本发明属于美容填充材料的技术领域，提供了一种高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料及制备方法。
背景技术：
注射美容是将填充物质注入人体局部，以达到修正皮肤缺陷的美容方法。注射美容是非手术整形美容的一种，利用注射的方法将生物材料或人工合成生物兼容性材料注射入真皮层或皮下通过不同的作用机理达到减少皮肤皱褶或塑型的一大类整形手术的方法。具有安全、无痛、高效的特点。特别是对于修复皱纹、改变唇型、修复疤痕具有显著的效果。
常见的注射美容有两类：一类是注射填充剂，如玻尿酸、自体脂肪、硅胶，它可以缓解已经发生的自然衰老；另一类是注射肉毒素，阻断神经和肌肉的信息传导，舒展过度收缩的肌肉，使皱纹消失。
注射美容的关键是注射材料，目前已有胶原蛋白、透明质酸等用于注射材料。但由于难以形成支撑，在几个月内，被机体吸收后，其体型修复作用消失。透明质酸钠是人和动物皮肤、玻璃体、关节润滑液和软骨组织的重要成分，它由(1-β-4)d-葡糖醛酸和(1-β-3)n-乙酰基-d-氨基葡糖双糖单位重复连接而成，广泛使用在修复手术、眼部手术或作为美容产品填充皱纹。透明质酸具有良好的理化性能及生物相容性。然而，它在体内受到透明质酸酶的酶解作用而迅速降解，存留时间较短，需要重复注射才能达到疗效。目前，为了解决透明质酸在体内的降解问题，通常采用交联改性透明质酸，通过交联修饰使透明质酸存留时间变长。
目前国内外在美容填充材料，尤其是透明质酸填充材料方面已取得了一定成效。其中刘博文等人发明了一种可注射的交联透明质酸凝胶及其制备方法（中国发明专利申请号201410074850.6），由透明质酸凝胶颗粒与磷酸氯化钠生理缓冲溶液配制而成；透明质酸凝胶颗粒系以透明质酸干粉为原料，通过交联处理、乳化交联制粒、纯化干燥溶胀，灌装灭菌之工艺制备而成。该发明提供的交联透明质酸凝胶粒，粒径均一，交联剂残留小于0.2ppm，注射推挤力适中，体内降解时间达8~12个月以上；该植入剂具有极好的美容修复效果，适用于注射至皮下真皮层深层至皮下浅层，修复中度至重度皱纹或褶皱，可满足皮肤衰老造成的皱纹或褶皱的修复需求。另外，魏长征等人发明了一种新型皮肤填充剂的制备方法（中国发明专利申请号201410715492.2），该方法采用低毒的氨基酸及其衍生物作为交联剂制备交联透明质酸钠凝胶；充分发挥了dmtmm法固有的反应活性高、条件温和以及处理简便等优势，选择人体必需氨基酸中的碱性氨基酸-赖氨酸和精氨酸或衍生物作为交联剂与透明质酸钠分子的羧基端发生交联反应，继而部分封闭了体内透明质酸酶的识别位点，延缓了酶的识别和降解，最终提高了体内的残留时间，为开发安全、长效的透明质酸钠类注射美容填充剂提供了一种新的技术，具有较好的市场开发前景。
可见，现有技术中的注射美容所用的填充材料易降解失效，而传统的添加交联剂的技术方法使透明质酸等填充材料的性质发生改变，并且存在很高的生物毒性或潜在的致癌性等缺点。
技术实现要素：
针对这种情况，本发明提出一种高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料及制备方法，有效解决了透明质酸易降解的问题，修复美容效果持久，且未使用交联剂，无生物毒性缺陷。
为实现上述目的，本发明涉及的具体技术方案如下：
一种高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料的制备方法，先分别制备低分子量透明质酸杂化颗粒以及单硬脂酸甘油酯均匀包覆的高分子量透明质酸，然后加入黄原胶分散胶液中进一步杂化，制得高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料，制备的具体步骤如下：
（1）将硅酸钠加入低分子量透明质酸中，调节ph值至5~6，然后加入乙醇，并加热至70~80℃，保温4~6h，得到湿凝胶；
（2）将步骤（1）制得的湿凝胶与正硅酸乙酯混合，陈化36~48h，使二氧化硅充分沉淀，然后对得到的凝胶进行低温干燥，使低分子量透明质酸与二氧化硅凝胶颗粒杂化，制得低分子量透明质酸杂化颗粒；
（3）将高分子量透明质酸冷冻干燥，然后通过与单硬脂酸甘油酯进行低温气流研磨，使单硬脂酸甘油酯均匀包覆高分子量透明质酸；
（4）将步骤（2）制得的低分子量透明质酸杂化颗粒及步骤（3）制得的单硬脂酸甘油酯均匀包覆的高分子量透明质酸加入黄原胶分散胶液中，进一步杂化8~12h，制得具有良好生物相容性、无毒性的高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料。
优选的，步骤（1）所述低分子量透明质酸的分子量为10万~40万道尔。
优选的，所述制备低分子量透明质酸杂化颗粒的过程中涉及的各原料的重量份为，硅酸钠24~28重量份、低分子量透明质酸28~41重量份、乙醇20~26重量份、正硅酸乙酯15~18重量份。
优选的，步骤（3）所述高分子量透明质酸的分子量为200万~400万道尔。
优选的，步骤（3）所述低温气流研磨的气源压力为0.7~0.9mpa，温度为-40~-20℃，采用对喷式气流磨。
优选的，步骤（3）中各原料的重量份为，高分子量透明质酸75~88重量份、单硬脂酸甘油酯12~25重量份。
优选的，步骤（4）所述黄原胶分散胶液中，黄原胶0.5~2重量份、乙醇30~50重量份、水48~69.5重量份。
优选的，步骤（4）中各原料的重量份为，低分子量透明质酸杂化颗粒35~45重量份、单硬脂酸甘油酯均匀包覆的高分子量透明质酸15~25重量份、黄原胶分散胶液30~50重量份。
由于透明质酸在体内受到透明质酸酶的酶解作用而迅速降解，存留时间较短，通常采用交联剂对透明质酸进行交联改性修饰，但交联剂的使用，一方面会改变透明质酸的性质，另一方面具有很高的生物毒性或潜在的致癌性。透明质酸是由单位d-葡萄糖醛酸及n-乙酰葡糖胺组成的高级多糖，d-葡萄糖醛酸及n-乙酰葡糖胺之间由β-1,3-配糖键相连，双糖单位之间由β-1,4-配糖键相连，双糖单位可达25000之多，透明质酸的分子量从5千到2千万道尔。与其他聚合物一样，不同分子量的透明质酸具有不同的性能。在此基础上，本发明创新性地采用高分子量透明质酸与低分子量透明质酸杂化的方法，利用高分子量透明质酸的长链对低分子量透明质酸杂化的短链进行保护，防止低分子量透明质酸被酶快速降解，从而具有良好的缓释作用，大幅降低了降解性，延长了修复效果。
本发明还提供一种上述制备方法制备得到的高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料。
该材料通过先分别制备低分子量透明质酸杂化颗粒以及单硬脂酸甘油酯均匀包覆的高分子量透明质酸，然后加入黄原胶分散胶液中进一步杂化，制得高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料。与传统方法相比，本发明制备的透明质酸美容填充材料，通过将高低分子量的透明质酸链的杂化，具有良好的缓释作用，大幅降低了降解性，延长了修复效果，并且有效克服了使用交联剂以产生生物毒性和致癌的缺陷，为透明质酸在注射美容整形的应用提供了一个安全可靠地的技术途径。
本发明提供了一种高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料及制备方法，与现有技术相比，其突出的特点和优异的效果在于：
1.本发明制备的透明质酸美容填充材料，可有效用于注射美容整形。
2.本发明的制备方法，通过分别将高低分子量的透明质酸预先固定，进一步将高低分子量透明质酸杂化，其具有良好的缓释作用，大幅降低了降解性，延长了修复效果；高低分子量的透明质酸链的杂化，使长链保护短链，有效防止低分子量透明质酸被酶快速降解。
3.本发明的制备方法，使得透明质酸在机体内的驻留时间延长，有效克服了使用交联剂以产生生物毒性的缺陷，为透明质酸在注射美容整形的应用提供了一个安全可靠地的技术途径。
具体实施方式
以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述方法思想的情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包含在本发明的范围内。
实施例1
将27kg硅酸钠加入33kg的分子量为30万道尔的低分子量透明质酸中，调节ph值至5，然后加入24kg乙醇，并加热至76℃，保温5h，得到湿凝胶，然后与16kg正硅酸乙酯混合，陈化42h，然后对得到的凝胶进行低温干燥，制得低分子量透明质酸杂化颗粒；将82kg的分子量为300万道尔高分子量透明质酸冷冻干燥，然后在压力为0.8mpa，温度为-30℃，采用对喷式气流磨与18kg单硬脂酸甘油酯进行研磨，使单硬脂酸甘油酯均匀包覆高分子量透明质酸；配置黄原胶分散胶液，其中黄原胶1kg、乙醇40kg、水59kg；然后将42kg低分子量透明质酸杂化颗粒及19kg单硬脂酸甘油酯均匀包覆的高分子量透明质酸加入39kg黄原胶分散胶液中，进一步杂化10h，制得具有良好生物相容性、无毒性的高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料。
测试方法：
采用加速酶降解低分子透明质酸进行测试。取10g本发明制得的透明质酸美容填充材料加入1l盐酸水溶液中，根据低分子透明质酸含量可知其初始浓度，ph值为5，加入透明质酸酶，酶浓度为30000u/l，加热到50℃，在100r/min的转速下磁力搅拌进行降解反应，分别在2h、5h、10h、24h及48h时采用分光光度法（使用阿里新蓝染料）测定低分子透明质酸的浓度，表示本发明填充材料中低分子透明质酸的酶解程度。
所得数据如表1所示。
实施例2
将24kg硅酸钠加入41kg的分子量为10万道尔的低分子量透明质酸中，调节ph值至6，然后加入20kg乙醇，并加热至70℃，保温6h，得到湿凝胶，然后与15kg正硅酸乙酯混合，陈化36h，然后对得到的凝胶进行低温干燥，制得低分子量透明质酸杂化颗粒；将75kg的分子量为200万高分子量透明质酸冷冻干燥，然后在压力为0.7mpa，温度为-40℃，采用对喷式气流磨与25kg单硬脂酸甘油酯进行研磨，使单硬脂酸甘油酯均匀包覆高分子量透明质酸；配置黄原胶分散胶液，其中黄原胶0.5kg、乙醇30kg、水69.5kg；然后将35kg低分子量透明质酸杂化颗粒及15kg单硬脂酸甘油酯均匀包覆的高分子量透明质酸加入50kg黄原胶分散胶液中，进一步杂化8h，制得具有良好生物相容性、无毒性的高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料。
测试方法与实施例1一致，所得数据如表1所示。
实施例3
将28kg硅酸钠加入28kg的分子量为40万道尔的低分子量透明质酸中，调节ph值至5，然后加入26kg乙醇，并加热至80℃，保温4h，得到湿凝胶，然后与18kg正硅酸乙酯混合，陈化48h，然后对得到的凝胶进行低温干燥，制得低分子量透明质酸杂化颗粒；将88kg的分子量为400万道尔高分子量透明质酸冷冻干燥，然后在压力为0.9mpa，温度为-20℃，采用对喷式气流磨与12kg单硬脂酸甘油酯进行研磨，使单硬脂酸甘油酯均匀包覆高分子量透明质酸；配置黄原胶分散胶液，其中黄原胶2kg、乙醇50kg、水48kg；然后将45kg低分子量透明质酸杂化颗粒及25kg单硬脂酸甘油酯均匀包覆的高分子量透明质酸加入30kg黄原胶分散胶液中，进一步杂化12h，制得具有良好生物相容性、无毒性的高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料。
测试方法与实施例1一致，所得数据如表1所示。
实施例4
将25kg硅酸钠加入37kg的分子量为20万道尔的低分子量透明质酸中，调节ph值至6，然后加入22kg乙醇，并加热至72℃，保温6h，得到湿凝胶，然后与16kg正硅酸乙酯混合，陈化38h，然后对得到的凝胶进行低温干燥，制得低分子量透明质酸杂化颗粒；将78kg的分子量为250万道尔高分子量透明质酸冷冻干燥，然后在压力为0.7mpa，温度为-35℃，采用对喷式气流磨与22kg单硬脂酸甘油酯进行研磨，使单硬脂酸甘油酯均匀包覆高分子量透明质酸；配置黄原胶分散胶液，其中黄原胶1kg、乙醇35kg、水64kg；然后将38kg低分子量透明质酸杂化颗粒及18kg单硬脂酸甘油酯均匀包覆的高分子量透明质酸加入44kg黄原胶分散胶液中，进一步杂化9h，制得具有良好生物相容性、无毒性的高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料。
测试方法与实施例1一致，所得数据如表1所示。
实施例5
将27kg硅酸钠加入33kg的分子量为35万道尔的低分子量透明质酸中，调节ph值至5，然后加入25kg乙醇，并加热至78℃，保温4h，得到湿凝胶，然后与17kg正硅酸乙酯混合，陈化36~48h，然后对得到的凝胶进行低温干燥，制得低分子量透明质酸杂化颗粒；将85kg的分子量为350万道尔高分子量透明质酸冷冻干燥，然后在压力为0.9mpa，温度为-25℃，采用对喷式气流磨与15kg单硬脂酸甘油酯进行研磨，使单硬脂酸甘油酯均匀包覆高分子量透明质酸；配置黄原胶分散胶液，其中黄原胶1.8kg、乙醇43kg、水55.2kg；然后将43kg低分子量透明质酸杂化颗粒及22kg单硬脂酸甘油酯均匀包覆的高分子量透明质酸加入35kg黄原胶分散胶液中，进一步杂化11h，制得具有良好生物相容性、无毒性的高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料。
测试方法与实施例1一致，所得数据如表1所示。
实施例6
将26kg硅酸钠加入35kg的分子量为30万道尔的低分子量透明质酸中，调节ph值至6，然后加入23kg乙醇，并加热至75℃，保温5h，得到湿凝胶，然后与16kg正硅酸乙酯混合，陈化43h，然后对得到的凝胶进行低温干燥，制得低分子量透明质酸杂化颗粒；将80kg的分子量为300万道尔高分子量透明质酸冷冻干燥，然后在压力为0.8mpa，温度为-30℃，采用对喷式气流磨与20kg单硬脂酸甘油酯进行研磨，使单硬脂酸甘油酯均匀包覆高分子量透明质酸；配置黄原胶分散胶液，其中黄原胶1kg、乙醇40kg、水59kg；然后将40kg低分子量透明质酸杂化颗粒及20kg单硬脂酸甘油酯均匀包覆的高分子量透明质酸加入40kg黄原胶分散胶液中，进一步杂化10h，制得具有良好生物相容性、无毒性的高低分子量杂化的透明质酸美容填充材料。
测试方法与实施例1一致，所得数据如表1所示。
对比例1
透明质酸美容填充材料制备过程中，未添加高分子量透明质酸，而是使用交联剂，其他制备条件与实施例6一致。
测试方法与实施例1一致，所得数据如表1所示。
表1：