本发明涉及中药有效部位提取，具体涉及一种可用于抑制h1n1流感神经氨酸酶进而抗流感的款冬花有效部位及其制备方法和用途。
背景技术：
流感是发病率最高、传播最快、致病地域最广的传染性疾病之一，严重危害着人类的健康和生命。近年来，h1n1高致病性禽流感和h1n1流感在世界范围内的蔓延更加引起了公众对流感的关注，以神经氨酸酶为靶点，快速筛选和研究神经氨酸酶抑制剂成为研究的热点领域。
款冬花中医临床常用中药，在我国应用历史悠久，始载于《神农本草经》，具润肺下气，止咳化痰的功效。常用于新久咳嗽，气喘，劳嗽咳血。款冬花中含有倍半萜，色原酮，苯丙素类、生物碱等多种成分，具有广泛的药理活性，如抗炎、抗过敏、神经保护、抗癌等。目前关于款冬有效部位对h1n1神经氨酸酶活性的抑制作用未见有相关报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种抗流感的款冬花有效部位及其制备方法和用途。
本发明提供的一种用于抑制h1n1神经氨酸酶的款冬花有效部位，通过包括如下步骤的方法制备得到：
取干燥款冬花药材，按每千克药材加入5-10升20-90％乙醇回流提取1-3次，每次0.5-3小时，滤过，合并提取液，回收乙醇至无醇味，得醇提取物；醇提取物加适量水分散，依次加入体积倍数为1-3倍的石油醚，乙酸乙酯、正丁醇萃取1-3次，合并正丁醇层减压回收溶剂，干燥，得正丁醇提取物。
制备过程优选条件为：提取溶剂为70％乙醇，回流提取时间为2小时，提取次数为3次。
药效学实验结果显示，本发明所提供的款冬花有效部位对h1n1神经氨酸酶有明显的抑制作用，可用于制备预防和治疗h1n1型流感病毒的药物。
具体实施方式
实施例1款冬花不同部位对h1n1神经氨酸酶的抑制作用
1药物和试剂
扎那米韦，流感病毒na，荧光底物，实施例1制备得到的款冬花醇提物a及不同部位b-f。
2实验方法
在酶反应体系中，40μg/ml浓度待测药物a、b、c、d、e、f与流感病毒na悬浮于反应缓冲液中(ph6.5)，加入荧光底物启动反应体系，37℃孵育60分钟后,加反应终止液终止反应。在激发波长360nm和发射波长为450nm的参数条件下，测定荧光强度值。反应体系的荧光强度可以反映酶的活性。根据荧光强度的减少量可以计算化合物对na活性的抑制率。
3款冬花不同部位的制备
取款冬花干燥药材1kg，分别用10升、8升、8升70％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，合并提取液，回收乙醇至无醇味，得乙醇提取物(a)。乙醇提取物加适量水分散，依次加入体积倍数为1倍的石油醚，乙酸乙酯、正丁醇萃取1次，石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层，分别减压浓缩得到石油醚部位(b)、乙酸乙酯部位(c)、正丁醇部位(d)；正丁醇萃取后剩余的水层加无水乙醇至浓度为70％，过滤得70％醇沉部位(e)以及70％醇溶部位(f)。
4实验结果
通过实验结果显示(表1)，款冬花正丁醇部位(d)对h1n1神经氨酸酶具有较强的抑制作用，ic50值为27.64±0.184μg/ml，说明正丁醇部位d为款冬花抑制h1n1神经氨酸酶的有效部位。
表1h1n1神经氨酸酶测试结果
实施例2款冬花抗流感有效部位的制备
取款冬花干燥药材1kg，分别用10升、8升、8升70％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，合并提取液，回收乙醇至无醇味，得乙醇提取物。乙醇提取物加适量水分散，依次加入体积倍数为2倍的石油醚，乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，合并正丁醇层减压回收溶剂，干燥，得正丁醇提取物17.7g。
实施例3款冬花抗流感有效部位的制备
取款冬花干燥药材1kg，分别用8升、6升、6升50％乙醇回流提取1次，每次2小时，滤过，合并提取液，回收乙醇至无醇味，得乙醇提取物。乙醇提取物加适量水分散，依次加入体积倍数为1倍的石油醚，乙酸乙酯、正丁醇分别萃取2次，合并正丁醇层减压回收溶剂，干燥，得正丁醇提取物16.9g。
实施例4款冬花抗流感有效部位的制备
取款冬花干燥药材1kg，分别用8升、8升、8升30％乙醇回流提取2次，每次1小时，滤过，合并提取液，回收乙醇至无醇味，得乙醇提取物。乙醇提取物加适量水分散，依次加入体积倍数为1倍的石油醚，乙酸乙酯、正丁醇分别萃取1次，合并正丁醇层减压回收溶剂，干燥，得正丁醇提取物15.9g。