一种解酒护肝复方制剂及其应用的制作方法

本发明涉及一种解酒护肝复方制剂及应用。

背景技术：

酒精是世界范围内最常用的一种药物，也是一种被社会所广泛接受的肝毒物；中国的酒文化源远流长，酒从发明之初到今天，已有八千多年的历史，千百年来，人们对酒是爱恨交加；少量饮酒能活血通络散寒，调节心情，消除疲劳和紧张状态；而无节制酗酒则会引起包括心血管系统、神经系统和消化系统在内等多个组织器官病变损伤。《本草纲目》言:“过饮不节，杀人顷刻”；调查研究显示在长期饮酒的患者中，约57.5％的病人有脂肪肝，15％的患者有肝硬化；一些消化系统的肿瘤如胃癌、食管癌、肝癌的发病率上升也和酒精中毒有着密切的关系；酒精中毒已越来越严重地威胁着人们的身体健康；因此，为了减少酒精中毒的发生，研究开发相关解酒护肝类产品的需求非常重要和迫切，现有的解酒配方中有些以传统解酒材料葛根，枳椇子为主要功效成分，如专利号101658648b公开了一种解酒护肝复方制剂及应用就是以葛根，枳椇子为主要功效成分，并没有结合茅岩莓，且现有技术中解酒护肝配方是先确定配方，再测试活性，这样导致所确定配方不一定是解酒护肝活性最好。

技术实现要素：

针对上述技术中存在的不足之处，本发明提供一种解酒护肝复方制剂及应用，能够结合葛根、枳椇子和茅岩莓，并且采用先测试乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的酶激活活性再确定配方的方式制备使得解酒护肝的效果更佳。

为实现上述目的，本发明提供一种一种解酒护肝复方制剂，所述解酒护肝复方制剂按重量百分比包括如下组分：葛根10-30％、青橄榄10-20％、枳椇子20-30％、铁皮石斛10-20％、茅岩莓提取物20-40％。

其中，所述解酒护肝复方制剂的具体组分如下：葛根20％、青橄榄10％、枳椇子20％、铁皮石斛10％、茅岩莓提取物40％。

其中，所述的解酒护肝复方制剂为口服剂解酒护肝复方制剂。

其中，所述的解酒护肝复方制剂是由体外乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的酶激活活性确定的。

本发明还提供一种解酒护肝复方制剂的制备方法，包括如下步骤：

步骤a：用水或乙醇制备解酒护肝药食用植物单方提取物；

步骤b：对各单方提取物提取液体外乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的酶激活活性筛选；

步骤c：根据步骤b)中乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的酶激活活性筛选的结果确定复方提取液的配方组成。

其中，所述步骤a包括以下具体步骤：

1)、葛根、枳椇子、铁皮石斛、青橄榄、茅岩莓按相关标准的规定经检验合格后，备用；

2)、新鲜葛根按相关标准配料后，投入提取罐内，每次5-6倍量70％乙醇，浸泡60分钟，提取2遍，合并提取液,减压回收乙醇,提取液浓缩至无醇味,离心,过滤得到葛根提取物；

3)、枳椇子按相关标准配料后，投入提取罐内，每次5-6倍量70％乙醇，浸泡60分钟，提取2遍，合并提取液,减压回收乙醇,提取液浓缩至无醇味,离心,过滤得到枳椇子提取物；

4)、新鲜铁皮石斛按相关标准配料后，投入提取罐内，每次5-6倍量水，浸泡60分钟，提取2遍，合并提取液,提取液浓缩至1/10,离心,过滤得到铁皮石斛提取物；

5)、新鲜青橄榄按相关标准配料后，投入提取罐内，每次5-6倍量水，浸泡60分钟，提取2遍，合并提取液,提取液浓缩至1/10,离心,过滤得到青橄榄提取物；

6)、茅岩莓按相关标准配料后，投入提取罐内，每次5-6倍量70％乙醇，浸泡60分钟，提取2遍，合并提取液,提取液浓缩至1/10,通过预先处理好的d101大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用10-30％乙醇洗脱，弃去洗脱液，继用50-70％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得茅岩莓。

其中，所述步骤b包括以下具体步骤：

1)葛根、枳椇子、铁皮石斛、青橄榄、茅岩莓提取物分别配制高中低三种浓度，dmso为助溶剂；

2)筛选乙醇脱氢酶(adh)激活活性：乙醇脱氢酶的活力测定采用瓦勒-霍赫法；方法如下：试管中分别加入一定量焦磷酸钠缓冲液、11.5％(v:v)的乙醇溶液、氧化型辅酶i(nad+)和一定浓度的单方提取液溶液,混合后放25℃水浴中保温10-15min，保温结束后的试管立即加入一定量的乙醇脱氢酶(adh),摇匀后立即在分光光度计340nm波长处测定吸光度值(a340nm),然后每隔10-15s记数一次,连续测定一段时间后作图，以蒸馏水作空白调零,以蒸馏水代替样品提取液作为对照组,测定对照组乙醇脱氢酶的酶活力；

按下式计算激活率:

激活率＝(酶活力试验组-酶活力对照组)/酶活力对照组×100％；

3)、筛选乙醛脱氢酶(aldh)激活活性：乙醛脱氢酶的活力测定采用瓦勒-霍赫法，方法如下：试管中分别加入一定量焦磷酸钠缓冲液、20.0％(v:v)的乙醛溶液、氧化型辅酶i(nad+)和一定浓度的单方提取液溶液,混合后放25℃水浴中保温10-15min；保温结束后的试管立即加入一定量的乙醛脱氢酶(aldh),摇匀后立即在分光光度计340nm波长处测定吸光度值(a340nm),然后每隔10-15s记数一次,连续测定一段时间后作图；以蒸馏水作空白调零,以蒸馏水代替样品提取液作为对照组,测定对照组乙醛脱氢酶的酶活力；按下式计算激活率:

激活率＝(酶活力试验组-酶活力对照组)/酶活力对照组×100％。

其中，所述葛根、枳椇子、铁皮石斛、青橄榄、茅岩莓提取物分别配制所述高中低三种浓度，所述高中低三种浓度分别为：1g/ml、0.1g/ml、0.01g/ml。

其中，步骤c包括以下具体步骤：

1)按照酶激活活力结果配比各单方提取液，设定5-10组配方，配制成复方提取液；

2)对各个配方的复方提取液测试乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的酶激活活性；

3)综合参考酶激活活性测试结果，确定三个最佳配比组方；

4)将各单方提取物按照配比混合，加入辅料，即得。

此外，本发明的解酒护肝复方提取物在解酒护肝作用的保健品及药品中的应用，该解酒护肝复方提取物根据上述的配方及方法得到，其特征在于，将所述复方提取物与药用辅料混合，制成口服制剂，它可以是硬胶囊、软胶囊、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、袋泡茶、软糖、口服液、饮料中的任意一种。

本发明所采用的药理作用为：

葛根,始载于《神农本草经》，历代本草均有记载，今为常用生药，被国家卫生部列入“药食两用”名录；葛根的有效成分主要为异黄酮类化合物，包括葛根素，大豆苷元(daidzein)、大豆苷(daidzin)等。葛根作为中国传统医学中最具代表性的解酒药物之一，具有解酒防醉、改善心脑血管循环、降低心肌耗氧量，降低血糖，防止高血压及动脉硬化，抗肝脏毒，抗炎，祛痰，解热，提高机体免疫力，抗菌，抗病毒等多种药理作用,可有效提高肝脏乙醇脱氢酶(alcoholdehydrogenase，adh)与乙醛脱氢酶(acetaldehydedehydrogenase，aldh)的活性，其解酒作用与增强乙醇的生物转化有关，从乙醇的吸收、代谢、排泄3个环节发挥解酒作用，对急、慢性酒精中毒均能发挥解酒作用。

茅岩莓,又名藤茶、白茶等，其学名为显齿蛇葡萄ampelopsisgrossedntata(hand.-mazz)w.t.wang，为葡萄科蛇葡萄属的一种野生木质落叶藤本植物，属于典型的类茶植物，生长于峰峦叠嶂、植被茂密、空气清新、土质疏松肥沃、云雾弥漫的悬崖上，是张家界茅岩山原始森林珍稀物种；民间将其幼嫩茎叶制成保健茶，主要化学成分有糖类、氨基酸、黄酮等。其中黄酮含量较高，尤其是二氢杨梅素含量丰富；现代医学研究表明,茅岩莓具有消炎、抑菌、止咳、镇痛、保肝、醒酒和抗血栓、降血脂、抗氧化、抑制肿瘤等一系列作用。

枳椇子，为鼠李科(rhamnaceae)拐枣属(hoveniathunb)植物枳椇的种子；枳椇子有清热利尿，解酒毒之功效，主治酒毒、烦热、口渴、呕吐、二便不利等症；民间素有“千杯不醉枳椇子”的说法，古代医书《医方考》中亦有记载“枳椇子(鸡距子)，解酒，过于葛花。今后凡遇伤酒中酒者，宜用之。”现代医学研究也证明，枳椇子可加快乙醇代谢，降低酒后血醇浓度，增强肝脏乙醛脱氢酶活性，降低肝脏脂质过氧化风险，减少乙醇所致肝损伤等。

青橄榄树canariumalbum(lour.)raeusch.是橄榄科橄榄属的常绿乔木,是我国南方部分地区种植的一种经济果树,其成熟干燥的果实为青果,是《中国药典》收载品种,有清热,利咽,生津,解毒的功能,适用于咽喉肿痛、咳嗽、烦渴、鱼蟹中毒及酒毒等,可单用或配伍使用。

铁皮石斛(dendrobiumofficinalekimuraetmigo)为兰科石斛属多年生附生草本植物，又名黑节草，更是石斛药材中的上品。以其新鲜或干燥的茎入药，具有“益胃生津，滋阴清热”的功效，被誉为“滋阴圣品”。在一千多年前的道家医学经典《道藏》中将铁皮石斛列为“中华九大仙草”之首，可见其功效与地位。

本发明的有益效果是：与现有技术相比，本发明将葛根、枳椇子、和茅岩莓结合，同时做到解酒护肝的功效；同时，通过先测试与筛选乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的活性，再确定复方制剂的配方，提升了配方的合理性，解酒护肝的效果更佳；多种成型形式，可多向选择。

附图说明

图1为乙醇脱氢酶(adh)活力测试图；

图2为乙醛脱氢酶(adlh)活力测试图。

具体实施方式

基于上述发明内容的具体中药组分以及制备方法和应用，下面结合具体实施例来说明本发明解酒护肝复方制剂的实施方式和结果。

酒的主要成为为乙醇，酒精在人体内的分解代谢主要考肝脏的酶系统中的两种酶：一种是乙醇脱氢酶，另一种是乙醛脱氢酶；乙醇脱氢酶能把酒精分子中的两个氢原子脱掉，使乙醇分解变成乙醛，而乙醛脱氢酶则能把乙醛中的两个氢原子脱掉，使乙醛转化为乙酸，最终分解为二氧化碳和水。

本发明的解酒护肝复方制剂就是通过先确定解酒护肝复方制剂的乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的酶活性的影响，之后确定好解酒复方制剂的配方比，效果更佳。

助溶剂dmso是一种透明、无色、无臭、呈微苦味的液体，被称为“万能溶媒”。

实施例一：

新鲜葛根:枳椇子:新鲜铁皮石斛:新鲜青橄榄:茅岩莓五种提取物配方比例为1:3:1:1:4制成胶囊剂：取葛根提取物2g,枳椇子提取物6g,铁皮石斛提取物2g,青橄榄提取物2g,茅岩莓提取物8g,加入淀粉60g，β环糊精50g，95％乙醇制粒，干燥，制成胶囊剂1000粒。

实施例2、葛根:枳椇子:新鲜铁皮石斛:新鲜青橄榄:茅岩莓五种提取物配方比例为2:2:1:1:4制成胶囊剂：

取葛根提取物4g,枳椇子提取物4g,铁皮石斛提取物2g,青橄榄提取物2g,茅岩莓总黄酮8g,加入淀粉60g，β环糊精50g，95％乙醇制粒，干燥，制成胶囊剂1000粒。

实施例3、

葛根:枳椇子:新鲜铁皮石斛:新鲜青橄榄:茅岩莓五种提取物配方比例为2:2:1:1:4制成胶囊剂：

取葛根提取物4g,枳椇子提取物4g,铁皮石斛提取物2g,青橄榄提取物2g,茅岩莓总黄酮8g,加入淀粉60g，β环糊精50g，95％乙醇制粒，干燥，制成胶囊剂1000粒。

相应地，设置三组对比例，分别为：

对比例1

新鲜葛根:枳椇子:新鲜铁皮石斛:新鲜青橄榄:茅岩莓五种提取物配方比例为1:2:2:2:3制成胶囊剂：

取葛根提取物2g,枳椇子提取物4g,铁皮石斛提取物4g,青橄榄提取物4g,茅岩莓提取物6g,加入淀粉60g，β环糊精50g，95％乙醇制粒，干燥，制成胶囊剂1000粒。

对比例2

新鲜葛根:枳椇子:新鲜铁皮石斛:新鲜青橄榄:茅岩莓五种提取物配方比例为1:3:2:1:3制成胶囊剂：

取葛根提取物2g,枳椇子提取物6g,铁皮石斛提取物4g,青橄榄提取物2g,茅岩莓提取物6g,加入淀粉60g，β环糊精50g，95％乙醇制粒，干燥，制成胶囊剂1000粒。

对比例3

新鲜葛根:枳椇子:新鲜铁皮石斛:新鲜青橄榄:茅岩莓五种提取物配方比例为3:2:2:1:2制成胶囊剂：

取葛根提取物6g,枳椇子提取物4g,铁皮石斛提取物4g,青橄榄提取物2g,茅岩莓提取物4g,加入淀粉60g，β环糊精50g，95％乙醇制粒，干燥，制成胶囊剂1000粒。

下面是实施例1-3和对比例1-3对乙醇脱氢酶的酶激活性进行分析：

采用瓦勒-霍赫(valle&hoch)法并稍加改良后测定乙醇脱氢酶(adh)的活性，具体步骤如下：

在测定管中分别加入ph值为8.8的焦磷酸钠缓冲液1.5ml，27mmol/l氧化型辅酶i(nad+)1.0ml，11.5％(v/v)的乙醇溶液0.5ml，0.1mg/ml实施例和0.1mg/ml对比例1～3产品溶液(胶囊去壳后用水溶解，加入少量dmso为助溶剂)0.1ml，混合后，放入25℃的水浴中加盖温育5min；温育后的测定管立即加入adh(0.25u/ml)0.1ml，摇匀后立即用分光光度计测定其吸光度(a340nm)值，以后每隔10s读数一次，连续测定5min，取反应最初的线性部分作图；以0.5m蒸馏水代替0.5ml11.5％(v/v)的乙醇溶液，作参比调零，以0.1ml蒸馏水代替0.1ml产品溶液，测定对照组adh的酶活力。

以a340nm对时间作图，取反应最初线性部分，计算△a340nm/10s值，根据生成物nadh在340nm处的摩尔消光系数为6.2，计算adh的活力单位；adh的活力以每分钟生成nadh的纳摩尔数(nmol/min)表示；按下式计算激活率:

激活率＝(酶活力试验组-酶活力对照组)/酶活力对照组×100％

产生的结果为图1：可见采用本发明方法实施例1～3制得的解酒护肝产品增强乙醇脱氢酶(adh)活力效果高于对比例1～3(不同配比)较明显，说明实施例1～3配方更合理。

接着，对实施例1-3和对比例1-3对乙醛脱氢酶的酶激活性进行分析：

具体方法为：采用瓦勒-霍赫(valle&hoch)法并稍加改良后测定乙醛脱氢酶(adlh)的活性；在测定管中分别加入ph值为9.5的焦磷酸钠缓冲液1.5ml，27mmol/l氧化型辅酶i(nad+)1.0ml，20％(v/v)的乙醛溶液0.5ml，0.1mg/ml实施例和0.1mg/ml对比例1～3产品溶液(胶囊去壳后用水溶解，加入少量dmso为助溶剂)0.1ml，混合后，放入25℃的水浴中加盖温育5min；温育后的测定管立即加入aldh(0.25u/ml)0.1ml，摇匀后立即用分光光度计测定其吸光度(a340nm)值，以后每隔10s读数一次，连续测定5min，取反应最初的线性部分作图。以0.5ml蒸馏水代替0.5ml20％(v/v)的乙醛溶液，作参比调零，以0.1ml蒸馏水代替0.1ml产品溶液，测定对照组adlh的酶活力。

以a340nm对时间作图，取反应最初线性部分，计算△a340nm/10s值，根据生成物nadh在340nm处的摩尔消光系数为6.2，计算adh的活力单位；adh的活力以每分钟生成nadh的纳摩尔数(nmol/min)表示；按下式计算激活率:

激活率＝(酶活力试验组-酶活力对照组)/酶活力对照组×100％

产生的结果为图2：可见，采用本发明方法实施例1～3制得的解酒护肝产品增强乙醛脱氢酶(adlh)活力效果明显高于对比例1～3(不同比例)，说明实施例1～3配方更合理。

本发明的优势在于：

(1)、将葛根、枳椇子、和茅岩莓结合，从葛根，枳椇子，茅岩莓，青橄榄,铁皮石斛中提取出具有解酒护肝活性物质作为增益型香料，开发出可以预防和缓解喝酒带来的口渴烦热，头晕呕吐等症状的产品；

(2)、通过先测试与筛选乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的酶活性，再确定复方制剂的配方，提升了配方的合理性，解酒护肝的效果更佳；

(3)、本发明的复方提取物制剂可成为多种形式的产品，应用广泛，多向选择。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下做出若干替代或明显变型，而且性能或用途相同，都应当视为属于本发明的保护范围。