一种美金刚难溶盐缓释注射剂及其制备方法与流程

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种美金刚难溶盐缓释注射剂及其制备方法。

背景技术

阿尔茨海默病是一种进行性发展的神经功能退行性变性疾病，其主要临床特征为记忆力减退、认知功能障碍、社交障碍和人格行为改变等，严重降低了患者的生活质量，并加重了家庭负担及社会负担。目前阿尔茨海默病的病因尚未明确，因此尚无药物可有效阻止甚至逆转阿尔茨海默病的进程，现有治疗手段多为改善患者的某些症状，或者延缓阿尔茨海默病发展进程。

迄今为止，已上市的阿尔茨海默病治疗药物仅有他克林、多奈哌齐、利斯的明、加兰他敏、石杉碱甲和盐酸美金刚。其中，盐酸美金刚是唯一一个被美国食品药品监督管理局(fda)批准用于治疗中度至重度阿尔茨海默病的药物。盐酸美金刚是一种低中度亲和力的非竞争性的n-甲基-d-天冬氨酸(nmda)受体拮抗剂，具有双向调节作用。当谷氨酸水平低于正常生理水平时，盐酸美金刚可活化突触后nmda受体增强谷氨酸的传递；而当谷氨酸水平高于正常生理水平时，盐酸美金刚则可非竞争性的阻断nmda受体，对抗过量谷氨酸所引发的兴奋性神经毒性，从而防止神经细胞凋亡，延缓阿尔茨海默病的发展进程。

目前国内外上市的盐酸美金刚制剂包括普通片剂(每日2次)、口服溶液剂(每日2次)和缓释胶囊(每日1次)。尽管口服制剂安全性高、服用方便、患者易于接受，但是盐酸美金刚口服制剂需每日用药1～2次，对于阿尔茨海默病患者而言，往往需长期用药，由于该类患者的病症主要表现为记忆障碍、精神异常，难以自主用药，易出现错服、漏服甚至拒服，最终导致治疗中止，病情进一步恶化。因此，亟需开发一种可长期释药的美金刚长效注射剂，维持数日甚至数月的治疗时间，以改善阿尔茨海默病患者用药依从性。

专利cn104127376a公开了一种盐酸美金刚口服溶液，与片剂相比具有更快的吸收效果；专利cn107412199a和专利cn107773553a分别公开了一种盐酸美金刚缓释胶囊组合物和一种盐酸美金刚缓释微丸及其制备方法。相比于普通片剂和口服溶液，日间给药2次减少至日间给药1次，但仍要每日给药。专利cn107468673a开了一种透皮用美金刚，可以避免每日多次口服给药，改为贴皮给药，但持续时间仅能维持12h。目前尚无一种可缓释数天甚至数周的美金刚缓释制剂，以改善阿尔茨海默病患者用药依从性，减轻社会负担。

技术实现要素：

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述的技术缺陷，提出了本发明。

因此，作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种美金刚难溶盐缓释注射剂。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种美金刚难溶盐缓释注射剂，其中：以质量百分数计，包括作为活性成分的美金刚难溶盐1％～30％、稳定剂0.1％～10％、ph调节剂0％～1％、等渗调节剂0.1％～5％和注射用水60％～98％；所述美金刚难溶盐包括美金刚-油酸盐、美金刚-亚油酸盐、美金刚-亚麻酸盐、美金刚-花生四烯酸盐、美金刚-硬脂酸盐、美金刚-月桂酸盐、美金刚-单宁酸盐、美金刚-棕榈酸盐、美金刚-双羟萘酸盐、美金刚-呋喃型酸盐中的一种。

作为本发明所述的美金刚难溶盐缓释注射剂的一种优选方案：还包括，以质量百分数计，0.1％～15％的冻干保护剂，所述冻干保护剂包括海藻糖、乳糖、葡萄糖、甘露糖醇、甘油、山梨醇、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚维酮、氨基酸、抗坏血酸、白蛋白中的一种或几种。

作为本发明所述的美金刚难溶盐缓释注射剂的一种优选方案：所述稳定剂包括海藻酸钠、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚山梨酯、泊洛沙姆、磷脂、聚乙二醇、聚维酮、聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物、聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸嵌段共聚物中的一种或一种以上。

作为本发明所述的美金刚难溶盐缓释注射剂的一种优选方案：所述ph调节剂包括盐酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、谷氨酸、乳酸、磷酸盐、醋酸及其盐、枸橼酸及其盐、酒石酸及其盐中的一种或一种以上；所述等渗调节剂选自葡萄糖、氯化钠、甘油、硫酸钠、海藻酸钠、甘露醇中的一种或一种以上。

作为本发明所述的美金刚难溶盐缓释注射剂的一种优选方案：所述美金刚难溶盐缓释注射剂能够以液体混悬液形式贮存或者分为粉末型注射剂和稀释液两部分贮存；其中，所述粉末型注射剂可以是包含一种或者多种辅料的美金刚难溶盐粉末，或者是不包含任何辅料的美金刚难溶盐粉末，所述稀释液可以是包含一种或者多种辅料的溶液，也可以是不包含辅料的注射用水。

作为本发明的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供所述的美金刚难溶盐缓释注射剂的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：所述的美金刚难溶盐缓释注射剂的制备方法，其包括，

制备美金刚难溶盐：将盐酸美金刚和酸盐分别溶解于水中，在搅拌条件下，将酸盐水溶液加至盐酸美金刚水溶液中，过滤，收集滤饼，即为美金刚难溶盐，对美金刚难溶盐进行纯化；

美金刚难溶盐缓释注射剂：将所述美金刚难溶盐分散于含有辅料的水溶液中，搅拌使其分散均匀，使用湿法介质研磨机进行研磨，得到美金刚难溶盐混悬液；或将美金刚难溶盐分散于含有辅料的水溶液中得到美金刚难溶盐混悬初液，使用高压均质进行均质，得到美金刚难溶盐混悬液；或将美金刚难溶盐转移至气流粉碎机中进行粉碎，得微粉化美金刚难溶盐粉末。

作为本发明所述的美金刚难溶盐缓释注射剂的制备方法的一种优选方案：所述制备美金刚难溶盐，包括，将盐酸美金刚和酸盐分别溶解于水中，于75℃下，分别配置浓度为0.1mol/l的溶液，在搅拌条件下，将酸盐水溶液加至盐酸美金刚水溶液中，10000r/min离心10min，抽滤，收集沉淀，热水洗涤三次，将所得滤饼40℃真空干燥24h。

作为本发明所述的美金刚难溶盐缓释注射剂的制备方法的一种优选方案：还包括，将所述美金刚难溶盐混悬液加入1％～15％的冻干保护剂，进行冷冻干燥，得到粉末型美金刚难溶盐缓释注射剂；或将所述微粉化美金刚难溶盐粉末分散于含有辅料和1％～15％冻干保护剂的水溶液中，再分装并冷冻干燥，得粉末型美金刚难溶盐缓释注射剂。

作为本发明所述的美金刚难溶盐缓释注射剂的制备方法的一种优选方案：所述湿法介质研磨，其研磨介质包括聚苯乙烯珠、氧化锆珠、硅酸锆珠中的一种。

作为本发明所述的美金刚难溶盐缓释注射剂的制备方法的一种优选方案：所述美金刚难溶盐缓释注射剂的平均粒径为0.2μm～10μm。

本发明的有益效果：本发明采用难溶性盐技术，制备了美金刚难溶盐，通过降低药物溶解度，延长药物释放时间。与盐酸美金刚相比，美金刚难溶盐溶解度降低了40～600倍，可缓释数天至数周。本发明采用难溶性盐技术，将美金刚难溶盐制备成混悬型美金刚难溶盐缓释注射剂，无需特殊制备设备，与其他长效注射剂技术如前体药物、微球、微囊、注射植入剂、凝胶、原位贮库相比，制备工艺简单，更易于工业化生产。本发明所述的美金刚难溶盐缓释注射剂，注射给药后，可持续释药数周，解决了美金刚药物需要频繁给药的弊端，有望显著提高阿尔茨海默病患者用药顺应性，降低看护成本，减轻社会负担。本发明可通过改变美金刚难溶性盐的酸根或者改变制剂粒径，调节缓释时间，可满足不同给药周期要求。本发明可避免过多小粒径(d30>100nm，即美金刚难溶盐缓释注射剂中粒径<100nm的粒子体积百分比低于30％)美金刚难溶盐颗粒的产生，所制备美金刚难溶盐长效注射剂平均粒径在0.2μm～10μm范围内，在保证良好通针性的同时，获得优良的缓释效果。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：

图1为美金刚硬脂酸盐缓释注射剂(实施例1)、美金刚棕榈酸盐缓释注射剂(实施例2)、美金刚油酸盐缓释注射剂(实施例3)和美金刚双羟萘酸盐缓释注射剂(实施例4)的粒径分布图。

图2为参照实施例5和实施例6所述方法制备的美金刚双羟萘酸盐缓释注射剂和参照对比例2所述方法制备的美金刚混悬液的粒径分布图。

图3为参照实施例1～实施例6所述方法制备的美金刚难溶盐缓释注射剂和参照对比例2所述方法制备的美金刚混悬液在模拟体液环境(10mm磷酸盐缓冲溶液，ph7.4)中的药物释放曲线图(n＝3，mean±sd)。

图4为经肌肉注射分别给予大鼠美金刚硬脂酸盐缓释注射剂(实施例1，剂量125mg/kg)、美金刚棕榈酸盐缓释注射剂(实施例2，剂量125mg/kg)、美金刚油酸盐缓释注射剂(实施例3，剂量125mg/kg)、美金刚双羟萘酸盐缓释注射剂(实施例4～实施例6，剂量125mg/kg)、盐酸美金刚溶液剂(对比例1，剂量25mg/kg)和美金刚混悬液(对比例2，剂量25mg/kg)后24小时内血药浓度-时间曲线图(n＝6，mean±sd)。

图5为经肌肉注射分别给予大鼠美金刚硬脂酸盐缓释注射剂(实施例1，剂量125mg/kg)、美金刚棕榈酸盐缓释注射剂(实施例2，剂量125mg/kg)、美金刚油酸盐缓释注射剂(实施例3，剂量125mg/kg)和美金刚双羟萘酸盐缓释注射剂(实施例4，剂量125mg/kg)后28天内血药浓度-时间曲线图(n＝6，mean±sd)。

图6为经肌肉注射分别给予大鼠美金刚双羟萘酸盐缓释注射剂(实施例4～实施例6，剂量125mg/kg)后28天内血药浓度-时间曲线图(n＝6，mean±sd)。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。

实施例1：

美金刚-硬脂酸盐缓释注射剂的制备：

a.美金刚-硬脂酸盐的合成

称取适量硬脂酸钠，分散至100ml的75℃蒸馏水中，搅拌溶解，配制浓度为0.1mol/l的硬脂酸钠水溶液；称取适量盐酸美金刚，溶解至100ml的75℃蒸馏水中，得浓度为0.1mol/l的盐酸美金刚水溶液。于75℃，在搅拌下，将上述盐酸美金刚水溶液滴加至硬脂酸钠水溶液中，10000r/min离心10min，抽滤，收集沉淀，热水洗涤三次，将所得滤饼40℃真空干燥24h，即得美金刚-硬脂酸盐。

b.美金刚-硬脂酸盐缓释注射剂的制备

将25g美金刚-硬脂酸盐(以美金刚计)分散在250ml含有2％(wt)羧甲基纤维素钠的水溶液中，水溶液用naoh调节ph为7.4，用nacl调节等渗，使用湿法介质研磨机在1500rpm转速下研磨15min，研磨介质为0.8mm氧化锆珠，得到平均粒径为0.865μm的美金刚-硬脂酸盐混悬液，向所得混悬液中加入5％(wt)甘露糖醇，分装，冷冻干燥，得美金刚-硬脂酸盐缓释注射剂。

实施例2：

美金刚-棕榈酸盐缓释注射剂的制备：

a.美金刚-棕榈酸盐的合成

称取适量棕榈酸钠，分散至100ml的75℃蒸馏水中，搅拌溶解，配制浓度为0.1mol/l的棕榈酸钠水溶液；称取适量盐酸美金刚，溶解至100ml的75℃蒸馏水中，得浓度为0.1mol/l的盐酸美金刚水溶液。于75℃，在搅拌下，将上述盐酸美金刚水溶液滴加至棕榈酸钠水溶液中，10000r/min离心10min，抽滤，收集沉淀，热水洗涤三次，将所得滤饼40℃真空干燥24h，即得美金刚-棕榈酸盐。

b.美金刚-棕榈酸盐缓释注射剂的制备

将25g美金刚-棕榈酸盐(以美金刚计)分散在250ml含有2％羧甲基纤维素钠的水溶液中，水溶液用naoh调节ph为7.4，用nacl调节等渗，使用湿法介质研磨机在1500rpm转速下研磨15min，研磨介质为0.8mm氧化锆珠，得到平均粒径为0.719μm的美金刚-棕榈酸盐混悬液，向所得混悬液中加入5％甘露糖醇，分装，冷冻干燥，得美金刚-棕榈酸盐缓释注射剂。

实施例3：

美金刚-油酸盐缓释注射剂的制备：

a.美金刚-油酸盐的合成

称取适量油酸钠，分散至100ml的75℃蒸馏水中，搅拌溶解，配制浓度为0.1mol/l的油酸钠水溶液；称取适量盐酸美金刚，溶解至100ml的75℃蒸馏水中，得浓度为0.1mol/l的盐酸美金刚水溶液。于75℃，在搅拌下，将上述盐酸美金刚水溶液滴加至油酸钠水溶液中，10000r/min离心10min，收集上层油状粘稠液体，热水洗涤三次，将所得油状粘稠液体40℃真空干燥24h，即得美金刚-油酸盐。

b.美金刚-油酸盐缓释注射剂的制备

将25g美金刚-油酸盐(以美金刚计)分散在250ml含有2％羧甲基纤维素钠的水溶液中，水溶液用naoh调节ph为7.4，用nacl调节等渗，使用湿法介质研磨机在1500rpm转速下研磨15min，研磨介质为0.8mm氧化锆珠，得到平均粒径为0.504μm的美金刚-油酸盐混悬液，向所得混悬液中加入5％甘露醇，分装，冷冻干燥，得美金刚-油酸盐缓释注射剂。

实施例4：

美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂的制备：

a.美金刚-双羟萘酸盐的合成

称取适量双羟萘酸钠，分散至100ml的75℃蒸馏水中，搅拌溶解，配制浓度为0.1mol/l的双羟萘酸钠水溶液；称取适量盐酸美金刚，溶解至100ml的75℃蒸馏水中，得浓度为0.2mol/l的盐酸美金刚水溶液。于75℃，在搅拌下，将上述盐酸美金刚水溶液滴加至双羟萘酸钠水溶液中，10000r/min离心10min，抽滤，收集滤饼，热水洗涤三次，将所得滤饼40℃真空干燥24h，即得美金刚-双羟萘酸盐。

b.美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂的制备

将25g美金刚-双羟萘酸盐(以美金刚计)分散在250ml含有2％羧甲基纤维素钠的水溶液中，水溶液用naoh调节ph为7.4，用nacl调节等渗，使用湿法介质研磨机在1500rpm转速下研磨15min，研磨介质为0.8mm氧化锆珠，得到平均粒径为0.671μm的美金刚-双羟萘酸盐混悬液，向所得混悬液中加入5％甘露醇，分装，冷冻干燥，得美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂。

实施例5：

美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂的制备：

将25g实施例4所制备的美金刚-双羟萘酸盐(以美金刚计)分散在250ml含有2％羧甲基纤维素钠和0.5％聚山梨酯80的水溶液中，水溶液用naoh调节ph为7.40，用nacl调节等渗，转移至高压均质机中，40mpa循环3次，100mpa循环10次，得到平均粒径为2.572μm的美金刚难溶性盐混悬液。向所得混悬液中加入5％甘露醇，分装，冷冻干燥，得美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂。

实施例6：

美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂的制备：

将25g实施例4所制备的美金刚-双羟萘酸盐(以美金刚计)至气流粉碎机中，调整加料喷咀压力0.3～0.4mpa，粉碎喷咀压力为0.6mpa，得到平均粒径在3.273μm的微粉化美金刚-双羟萘酸盐。将25g上述微粉化美金刚-双羟萘酸盐(以美金刚计)分散至含2％羧甲基纤维素钠和5％甘露醇的水溶液中，用naoh调节ph为7.40，用nacl调节等渗，分装，冷冻干燥，得美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂。

对比例1：

盐酸美金刚溶液剂

将25g盐酸美金刚(以美金刚计)溶解至250ml含有2％羧甲基纤维素钠的水溶液中，用naoh调节ph为7.4，用nacl调节等渗，分装，得盐酸美金刚溶液剂。

对比例2：

美金刚混悬注射剂

a.美金刚的合成

称取适量氢氧化钠，分散至100ml蒸馏水中，搅拌溶解，配制浓度为0.1mol/l的氢氧化钠水溶液；称取适量盐酸美金刚，溶解至100ml蒸馏水中，得浓度为0.1mol/l的盐酸美金刚水溶液。在搅拌下，将上述盐酸美金刚水溶液滴加至氢氧化钠水溶液中，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤三次，即得美金刚。

b.美金刚混悬注射剂的制备

将25g美金刚分散在250ml含有2％羧甲基纤维素钠的水溶液中，水溶液用naoh调节ph为7.4，用nacl调节等渗，使用湿法介质研磨机在1500rpm转速下研磨15min，研磨介质为0.8mm氧化锆珠，得到平均粒径为1.257μm的美金刚混悬液，向所得混悬液中加入5％甘露醇，分装，冷冻干燥，得美金刚混悬注射剂。

实施例7：

美金刚难溶盐缓释注射剂的粒径及粒度分布

分别将实施例1～实施例6所制备的美金刚难溶盐缓释注射剂、对比例2所制备的美金刚混悬注射剂与稀释液混合均匀，形成混悬液。分别取20μl上述混悬液，以相应美金刚难溶盐的饱和水溶液为分散介质，采用美国microtrac公司的s3500型粒度测定仪，进行粒度分析，粒度分布图如图1和图2所示。

结果显示，参照实施例1～实施例6所制备的美金刚难溶盐缓释注射剂的粒径均小于10μm，具有良好的通针性。表明本发明所涉及的美金刚难溶盐缓释注射剂得制备方法具有优良的耐用性。

本发明可通过改变美金刚难溶性盐的酸根或者改变制剂粒径，调节缓释时间，缓释时间由5天至28天不等，可满足不同给药周期要求。

本发明可避免过多小粒径美金刚难溶盐颗粒的产生，所制备美金刚难溶盐长效注射剂平均粒径在0.2μm～10μm范围内，在保证良好通针性的同时，获得优良的缓释效果。

实施例8：

美金刚难溶盐缓释注射剂的体外药物释放

采用透析法测定美金刚难溶盐缓释注射剂(实施例1～实施例6)及美金刚混悬注射剂(对比例2)的体外药物释放行为。分别将实施例1～实施例6所制备的美金刚难溶盐缓释注射剂、对比例2所制备的美金刚混悬注射剂与稀释液混合均匀，形成混悬液。分别精密移取1ml上述混悬液至透析袋(截留分子量50000da)中，两端扎紧。将透析袋置于装有100ml模拟体液(10mmol/l磷酸盐缓冲溶液，ph＝7.4)的具塞锥形瓶中，于37℃恒温水浴振荡器中，100r/min往复振摇。分别于1、2、4、6、8、12和24h、2、3、4、6、8、10、12和14day，取出全部释放介质，同时补充100ml释放介质。测定释放介质中美金刚浓度，并计算药物累积释放百分比，绘制体外药物释放曲线。实施例1～实施例6及对比例2的体外药物释放曲线图如图3所示。

结果显示，参照对比例2方法所制备的美金刚混悬注射剂在模拟体液环境中2h时，累积药物释放量已达到90％以上，无明显缓释作用。而参照实施例1～实施例6方法所制备的美金刚难溶盐缓释注射剂具有明显的缓释作用，药物释放速度由大到小依次为：对比例2>实施例1>实施例2>实施例3>实施例4>实施例5>实施例6。美金刚-硬脂酸盐缓释注射剂(实施例1)和美金刚-棕榈酸盐缓释注射剂(实施例2)可缓释7天，美金刚-油酸盐缓释注射剂(实施例3)可缓释12天。采用湿法介质研磨法、高压均质法和气流粉碎法所制备的美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂(实施例4～实施例6)均可缓释14天以上，其中实施例5和实施例6由于粒径较大，药物释放速度更慢。

上述结果表明，与美金刚混悬注射剂相比，美金刚难溶性盐缓释注射剂具有优良的缓释作用，缓释时间可持续一周以上。

实施例9：

美金刚难溶盐缓释注射剂的大鼠体内药动学评价

取48只sd大鼠，雄性，体重(200±20)g，江南大学实验动物中心提供，置实验环境饲养4天后，随机分成8组，每组6只，实验前禁食12h，分别于大鼠右后腿肌肉注射125mg/kg参照本实施例1所述方法制备的美金刚-硬脂酸盐缓释注射剂、125mg/kg参照本实施例2所述方法制备的美金刚-棕榈酸盐缓释注射剂、125mg/kg参照本实施例3所述方法制备的美金刚-油酸盐缓释注射剂、125mg/kg参照实施例4所述方法制备的美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂、125mg/kg参照实施例5所述方法制备的美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂、125mg/kg参照实施例6所述方法制备的美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂、25mg/kg参照对比例1所述方法制备的盐酸美金刚溶液剂和25mg/kg参照对比例2所述方法制备的美金刚混悬注射剂。分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8和12h、1、2、3、4、5、6、7、10、14、17、21、25和28天由眼眶后静脉丛取血约0.3ml，置预先肝素化的1.5ml尖底离心试管中，4000rpm离心10min，吸取上层血浆于-80℃保存待测。

血浆样品处理：精密取血浆样品100μl于7ml离心管中，加入20μl内标溶液(盐酸金刚烷胺)和200μl氢氧化钠水溶液，涡旋混匀，加入叔丁基甲烷溶液3ml，涡旋10min，4000rpm离心10min。取上清液至5ml离心管中，空气流吹干，于-20℃保存待测。测定前加入200μl甲醇，涡旋5min，12000rpm离心10min，取上清液采用超高效液相质谱联用仪测定血药浓度。各给药组血药浓度-时间曲线如图4～图6所示。

图4显示，参照对比例1所述方法制备的盐酸美金刚注射液和参照对比例2所述方法制备的美金刚混悬注射剂经肌肉注射给予大鼠6小时内，血药浓度均显著高于参照实施例1～实施例6所述方法制备的美金刚难溶盐缓释注射剂；4小时时，对比例1和对比例2组血药浓度高达18000ng/ml～29000ng/ml，而实施例1～实施例6组血药浓度均低于1000ng/ml，仅为280ng/ml～1000ng/ml，约降低了18～103倍；24小时后，对比例1和对比例2组血药浓度均低于25ng/ml，无明显缓释作用，而实施例1～实施例6组血药浓度仍维持在250ng/ml～800ng/ml范围内。上述结果表明，与盐酸美金刚注射液和美金刚混悬注射剂相比，美金刚难溶盐缓释注射剂在大鼠体内具有明显的缓释作用。

图5和图6显示，给药初期(2天内)，各组血药浓度由高到低依次为：实施例1(美金刚-硬脂酸盐缓释注射剂)>实施例2(美金刚-棕榈酸盐缓释注射剂)>实施例3(美金刚-油酸盐缓释注射剂)>实施例4(美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂)>实施例5(美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂)>实施例6(美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂)。其中参照实施例1所述方法制备的美金刚-硬脂酸盐缓释注射剂可缓释5天；参照实施例2所述方法制备的美金刚-棕榈酸盐缓释注射剂和参照实施例3所述方法制备的美金刚-油酸盐缓释注射剂可缓释7天；参照实施例4所述方法制备的美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂可缓释21天；参照实施例5和实施例6所述方法所制备的美金刚-双羟萘酸盐缓释注射剂可缓释28天。

应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。