具有抗菌性及促进创伤治愈性的创伤治愈剂的制作方法

本发明涉及以鱼精蛋白(protamine)为有效成分的具有抗菌性及促进创伤治愈性的创伤治愈剂。

背景技术：

对于创伤，重要的是预防感染及促进治愈，因此关于创伤的治疗，提出了具有上述效能的创伤治愈剂。

作为对预防感染有效果、能够用于创伤治疗的组合物，专利文献1中公开了如下抗菌组合物，其包含抗菌剂及edta(乙二胺四乙酸)，该抗菌剂选自含碘及银离子的化合物，并且edta采用二元盐、三元盐及四元盐，该抗菌组合物的ph为4～8。专利文献1中记载了利用该抗菌组合物能够破坏在创伤处形成的生物膜。

专利文献2中公开了如下组合物，其用于阻碍或分散微生物生物膜，包含(a)硫酸鱼精蛋白及(b)苯扎氯铵、(a)偏高碘酸盐及(b)5-氟尿嘧啶、(a)偏高碘酸盐及(b)氯己定、或(a)硫酸鱼精蛋白及(b)银纳米粒子、且包含用于阻碍微生物生物膜的组合物、硫酸鱼精蛋白和双胍(ビスグァニド)。专利文献2中记载了作为所述组合物用途的创伤护理。

作为对促进治愈有效的组合物，专利文献3中公开了含有源自血小板的血管生成因子及生长因子、以及载体的创伤治疗用组合物。专利文献4中公开了如下促进创伤治愈用的组合物，其由微球构成，所述微球由选自聚苯乙烯、以及用选自由氨基、羧基及硫酸基所组成的组中的表面基团衍生化而成的聚苯乙烯的材料制造。专利文献4中，作为用于导入聚苯乙烯的衍生化中使用的表面基团的化合物，例示出了鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白等鱼精蛋白盐等。

非专利文献1中，对于具有抗菌作用的含银化合物，提示了具有细胞毒性等，并报道了在表皮角化细胞活跃增殖的创伤部应尽量不使用磺胺嘧啶银。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2016-40294号公报

专利文献2：日本特表2012-515726号公报

专利文献3：日本特表昭62-501628号公报

专利文献4：日本特表2002-502413号公报

非专利文献

非专利文献1：atiyehbs，costagliolam，hayeksn，dibosa：effectofsilveronburnwoundinfectioncontrolandhealingreviewoftheliterature：burns，2007；33：139-148

技术实现要素：

发明要解决的问题

对于专利文献1中记载的包含抗菌剂及edta的抗菌组合物，能够期待由抗菌剂带来的感染预防，但另一方面，担心由银离子、碘等的细胞毒性导致的创伤治愈的阻碍、银在以脏器为代表的体内的蓄积等。进而，专利文献1中记载的抗菌组合物包含多种有效成分的组合，会有其制造工艺变烦杂的情况。

对于专利文献2中记载的用于阻碍或分散微生物生物膜的组合物，能够期待生物膜阻碍效果，但另一方面，具有以下课题：由于为包含多种有效成分的组合物，因此有制造工艺烦杂等问题，由于组合使用银纳米粒子这样的金属、偏高碘酸盐这样的无机材料、或双胍等杀菌剂，因此必须考虑这些组合使用成分对生物体的影响、副作用，其用量、用法有时受限制。

对于专利文献3中记载的创伤治疗用组合物，载体上负载有血管生成因子及生长因子，但这些因子在制备过程中处理困难，有在制备过程中这些因子从载体丢失、或失活的可能性。

对于专利文献4中记载的由微球构成的组合物，专利文献4中提示了对假单胞菌属物种引起的创伤的感染的间接的抑菌作用这点是优异的。但另一方面，微球的主要构成材料为形成芯的聚苯乙烯，需要用于合成适当的微小尺寸的聚苯乙烯粒子的特别的工序、制造装置。进而，向由聚苯乙烯构成的芯的表面导入氨基等表面基团也需要用于其的特别的工序、处理装置。

根据以上说明的背景技术，谋求即使在包含单一有效成分的情况下，没有细胞毒性且没有在体内的蓄积等的生物体适合性也高、并且具有抗菌性和促进创伤治愈性、能通过更简便的制造方法、制造装置制造的创伤治愈剂。

本发明的目的在于，提供一种创伤治愈剂，其生物体适合性高、并且具有抗菌性和促进创伤治愈性、能通过更简便的制造方法、制造装置制造、也能够用于提供包含单一有效成分的创伤治愈剂。

用于解决问题的方案

作为以往抗菌性的创伤治愈剂，市售有配合有银的创伤治愈剂，利用无纺布、水胶体、泡沫材料等作为基材，有使基材分子与银进行离子键合而成的创伤治愈剂，或使银盐、有机银化合物、银纳米晶体等复合化而成的创伤治愈剂。但是提示了这些创伤治愈剂具有细胞毒性等，如前述，也报道了在表皮角化细胞活跃增殖的创伤部应尽量不使用磺胺嘧啶银(非专利文献1)。

另外，对于以多种成分为有效成分的治愈剂，从其制造、品质管理、成本的观点出发是不利的，以单一成分为有效成分在工业方面是有效的。

抗菌性和治愈促进性从细胞活性的观点出发为相反的作用，抗菌性为降低菌的活性的作用，治愈促进性为提高人体的细胞活性的作用，采用具有该相反作用的单一有效成分是通常难以想到的课题。进而，现有技术中虽然公开了大量有效成分，但根据上述的考虑，对于基于存在利用单一的有效成分而兼具抗菌性和促进创伤治愈性的创伤治愈剂的想法，尝试单独兼具抗菌性和促进创伤治愈性的化合物的检索的研究目前为止是没有的。进而，现有技术文献中公开的有效成分有非常多，将它们逐个进行动物实验等是极其困难的。

本发明人等反复进行深入研究，结果新发现：在各种抗菌物质中，鱼精蛋白及其药学上可接受的盐具有创伤治愈效果，从而得到了本发明。对于鱼精蛋白，具有抗菌性是公知的效果，但其创伤治愈效果目前还未被知晓。

本发明的创伤治愈剂的特征在于，包含选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的至少1种作为用于抗菌及促进创伤治愈的有效成分。

通过使用包含选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的至少1种作为用于抗菌及促进创伤治愈的有效成分的本发明的创伤治愈剂，能够对罹患创伤的患者进行防止感染、并且用于促进创伤治愈的治疗。

本发明的选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的至少1种在创伤治愈剂的制造中的使用方法的特征在于，使用选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的至少1种作为上述创伤治愈剂的用于抗菌及促进创伤治愈的有效成分。

本发明还涉及选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的至少1种在用于抗菌及促进创伤治愈中的使用。

本发明还涉及一种处置方法，其特征在于，其是用于患者具有的创伤的抗菌及促进创伤治愈的处置方法，对上述创伤施用创伤治愈剂，所述创伤治愈剂包含选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的至少1种作为创伤治愈用的有效成分。

发明效果

利用包含选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的至少1种作为促进创伤治愈用的有效成分的创伤治愈剂，能够得到创伤的抗菌效果及促进创伤治愈效果。选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的至少1种可以作为单一有效成分配合至创伤治愈剂中，通过这样的配合，能够得到抗菌效果及促进创伤治愈效果，生物体适合性高，在创伤治愈剂制造时作为有效成分可以添加1种，因此能够作为在工业方面也有效的创伤治愈剂来用于创伤治愈。

附图说明

图1为用平均值±标准偏差表示治愈试验的结果的图。根据图1所示的结果，能够确认：与对照区(无涂布)、硫酸银区相比，盐酸鱼精蛋白区和硫酸鱼精蛋白区具有促进创伤治愈效果。

具体实施方式

已知鱼精蛋白具有抗菌性，是以往以来作为食品防腐剂等而使用的安全性高的原材料。另一方面，本发明人进行了反复研究，结果新发现：鱼精蛋白不仅具有抗菌性，还具有创伤治愈的促进效果，以鱼精蛋白成分为单一有效成分，能提供具备抗菌性的创伤治愈剂。

需要说明的是，也考虑了出于止血目的、剂型自身的保存目的等而使创伤治愈(促进)剂中含有鱼精蛋白和/或其盐，但即使为该情况下，鱼精蛋白和/或其盐为抗菌及创伤治愈用的有效成分也是不变的。

进而，鱼精蛋白为蛋白质原材料，因此没有如银那样在以脏器为代表的体内的蓄积的担心，为安全性高的原材料。

另外，对于组合特性、结构明显不同的多种化合物作为有效成分而成的医药组合物，在其制造时需要各个有效成分所需的品质管理、多种有效成分的混合工序等，因此与使用单一有效成分的制造工艺相比，制造工艺更复杂。对于鱼精蛋白及其药学上可接受的盐，积累了作为食品防腐剂用的材料的安全性相关的知识，已经确立了其品质管理方法。

使用选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的至少1种化合物作为单一有效成分来制造创伤治愈剂的情况下，能使创伤治愈剂的制造工艺简化。

鱼精蛋白的药学上可接受的盐在由鱼精蛋白构成的部分发挥目标效果的方面，作用效果与鱼精蛋白是共通的，利用鱼精蛋白及其药学上可接受的盐作为创伤治愈剂的有效成分时可以同等地处理它们。因此，使用选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的多种化合物作为有效成分来制造创伤治愈剂的情况下，也能够将它们作为在分子结构及作用效果的方面相同的化合物来处理，能够使创伤治愈剂的制造工艺简化。

本发明的创伤治愈剂包含鱼精蛋白及其药学上可接受的盐的至少1种作为有效成分。

本发明的创伤治愈剂在不损害利用具有抗菌性和促进创伤治愈效果的鱼精蛋白及其药学上可接受的盐的至少1种的优点的范围内，可以组合使用其他抗菌剂、创伤治愈剂作为有效成分。

从制造工艺的简化、有效成分的安全性的观点出发，优选有效成分为由选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的至少1种构成的、即有效成分为由选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的至少1种构成的单一有效成分的创伤治愈剂，更优选将鱼精蛋白及其药学上可接受的盐的1种作为单一有效成分的创伤治愈剂。

本发明的创伤治愈剂通过选自鱼精蛋白及其药学上可接受的盐中的至少1种(以下，称为“鱼精蛋白成分”)所具有的抗菌性带来的预防感染和促进创伤治愈效果这两者，能够得到促进创伤治愈效果。

创伤也称为损伤、外伤，是指身体表面、粘膜面、脏器表面等因外部刺激而发生断裂、具有开放部的部位。

通过本发明促进治愈的创伤的种类没有特别限定。对于作为治疗对象的创伤，可列举出切创(incisionwound)、割创(chopwound)、刺创(puncturewound)、挫创(contusedwound)、裂伤(lacerationwound)、刺伤(impalementwound)、剥皮伤(dermabrasion)、剥离(decollement)、擦伤(abrasion)、挤压伤(crushedwound)、挫伤(contusion)、枪伤、爆炸伤(blastinjury)、咬伤、擦创、爆创、咬创、摔伤、外伤、褥疮、手术伤口、烧伤伤口、枪伤伤口、皮下脓疡、经缝合的裂伤、被污染的裂伤、充血性溃疡、下腿溃疡、足部溃疡、静脉性溃疡、糖尿病性溃疡、缺血性溃疡、压迫溃疡、急性·慢性的创伤、开放性损伤、非开放性损伤等。

另外，对需要创伤治疗、通过本发明促进创伤治愈的治疗对象没有特别限定。作为治疗对象，可列举出包括人在内的动物。作为动物种类，例如可列举出狗、猫、鼠、牛、猪、羊、马、海豚等。另外，作为用途相关的分类的动物，可列举出宠物动物、商用动物、家畜、竞技用动物等。

鱼精蛋白为在鲑鱼、鲱鱼、鳟鱼等鱼类的精子核中以与dna结合而成的核精蛋白的形式存在的强碱性蛋白质，根据原料的不同，被称为例如鲑精蛋白(鲑鱼)、鲱精蛋白(鲱鱼)等，各自的结构也有若干不同。任意鱼精蛋白均可以用作有效成分。

对于作为鱼精蛋白衍生物的、鱼精蛋白的药学上可接受的盐，可以利用与酸或碱的盐。作为用于获得盐的酸，可以使用无机酸及有机酸中的至少1种。另外，作为用于获得盐的碱，可以使用无机碱及有机碱中的至少1种。

作为鱼精蛋白的盐，可以优选使用利用以下举出的盐形成用的酸或碱而得到的药学上可接受的盐。

作为酸加成盐形成用的无机酸及有机酸，例如可列举出盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸及富马酸等二羧酸、乙酸、丙酸及丁酸等单羧酸等。

作为盐形成用的无机碱，例如可列举出氨、钠、锂、钙、镁、铝等的氢氧化物、碳酸盐及碳酸氢盐等。

作为盐形成用的有机碱，例如可列举出甲胺、二甲胺、三乙胺等单烷基胺、二烷基胺及三烷基胺、单羟基烷基胺、二羟基烷基胺及三羟基烷基胺、胍、n-甲基葡萄糖胺等。

这些鱼精蛋白衍生物根据需要可以单独使用或将它们的2种以上组合来使用。

对于作为本发明的创伤治愈剂所具有的抗菌效果的对象的菌没有特别限定。对于作为本发明的创伤治愈剂带来的抗菌效果的对象的菌，例如，可列举出细菌、霉、酵母等。作为细菌，可以为革兰氏阳性菌也可以为革兰氏阴性菌。作为细菌，可列举出金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌、沙门氏菌、乳酸菌等。作为霉，可列举出念珠菌等。作为酵母，可列举出产膜酵母等。

本发明的创伤治愈剂中，作为有效成分，可以直接使用鱼精蛋白成分，或者适宜使用赋形剂、载体、稀释剂等来制剂化为符合目标施用形态的剂型。为了制造本发明的创伤治愈剂，可以仅使用鱼精蛋白成分作为有效成分，进而也可以使用鱼精蛋白成分作为单一有效成分。

作为可利用的剂型，例如，可列举出片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服液剂、糖浆剂、口服胶冻剂、口腔用片剂、口腔用喷雾剂、口腔用半固体剂、漱口剂、注射剂、吸入剂、滴眼剂、眼软膏剂、滴耳剂、滴鼻剂、栓剂、直肠用半固体剂、灌肠剂、阴道剂、阴道用栓剂、外用散剂、外用固体剂、外用液剂等。

可以直接利用粉末状等的鱼精蛋白成分来用作外用、即局部用的涂布剂。例如，可以在基材涂布鱼精蛋白成分从而贴附于创伤部位来用作创伤治愈剂。作为基材，可以使用例如纱布、海绵包覆材料、海绵、发泡体、无纺布、聚氨酯、绷带、橡皮膏、亲水性创伤包覆材料、密封性创伤包覆材料等创伤包覆材料、干燥片、干式无纺布片、冷冻干燥片、固体凝胶片等凝胶片、水凝胶、粘性凝胶等凝胶。另外，也可以将例如包含鱼精蛋白成分作为有效成分的、软膏、乳液(lotion)、乳霜、冲洗液、浸渍液等局部用涂布剂涂布于创伤部位。局部用的涂布剂例如也可以采用可利用喷雾器、涂抹器而涂布于创伤部位的组成、形态。

对于本发明的创伤治愈剂中所含的鱼精蛋白成分的配合量、向创伤部位的施用量，根据治疗对象、治疗目的来适宜选择治疗所需的量，没有特别限定。例如，在作为基材的仁丹医用灭菌垫t(森下仁丹公司制)上涂布鱼精蛋白从而贴附于创伤部位而使用时，相对于基材和鱼精蛋白的合计量，鱼精蛋白的量优选为0.001质量％以上且50质量％以下。鱼精蛋白的量的下限值更优选为0.01质量％以上、进一步优选为0.1质量％以上、最优选为0.125质量％以上。鱼精蛋白的量的上限值更优选10质量％以下、进一步优选2质量％以下、最优选1.25质量％以下。优选选择0.125质量％～1.25质量％的范围的鱼精蛋白的涂布量，在该涂布量的范围中，更优选1.25质量％。关于软膏、乳液、乳霜、冲洗液、浸渍液等局部用涂布剂，也可以以成为同样的涂布量的方式来选择这些涂布剂中所含的鱼精蛋白成分的浓度。

可以对鱼精蛋白成分进行灭菌处理。灭菌处理可以在向制剂化工序的供给前、制剂化工序中及制剂化工序后中的至少1个阶段对鱼精蛋白成分进行。鱼精蛋白的灭菌处理中利用的灭菌方法只要为不损害鱼精蛋白成分所具有的目标效果、并且可得到目标灭菌效果的方法，就没有特别限定。作为灭菌方法，可列举出γ射线灭菌、辐射灭菌、环氧乙烷气体(eog)灭菌、气体灭菌、电子束灭菌、高压灭菌器灭菌、蒸汽灭菌、干热灭菌、火焰灭菌、煮沸消毒、高频灭菌、等离子体灭菌、紫外线灭菌、以溶液状利用时的过滤器过滤等。

通过使用具有抗菌性及促进创伤治愈效果这两者的鱼精蛋白成分作为用于基于抗菌性的预防感染和促进创伤治愈的有效成分，从而能够以鱼精蛋白成分单独得到抗菌效果及促进创伤治愈效果而不需要金属等其他有效成分的组合使用。其结果，能够制造以鱼精蛋白成分为单一有效成分的创伤治愈剂。跟银等金属成分与其他成分的组合使用等组合多种不同的化合物作为有效成分的情况相比，以鱼精蛋白成分为单一有效成分的创伤治愈剂在银等金属的体内蓄积·毒性等轻的方面能够实现安全性的提高，另外，因仅使用单一有效成分即可这点而能够实现制造工艺的简化。

抗菌性也称为抗菌作用、抗菌效果，是指阻止细菌的生育、增殖、或使细菌灭绝的效果。在创伤处担心例如金黄色葡萄球菌等细菌会引起感染症。由于鱼精蛋白成分具有抗菌性，因此通过在创伤部位施用鱼精蛋白成分，能够预防创伤部位的感染。

鱼精蛋白成分的抗菌性可以根据“jisl1902：2015纤维制品的抗菌性试验方法及抗菌效果”(iso20743)中的抗菌活性值来评价，对象原材料的抗菌活性值为2.0以上时，可以判断为有抗菌性。对于鱼精蛋白成分，对金黄色葡萄球菌的抗菌活性值为2.0以上。

鱼精蛋白成分不仅具有抗菌性，还有促进创伤治愈效果。

促进创伤治愈效果是指使创伤更迅速地恢复的效果。通过使创伤迅速地恢复，从而能够缩短由创伤引起的生活品质降低的时间等。鱼精蛋白成分具有促进创伤治愈效果，因此与不使用创伤治愈剂时相比，通过鱼精蛋白成分的施用，能够使创伤更迅速地恢复。另外，与具有抗菌性的硫酸银相比，鱼精蛋白成分能使创伤更迅速地的恢复，因此本发明中利用的鱼精蛋白成分的促进创伤治愈效果不只是起因于抗菌性，而是鱼精蛋白成分特有的效果。

鱼精蛋白成分的促进创伤治愈效果可以根据使用了小鼠、大鼠等动物的治愈试验来评价。具体而言，与不使用创伤治愈剂的对照区相比，使用了鱼精蛋白成分的试验区中创伤的恢复快时，可以判断为具有促进创伤治愈效果。根据本发明人等的利用了治愈试验的研究，确认了鱼精蛋白成分能够比不使用创伤治愈剂的对照区加快创伤的恢复。

实施例

通过以下的实施例具体地对本发明进行说明，但本发明不受这些实施例的限定。

[实施例1]抗菌性试验

以0.40g±0.05g的质量将标准布裁切成适当的大小。准备灭菌水(对照试样)及各试验试样溶液(盐酸鱼精蛋白；maruhanichirocorporation制、硫酸鱼精蛋白；maruhanichirocorporation制、硫酸银；和光纯药工业公司制)并进行过滤器过滤。将经过滤器过滤的各溶液以有效成分的固体成分量成为0.125质量％及1.25质量％中任一者的方式分别各自涂布在标准布上，制作3种试验片后，放入至高压灭菌器灭菌完的各个小瓶中。

在各个试验片上以每个部位0.2ml分多个部位接种金黄色葡萄球菌菌液。接种后立即向一部分小瓶添加20ml的洗出用生理食盐水，洗出金黄色葡萄球菌后，测定活菌数。将未洗出的剩余的小瓶在37℃±2℃下培养18～24小时。培养后，向小瓶中添加20ml的洗出用生理食盐水，洗出金黄色葡萄球菌后，测定活菌数。根据式(1)，计算抗菌活性值，将抗菌活性值2.0以上判断为有抗菌性。

a＝(logct-logc0)-(logtt-logt0)···式(1)

a：抗菌活性值

logct：培养18-24小时后的对照试样的活菌数的算术平均的常用对数

logc0：刚刚接种后的对照试样的活菌数的算术平均的常用对数

logtt：培养18-24小时后的试验试样的活菌数的算术平均的常用对数

logt0：刚刚接种后的试验试样的活菌数的算术平均的常用对数

将所得结果示于表1。盐酸鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白、硫酸银的抗菌活性值均为2.0以上。由此确认了盐酸鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白、硫酸银均有抗菌性。

[表1]

表1

[实施例2]治愈试验

准备基材(仁丹医用灭菌垫t、森下仁丹公司制)，将过滤器过滤完的各试验试样溶液(盐酸鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白、硫酸银)以各个有效成分的固体成分量成为1.25质量％的方式均质地涂布在各基材上。在8周龄的brihan：wist@jcl(galas)大鼠(各试验区4只)的单侧侧腹部制作2.5cm×2.5cm大小的皮肤全层切开伤口。

贴附分别各自涂布有各试验试样溶液的基材(试验区)、或均未涂布的基材(对照区)后，用包扎材料(3mtegadermsmoothfilmroll、3mjapanlimited制)固定。每天更换一次基材及包扎材料，并在更换时用数码相机对切开伤口拍摄，然后用图像解析软件(imagej,nationalinstitutesofhealth,usa)求出创伤面积。将切开伤口制作日(观察第0天)的创伤面积设为100％，求出各观察日的创伤的面积比例(％)。

将所得结果示于图1。在观察的第1～4天，与对照区及作为试验区的硫酸银区相比，在作为试验区的盐酸鱼精蛋白区及硫酸鱼精蛋白区观察到促进创伤治愈的效果。硫酸银、盐酸鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白均具有抗菌性，但仅在盐酸鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白中观察到促进创伤治愈效果，因此鱼精蛋白的促进创伤治愈效果不只是起因于抗菌性，是在鱼精蛋白成分的抗菌性之外另行得到的特有的效果。

[实施例3]灭菌处理的研究

将盐酸鱼精蛋白粉末、硫酸鱼精蛋白粉末分别封入灭菌袋(ids两用卷袋、hogymedicalco.,ltd.制)中。对照区(未处理)不进行灭菌处理，对剩余的进行eog灭菌处理(eog浓度20％、灭菌时间4小时、温度55℃)及γ射线灭菌处理(30kgy)。以0.40g±0.05g的质量将标准布裁切成适当的大小。将各试验粉末(盐酸鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白)溶解于灭菌水后，进行过滤器过滤。将经过滤器过滤的各试验溶液以有效成分的固体成分量成为0.125质量％及1.25质量％中任一者的方式涂布于标准布而制作试验片后，放入高压灭菌器灭菌完的各个小瓶中。在试验片上以每个部位0.2ml分多个部位接种金黄色葡萄球菌菌液。接种后立即向一部分小瓶中添加20ml的洗出用生理食盐水，洗出金黄色葡萄球菌后，测定活菌数。将未洗出的剩余的小瓶在37℃±2℃下培养18～24小时。培养后，向小瓶中添加20ml的洗出用生理食盐水，洗出金黄色葡萄球菌后，测定活菌数。根据式(1)，计算抗菌活性值，将抗菌活性值2.0以上判断为有抗菌性。

将所得结果示于表2。进行了eog灭菌处理及γ射线灭菌处理的盐酸鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白的抗菌活性值均为2.0以上，确认了盐酸鱼精蛋白、硫酸鱼精蛋白即使进行灭菌处理也未失去抗菌性。

[表2]

表2

产业上的可利用性

根据本发明，单独用鱼精蛋白成分也能够得到抗菌效果及促进创伤治愈效果，能提供包含鱼精蛋白成分作为单一有效成分的创伤治愈剂。