本发明涉及生物医学技术领域，具体为一种包含人关节液外泌体的制剂及其使用方法。
背景技术
外泌体是指包含了复杂rna和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡，1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年johnstone将其命名为"exosome"；多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中；所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，人关节液外泌体中存在外泌体，现有技术中对于人关节病的治疗常采用药物或者手术治疗，治疗效果一般，对病人身体产生的创伤较大，而且目前对关节病的治疗方法，大多数只能起到缓解作用，并不能从根本上根治疾病，为此，我们提出一种包含人关节液外泌体的制剂及其使用方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种包含人关节液外泌体的制剂及其使用方法，以解决背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种包含人关节液外泌体的制剂，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液外泌体20-30％、聚乙二醇溶液15-18％、人血白蛋白7-12％、蛋氨酸6.5-7.5％、丙烯碳酸酯5.3-6.7％、维生素c2.1-3.8％、氨甲环酸1.35-2.28％、溶媒4.87-5.86％、磷酯酰肌氨酸复合物5.66-7.32％、去离子水为余量。
优选的，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液外泌体20％、聚乙二醇溶液15％、人血白蛋白7％、蛋氨酸6.5％、丙烯碳酸酯5.3％、维生素c2.1％、氨甲环酸1.35％、溶媒4.87％、磷酯酰肌氨酸复合物5.66％、去离子水为余量。
优选的，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液外泌体23％、聚乙二醇溶液16％、人血白蛋白8％、蛋氨酸6.8％、丙烯碳酸酯5.7％、维生素c2.6％、氨甲环酸1.68％、溶媒5.14％、磷酯酰肌氨酸复合物5.88％、去离子水为余量。
优选的，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液外泌体27％、聚乙二醇溶液17％、人血白蛋白10％、蛋氨酸7.2％、丙烯碳酸酯6.2％、维生素c3.5％、氨甲环酸2.12％、溶媒5.48％、磷酯酰肌氨酸复合物6.92％、去离子水为余量。
优选的，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液外泌体30％、聚乙二醇溶液18％、人血白蛋白12％、蛋氨酸7.5％、丙烯碳酸酯6.7％、维生素c3.8％、氨甲环酸2.28％、溶媒5.86％、磷酯酰肌氨酸复合物7.32％、去离子水为余量。
优选的，所述溶媒为复方电解质注射液、葡萄糖注射液或生理盐水的任意一种；所述磷酯酰肌氨酸复合物由磷酯酰肌氨酸45％和55％磺基丁二酸钠二辛酯组成。
一种包含人关节液外泌体的制剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：取人关节液置于无菌离心管中，利用超速离心法分离关节液中的外泌体；离心步骤如下：300g，4℃，15分钟；3000g，4℃，15分钟；20000g，4℃，70分钟；0.22微米的筛子过滤；120000g，4℃，120分钟，得到人关节液外泌体；
步骤二：制备制剂：取人血白蛋白、蛋氨酸、维生素和氨甲环酸置于高速搅拌器中，以600-800转/min的速度搅拌15-25分钟；然后向搅拌器中加入丙烯碳酸酯、磷酯酰肌氨酸复合物、溶媒和去离子水，提高搅拌速度为1000-1200转/min，搅拌时温度保持在25-35℃，搅拌结束后离心过滤10-20分钟，取过滤液与人关节液外泌体混合得到制剂；
步骤三：除菌：取步骤二中得到的制剂送入除菌级亲水性过滤器中过滤除菌；亲水性过滤器的孔径为0.1～1μm；
步骤四：复苏冻存：取过滤除菌后的制剂加入恒温水浴进行复苏，加入制剂保存管中，然后进行预冷20-30分钟，最后加入液氮罐低温冻存；
步骤五：注射使用：取出制剂保存管，然后使用注射器进行消毒，注射器吸入制剂保存管中的制剂，注射到患者关节处即可。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的配方设计更加合理，通过分离提取得到人关节液外泌体，通过向人关节液外泌体添加人血白蛋白、维生素c、蛋氨酸、氨甲环酸、丙烯碳酸酯等多种关节液所需物质，对于治疗关节病有良好的疗效，相比药物或手术治疗，该外泌体制剂的使用更加的安全，减少了对病人身体造成的创伤；而且该外泌体制剂在制得后可以长期保存，外泌体制剂在使用时也非常的方便，安全性高，治疗效果好，利于推广应用。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：
一种包含人关节液外泌体的制剂，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液外泌体20％、聚乙二醇溶液15％、人血白蛋白7％、蛋氨酸6.5％、丙烯碳酸酯5.3％、维生素c2.1％、氨甲环酸1.35％、溶媒4.87％、磷酯酰肌氨酸复合物5.66％、去离子水为余量。
进一步的，溶媒为复方电解质注射液；磷酯酰肌氨酸复合物由磷酯酰肌氨酸45％和55％磺基丁二酸钠二辛酯组成。
一种包含人关节液外泌体的制剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：人关节液外泌体的分离提取：取人关节液置于无菌离心管中，利用超速离心法分离关节液中的外泌体；离心步骤如下：300g，4℃，15分钟；3000g，4℃，15分钟；20000g，4℃，70分钟；0.22微米的筛子过滤；120000g，4℃，120分钟，得到人关节液外泌体；
步骤二：制备制剂：取人血白蛋白、蛋氨酸、维生素和氨甲环酸置于高速搅拌器中，以600转/min的速度搅拌15分钟；然后向搅拌器中加入丙烯碳酸酯、磷酯酰肌氨酸复合物、溶媒和去离子水，提高搅拌速度为1000转/min，搅拌时温度保持在25℃，搅拌结束后离心过滤10分钟，取过滤液与人关节液外泌体混合得到制剂；
步骤三：除菌：取步骤二中得到的制剂送入除菌级亲水性过滤器中过滤除菌；亲水性过滤器的孔径为0.1μm；
步骤四：复苏冻存：取过滤除菌后的制剂加入恒温水浴进行复苏，加入制剂保存管中，然后进行预冷20分钟，最后加入液氮罐低温冻存；
步骤五：注射使用：取出制剂保存管，然后使用注射器进行消毒，注射器吸入制剂保存管中的制剂，注射到患者关节处即可。
实施例二：
一种包含人关节液外泌体的制剂，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液外泌体23％、聚乙二醇溶液16％、人血白蛋白8％、蛋氨酸6.8％、丙烯碳酸酯5.7％、维生素c2.6％、氨甲环酸1.68％、溶媒5.14％、磷酯酰肌氨酸复合物5.88％、去离子水为余量。
进一步的，溶媒为葡萄糖注射液；磷酯酰肌氨酸复合物由磷酯酰肌氨酸45％和55％磺基丁二酸钠二辛酯组成。
一种包含人关节液外泌体的制剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：人关节液外泌体的分离提取：取人关节液置于无菌离心管中，利用超速离心法分离关节液中的外泌体；离心步骤如下：300g，4℃，15分钟；3000g，4℃，15分钟；20000g，4℃，70分钟；0.22微米的筛子过滤；120000g，4℃，120分钟，得到人关节液外泌体；
步骤二：制备制剂：取人血白蛋白、蛋氨酸、维生素和氨甲环酸置于高速搅拌器中，以650转/min的速度搅拌18分钟；然后向搅拌器中加入丙烯碳酸酯、磷酯酰肌氨酸复合物、溶媒和去离子水，提高搅拌速度为1050转/min，搅拌时温度保持在28℃，搅拌结束后离心过滤13分钟，取过滤液与人关节液外泌体混合得到制剂；
步骤三：除菌：取步骤二中得到的制剂送入除菌级亲水性过滤器中过滤除菌；亲水性过滤器的孔径为0.4μm；
步骤四：复苏冻存：取过滤除菌后的制剂加入恒温水浴进行复苏，加入制剂保存管中，然后进行预冷24分钟，最后加入液氮罐低温冻存；
步骤五：注射使用：取出制剂保存管，然后使用注射器进行消毒，注射器吸入制剂保存管中的制剂，注射到患者关节处即可。
实施例三：
一种包含人关节液外泌体的制剂，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液外泌体27％、聚乙二醇溶液17％、人血白蛋白10％、蛋氨酸7.2％、丙烯碳酸酯6.2％、维生素c3.5％、氨甲环酸2.12％、溶媒5.48％、磷酯酰肌氨酸复合物6.92％、去离子水为余量。
进一步的，溶媒为生理盐水；磷酯酰肌氨酸复合物由磷酯酰肌氨酸45％和55％磺基丁二酸钠二辛酯组成。
一种包含人关节液外泌体的制剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：人关节液外泌体的分离提取：取人关节液置于无菌离心管中，利用超速离心法分离关节液中的外泌体；离心步骤如下：300g，4℃，15分钟；3000g，4℃，15分钟；20000g，4℃，70分钟；0.22微米的筛子过滤；120000g，4℃，120分钟，得到人关节液外泌体；
步骤二：制备制剂：取人血白蛋白、蛋氨酸、维生素和氨甲环酸置于高速搅拌器中，以750转/min的速度搅拌22分钟；然后向搅拌器中加入丙烯碳酸酯、磷酯酰肌氨酸复合物、溶媒和去离子水，提高搅拌速度为1150转/min，搅拌时温度保持在33℃，搅拌结束后离心过滤17分钟，取过滤液与人关节液外泌体混合得到制剂；
步骤三：除菌：取步骤二中得到的制剂送入除菌级亲水性过滤器中过滤除菌；亲水性过滤器的孔径为0.8μm；
步骤四：复苏冻存：取过滤除菌后的制剂加入恒温水浴进行复苏，加入制剂保存管中，然后进行预冷28分钟，最后加入液氮罐低温冻存；
步骤五：注射使用：取出制剂保存管，然后使用注射器进行消毒，注射器吸入制剂保存管中的制剂，注射到患者关节处即可。
实施例四：
一种包含人关节液外泌体的制剂，包括以下成分(按质量百分比计)：人关节液外泌体30％、聚乙二醇溶液18％、人血白蛋白12％、蛋氨酸7.5％、丙烯碳酸酯6.7％、维生素c3.8％、氨甲环酸2.28％、溶媒5.86％、磷酯酰肌氨酸复合物7.32％、去离子水为余量。
进一步的，溶媒为葡萄糖注射液；磷酯酰肌氨酸复合物由磷酯酰肌氨酸45％和55％磺基丁二酸钠二辛酯组成。
一种包含人关节液外泌体的制剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：人关节液外泌体的分离提取：取人关节液置于无菌离心管中，利用超速离心法分离关节液中的外泌体；离心步骤如下：300g，4℃，15分钟；3000g，4℃，15分钟；20000g，4℃，70分钟；0.22微米的筛子过滤；120000g，4℃，120分钟，得到人关节液外泌体；
步骤二：制备制剂：取人血白蛋白、蛋氨酸、维生素和氨甲环酸置于高速搅拌器中，以800转/min的速度搅拌25分钟；然后向搅拌器中加入丙烯碳酸酯、磷酯酰肌氨酸复合物、溶媒和去离子水，提高搅拌速度为1200转/min，搅拌时温度保持在35℃，搅拌结束后离心过滤20分钟，取过滤液与人关节液外泌体混合得到制剂；
步骤三：除菌：取步骤二中得到的制剂送入除菌级亲水性过滤器中过滤除菌；亲水性过滤器的孔径为1μm；
步骤四：复苏冻存：取过滤除菌后的制剂加入恒温水浴进行复苏，加入制剂保存管中，然后进行预冷30分钟，最后加入液氮罐低温冻存；
步骤五：注射使用：取出制剂保存管，然后使用注射器进行消毒，注射器吸入制剂保存管中的制剂，注射到患者关节处即可。
以上四组实施例均可制得外泌体的制剂，并且本发明的配方设计更加合理，通过分离提取得到人关节液外泌体，通过向人关节液外泌体添加人血白蛋白、维生素c、蛋氨酸、氨甲环酸、丙烯碳酸酯等多种关节液所需物质，对于治疗关节病有良好的疗效，相比药物或手术治疗，该外泌体制剂的使用更加的安全，减少了对病人身体造成的创伤；而且该外泌体制剂在制得后可以长期保存，外泌体制剂在使用时也非常的方便，安全性高，治疗效果好，利于推广应用。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。