本发明涉及一种天然药物组合物，更具体地涉及一种由凉粉草桑枝水提取物、山茱萸总黄酮提取物、山茱萸布渣叶水提取物组成的天然抗疲劳药物组合物。
背景技术：
疲劳综合征是一组以持续或反复发作的疲劳。与长期的劳累，饮食不规律，工作压力和心理压力过大等精神因素以及应激等造成的神经、内分泌、免疫、消化、循环、运动等系统的功能紊乱关系密切。长期的疲劳会对身心造成极大的危害，首先，持续的生理或心理疲劳都会使人精神紧张，从而引发失眠、多梦、易醒、记忆力减退等症状；肌肉疲劳还会导致颈椎病、肩周炎和腰腿疼痛等；过度疲劳饮食不规律会使肠胃出现问题，包括消化不良、腹胀、烧心等症状；长期的过度疲劳、健康透支还容易引发心肌缺血、脑循环障碍、高血脂等疾病。
现今，由于疲劳带来的临床症状不是十分明显，而且只有长期性的疲劳才会产生较为严重的症状，因此，在身体和精神感受到疲劳后，很多人往往容易忽视其危害性，久而久之造成更为严重的问题。目前，人们工作生活压力巨大，不仅身体承受着超负荷的工作量，精神上也压力重重，所以，抗疲劳药物的研制成为重要课题。
中医对抗疲劳有较充分的概述，在后续的不断补充和丰富下使得中医疲劳理论不断完善。其中黄芪、人参、灵芝何首乌、蜂王浆、枸杞、黄精、大枣、肉苁蓉和天门冬等，不仅可以缓解疲劳还可增强体力及免疫力。
凉粉草又名仙人草，唇形科仙草属，是一种药食两用的植物，含有黄酮、酚类、萜类等多种化学成分，具有清热利湿、凉血解暑的功效。其化学成分中的酚类化合物可降低人体心脑血管疾病的发病率，含有的咖啡酸具有抗菌、抗病毒、中枢兴奋等功效。桑枝是桑科植物桑的一年生干燥嫩枝，含有多糖、黄酮类化合物、香豆素类化合物和生物碱等多种成分，中国药典记载桑枝具有祛风湿、利关节、行水之功效。现代药理研究表明桑枝多糖具有降血糖、调节免疫、抗氧化等药理作用。山茱萸又名枣皮，山茱萸科植物山茱萸的成熟果实，山茱萸果实含有萜类、皂苷、黄酮、挥发油等生物活性成分，具有降血压、抗氧化、抗癌等功能。布渣叶是椴树科植物破布树的干燥叶。其成分复杂，含有生物碱、黄酮、挥发油、有机酸等，具有消食化滞，清热利湿的功效，可用于治疗食滞、食欲不振、消化不良等。本发明人经过大量的各配方比例的研究和实验，最后获得了本发明的最佳药物比例组合，并证明了其可以抗疲劳，由此完成了本发明。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种天然药物组合物，该组合物的原料廉价易得、疗效确切、安全可靠，便于应用推广，具有良好的抗疲劳作用。
本发明提供的一种天然抗疲劳药物组合物，由凉粉草桑枝水提取物、山茱萸总黄酮提取物、山茱萸布渣叶水提取物按5-8:3-4:2-3的比例组成。
上述天然抗疲劳药物组合物，其中凉粉草桑枝水提取物、山茱萸总黄酮提取物、山茱萸布渣叶水提取物的用量比例是8:4:3。
其中，凉粉草桑枝水提取物、山茱萸总黄酮提取物、山茱萸布渣叶水提取物可通过本领域技术人员公知的常规方法进行提纯获得，也能获得相同疗效。以下列出的方法仅仅是发明人认为更优选的方法，并不在意对该天然抗疲劳药物组合物中各成分的提取方法做出特别的限制。
优选地，上述天然抗疲劳药物组合物中凉粉草桑枝水提取物的制备方法是：
按照配伍比例1-3:1或其他比例称取凉粉草和桑枝，置于圆底烧瓶中，加10-12倍量的水超声提取3次，每次20min，超声频率为80kHz，超声温度为90℃，过滤，合并滤液并浓缩至相对密度为1.25，加入乙醇至含醇量达70％，静置过夜，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩，减压干燥至干浸膏，即得凉粉草桑枝水提取物。
上述天然抗疲劳药物组合物中山茱萸总黄酮提取物的制备方法是：
称取山茱萸适量，粉碎，加入10倍量的水浸泡10h，转入超声提取仪中超声提取40min，过滤得滤液，将滤液以每小时2倍量树脂体积的上柱速度上柱，用蒸馏水洗至无色，再用每小时2倍量树脂体积的70％乙醇以3-5mL/min的速度洗脱，收集洗脱液，低温真空干燥，即得山茱萸总黄酮提取物。
上述天然抗疲劳药物组合物中山茱萸布渣叶水提取物的制备方法是：
按照配伍比例1:2称取山茱萸和布渣叶，粉碎，置于圆底烧瓶中，加入10倍量的水，置于电热套中加热提取2次，每次1h，过滤取滤液，以20000r·min-1离心20min，取上清液，过0.22μm滤膜，减压浓缩、干燥，即得山茱萸布渣叶水提取物。
本发明还提供了该天然抗疲劳药物组合物的优选制备方法，包括：
(1)凉粉草桑枝水提取物的制备
按照配伍比例1-3:1或其他比例称取凉粉草和桑枝，置于圆底烧瓶中，加10-12倍量的水超声提取3次，每次20min，超声频率为80kHz，超声温度为90℃，过滤，合并滤液并浓缩至相对密度为1.25，加入乙醇至含醇量达70％，静置过夜，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩，减压干燥至干浸膏，即得凉粉草桑枝水提取物。
(2)山茱萸总黄酮提取物的制备
称取山茱萸适量，粉碎，加入10倍量的水浸泡10h，转入超声提取仪中超声提取40min，过滤得滤液，将滤液以每小时2倍量树脂体积的上柱速度上柱，用蒸馏水洗至无色，再用每小时2倍量树脂体积的70％乙醇以3-5mL/min的速度洗脱，收集洗脱液，低温真空干燥，即得山茱萸总黄酮提取物。
(3)山茱萸布渣叶水提取物的制备
按照配伍比例1:2称取山茱萸和布渣叶，粉碎，置于圆底烧瓶中，加入10倍量的水，置于电热套中加热提取2次，每次1h，过滤取滤液，以20000r·min-1离心20min，取上清液，过0.22μm滤膜，减压浓缩、干燥，即得山茱萸布渣叶水提取物。
(4)按比例选取凉粉草桑枝水提取物、山茱萸总黄酮提取物与山茱萸布渣叶水提取物混合均匀，即得用于抗疲劳药物制备的天然药物组合物。
本发明天然抗疲劳药物组合物在缓解疲劳方面的有益效果如下：
1.本发明天然抗疲劳药物组合物具有良好的抗疲劳和耐缺氧作用，能显著提高运动耐力，且组合物的原料廉价易得、疗效确切、安全可靠，便于应用推广。
2.本发明人独创的将凉粉草桑枝水提取物、山茱萸总黄酮提取物与山茱萸布渣叶水提取物进行组合，并通过大量实验确定这些组分之间的用量比，使该组合物发挥了很好的协同作用，具有很好的抗疲劳和耐缺氧作用。
具体实施方式
下面通过实施例和试验例进一步阐述本发明天然抗疲劳药物组合物的制备，及在抗疲劳方面的有益效果。
实施例1：本发明天然抗疲劳药物组合物及其制剂的制备
第一步：各种提取物的制备
(1)凉粉草桑枝水提取物的制备
按照配伍比例1-3:1或其他比例称取凉粉草和桑枝，置于圆底烧瓶中，加10-12倍量的水超声提取3次，每次20min，超声频率为80kHz，超声温度为90℃，过滤，合并滤液并浓缩至相对密度为1.25，加入乙醇至含醇量达70％，静置过夜，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩，减压干燥至干浸膏，即得凉粉草桑枝水提取物。
(2)山茱萸总黄酮提取物的制备
称取山茱萸适量，粉碎，加入10倍量的水浸泡10h，转入超声提取仪中超声提取40min，过滤得滤液，将滤液以每小时2倍量树脂体积的上柱速度上柱，用蒸馏水洗至无色，再用每小时2倍量树脂体积的70％乙醇以3-5mL/min的速度洗脱，收集洗脱液，低温真空干燥，即得山茱萸总黄酮提取物。
(3)山茱萸布渣叶水提取物的制备
按照配伍比例1:2称取山茱萸和布渣叶，粉碎，置于圆底烧瓶中，加入10倍量的水，置于电热套中加热提取2次，每次1h，过滤取滤液，以20000r·min-1离心20min，取上清液，过0.22μm滤膜，减压浓缩、干燥，即得山茱萸布渣叶水提取物。
第二步：制剂的制备
(1)本发明天然抗疲劳药物组合物胶囊剂的制备
分别称取上述步骤制备的凉粉草桑枝水提取物40mg，山茱萸总黄酮提取物28mg，山茱萸布渣叶水提取物20mg，同时称取淀粉80mg，糊精32mg，混合均匀，填充胶囊，制成每个纯重200mg的胶囊剂。
(2)本发明天然抗疲劳药物组合物片剂的制备
分别称取上述步骤制备的凉粉草桑枝水提取物40mg，山茱萸总黄酮提取物28mg，山茱萸布渣叶水提取物20mg，同时称取淀粉78mg，糊精32mg，混合均匀，喷入80％乙醇湿法制粒，干燥，整粒后加入2mg硬脂酸镁混合均匀，压片，制成每片纯重200mg的片剂。
(3)本发明天然抗疲劳药物组合物颗粒剂的制备
分别称取上述步骤制备的凉粉草桑枝水提取物40mg，山茱萸总黄酮提取物28mg，山茱萸布渣叶水提取物20mg，同时称取淀粉74mg，糊精32mg，糖粉6mg，混合均匀，，喷入65％乙醇湿法制粒，干燥，整粒后制成纯重200mg的颗粒剂。
试验例1：本发明天然抗疲劳药物组合物对小鼠运动疲劳的作用
1.试验材料
凉粉草、桑枝、山茱萸、布渣叶、西洋参含片均购自青岛国风大药房；
按上述实施方案制备凉粉草桑枝水提取物、山茱萸总黄酮提取物、山茱萸布渣叶水提取物，按组方比例制成本发明组合物(组合物1)，凉粉草桑枝水提取物和山茱萸总黄酮提取物组合物(组合物2)，凉粉草桑枝水提取物和山茱萸布渣叶水提取物组合物(组合物3)，山茱萸总黄酮提取物和山茱萸布渣叶水提取物组合物(组合物4)，用时分别配制成1.2mg/ml的溶液，备用。
西洋参含片配制成1.2mg/ml的溶液备用。
蒽酮、硫酸、亚硝酸钠、钠石灰、凡士林等，国产分析纯；
昆明种清洁级小鼠，体质量18-20g，雌雄各半，购自青岛动物实验中心，在自由饮水、进食环境中适应性喂养5-7d后，用于实验。
2.试验方法
取小鼠72只，随机分为6组，即正常对照组(蒸馏水)、组合物1、组合物2、组合物3、组合物4和西洋参组，分别灌胃给药0.2mL/10g体重，每日1次，连续10d。末次给药1h后，将小鼠尾部系以体重5％的铅丝负重，置入温度为25℃，水深30cm的游泳箱中负重游泳。记录小鼠开始游泳到体力耗尽沉入水面8s不能浮出水面为止的时间，该时间为小鼠的力竭游泳时间。此后迅速取出小鼠、断头处死，立即取出肝脏和大腿肌肉，加冰生理盐水制备肝组织和肌肉组织匀浆，按照蒽酮-硫酸法测定肝糖原和肌糖原含量。
3.试验结果
与正常对照组比较，本发明组合物1组小鼠力竭游泳时间显著延长(p<0.01)，肝糖原和肌糖原含量极显著增加(p<0.01)，且与西洋参组比较无显著性差异(p>0.05)；与正常对照组比较，组合物2、组合物3、组合物4各组小鼠的力竭游泳时间有所延长(p<0.05或p<0.01)，肝糖原含量有所增加(p<0.05或p<0.01)，而肌糖原含量无明显变化(p>0.05)，但与本发明组合物1组比较，仍有显著性差异(p<0.05或p<0.01)。提示本发明组合物1中各组分具有协同作用，可有效缓解负重游泳小鼠的疲劳发生。
表1组合物的抗疲劳作用(n＝12)
Table 1 Anti-fatigue effect of the composition(n＝12)
注：与正常对照组比较，*p<0.05，**p<0.01；与组合物1组比较，Δp<0.05，ΔΔp<0.01；与西洋参组比较，#p<0.05，##p<0.01。
试验例2：本发明天然抗疲劳药物组合物对小鼠耐缺氧的影响
1.试验材料
凉粉草、桑枝、山茱萸、布渣叶、西洋参含片均购自青岛国风大药房；
按上述实施方案制备凉粉草桑枝水提取物、山茱萸总黄酮提取物、山茱萸布渣叶水提取物，按组方比例制成本发明组合物(组合物1)，凉粉草桑枝水提取物和山茱萸总黄酮提取物组合物(组合物2)，凉粉草桑枝水提取物和山茱萸布渣叶水提取物组合物(组合物3)，山茱萸总黄酮提取物和山茱萸布渣叶水提取物组合物(组合物4)，用时分别配制成1.2mg/ml的溶液，备用。
西洋参含片配制成1.2mg/ml的溶液备用。
其他试剂均市市售分析纯；
昆明种小鼠(清洁级)，体质量l8～22g，雌雄兼用，由青岛市药检所动物中心提供。在自由摄食、饮水环境中适应5～7d后，用于实验。
2.试验方法
取小鼠72只，随机分为6组，即正常对照组(蒸馏水)、组合物1、组合物2、组合物3、组合物4和西洋参组，分别灌胃给药0.2mL/10g体重，每日1次，连续7天。于末次给药1h后，将小鼠分别放入盛有15g钠石灰的250mL广口瓶内(每瓶1只)，用凡士林涂抹瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，记录小鼠常压耐缺氧存活时间。
3.试验结果
结果如表2所示。本发明组合物1可显著延长小鼠常压缺氧情况下的存活时间，与正常对照组比较差异有统计学意义(p<0.01)，与西洋参组比较无统计性差异(p>0.05)；组合物2、3、4各组小鼠的存活时间也有所延长，但只有组合物4组与正常对照组比较有显著性差异(p<0.05)，且与本发明组合物1和西洋参组比较，具有显著性差异(p<0.05或p<0.01)。提示本发明组合物1中各组分具有协同作用，能有效提高小鼠耐缺氧能力，延缓疲劳的发生。
表2本发明组合物对小鼠常压缺氧存活时间的影响(n＝12，)
Table 2 Effect of the composition of the present invention on the survival time of hypoxia in mice under normal pressure(n＝12)
注：与正常对照组比较，*p<0.05，**p<0.01；与组合物1组比较，Δp<0.05，ΔΔp<0.01；与西洋参组比较，#p<0.05，##p<0.01。