本发明属于中药制剂领域，具体涉及一种用于防治骨关节炎的药物组合物及其制备方法。
背景技术：
：骨关节炎(oa)是一种以关节软骨退变和关节周围形成骨质增生为病理特征的慢性进行性疾病，亦称为退行性关节炎。是影响人类健康最常见的关节疾患之一，没有明显的种族和地域差异。在超过50岁以上人群中，骨关节炎在导致长期残疾的疾病中仅次于心脑血管疾病排名第二，世界卫生组织(who)将骨关节炎、心脑血管疾病和癌症并列为危害人类健康的三大杀手。随着平均寿命的延长，老龄化人口数量的逐步增多，预计在今后较长的一段时期内，骨关节炎的患病人数会进一步增加，对社会和经济的影响也将进一步加大。骨关节炎的发病机制主要有以下几个方面：基质蛋白酶(尤其是金属基质蛋白酶)降解软骨细胞外基质；细胞因子作用；软骨细胞凋亡；自身免疫反应；一氧化氮作用等。其治疗的总体原则是在疾病早期采取药物和非药物相结合，在疾病进展的晚期，必要时采取手术治疗。中国发明专利cn101227926用于治疗骨关节炎的方法和组合物，公开了一种包含一种或多种离子通道调节剂和一种或多种骨关节炎治疗剂的组合物，所述骨关节炎治疗剂包括但不限于药用粘性补充剂、甾体类和非甾体类抗炎药、葡糖胺、软骨素等。该组合物通过包埋在细胞膜中的离子通道调节剂来调节离子移动进入和流出细胞，配合骨关节炎治疗剂对骨关节炎进行治疗，但其中非甾体抗炎药长期服用常常导致严重不良反应，且不能改变病程，甚至会出现症状加重的现象，同时复发率高。与西药不同的是，传统医学认为骨关节炎属中医的“痹症”范畴，其病因病机多为肝肾两虚，筋骨失荣，加之外伤，劳损或风寒湿邪侵袭所致，治疗原则以补益肝肾、祛风活血为主。在骨关节炎治疗中结合中医药治疗，可以调动机体的内在免疫能力，减轻炎症，延缓骨退化，改善功能，从而提高疗效，改善生命质量。如中国发明专利cn103083621a一种治疗骨关节炎的药物组合物，所述药物组合物由白芍、甘草、木瓜、川芎、姜黄、钙源、维生素c、维生素d3和维生素e制成。该发明能有效改善骨关节炎疼痛、功能障碍等临床症状并且不易对胃肠道产生副作用，但该发明只能延缓或抑制骨关节炎病例状态进一步向前发展，只是缓解表面病痛，容易复发。针对上述技术问题，有必要提供一种不良反应少，从病因着手有效防治骨关节炎，降低复发率的用于防治骨关节炎的药物组合物及其制备方法。技术实现要素：本发明旨在提供一种用于防治骨关节炎的药物组合物及其制备方法，所述药物组合物不良反应少，从病因着手有效防治骨关节炎，降低复发率。为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：一种用于防治骨关节炎的药物组合物，所述药物组合物包括以下制备原料及其重量份数：巴戟天10-30份、骨碎补10-30份、淫羊藿10-30份、当归5-15份、续断8-20份、杜仲8-20份、龟甲5-10份、熟地黄5-10份、制何首乌5-10份和山药5-30份。进一步地，所述药物组合物包括以下制备原料及其重量份数：巴戟天15-30份、骨碎补15-30份、淫羊藿15-30份、当归8-15份、续断10-20份、杜仲10-20份、龟甲6-10份、熟地黄7-10份、制何首乌7-10份和山药8-30份。更进一步地，所述药物组合物包括以下制备原料及其重量份数：巴戟天20份、骨碎补20份、淫羊藿20份、当归8份、续断15份、杜仲15份、龟甲6份、熟地黄8份、制何首乌8份和山药13份。进一步地，所述药物组合物由以下步骤制备得到：s1、将所述原料分别粉碎，过药典5号筛，得原料细粉，按所述重量份数混合均匀，得原料混合细粉；s2、取步骤s1所得原料混合细粉，投入超临界二氧化碳萃取釜内进行萃取，得萃取物和药渣；s3、取步骤s2所得药渣加入质量体积比为1:(5-20)的纯化水煎煮1-3h，煎煮2-3次，合并滤液，浓缩、喷雾干燥得干膏粉；s4、取步骤s1所得萃取物加入质量体积比为1:(2-5)的乙醇溶解后喷入步骤s3所得干膏粉中，混匀，低温烘干，即得。更进一步地，所述药物组合物可以制成胶囊剂、丸剂、合剂、片剂或颗粒剂。进一步地，一种用于防治骨关节炎的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：a)将所述原料分别粉碎，过药典5号筛，得原料细粉，按所述重量份数混合均匀，得原料混合细粉；b)取步骤a所得原料混合细粉，投入超临界二氧化碳萃取釜内进行萃取，得萃取物和药渣；c)取步骤b所得药渣加入质量体积比为1:(5-20)的纯化水煎煮1-3h，煎煮2-3次，合并滤液，浓缩、喷雾干燥得干膏粉；d)取步骤a所得萃取物加入质量体积比为1:(2-5)的乙醇溶解后喷入步骤c所得干膏粉中，混匀，低温烘干，即得。更进一步地，所述的药物组合物在制备治疗骨关节炎药物中的用途。进一步地，所述药物组合物可降低细胞因子il-1β、il-6和tnf-α的含量；所述药物组合物可降低金属蛋白酶mmp-1和mmp-13的含量。更进一步地，所述药物组合物可提高软骨细胞od值和降低软骨细胞凋亡率。进一步地，所述的药物组合物还具有在制备治疗类风湿性关节炎药物中的用途，所述药物组合物可降低类风湿因子rf的含量。中药护骨胶囊是补肾、健脾、活血化瘀的组方，其中组方为：何首乌、淫羊藿为君，熟地黄、龟甲、巴戟天为臣，杜仲、续断、骨碎补、当归、山药为佐，主要用于治疗骨质疏松症。而本发明药物组合物以巴戟天、骨碎补和淫羊藿为君。巴戟天味甘、辛，性微温，归肾、肝经，补肾阳，强筋骨，祛风湿，主治阳痿遗精，少腹冷痛，风湿痹痛，筋骨痿软等症；骨碎补味苦性温，归肝、肾经，疗伤止痛，补肾强骨，主治跌扑闪挫，筋骨折伤，肾虚腰痛，筋骨痿软等症；淫羊藿味辛、甘，性温，归肝、肾经，补肾阳，强筋骨，祛风湿，主治肾阳虚衰，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛等症。三者相互依存，相互为用，共同完成肾主骨的功能，达到治疗主病主证的君药作用。以杜仲、续断和当归为臣。杜仲味甘，性温，归肝、肾经，补肝肾，强筋骨，主治肝肾不足，腰膝酸痛，筋骨无力，头晕目眩等症；续断味苦、辛，性微温，归肝、肾经，补肝肾，强筋骨，续折伤，主治肝肾不足，腰膝酸软，风湿痹痛，跌扑损伤，筋伤骨折等症；当归味甘、辛，性温，归肝、心、脾经，补血活血，调经止痛，主治血虚萎黄，眩晕心悸，虚寒腹痛，风湿痹痛，跌扑损伤，痈疽疮疡等症。三位臣药可以分别辅助三味君药增强补肾益精，养骨壮骨之功效。以熟地黄、制何首乌、龟甲和山药为佐。熟地黄味甘，性微温，归肝、肾经，补血滋阴，益精填髓，主治血虚萎黄，心悸怔忡，肝肾阴虚，腰膝酸软，骨蒸潮热等症；制何首乌味苦、甘、涩，性微温，归肝、心、肾经，补肝肾，益精血，强筋骨，主治血虚萎黄，腰膝酸软，肢体麻木等症；龟甲味咸、甘，性微寒，归肝、肾、心经，滋阴潜阳，益肾强骨，养血补心，主治阴虚潮热，骨蒸盗汗，头晕目眩，虚风内动，筋骨痿软等症；山药味甘，性平，归脾、肺、肾经，补脾养胃，生津益肺，补肾涩精，主治脾虚食少，久泻不止，肺虚喘咳，肾虚遗精，带下，尿频，虚热消渴等症。共同辅佐君药、臣药达到补肾益肝、强筋壮骨的目的。通过调整各味中药的用量和改善提取工艺，用超临界二氧化碳萃取原料药材，将萃取后的药渣煎煮浓缩与萃取物混合均匀制得本发明药物组合物。发明人意外地发现，该药物组合物可有效治愈骨关节炎，并且复发率低。试验证明该药物组合物可显著(p<0.05)降低细胞因子il-1β、il-6和tnf-α还有金属蛋白酶mmp-1和mmp-13的含量，显著(p<0.05)提高软骨细胞od值，显著(p<0.05)降低软骨细胞凋亡率，从而促进软骨细胞增殖。本发明通过对细胞因子、金属蛋白酶和细胞增殖与凋亡的影响，从几个方面的病理出发，从根本治愈骨关节炎，并且经过对病人的随访发现本发明药物组合物治愈率高，复发率低。同时，发明人意外地发现，本发明药物组合物对治疗类风湿性关节炎也有较显著的治疗作用。试验证明，该药物组合物可显著(p<0.05)降低类风湿性关节炎动物模型的类风湿因子的含量，其效果与甲氨蝶呤具有等同效果。本发明具有以下优点：(1)本发明药物组合物配伍科学，无急性毒性与长期毒性，并且试验中无不良反应现象，安全可靠；(2)本发明药物组合物针对骨关节炎的发病机理，可通过影响细胞因子、金属蛋白酶、软骨细胞增殖与凋亡来有效治愈骨关节炎；(3)本发明药物组合物治愈率高，复发率低，帮助患者走出骨关节炎疾病的痛苦。(4)研究还发现本发明药物组合物能显著的降低类风湿因子rf，对类风湿性关节炎也有显著的疗效。具体实施方式以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。实施例1用于防治骨关节炎的药物组合物一种防治骨关节炎的药物组合物，由以下重量份数的原料制备制成：巴戟天20份、骨碎补20份、淫羊藿20份、当归8份、续断15份、杜仲15份、龟甲6份、熟地黄8份、制何首乌8份和山药13份。制备方法：a)将所述原料分别粉碎，过药典5号筛，得原料细粉，按所述重量份数混合均匀，得原料混合细粉；b)取步骤a所得原料混合细粉，投入超临界二氧化碳萃取釜内进行萃取，得萃取物和药渣；c)取步骤b所得药渣加入质量体积比为1:15的纯化水煎煮2h，煎煮2次，合并滤液，浓缩、喷雾干燥得干膏粉；d)取步骤a所得萃取物加入质量体积比为1:3的乙醇溶解后喷入步骤c所得干膏粉中，混匀，低温烘干，即得。实施例2用于防治骨关节炎的药物组合物一种防治骨关节炎的药物组合物，由以下重量份数的原料制备制成：巴戟天25份、骨碎补15份、淫羊藿20份、当归10份、续断10份、杜仲13份、龟甲8份、熟地黄7份、制何首乌6份和山药15份。制备方法参考实施例1。实施例3用于防治骨关节炎的药物组合物一种防治骨关节炎的药物组合物，由以下重量份数的原料制备制成：巴戟天15份、骨碎补25份、淫羊藿18份、当归12份、续断8份、杜仲10份、龟甲8份、熟地黄5份、制何首乌10份和山药20份。制备方法参考实施例1。对比例1护骨胶囊组合物原料及其重量份数同实施例1，制备方法参考中国发明专利cn1448176a。试验例1急性毒性试验1.试验材料：实施例1-3制备的用于防治骨关节炎的药物组合物。2.试验对象：健康sd大鼠，雌雄各半。3.试验方法：将60只大鼠平均分为3组，每组20只，雌雄各半，分别受试实施例1-3制得的用于防治骨关节炎的药物组合物，受试物剂量为20g/kg，一日内连续两次灌胃，停药后继续观察7d，记录动物的中毒表现及死亡情况。4.试验结果：急性毒性试验灌胃给予受试物后，各组大鼠均未见明显中毒症状，7d内动物无死亡。因此认为本发明制得的药物组合物对两种性别大鼠的急性毒性ld均大于20g/kg，安全度高，无急性毒性。试验例2长期毒性试验1.试验材料：实施例1-3制备的用于防治骨关节炎的药物组合物。2.试验对象：健康sd大鼠，雌雄各半。3.试验方法：将60只小鼠平均分为3组，每组20只，雌雄各半，分别受试实施例1-3制得的用于防治骨关节炎的药物组合物，受试物剂量为每日0.05g/kg，连续180d，停药后继续观察30d，记录大鼠的死亡率及行为。4.试验结果：长期毒性试验灌胃给予受试物后，各组大鼠均未见明显中毒症状，30d内动物无死亡。因此认为本发明制得的药物组合物对两种性别大鼠无长期毒性。试验例3对细胞因子的影响1.试验材料：实施例1和对比例1制备的药物组合物。2.试验对象：健康sd大鼠，雌雄各半。3.试验方法：70只健康sd大鼠，适应性喂养1周后，取60只于双膝关节腔注射4％木瓜蛋白酶溶液0.2ml，每隔3天注射一次，连续注射3次即成模型。将模型大鼠分成模型组、阳性对照组(双醋瑞因)、实施例1高、中、低剂量组、对比例1高剂量组，受试物剂量分别为双醋瑞因0.009g/kg、实施例1高剂量3.0g/kg、实施例1中剂量1.5g/kg、实施例1低剂量0.75g/kg、对比例1高剂量3.0g/kg，空白组和模型给予等体积生理盐水，每日1次，4周后采集血液样本，用elisa法检测各组大鼠血清中il-1β、il-6、tnf-α的含量。4.试验结果：表1药物组合物对细胞因子的影响注：与空白组比较，#p<0.05，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。由表1可知，本发明实施例1高、中、低剂量组与模型组相比，显著降低了il-1β、il-6和tnf-α的含量，其中实施例1高剂量组效果与阳性对照组几乎没有差异，具有同等效果。而对比例1高剂量组与模型组无显著性差异，对细胞因子影响不大。试验例4对金属蛋白酶的影响1.试验材料：实施例1和对比例1制备的药物组合物。2.试验对象：健康sd大鼠，雌雄各半。3.试验方法：70只健康sd大鼠，适应性喂养1周后，取60只于双膝关节腔注射4％木瓜蛋白酶溶液0.2ml，每隔3天注射一次，连续注射3次即成模型。将模型大鼠分成模型组、阳性对照组(吲哚美辛)、实施例1高、中、低剂量组、对比例1高剂量组，受试物剂量分别为吲哚美辛0.009g/kg、实施例1高剂量3.0g/kg、实施例1中剂量1.5g/kg、实施例1低剂量0.75g/kg、对比例1高剂量3.0g/kg，空白组和模型给予等体积生理盐水，每日1次，4周后采集血液样本，用elisa法检测各组大鼠血清中mmp-1和mmp-13的含量。4.试验结果表2药物组合物对金属蛋白酶的影响组别mmp-1(ng/l)mmp-13(ng/l)空白组233.62±23.18208.16±21.84模型组421.31±24.39##353.14±19.62##阳性对照组259.67±27.86**221.39±21.19**实施例1高剂量238.73±28.85**209.84±22.13**实施例1中剂量298.94±30.41**241.12±19.57**实施例1低剂量371.87±31.37*315.83±18.95*对比例1高剂量394.81±29.83334.74±22.73注：与空白组比较，#p<0.05，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。由表2可知，本发明实施例1高、中、低剂量组与模型组相比，显著降低了金属蛋白酶的含量，其中实施例1高剂量组效果与阳性对照组几乎没有差异，具有同等效果。而对比例1高剂量组与模型组无显著性差异，对金属蛋白酶影响不大。试验例5对软骨细胞增殖与凋亡的影响1.试验材料：实施例1和对比例1制备的药物组合物。2.试验对象：新西兰兔1个月龄大。3.试验方法：(1)兔血清制备：新西兰兔12只，雌雄各半，分为空白对照组、实施例1组和对比例1组，分别受试实施例1和对比例1制备的药物组合物，受试物剂量为1.56g/kg，空白组受试等体积的生理盐水，连续灌胃2次，中间间隔2h，分别在末次灌胃后主动脉采血，取血清备用；(2)兔膝骨关节软骨细胞的分离与培养：将12只新西兰兔处死后，无菌条件下截取双侧胫骨近端、股骨远端关节软骨，经冲洗、消化、切分、孵育后加入小牛血清培养，原代细胞长满后传代培养；(3)含药血清的加入：传代细胞接种在24孔板中，接种密度2×104个/cm2，分空白对照组、实施例1高、中、低血清组(含药血清分别为5％、10％和20％)和对比例高血清组(含药血清为20％)。每组选6个培养孔，分别用相应的血清培养；(4)检测方法：按mtt比色法在全自动酶标仪上以492nm为检测波长检测光密度(od)值，观测软骨细胞增殖情况；按tunel法检测软骨细胞的凋亡率。4.试验结果：表3药物组合物对家兔软骨细胞增殖、凋亡的影响注：与空白对照组比较，#p<0.05，##p<0.01。由表3可知，与空白对照组相比，实施例1高、中、低剂量组都能显著增加od值，促进软骨细胞的增殖，同时显著降低凋亡率。而对比例1高剂量组的od值与凋亡率与空白对照组没有显著的差异。试验例6对类风湿因子的影响1.试验材料：实施例1和对比例1制备的药物组合物。2.试验对象：健康sd大鼠，雌雄各半。3.试验方法：70只健康sd大鼠，适应性喂养1周后，取60只用弗氏完全佐剂参照文献(周金黄，《药理学进展》)造成类似于人的类风湿性关节炎的大鼠模型。将模型大鼠分成模型组、阳性对照组(甲氨蝶呤)、实施例1高、中、低剂量组、对比例1高剂量组，受试物剂量分别为甲氨蝶呤2mg/kg、实施例1高剂量3.0g/kg、实施例1中剂量1.5g/kg、实施例1低剂量0.75g/kg、对比例1高剂量3.0g/kg，空白组和模型给予等体积生理盐水，每日1次，4周后采集血液样本，用elisa法检测各组大鼠血清中类风湿因子rf的含量。4.试验结果表4药物组合物对类风湿因子的影响组别类风湿因子rf(pg/ml)空白组32.51±2.26模型组86.31±3.51##阳性对照组46.87±4.27**实施例1高剂量40.16±3.28**实施例1中剂量56.37±4.92**实施例1低剂量76.28±5.78*对比例1高剂量80.05±6.83注：与空白组比较，#p<0.05，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。由表4可知，本发明实施例1高、中、低剂量组与模型组相比，显著降低了类风湿因子的含量，其中实施例1高剂量组效果与阳性对照组几乎没有差异，具有同等效果。而对比例1高剂量组与模型组无显著性差异，对类风湿因子影响不大。试验例7临床试验本发明的实施例已经在200人的规模性测试中获得了验证，在用药后，具有祛风止痛、舒筋活络，消肿止痛、强壮筋骨之功效，对骨关节炎有很好的治疗效果，治愈率在88％以上，显效率在96％以上。典型病例1：赵某，女，47岁，清洁工，1年前膝骨关节疼痛、活动不利，初步诊断为膝骨关节炎。服用了本发明的药物组合物，3个月后，症状全部消失，随访至今未再复发。典型病例2：周某，男，32岁，体育事业从事者，运动受伤致膝关节疼痛难忍，长期疼痛6个月，加重，医院治疗后又复发。服用了本发明的药物组合物，3个月后，症状全部消失，随访至今未再复发。典型病例3：吴某，男，51岁，搬运工，膝骨、肩骨关节疼痛不适，行动不便，久治不愈，痛苦不堪。服用了本发明的药物组合物，2个月后，症状全部消失，随访至今未再复发。上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属
技术领域：
中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。当前第1页12