并且经常是本文中所述的单纯疱疹病毒i(ohsv-1)。在某些实施方式中，该组合物进一步包含药学可接受的载体。短语“要学可接受的载体”意指包括不会干扰溶瘤病毒的生物学活性并且对于接受施用的受试者无毒性的任意载体、稀释剂或赋形剂(总体上参见，remington:thescienceandpracticeofpharmacy,lippincottwilliams&wilkins；第21版(2005年5月1日)以及theunitedstatespharmacopeia:thenationalformulary(usp40-nf35和增刊))。在溶瘤病毒(或编码溶瘤病毒的病毒载体)的情形下，适合的药物载体的非限制性实例包括磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液(例如油/水乳液)、各种类型的润湿剂、无菌溶液，等等。另外的药学可接受的载体包括，凝胶、可生物吸附基质材料、含有溶瘤病毒的植入原件，或任何其他适合的溶媒、递送或分配装置或配料。这样的载体能够通过常规方法来配制，并且能够以有效剂量向受试者施用。另外的可药用赋形剂包括，但不限于，水、盐水、聚乙二醇、透明质酸和乙醇。此处还可以包括可药用盐，例如，无机酸的盐(例如盐酸、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐等)和有机酸的盐(例如乙酸盐、丙酸盐、苯甲酸盐等)。可用于向靶细胞递送stat1/3抑制剂的这样的可药用(药品级)载体、稀释剂和赋形剂将优选地不会在接受该组合物的个体(受试者)中引起免疫应答(并且优选地以无不当毒性施用)。在c16或硝基呋喃(二者均为小分子)的情形下，适合的可药用载体的非限制性实例可以包括载体、稀释剂和辅料，例如达尔伯克氏磷酸盐缓冲盐水，ph约为7.4；0.9％盐水(0.9％w/vnaci)；和5％(w/v)葡萄糖。本文中提供的组合物能够以各种浓度提供。例如，溶瘤病毒的剂量能够以如下范围的剂量提供，大于约109噬斑形成单位(“pfu”)，约102至大于109pfu之间，约102至约107pfu之间，约103至约106pfu之间，或约104至约105pfu之间。在某些实施方式中(并且以利用溶瘤性hsv为例)，人类的剂量形式范围可以为约106至约109pfu。在进一步的实施方式中，该剂量形式范围可以为约106至约108pfu/ml，每2-3周向治疗的具有大病灶(例如，>5cm)的患者注射多达4ml，以及在具有小病灶(例如，<0.5cm)的患者中注射较小的量(例如，0.1ml)。类似地，基于标准处方方案能够容易地提供c16(或类似物或衍生物)和硝基呋喃的各种剂量形式(参见例如，physician'sdeskreference,第71版，pdrstaff,2017；和themerckmanual,第19版，roberts.porter,2011)。在本发明的在某些实施方式中，由于溶瘤病毒和c16(或类似物或衍生物)与硝基呋喃的协同作用(synergsym)，可以使用低于标准的较低剂量。因此，在在某些实施方式中，可以向患者施用少于约106pfu/ml(每2-3周向患者注射4ml)，连同(序贯或同时，c16(或其类似物或衍生物)或硝基呋喃。组合物可以在适合于稳定货架期的温度下储存，并且包括室温(约20c)、4c、-20c、-80c，以及液n2中。由于期望体内施用的组合物通常不具有防腐剂，因此经常会储存在更冷的温度下。组合物可以干燥形式(例如，冻干的)或以液体形式储存。d.施用除了本文中所述的组合物之外，还提供了利用这样的组合物来治疗或缓解癌症的各种方法。在本发明的优选实施方式中，提供了用于改善溶瘤病毒治疗效力的方法，所述方法包括以下步骤：(1)向受试者或者施用溶瘤病毒和(2)以有效减少小胶质细胞-或巨噬细胞-介导的溶瘤病毒复制的抑制的量施用stat1/3磷酸化抑制剂(例如c16，或其类似物或衍生物，或硝基呋喃)。在这样的实施方式中，通常向受试者递送有效剂量的(1)溶瘤病毒和(2)stat1/3磷酸化抑制剂。在本发明的各种实施方式中，可以任意顺序完成，或者，同时进行。术语“有效剂量”和“有效量”是指足以有效治疗目标癌症的stat1/3磷酸化或prk的溶瘤病毒和抑制剂的量，例如，有效减少目标肿瘤尺寸或载荷的量，或者阻碍目标肿瘤细胞生长速率的量。更具体地，这样的术语是指有效地以必要剂量和治疗期间实现期望结果的stat1/3磷酸化或prk的溶瘤病毒和抑制剂的量。例如，在治疗癌症的情形中，本文所述组合物的有效量是相比于不施用本文中所述的溶瘤病毒和pkr抑制剂获得的应答，能够诱导缓解、减少肿瘤负荷和/或防止肿瘤散播或生长的量。有效量可以根据以下因素而不同，例如，受试者的疾病状态、年龄、性别和体重，以及药物配方、施用途径等等，但本领域技术人员能够常规地确定。向诊断患有癌症或疑似患有癌症的受试者施用该治疗组合物。受试者可以是人或者非人动物。该组合物可以用于治疗癌症，本文中施用的术语“治疗”或“处理”意指获得有益或期望结果(包括临床结果)的过程。有益或期望的临床结果能够包括，但不限于，一种或多种症状或病症的缓解或改善、疾病严重程度的减轻、疾病的稳定状态(即，未恶化)、防止疾病的传播、延迟或减慢疾病进展、缓解或减轻疾病状态、减少疾病复发以及控制疾病(不论部分或全部)不论可检测或不可检测。术语“治疗”或“处理”也意指，相比于未接受治疗/处理的期望存活的存活延长。癌症的代表性形式包括，癌瘤(carcinomas)、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和肉瘤。其他实例包括，但不限于，胆管癌、、脑癌(例如，胶质母细胞瘤)、乳腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、cns(例如，听神经瘤、星形细胞瘤、颅咽管瘤(craniopharyogioma)、室管膜瘤、胶质母细胞瘤、血管母细胞瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤(menangioma)、神经母细胞瘤、少突胶质瘤、松果体瘤和视网膜母细胞瘤)、子宫内膜内层癌、造血细胞癌症(例如，白血病和淋巴瘤)、肾癌、喉癌、肺癌、肝癌、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌(例如，黑素瘤和鳞状细胞癌)和甲状腺。癌症可以包括实体瘤(例如，肉瘤，例如纤维肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤和骨肉瘤)、已扩散(例如，白血病)，或这些的组合(例如，具有实体瘤和散播的或扩散癌细胞的转移癌)。也可以治疗良性肿瘤和不希望的细胞增殖的其他病症。最基本的，向受试者共施用ohsv和stat1/3抑制剂。共施用可以是同时或序贯施用。当进行序贯施用时，ohsv或thestat1/3抑制剂可以先给予。施用每一种试剂的含义可以相同(例如，注射)或者不同(例如，一种试剂口服给予，而另一种通过注射给予)，与他们是同时施用还是序贯施用无关。可以向受试者多次施用一种或两种试剂。例如，受试者可以接受一次初始剂量的ohsv和抑制剂二者，以及第二剂量的仅抑制剂。溶瘤病毒和stat1/3抑制剂可以通过例如口服、局部、肠胃外、全身、静脉内、肌肉内、眼内、鞘内、肿瘤内、皮下或透皮的途径给予。在某些实施方式中，溶瘤病毒和/或stat1/3抑制剂可以通过插管、通过导管或通过直接注射来递送。施用的位点可以是肿瘤内或远离肿瘤的位点。施用途径经常取决于所靶向的癌症。溶瘤病毒(和pkr抑制剂/stat1/3磷酸化抑制剂)的最佳或适合剂量方案是本领域技术人员容易确定的，由主治医师基于患者数据、患者观察和各种临床因素来确定，包括例如受试者的体重、体表面积、年龄、性别和所施用的特定溶瘤病毒、施用时间和途径、待治疗的癌症类型、患者的总体健康状况、以及该患者正在接受的其他药物治疗。根据某些实施方式，利用本文中所述的溶瘤病毒和pkr抑制剂和/或stat1/3磷酸化抑制剂对受试者进行治疗可以与其他类型的治疗联合，例如，利用化疗，例如，化疗剂，例如依托泊甙、异环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、强力霉素等等。可将ohsv和stat1/3抑制剂配制成用于临床应用的药物和药物组合物，并且可以与可药用载体、稀释剂、赋形剂或辅料组合。该配方至少部分地却决于施用的途径。适合的配方可以包括无菌培养基中的病毒和抑制剂。该配方可以是流体、凝胶、糊状或者固体形式。可将配方提供给受试者或专业医疗机构。优选地施用治疗有效量。其是充分显示出对受试者益处的量。所施用的实际量和施用的时程将至少不分地取决于癌症的性质、受试者的情况、递送位点以及其他因素。另外，在某些实施方式中，提供了用于改善癌细胞中溶瘤活性(以及用于防止癌细胞中巨噬细胞和小胶质细胞抑制的溶瘤性病毒活性)的方法，该方法包括以下步骤：(a)向癌细胞施用溶瘤病毒，和(b)以在靶向的癌细胞(例如胶质母细胞瘤细胞)中有效减少这样的小胶质细胞-或巨噬细胞-介导的溶瘤病毒复制的抑制的量施用stat1/3磷酸化抑制剂。在本文所述的方法中，溶瘤病毒和pkr抑制剂和/或stat1/3磷酸化抑制剂可以在单一制剂中一起向癌细胞(或受试者)施用，或可替代地，作为单独制剂连续施用。在本发明的另外其他的实施方式中，溶瘤病毒和pkr抑制剂和/或stat1/3磷酸化抑制剂能够瘤内施用，或者肿瘤手术切除后施用。以下实施例是以举例说明的方式，而不是以限制的方式提供。实施例实施例1硝呋酚酰肼具有强效肿瘤抑制效果。在本实施例中，在不同的肿瘤细胞中评价硝呋酚酰肼的抗肿瘤效应。用硝呋酚酰肼处理细胞72小时(图1a)。硝呋酚酰肼对btuc、9l、sf126、u87、u373、lncap和mcf7细胞的50％抑制浓度(ic50)分别为大约15μμ、27μμ、20μμ、20μμ、23μμ、5μμ和20μμ。为了核实硝呋酚酰肼的体内抗-肿瘤效力，具有皮下u87肿瘤移植物的动物在腹膜中注射溶媒、1mg/kg硝呋酚酰肼和50mg/kg硝呋酚酰肼。在硝呋酚酰肼治疗的动物中观察到显著的肿瘤抑制。在用1mg/kg硝呋酚酰肼和50mg/kg硝呋酚酰肼治疗后7天，肿瘤体积分别减小约25％和60％(图1b)。实施例2硝呋酚酰肼增强ohsv-1在肿瘤细胞中的复制效率。在本实施例中，评价了硝呋酚酰肼对ohsv-1的抗肿瘤效力。将ohsv-1感染的经处理的胶质瘤细胞与低浓度的硝呋酚酰肼一起孵育。用0.5μμ硝呋酚酰肼和10μμ硝呋酚酰肼处理的u87细胞的复制分别增加27倍和40倍。类似地，在0.5μμ硝呋酚酰肼和10μμ硝呋酚酰肼处理的9l细胞中，病毒复制分别增加0.8倍和4.7倍(图2a)。pcr病毒滴度还证实了u87胶质瘤细胞中的剂量依赖性hrr3复制增强，而在正常小胶质细胞中则无复制增强(图2b)。实施例3硝呋酚酰肼和ohsv-1提供协同抗肿瘤效应。在本实施例中，评价了硝呋酚酰肼和ohsv-1的联合抗-肿瘤效应。hrr3是一种溶瘤型hsv-1[59,60]，其具有icp6基因突变/缺失[59]。核糖核苷酸还原酶(rr)是脱氧核糖核苷酸的合成所必须的，其是病毒dna合成和复制所需的并且由病毒icp6基因编码。在大多数快速分裂的细胞中发现了哺乳动物rr的表达增加，并且和rr缺失突变体(hrr3)仅在通过表达rr的哺乳动物补体来补偿icp6损失的细胞中有效复制[61]。在u87胶质瘤细胞中确定了硝呋酚酰肼和hrr3的单独或组合细胞毒性效应。硝呋酚酰肼和hrr3单独剂量针对u87细胞的ic50分别为约20μμ和3.12moi。而组合大约4μμ硝呋酚酰肼和moi为1的hrr3剂量提供针对u87细胞的ic50(图3a)。为了探寻这种组合是否提供了协同抗肿瘤效应，通过calcusyn软件(http://www.biosoft.eom/w/calcusyn.htm)对数据进新了分析。证实了0.78/3.12、1.56/6.25、3.12/12.5、6.25/25和25/100hrr3/硝呋酚酰肼剂量是协同性的(图3b)。实施例4硝呋酚酰肼使ohsv-1即刻早期基因icp27表达增加。在本实施例中，研究了硝呋酚酰肼介导的ohsv-1复制增强的基本机制。通过蛋白质印记分析获得了硝呋酚酰肼对病毒即刻早期基因(icp27和icp4)表达的影响。低浓度的硝呋酚酰肼(0.5μμ、1μμ和10μμ)显著增强icp27表达，但不增强icp4表达(图4a)。qrt-pcr分析进一步核实了硝呋酚酰肼介导的icp27mrna表达上调(图4b)。实施例5硝呋酚酰肼减少感染ohsv-1的肿瘤细胞中的stats活化。在本实施例中，评价了负责协同效应的细胞因子。在经硝呋酚酰肼处理的感染ohsv-1的u87细胞确定了typel干扰素信号通路、stat1和stat3的关键调控子的表达。在u87细胞中观察到硝呋酚酰肼介导的剂量依赖性stat1和stat3磷酸化减少(图5a)。为了确认具体的stat3抑制剂(stattic)是否也与ohsv-1一起提供相似的加和效应，利用mtt测定确定static和ohsv-1的组合抗肿瘤效力。与硝呋酚酰肼和hrr3的组合相似，stattic和hrr3的组合也显示出针对u87细胞的抗肿瘤效应(图5b)。实施例6胶质母细胞瘤的体内剂量依赖性ohsv-1扩增。在本实施例中，评价了体内ohsv-1复制增强效应。用hrr3单独或者hrr3与50mg/kg硝呋酚酰肼或100mg/kg硝呋酚酰肼的组合来处理皮下移植的u87肿瘤。通过在瘤体中实施qpcr来确定剂量依赖性ohsv-1扩增。50mg/kg硝呋酚酰肼和100mg/kg硝呋酚酰肼分别观察到1.6倍和2.2倍的ohsv-1增强(图6a)。还通过在收获的肿瘤组织中进行免疫组化分析进行证实了酚酰肼介导的ohsv-1扩增(图6b)。实施例7硝呋酚酰肼和ohsv-1对肿瘤细胞的协同效应。在本实施例中，评价了硝呋酚酰肼和ohsv-1对肿瘤细胞的影响。用硝呋酚酰肼(0-100μμ)或hrr3病毒以moi为0至12.5处理各种类型的癌细胞。测量细胞存活。如图7a-图7c中所示，以较高剂量用硝呋酚酰肼处理导致在所有细胞系中的细胞死(ct26(结肠直肠癌)、ll2(鼠lewis肺癌)、u87(人胶质瘤；b16，鼠黑素瘤；4t1，鼠乳腺癌))中的细胞死亡。用kos和hrr3病毒二者清除除b16之外的所有细胞系。用硝呋酚酰肼或培养基处理肿瘤细胞。孵育之后，加入病毒并且进一步孵育72小时(图7d)或48小时(图7e-图7g)。通过mtt测定来测量细胞毒性。误差条代表s.d.并且指示统计学显著性差异。用硝呋酚酰肼和病毒二者进行处理导致显著较少的细胞存活。在图7h-图7k中，用不同剂量的硝呋酚酰肼以及指定的病毒(hrr3、kos或vg12tr)单独或组合处理细胞48小时(图7j、图7k)或72小时(图7h)。通过mtt测定测量细胞活力并且利用chour-talalay分析来计算联合指数(ci)值。将ci对影响分数(fa)作图。ci<1、ci＝1和ci>1分别代表协同效应、加和效应和拮抗效应。用硝呋酚酰肼和病毒二者进行的处理对所有细胞均具有协同效应。图7l代表硝呋酚酰肼和hrr3病毒的组合对各种肿瘤细胞的剂量减少指数。该dri(剂量减少指数)确定了，相比于达到相同效果水平所需的单一试剂浓度，当以协同性联用给予时允许的每一种药物的剂量减少的量级。如表格中所示出的，dri的范围达到12.9。实施例8小胶质分离和培养。e18spraguedawley大鼠获自charlesriverlaboratories(charlesriver,wilmington,ma)。根据标准方案进行大鼠原代小胶质分离和培养。简言之，从18天的胚胎e18spraguedawley大鼠大脑分离皮层。在胰蛋白酶/edta(invitrogen,加拿大)中孵育30分钟后，用培养基洗涤收获的组织并在dna酶i(invitrogen,加拿大)的存在下将其绞碎。然后将细胞悬液离心，在新鲜培养基中重悬浮并且以高汇合度铺板于10cm培养板上。在补充有10％胎牛血清(invitrogen,加拿大)、1％抗生素(青霉素-链霉素)的达尔伯克改良的伊格尔培养基(sigma,加拿大)中培养小胶质细胞并在37℃在5％co2中保持。每3-4天更换培养基。7-10天后，通过用手轻轻摇动培养板数次来收获小胶质细胞。最后，将悬浮于上清中的小胶质细胞铺板于涂敷覆有多聚赖氨酸的培养板上。通过itgma(1:200；prosciincorporated,ca)的免疫细胞化学染色来常规测量细胞纯度，其中itgma是一种小胶质细胞特异性的整联蛋白。实施例9细胞培养。u87(人gbm)细胞和vero细胞(非洲绿猴肾细胞)获自美国典型培养物保藏中心(americantypeculturecollection，atcc,manasas,va)。bv2细胞(小鼠小胶质细胞)由曼尼托巴大学大学提供。将所有细胞保持在补充有10％胎牛血清(fbs)和1％抗生素(青霉素和链霉素)的达尔伯克改良的伊格尔培养基(dmem)中。将所有的培养物在37℃下保持在5％co2中。实施例10病毒复制分析。g207病毒获自neurovirtherapeutinc.(sandiego,ca)。用完全培养基(dmem，含有10％fbs和1％抗生素)将仅单独u87(5×104)细胞，或与指定量的小胶质细胞联合培养孵育过夜。第二天用g207病毒感染细胞，感染复数(moi)为1。在无fbs和抗生素的dmem培养基中维持病毒感染和处理。在感染后2-4天收获病毒。在三次冻融循环后，在vero细胞上通过在12孔板上进行标准空斑分析(standardplaqueassay)来滴定病毒，试验进行一式三份。实施例11影响病毒复制的药物和试剂。将仅单独u87(5×104)或u87+小胶质细胞共培养(5×104+5×104)或仅单独bv2小胶质细胞(5×104)接种至24-孔板。孵育过夜后(使得细胞贴壁)，用指定浓度的nfkb抑制剂、bay-11(santacruz,加拿大)或指定浓度的咪唑o-吲哚酮衍生物c16(milipore,加拿大)或溶媒对细胞进行预处理1-2小时。然后，在化学抑制剂存在的条件下，用ohsv-1(g207或hrr3)病毒再感染细胞2天，moi为1。收获病毒并在vero细胞中通过空斑形成测定在12孔板中进行滴定，实验进行一式三份。实施例12蛋白质印记分析。用样品缓冲液(125mmtris-hcl、50％甘油、4％溴酚蓝和5％2-巯基乙醇)收获总蛋白并且煮沸5分钟。使蛋白样品经历sds-page(8％凝胶)电泳，将其转移至硝酸纤维膜并且在室温下在tbs-tween20(tbs-t)中用5％脱脂牛奶(biorad)封闭1小时。然后将该膜与抗β-肌动蛋白的一抗以1:1000(cellsignaling,danvers,ma)或者与抗-stat1抗体以1:1000(cellsignaling,danvers,ma)或者抗-stat3抗体以1:1000(cellsignaling,danvers,ma)或者抗-phosphostat1抗体(tyr701)以1:1000(cellsignaling,danvers,ma)或者抗-phosphostat3抗体(tyr705)以1:1500(cellsignaling,danvers,ma)或者抗-phosphor-eif2α抗体(ser51)以1:1000(cellsignaling,danvers,ma)或者抗-icp27抗体以1:1000(abeam,cambridge,ma)或者抗-icp4抗体以1:750(abeam,cambridge,ma)在4℃一起一起孵育过夜。在第二天用tbs-t洗涤该膜三次，并与相应的二抗以1:3000(perkimelmer,boston,ma)在室温下一起孵育1小时。用tbs-t洗涤该膜三次，之后利用ecl试剂(perkimelmer,boston,ma)和versadoc成像系统(bio-rad)使其可视化。利用imagej软件(nih,bethesda,md)测量条带密度。实施例13rna提取和rt-pcr用ohsv-1感染u87和bv2小胶质细胞，moi为1。利用triazol试剂(invitrogen,加拿大)在感染后24小时从bv2或u87细胞分离总rna。通过利用一步实时pcr来进行rt-pcr，利用kapafastone-stepqrt-pcruniversal(d-markbiosciences,加拿大)，遵循制造商的手册。利用如下列出的引物来扩增cdna，结果表示为2-δδοτ，并且利用β-肌动蛋白进行归一化。基因引物seqidicp4正向seqidno:1icp4反向seqidno:2icp27正向seqidno:3icp27反向seqidno:4β-肌动蛋白正向seqidno:5β-肌动蛋白反向seqidno:6icp8正向seqidno:7icp8反向seqidno:8gc正向seqidno:9gc反向seqidno:10vp5正向seqidno:11vp5反向seqidno:12实施例14β-半乳糖苷染色。用g207病毒感染铺板于8-孔腔室玻片的细胞，并以假接种的细胞作为对照。感染后24小时，利用0.5％戊二醛溶液固定细胞。用pbs洗涤固定的细胞两次，并且之后用以x-gal染色溶液(5mmk3fe，5mmk4fe和2mmmgcl2)稀释的1mg/mlx-gal溶液(sigma，加拿大)在37℃孵育一小时。然后通过利用光学显微镜观察染色的细胞并使其成像。实施例15细胞增殖测定。以1×104(u87)将细胞接种到96-孔板中。在孵育过夜后，仅用溶媒处理细胞，或者用指定moi的病毒或指定浓度的药物或试剂处理细胞。在处理细胞2至3天后，根据制造商的说明书通过mtt测定(sigma,加拿大)来测量细胞活力。简言之，将细胞与mtt溶液在37℃一起孵育3小时，然后与裂解缓冲液一起孵育。在与裂解缓冲液孵育过夜之后，利用读板器(envision2103multilabel读板器，perkinelmer)在595nm处测量细胞活力。实施例16u87异种移植模型。5至6周龄的雌性无胸腺裸鼠获自harlon实验室。将人胶质瘤u87细胞皮下移植到下腰部(lowerflank)。当肿瘤尺寸达到-75至100mm3时，腹膜内(ip)给予溶媒或c16(5mg/kg)。在初次施用c16之后2天(图14)或4天(图15)，瘤内注射溶媒或ohsv-1。然后利用卡尺测量肿瘤体积(高×长×宽/2)。在实验结束时，利用co2窒息处死小鼠。实施例17组织dna提取&qpcr。利用ezna组织dna试剂盒(omegabioteck)从4％多聚甲醛固定的肿瘤组织提取dna。利用sybergreenmastermix(invitrogen,加拿大)使提取的dna经历qpcr分析，补充有由seqidno:13(正向)和seqidno:14(反向)表示的icp27引物和由seqidno:15(正向)和seqidno:16(反向)表示的β-肌动蛋白引物。利用quantstudieo6flexqpcr仪(appliedbiosystems,加拿大)实施扩增。实施例18免疫组化学。收获的肿瘤在用4％多聚甲醛固定24小时之后，经历恒冷箱切片。用4％多聚甲醛将组织固定24小时，之后与30％蔗糖一起孵育72小时。然后将组织包埋在oct(sakuratissuetek)中，利用低温恒温器(leicacm3050s)进行切片，并将其置于fisherbrandtmsuperfrosttmplus显微镜载玻片(fisherscientific,加拿大)上。然后用pbs洗涤切片，用0.125％tritonx-100透化5分钟，并且与5％山羊血清(santacruz,加拿大)孵育1小时以阻断非特异性结合。然后将细胞与抗-hsv-1抗体以1:50(abeam,cambridge,ma)或抗-f4/80抗体以1:50(abeam,cambridge,ma)在4℃一起孵育过夜。在第二天，用pbs洗涤三次，之后，将切片与羊抗兔iggalexafluor488或羊抗大鼠iggalexafluor568二抗以1:500(invitrogen,加拿大)在室温下一起孵育1小时。在三个洗涤步骤之后，用dapifluromountg(electronmicroscopysciences)将切片封片，并且利用共聚焦显微镜(olympus,加拿大)可视化和成像。实施例19统计学分析。通过spss18或microsoftexcel来实施本文所述的统计学分析，并且分别通过利用不依赖样品的t检验来确定显著性(p<0.05)或利用双尾学生t检验来确定p<0.001、p<0.01或p<0.05。将这些实施例中所述的数据表示为平均±sd或±se。实施例20小胶质细胞的存在阻碍ohsv-1对u87细胞的溶瘤效应。利用一步病毒生长测定来确定g207在u87细胞中复制的效率(实施例8和实施例9)。在图14a中示出了结果。通过mtt测定来评价g207抗-增殖作用。在感染72小时后，在moi＝1情形下，针对g207观察剂量依赖性抗-增殖作用和ic50(图14b)。结果证实了g207在u87细胞中能够有效地复制，从而导致显著的细胞裂解。然后测量在不同数量的小胶质细胞存在的情形下，g207在u87细胞中的生长。在u87培养物中添加小胶质细胞以剂量依赖的方式抑制g207复制。通过在u87(5×104)中添加6.25×103和1×105个小胶质细胞，g207复制分别减少了50％且几乎减少了100％(图9c)。为了进一步证实小胶质介导的ohsv-1生长抑制不是毒株特异性的，测试了不同的hsv-1毒株，包括hrr3(icp6突变的)、b17-tk(tk-突变体)和kos(野生型)。观测测试的所有hsv-1毒株中的类似病毒复制抑制(图9d)。实施例21小胶质细胞形成复制屏障以防止ohsv-1散播。还考虑了ohsv-1是否能够感染小胶质细胞并且在小胶质细胞中复制。啮齿动物原代培养的小胶质细胞和被g207感染的bv2小胶质细胞显示出lacz染色，这表明该病毒能够进入细胞并且表达该病毒携带的报告子基因(图10a)。被ohsv-1感染的bv2细胞中lacz的定量分析证实了lacz表达取决于g207感染的moi(图10b)。通过由复制缺陷型hsv-1表达的绿色荧光蛋白(gfp)也观察到了小胶质细胞中的浓度依赖性hsv-1感染(数据未示出)。然而，在原代培养的大鼠小胶质细胞和bv2细胞中的生长测定显示，在小胶质中g207并不产生其子代(图10c)。这些结果暗示了该病毒被小胶质细胞内在化，但并不支持其复制(即，ohsv-1能够使小胶质细胞内在化，但不能在其中复制)。实施例22在bv2小胶质细胞中的ohsv-1基因表达谱。为了揭示在小胶质细胞中阻止hsv-1复制的机制，测量了神经胶质瘤(u87)和小胶质(bv2)细胞中的一组病毒基因的转录水平(实施例13)。该病毒基因包括icp4、icp27、icp8、vp5和glyco蛋白c(gc)，分别代表即刻早期基因、早期基因和晚期基因。定量rt-pcr结果显示出icp27、icp8、vp5和gc的转录，但相比于u87，icp4在bv2细胞中未显示出明显被抑制(图11)。实施例23c16克服了小胶质细胞介导的ohsv-1复制屏障。测试了pkr抑制剂(c16)、nfkappab抑制剂(bay11)和inos抑制剂(氨基胍盐酸盐)对g207在bv2细胞中复制的影响(实施例15)。分别用1μμ和10μμ的c16进行处理使得复制显著增强9倍和8倍(图12a)。然而，bay11和氨基胍盐酸盐对于ohsv-1在bv2细胞中的复制没有影响(图12a)。此外，c16(但不是bay11也不是氨基胍盐酸盐)使icp4和icp27的表达分别上调1.8倍和25倍(图12b)。为了证实c16-介导的病毒基因转录增强不是由于g207中icp34.5和/或icp6的缺失，还检验了c16对被野生型(kos)和icp6突变的(hrr3)hsv-1感染的bv2细胞的影响。c16处理还上调了被kos和hrr3感染的bv2细胞中的icp27表达(图12c)。最后，检验了c16是否能够克服胶质瘤细胞中由该小胶质细胞-介导的病毒复制的抑制。如图12d中所示，在用c16处理的胶质瘤细胞-小胶质细胞共培养物中，g207病毒复制增加了33％。实施例24c16通过抑制stat1和stat3减少小胶质细胞中的ohsv-1。如图13中所示，c16还被证实在bv2小胶质细胞中不依赖于eif2a磷酸化状态而显著抑制由ohsv-1引起的pstati(tyr701)和pstat3(tyr705)的上调。总之，在被g207感染的小胶质细胞中，stat1的表达水平被上调，stat3的表达水平未被上调并且在c16处理后还会下降。c16还显示出导致stat1/3磷酸化中的抑制，如在处理的bv2细胞中所证实的(图16)。实施例25c16通过克服肿瘤相关的巨噬细胞屏障而选择性促进小胶质细胞异种移植物中的ohsv-1复制。为了证实c16能够被范围为增强体内的ohsv肿瘤间复制的效力，将c16注入到皮下植入瘤内容纳有ohsv-1的u87肿瘤的荷瘤动物中(实施例16)。施用c16显著增强了肿瘤体中的ohsv-1滴度，其通过利用qpcr测量病毒dna拷贝数来确定(图14a)。免疫组织化学分析(实施例18)证明了，相比于那些仅用ohsv-1处理的动物，在与ohsv-1和5mg/kgc16共培养的动物中可复制hsv-1细胞的数目增加。此外，在与ohsv-1和c16共培养的动物中观察到大量的与hsv-1和巨噬细胞标志物共定位的细胞，而在仅ohsv-1培养的动物中却未观察到此现象，这表明在c16处理后巨噬细胞中的病毒复制增加(图14b)。实施例26c16显著改善人胶质瘤异种移植物消退。最后，检验了c16-介导的肿瘤中增强的ohsv-1负载是否能够扩大抗-肿瘤溶瘤效应。如图15a中所示，在肿瘤移植后50天，c16(5mg/kg)和ohsv-1联合治疗组的肿瘤尺寸相比于单独用c16、单独用溶媒和单独用ohsv-1治疗分别减小了9.3倍、8.2倍和6倍。此外，c16和ohsv-1联合治疗动物的不同器官中的qpcr病毒滴度(实施例17)仅限于肿瘤中，而并未散播至肝脏、脑和胃肠道(图15b)。kaplanmeier分析还揭示了c16和ohsv-1联合治疗的存活增加(图15c)。实施例27通过nf和ohsv-1联用的stat抑制。nf是已知的stat1和stat3抑制剂。为了评价nf和ohsv-1联用的抗肿瘤效应的深层分子机制，在用nf和溶瘤病毒处理过夜之后，确定u87细胞(图19a)和ct26细胞(图19b)细胞中的stat1和stat3状态。nf导致stat1/3的剂量依赖性磷酸化抑制。在u87(图19a)和ct26(图19b)细胞中，nf还有效地抑制hrr3诱导的stat1/3磷酸化上调。出人意料地，尽管hrr3感染使得u87细胞中stat1/3磷酸化升高，但是高剂量的nf和hrr3(nf50μμ和hrr36.25moi)联用却使stat1/3磷酸化降低至，甚至低于在仅用nf所见的水平(图19a)。然而，发现了hsv-1感染介导的stat1/3磷酸化增加是时间依赖性的，stat1/3磷酸化随时间逐渐降低(数据未示出)。为了进一步证明nf能够在体内抑制stat，用hrr3单独或者与50mg/kgnf或100mg/kgnf联用来处理皮下植入的u87肿瘤。通过蛋白质印记分析来测量收获的肿瘤组织中的磷酸化stat1/3的表达水平。尽管在肿瘤组织中未检测出pstati，但是这证明了在仅用hrr3处理的肿瘤体中stat3磷酸化增加。而且，通过病毒与i.p.注射的nf联用以剂量依赖的方式抑制病毒引起的pstat3上调(图19c)。实施例28ohsv-1和nf的体内抗-肿瘤效应。用单一剂量的hrr3(ohsv-1)病毒(2x10λ7pfu)或溶媒处理ct26(结肠癌)肿瘤荷瘤balb/c小鼠，并且给予每日腹膜注射仅50mg/kgnf或与hrr3病毒联用(每组5只小鼠)。用卡尺测量肿瘤尺寸(长×高×宽/2)。数据为平均值±s.e.并且用p值来表示以nf和ohsv-1联用、仅nf、和仅ohsv-1处理之间的统计学显著性差异，*p<0.05。相比于仅nf或仅hrr3，观察到联用带来的肿瘤消退增加。在肿瘤植入后第23天，分别相比于仅用ohsv-1和仅用nf处理的小鼠，在nf+ohsv-1处理的小鼠中观察到2.2倍和1.9倍的更大肿瘤消退(图20)。实施例29ohsv-1和nf的体内安全性。评价了nf和ohsv-1联用的安全性。从肿瘤、肝和胃肠道(gt)制备总dna，并使其经历qpcr分析以测量病毒dna的量。如所期望的，在具有或不具有nf的hrr3处理的肿瘤中检测到类似地高水平的hsv-1dna。尽管在具有或不具有nf的肝脏和gt中病毒dna的水平几乎是不可检测到的，但在仅用hrr3处理的动物的脑中检测到显著水平，并且当病毒与nf联用时，该水平为接近十分之一(10-foldless)(图21a)。在仅用hrr3(2×107pfu)处理的5只小鼠中，一只小鼠由于病毒相关毒性而被安乐死。在用nf和hrr3联用处理的小鼠中未观察到毒性。此外，当向两只小鼠瘤内注射高剂量的hrr3(1×108pfu)时，两只小鼠均显示出严重hsv-1毒性(后腿瘫痪或活动受限)的信号并且立即终止。另一方面，当与nf联合给予时，hsv-1对于用hrr3以相同高剂量处理的小鼠则无毒性(数据未示出)。为了进一步证明安全性并未由于与nf的联用而受到损害，在治疗的各个阶段测量动物的体重。相比于溶媒或单一试剂处理，在用nf和hrr3联用处理的小鼠中并未出现净体重的显著差异(图21b)。这些数据表明，nf与hrr3联用并不会损害安全性，而且反而会减少脑中的hsv-1毒性。从前文描述可以看出，尽管本文中已经出于举例说明的目的描述了具体的实施方式，但是在不背离本发明精神和范围的情况下可以做出各种变化。因此，除所附权利要求书限定范围外，本发明不限于此。本说明书中提及的所有u.s.专利、u.s.专利申请公开、u.s.专利申请、外国专利、外国专利申请和非专利公开是指以其全部内容以引用方式结合于此作为参考。这样的文件出于描述和和披露，例如公开内容中描述的材料和方法的目的结合于此，其可以与本发明的描述结合使用。上文中和本文全文中所讨论的公开内容仅以其在本发明申请日之前的公开内容为限提供。本文中的披露内容不应被认为是承认发明人由于在先发明而没有资格提前引用任何出版物。通常，在所附权利要求书中，所使用的术语不应被认为是将限制权利要求的范围限于说明书和权利要求书中所述的具体实施方式，而是应该理解为包括所有可能的实施方式，以及这些权利要求所限定的等同替代方式的全部范围。因此，权利要求不限于本文披露内容。参考文献1.yoonss，nakamurah，carrolnm，bodebp，chioccaeaandtanabekk.anoncolyticherpessimplexvirustype1selectivelydestroysdiffuselivermetastasesfromcoloncarcinoma.thefasebjournal.2000；14(2)：301-311.2.minetat，rabkinsd，yazakit，hunterwdandmartuzarl.attenuatedmulti-mutatedherpessimplexvirus-1forthetreatmentofmalignantgliomas.naturemedicine.1995；1(9)：938-943.3.koobyda，carewjf，haltermanmw，mackje，bertinojr，blumgartlh，federoffhjandfongy.oncolyticviraltherapyforhumancolorectalcancerandlivermetastasesusingamulti-mutatedherpessimplexvirustype-1(g207).thefasebjournal.1999；13(11)：1325-1334.4.todot，martuzarl，rabkinsdandjohnsonpa.oncolyticherpessimplexvirusvectorwithenhancedmhcclassipresentationandtumorcellkilling.proceedingsofthenationalacademyofsciences.2001；98(11)：6396-6401.5.macea，ganlyi，soutardsandbrownsm.potentialforefficacyoftheoncolyticherpessimplexvirus1716inpatientswithoralsquamouscellcarcinoma.head&neck.2008；30(8)：1045-1051.6.harrows，papanastassiouv，harlandj，mabbsr，pettyr，fraserm，hadleyd，pattersonj，brownsandramplingr.hsv1716injectionintothebrainadjacenttotumourfollowingsurgicalresectionofhigh-gradeglioma：safetydataandlong-termsurvival.genetherapy.2004；11(22)：1648-1658.7.nakaoa，kasuyah，sahint，nomuran，kanzakia，misawam，shirotat，yamadas，fujiitandsugimotoh.aphaseidose-escalationclinicaltrialofintraoperativedirectintratumoralinjectionofhf10oncolyticvirusinnon-resectablepatientswithadvancedpancreaticcancer.cancergenetherapy.2011；18(3)：167-175.8.fongy，kimt，bhargavaa，schwartzl，brownk，brodyl，coveya，karraschm，getrajdmangandmeschedera.aherpesoncolyticviruscanbedeliveredviathevasculaturetoproducebiologicchangesinhumancolorectalcancer.moleculartherapy.2009；17(2)：389-394.9.andtbackarh，kaufmanhl，collichiof，amatrudat，senzern，chesneyj，delmanka，spitlerle，puzanoviandagarwalass.talimogenelaherparepvecimprovesdurableresponserateinpatientswithadvancedmelanoma.journalofclinicaloncology.2015：jco.2014.2058.3377.10.gastondc，odomcl，lil，markertjm，rothjc，cassadyka，whitleyrjandparkerjn.productionofbioactivesolubleinterleukin-15incomplexwithinterleukin-15receptoralphafromaconditionally-replicatingoncolytichsv-1.plosone.2013；8(11)：e81768.11.parkerjn，gillespiegy，lovece，randalls，whitleyrjandmarkertjm.engineeredherpessimplexvirusexpressingil-12inthetreatmentofexperimentalmurinebraintumors.proceedingsofthenationalacademyofsciences.2000；97(5)：2208-2213.12.passerbj，cheemat，wus，wuc，rabkinsdandmartuzarl.combinationofvinblastineandoncolyticherpessimplexvirusvectorexpressingil-12therapyincreasesantitumorandantiangiogeniceffectsinprostatecancermodels.cancergenetherapy.2013；20(1)：17-24.13.carewjf，koobyda，haltermanmw，kims-h，federoffhjandfongy.anovelapproachtocancertherapyusinganoncolyticherpesvirustopackageampliconscontainingcytokinegenes.moleculartherapy.2001；4(3)：250-256.14.kambarah，okanoh，chioccaeaandsaekiy.anoncolytichsv-1mutantexpressingicp34.5undercontrolofanestinpromoterincreasessurvivalofanimalsevenwhensymptomaticfromabraintumor.cancerresearch.2005；65(7)：2832-2839.15.fukuharah，inoy，kurodat，martuzarlandtodot.triplegene-deletedoncolyticherpessimplexvirusvectordouble-armedwithinterleukin18andsolubleb7-1constructedbybacterialartificialchromosome-mediatedsystem.cancerresearch.2005；65(23)：10663-10668.16.xur，yuanz，guanz，caoy，wangh，hux，fengj，zhangy，lifandchenz.[phaseiiclinicalstudyofintratumoralh101，ane1bdeletedadenovirus，incombinationwithchemotherapyinpatientswithcancer].aizheng＝aizheng＝chinesejournalofcancer.2003；22(12)：1307-1310.17.nemunaitisj，cunninghamc，buchanana，blackburna，edelmang，maplesp，nettog，tonga，randlevbandolsons.intravenousinfusionofareplication-selectiveadenovirus(onyx-015)incancerpatients：safety，feasibilityandbiologicalactivity.genetherapy.2001；8(10)：746-759.18.deweesetl，vanderpoelh，lis，mikhakb，drewr，goemannm，hamperu，dejongr，detorienandrodriguezr.aphaseitrialofcv706，areplication-competent，psaselectiveoncolyticadenovirus，forthetreatmentoflocallyrecurrentprostatecancerfollowingradiationtherapy.cancerresearch.2001；61(20)：7464-7472.19.rameshn，gey，ennistdl，zhum，minam，ganeshs，reddypsandyud-c.cg0070，aconditionallyreplicatinggranulocytemacrophagecolony-stimulatingfactor-armedoncolyticadenovirusforthetreatmentofbladdercancer.clinicalcancerresearch.2006；12(1)：305-313.20.nemunaitisj，tongaw，nemunaitism，senzern，phadkeap，bedellc，adamsn，zhangy-a，maplespbandchens.aphaseistudyoftelomerase-specificreplicationcompetentoncolyticadenovirus(telomelysin)forvarioussolidtumors.moleculartherapy.2010；18(2)：429-434.21.freytagso，khilm，strickerh，peabodyj，menonm，deperalta-venturinam，nafzigerd，peggj，paiellidandbrowns.phaseistudyofreplication-competentadenovirus-mediateddoublesuicidegenetherapyforthetreatmentoflocallyrecurrentprostatecancer.cancerresearch.2002；62(17)：4968-4976.22.kimballkj，preussma，barnesmn，wangm，siegalgp，wanw，kuoh，saddeknis，stockardcrandgrizzlewe.aphaseistudyofatropism-modifiedconditionallyreplicativeadenovirusforrecurrentmalignantgynecologicdiseases.clinicalcancerresearch.2010；16(21)：5277-5287.23.koskia，kangasniemil，escutenaires，pesonens，cerullov，diaconui，nokisalmip，rakim，rajeckimandgusek.treatmentofcancerpatientswithaserotype5/3chimericoncolyticadenovirusexpressinggmcsf.moleculartherapy.2010；18(10)：1874-1884.24.lichtensteind，spencerj，doronink，patrad，meyerj，shashkovae，kuppuswamym，dhard，thomasmandtollefsona.anacutetoxicologystudywithingn007，anoncolyticadenovirusvector，inmiceandpermissivesyrianhamsters；comparisonswithwild-typead5andareplication-defectiveadenovirusvector.cancergenetherapy.2009；16(8)：644-654.25.kuhni，hardenp，bauzonm，chartierc，nyej，thornes，reidt，nis，lieberaandfisherk.directedevolutiongeneratesanoveloncolyticvirusforthetreatmentofcoloncancer.plosone.2008；3(6)：e2409.26.yud-c，cheny，sengm，dilleyjandhendersondr.theadditionofadenovirustype5regione3enablescalydonvirus787toeliminatedistantprostatetumorxenografts.cancerresearch.1999；59(17)：4200-4203.27.lij，liuh，zhangx，xuj，huw，liangm，chens，hufandchud.aphaseitrialofintratumoraladministrationofrecombinantoncolyticadenovirusoverexpressinghsp70inadvancedsolidtumorpatients.genetherapy.2009；16(3)：376-382.28.yuanm，wongy，augandshafrend.combinationofintravenouslydeliveredcavatak(coxsackievirusa21)andimmune-checkpointblockadesignificantlyreducestumorgrowthandtumorrechallenge.journalforimmunotherapyofcancer.2015；3(suppl2)：p342.29.galanise，hartmannlc，clibywa，longhj，peethambarampp，barretteba，kaurjs，haluskapj，adercaiandzollmanpj.phaseitrialofintraperitonealadministrationofanoncolyticmeaslesvirusstrainengineeredtoexpresscarcinoembryonicantigenforrecurrentovariancancer.cancerresearch.2010；70(3)：875-882.30.myersr，greiners，harveym，griesmanng，kuffelm，buhrows，reidj，federspielm，amesmanddinglid.preclinicalpharmacologyandtoxicologyofintravenousmv-nis，anoncolyticmeaslesvirusadministeredwithorwithoutcyclophosphamide.clinicalpharmacologyandtherapeutics.2007；82(6)：700.31.engelandce，grossardtc，veinalder，bossows，lutzd，kaufmannjk，shevchenkoi，umanskyv，nettelbeckdmandweichertw.ctla-4andpd-l1checkpointblockadeenhancesoncolyticmeaslesvirustherapy.moleculartherapy.2014；22(11)：1949-1959.32.groted，cattaneorandfieldingak.neutrophilscontributetothemeaslesvirus-inducedantitumoreffectenhancementbygranulocytemacrophagecolony-stimulatingfactorexpression.cancerresearch.2003；63(19)：6463-6468.33.freemanal，zakay-ronesz，gomorijm，linetskye，rasoolyl，greenbaume，rozenman-yairs，paneta，libsoneandirvingcs.phasei/iitrialofintravenousndv-hujoncolyticvirusinrecurrentglioblastomamultiforme.moleculartherapy.2006；13(1)：221-228.34.lauriesa，belljc，atkinshl，roachj，bamatmk，o′neiljd，robertsms，groenewsandlorencerm.aphase1clinicalstudyofintravenousadministrationofpv701，anoncolyticvirus，usingtwo-stepdesensitization.clinicalcancerresearch.2006；12(8)：2555-2562.35.csataryl，eckhardts，bukoszai，czegledif，fenyvesic，gergelyp，bodeybandcsataryc.attenuatedveterinaryvirusvaccineforthetreatmentofcancer.cancerdetectionandprevention.1992；17(6)：619-627.36.vigila，parkm-s，martinezo，chuama，xiaos，crosjf，martínez-sobridol，wooslandgarcía-sastrea.useofreversegeneticstoenhancetheoncolyticpropertiesofnewcastlediseasevirus.cancerresearch.2007；67(17)：8285-8292.37.zhaoh，jankem，fournierpandschirrmacherv.recombinantnewcastlediseasevirusexpressinghumaninterleukin-2servesasapotentialcandidatefortumortherapy.virusresearch.2008；136(1)：75-80.38.geletnekyk，kiprianovai，ayachea，kochr，ycallemh，deleul，sommerc，thomasn，rommelaerejandschlehoferjr.regressionofadvancedratandhumangliomasbylocalorsystemictreatmentwithoncolyticparvovirush-1inratmodels.neuro-oncology.2010；12(8)：804-814.39.goetzcandgromeierm.preparinganoncolyticpoliovirusrecombinantforclinicalapplicationagainstglioblastomamultiforme.cytokine&growthfactorreviews.2010；21(2)：197-203.40.forsythp，roldáng，georged，wallacec，palmerca，morrisd，cairncrossg，matthewsmv，markertjandgillespiey.aphaseitrialofintratumoraladministrationofreovirusinpatientswithhistologicallyconfirmedrecurrentmalignantgliomas.moleculartherapy.2008；16(3)：627-632.41.reddyps，burroughskd，haleslm，ganeshs，jonesbh，idamakantin，hayc，liss，skeleklandvaskoa-j.senecavalleyvirus，asystemicallydeliverableoncolyticpicornavirus，andthetreatmentofneuroendocrinecancers.journalofthenationalcancerinstitute.2007；99(21)：1623-1633.42.taic-k，wangwj，chentcandkasaharan.single-shot，multicyclesuicidegenetherapybyreplication-competentretrovirusvectorsachieveslong-termsurvivalbenefitinexperimentalglioma.moleculartherapy.2005；12(5)：842-851.43.parkb-h，hwangt，liut-c，szedy，kimj-s，kwonh-c，ohsy，hans-y，yoonj-handhongs-h.useofatargetedoncolyticpoxvirus，jx-594，inpatientswithrefractoryprimaryormetastaticlivercancer：aphaseitrial.thelancetoncology.2008；9(6)：533-542.44.gomellalg，mastrangelomj，mccuepa，maguirehc，mulhollandsgandlattimeec.phaseistudyofintravesicalvacciniavirusasavectorforgenetherapyofbladdercancer.thejournalofurology.2001；166(4)：1291-1295.45.kimdh，wangy，leboeuff，belljandthornesh.targetingofinterferon-betatoproduceaspecific，multi-mechanisticoncolyticvacciniavirus.plosmed.2007；4(12)：e353.46.chardls，maniatie，wangp，zhangz，gaod，wangj，caof，ahmedj，elkhourimandhughesj.avacciniavirusarmedwithinterleukin-10isapromisingtherapeuticagentfortreatmentofmurinepancreaticcancer.clinicalcancerresearch.2015；21(2)：405-416.47.kimhs，kim-schulzes，kimdwandkaufmanhl.hostlymphodepletionenhancesthetherapeuticactivityofanoncolyticvacciniavirusexpressing4-1bbligand.cancerresearch.2009；69(21)：8516-8525.48.lij，o′malleym，sampathp，kalinskip，bartlettdlandthornesh.expressionofccl19fromoncolyticvacciniaenhancesimmunotherapeuticpotentialwhilemaintainingoncolyticactivity.neoplasia.2012；14(12)：1115-1n1111.49.gilm，komorowskimp，seshadrim，rokitah，mcgrayar，opyrchalm，odunsikoandkozbord.cxcl12/cxcr4blockadebyoncolyticvirotherapyinhibitsovariancancergrowthbydecreasingimmunosuppressionandtargetingcancer-initiatingcells.thejournalofimmunology.2014；193(10)：5327-5337.50.mccartja，mehtan，scollardd，reillyrm，carrasquilloja，tangn，dengh，millerm，xuhandlibuttisk.oncolyticvacciniavirusexpressingthehumansomatostatinreceptorsstr2：molecularimagingaftersystemicdeliveryusing111in-pentetreotide.moleculartherapy.2004；10(3)：553-561.51.gentschevi，müllerm，adelfingerm，weibels，grummtf，zimmermannm，bitzerm，heisigm，zhangqandyongay.efficientcolonizationandtherapyofhumanhepatocellularcarcinoma(hcc)usingtheoncolyticvacciniavirusstrainglv-1h68.plosone.2011；6(7)：e22069.52.conradsj，el-aswadm，kurbane，jengd，trippbc，nuttingc，eversoler，mackenziecandessanik.oncolytictanapoxvirusexpressingfliccausesregressionofhumancolorectalcancerxenograftsinnudemice.journalofexperimental&clinicalcancerresearch.2015；34(1)：1.53.shinej，wannagb，choib，aguilad，eberto，gendenemandwoosl.interleukin-12expressionenhancesvesicularstomatitisvirusoncolytictherapyinmurinesquamouscellcarcinoma.thelaryngoscope.2007；117(2)：210-214.54.stephensonk，barran，daviese，ashkaraandlichtyb.expressinghumaninterleukin-15fromoncolyticvesicularstomatitisvirusimprovessurvivalinamurinemetastaticcolonadenocarcinomamodelthroughtheenhancementofanti-tumorimmunity.cancergenetherapy.2012；19(4)：238-246.55.bergmani，griffinja，gaoyandwhitaker-dowlingp.treatmentofimplantedmammarytumorswithrecombinantvesicularstomatitisvirustargetedtoher2/neu.internationaljournalofcancer.2007；121(2)：425-430.56.wennierst，liuj，lis，rahmanmm，monamandmcfaddeng.myxomavirussensitizescancercellstogemcitabineandisaneffectiveoncolyticvirotherapeuticinmodelsofdisseminatedpancreaticcancer.moleculartherapy.2012；20(4)：759-768.57.tosicv，thomasdl，kranzdm，liuj，mcfaddeng，shislerjl，macneillalandroyej.myxomavirusexpressingafusionproteinofinterleukin-15(il15)andil15receptoralphahasenhancedantitumoractivity.plosone.2014；9(10)：e109801.58.vanrikxoortm，michaelism，wolschekm，mustert，egorova，seipeltj，doerrhwandcinatljrj.oncolyticeffectsofanovelinfluenzaavirusexpressinginterleukin-15fromthensreadingframe.plosone.2012；7(5)：e36506.59.goldsteindjandwellersk.herpessimplexvirustype1-inducedribonucleotidereductaseactivityisdispensableforvirusgrowthanddnasynthesis：isolationandcharacterizationofanicp6laczinsertionmutant.journalofvirology.1988；62(1)：196-205.60.yoonss，nakamurah，carrollnm，bodebp，chioccaeaandtanabekk.anoncolyticherpessimplexvirustype1selectivelydestroysdiffuselivermetastasesfromcoloncarcinoma.thefasebjournal.2000；14(2)：301-311.61.aghim，vistedt，depinhorandchioccae.oncolyticherpesviruswithdefectiveicp6specificallyreplicatesinquiescentcellswithhomozygousgeneticmutationsinp16.oncogene.2008；27(30)：4249-4254.当前第1页12当前第1页12