四环素的有效成分在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法

本发明涉及药学领域，尤其是四环素有效成分在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

四环素是抗菌素的一种,可抑制多种球菌、杆菌和某些病毒。可用于敏感微生物所致的下列疾病：(1)立克次体病，包括流行性斑疹伤寒、地方性斑疹伤寒、洛矶山热、恙虫病和q热。(2)支原体属感染。(3)衣原体属感染，包括鹦鹉热、性病、淋巴肉牙肿、非特异性尿道炎、输卵管炎、宫颈炎及沙眼。(4)回归热。(5)布鲁菌病。(6)霍乱。(7)兔热病。(8)鼠疫。(9)软下疳。治疗布鲁菌病和鼠疫时需与氨基糖苷类联合应用。

批准文号：国药准字h440220690

生产产家：广东华南药业集团有限公司。

技术实现要素：

本发明的目的是：发现了四环素的有效成分在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明是这样实现的：四环素的有效成分在制备抗肿瘤药物中的应用。

所述的有效成分包括

将所述的有效成分制备成片剂、注射剂、胶囊剂、口服液或滴丸剂。

由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，发明人发现已知的中成药四环素对多种肿瘤细胞具有良好的抑制作用，为老药的新用途提供理论基础，为开发四环素的抗癌作用提供了新思路。而且四环素是已上市的成品药，应用于人体的概率更大，具有很好的临床开发前景。本发明材料来源广泛，成本低廉，使用效果理想。

附图说明

附图1为20µg/ml的四环素对pc3、mda、k562和hel细胞生长的抑制作用；

附图2为不同浓度梯度的四环素（80µg/ml、40µg/ml、20µg/ml、10µg/ml、5µg/ml）对pc3和hel细胞生长的抑制作用；

附图7为附图2中不同浓度梯度的四环素盐（80µg/ml、40µg/ml、20µg/ml、10µg/ml、5µg/ml）对pc3和hel细胞生长的抑制率。

图3为hel对照细胞，图4为hel加药48h细胞；

图5为pc3对照细胞，图6为pc3加药48h细胞。

具体实施方式

本发明的实施例：

四环素mtt法抗癌活性检测

细胞及其它试剂

前列腺癌细胞株pc3、白血病细胞株k562、人乳腺癌细胞mda、人红白细胞白血病细胞hel均为贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室保存。dmem培养基及胰酶购于hyclone公司，胎牛血清（fbs）购于浙江天杭生物科技有限公司，四甲基偶氮哩盐（mtt）购于solarbiolifescience公司，二甲基亚飒（dmso）及青链霉素混合液购于北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司。

体外抗肿瘤活性检测

mtt溶液配制：称取mtt粉末0.2g，加入灭菌的pbs40ml,60℃溶解，0.22µm过滤膜过滤除菌，4℃保存备用。

从液氮罐取出前列腺癌细胞株pc3、白血病细胞株k562、人乳腺癌细胞mda、人红白细胞白血病细胞株hel复苏培养。

分别取对数生长期的细胞，将细胞浓度调整成5000个/孔，接种于96孔板中（190种升/孔），在37℃，5%二氧化碳的培养箱中培养24个小时。每种细胞设置4个复孔，并设同等数量的对照孔。首先检测20µg/ml的四环素对四种癌细胞生长的抑制作用。每孔加药10µl,37℃、5%co2培养箱中培养48h，加mtt溶液10µl（避光操作），置入co2培养箱中继续培养4h，离心（2500rpm，15min），弃去上清液，每孔加150µldmso，放入摇床摇晃（10min，130rpm，25℃），用酶标仪波长490nm下测od值，根基以下公式计算药物的抑制率。

研究结果表明，四环素对hel、pc3细胞的生长均有很好的抑制作用，20µg/ml时四环素的抑制率分别为28.85%和53.86%。对k562、mda细胞的生长的抑制作用较弱，其抑制率为（图1）。

进一步通过浓度梯度的形式研究四环素对各细胞生长的抑制作用，根据初筛的结果检测不同浓度的四环素与盐酸小檗（80µg/ml、40µg/ml、20µg/ml、10µg/ml、5µg/ml）对hel、pc3两种细胞生长的抑制作用，每个细胞每组4个平行。

图2可看出，四环素对hel、pc3两种细胞的生长均有很好的抑制作用，且随药物浓度的增加抑制作用增强，80µg/ml时四环素抑制率分别为72.09%、80.93%，由以上数据可看出，四环素可作为抗前列腺癌及白血病的潜在药物。

技术特征：

1.中成药四环素有效成分在制备抗肿瘤药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的四环素的有效成分在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：四环素从放线菌金色链丛菌（streptomycesaureofa-ciens）的培养液等分离出来的抗菌物质，为广谱抑菌剂，高浓度时具杀菌作用，对革兰氏阳性菌、阴性菌、立克次体、滤过性病毒、螺旋体属乃至原虫类都有很好的抑制作用。

3.根据权利要求1和2所述的四环素的有效成分在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：将所述的有效成分制备成片剂、颗粒剂、注射剂、胶囊剂、粉针剂、口服液、气雾剂或滴丸剂。

技术总结
本发明公开了一种中成药四环素的有效成分在制备抗肿瘤药物中的应用。发明人发现已知的中成药四环素对多种肿瘤细胞具有良好的抑制作用，为老药的新用途提供理论基础，为开发四环素的抗癌作用提供了新思路。而且四环素是已上市的成品药，已经有过一系列的临床安全评估，具有很好的临床应用前景。本发明材料来源广泛，成本低廉，使用效果理想。

技术研发人员：骆衡;王庆松;张芳
受保护的技术使用者：骆衡;王庆松;张芳
技术研发日：2018.05.31
技术公布日：2019.12.10