赤苍藤的提取方法及利尿作用与流程

本发明涉及中药治疗疑难杂症的医疗领域，具体是一种赤苍藤提取方法及利尿作用。

背景技术

赤苍藤为铁青树科赤苍藤属植物赤苍藤(erythropalumscandensbl.)的根茎，别名牛耳藤、萎藤、勾华、侧苋、细绿藤、腥藤、七白芍、假黄藤、大叶臭菜、蚂蟥藤等。赤苍藤具有较高的食用、药用及绿化观赏价值，主要产自于亚洲南部及东南部，我国主要分布于云南南部和广西、广东和贵州等地，多见于低山及丘陵地区或山区溪边、山谷、密林或疏林的林缘或灌丛中。性喜温暖、湿润气候，不耐寒，耐半阴环境。

赤苍藤为多年生常绿大型木质藤本植物，藤茎达10cm，卷须腋生。枝纤细，绿色，有不明显条纹。叶纸质至厚纸质或近革质，卵形、长卵形或三角状卵形，上面绿色，背面粉绿色。花排成腋生的二歧聚伞花序，花小，花冠白色，卵状三角形。核果卵状椭圆形或椭圆状，全为增大的壶状花萼筒所包围。花萼筒顶端有宿存的波状裂齿，成熟时淡红褐色，干后黄褐色。结成下垂的果实，成熟时蓝紫色。是十分优良的观叶、观果景观树种，极具观赏价值。赤苍藤生长势强健，是栅栏及棚架造景的好材料，可做庭院观赏树种、绿篱和作坡面的垂直绿化树种，也可以种植于门庭、花架旁，让其攀爬自然成景。

赤苍藤是生长在悬崖峭壁上的珍贵药用植物，其味微苦，性平，归肝、肾经。赤苍藤根中含酚性成分，树脂及三萜，树脂的主要成分为苏门树脂酸、桂皮酸松柏醇酯。具有清热利尿的功效，可用于治疗肝胆湿热、腹痛、尿频、尿急、尿痛、小便不利、黄疸肝炎、肠炎、尿道炎、急性肾炎、肾炎水肿、肺结核、泌尿系统炎症、风湿骨痛等症。茎入药，利尿，治黄疸，也治风湿骨痛；根煮肉或浸酒服，同时捣烂叶敷患处可治水肿。

赤苍藤是在热带及亚热带地区分布的可食用野菜，也是一种天然无公害的有待开发的野生植物资源。民间人们常摘其嫩枝叶作为野生蔬菜食用，可用于鲜食、炒食、做陷、做汤、做粥及腌渍等，味道鲜美，清香宜口，风味独特，是一种深受欢迎的特色野生森林蔬菜。内含胡萝卜素，维生素b、c，含有铁、锌、铜、锰等许多对人体有益的矿物质，营养价值高于种植蔬菜，硫胺素、核黄素的含量也比一般家用蔬菜高。因为其不含有脂肪，也被誉为“美容瘦身菜”。或采摘根茎切片煮水当茶饮用，能够短时增大尿液的臭味，具有促进尿酸排放和抗高尿酸血症的能力。

黄元河,黎星星,潘乔丹,黎为能,黄一能曾经研究过《赤苍藤醇提物的急性毒性》，其方法是：

1.取赤苍藤茎叶干燥粉末，加适量75％乙醇加热回流提取3次，将3次回流所得的滤液混合后用旋转蒸发仪浓缩，将浓缩液冷冻干燥，得浸膏。各样品组在配制时按生药量计算。

2.km小鼠，雌雄各半，共10只。选择人口服剂量10.25g/d剂量的30倍为最大耐受量，折算为小鼠给药剂量，按生药量计算为40g/kg。实验前12h禁食，每天灌胃2次，每次间隔6h，药容积均为10ml/kg。灌胃后每日观察1次，注意观察记录动物毒性反应及死亡数，灌胃前后体重变化，共观察14d，对于所有的试验动物进行尸检，取心、肝、脾、肺、肾等作大体观察，称质量，做脏器系数分析。

3.赤苍藤醇提取物的小鼠最大耐受量试验的14d中，小鼠均表现正常，均未见死亡。14d中，灌胃后所有受试小鼠的毛色均光洁，其饮食、活动和大小便均正常，其眼、鼻和口腔均无异常分泌物，同时也未出现不良情况。灌胃前小鼠体重与灌胃后第5、10、12、14天后小鼠体重无明显变化。14d后处死所有小鼠，解剖后，观察受试小鼠的心、肝、脾、肺、肾和胃等脏器，均未见异常改变，脏器系数与正常组比较均无统计学差异(p＞0.05)。

4.但未见有对赤苍藤利尿作用的公开文献报道。

技术实现要素：

本发明的目的是提供赤苍藤的提取方法及利尿作用。分别采用水煎煮法与乙醇回流提取法提取赤苍藤的有效成分，然后将提取物配制成不同浓度的药液，用于利尿作用的研究。

本发明所述的药物赤苍藤(erythropalumscandensbl.)为铁青树科(olacaceae)赤苍藤属(erythropalum)多年生常绿大型木质藤本植物。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

1.赤苍藤的提取方法，采用水煎煮法，包括以下步骤：

1)赤苍藤粗粉，以水为溶剂，料液比5～50倍，浸渍10～200min，置电炉上加热煎煮1～3次，每次30～240min，滤取合并药液，浓缩为赤苍藤水提浸膏。

2)将赤苍藤水提浸膏加入医学上许可的辅料，制成赤苍藤水提物口服制剂。

2.赤苍藤的提取方法，采用醇回流提取法，包括以下步骤：

1)赤苍藤粗粉，以体积百分浓度为20％～100％的乙醇为溶剂，料液比5～50倍，回流提取1～3次，每次30～240min，过滤合并滤液，浓缩为赤苍藤醇提浸膏。

2)将赤苍藤醇提浸膏加入医学上许可的辅料，制成赤苍藤醇提物口服制剂。

3.上述的赤苍藤水提物口服制剂具有利尿用途的药物。

4.上述的赤苍藤醇提物口服制剂具有利尿用途的药物。

本发明人认为赤苍藤作为利尿药物的机理是：

文献介绍，赤苍藤具有清热利尿的功效，可用于治疗肝胆湿热、腹痛、尿频、尿急、尿痛、小便不利、黄疸肝炎、肠炎、尿道炎、急性肾炎、肾炎水肿、肺结核、泌尿系统炎症、风湿骨痛等症。茎入药，利尿，治黄疸，也治风湿骨痛；根煮肉或浸酒服，同时捣烂叶敷患处可治水肿。

所以本发明将赤苍藤作为利尿药物，利尿就是利用某种手段而影响肾成尿过程，而使尿液增多。目前临床上常用的利尿药效果明显，如呋喃苯胺酸和双氢氯噻嗪，不良反应较多，常见水与电解质紊乱、血脂异常、高血糖、耳毒性、高尿酸血症及胃肠反应等，因此寻找高效、安全、有效、经济的利尿药尤为重要。也许赤苍藤的水提、醇提物保留了酚性成分，树脂及三萜类成分，能够起到利尿作用。

本发明的优点：

1.本发明对赤苍藤进行水提与醇提，提取条件温和，不破坏赤苍藤的总黄酮、酚性成分，树脂及三萜，最大限度的保留赤苍藤的有效药用成分。

2.提取时间短，成本低，适合现有中药厂的生产制备。

3.过去西药利尿药不良反应较多，常见水与电解质紊乱、血脂异常、高血糖、耳毒性、高尿酸血症及胃肠反应等，本发明水提/醇提赤苍藤法高效、安全、有效、经济，得到利尿药。

附图说明

图1是赤苍藤嫩枝条的照片。

图2是赤苍藤长出果实的照片。

具体实施方式

以下结合实施例和通过试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括本发明药物的动物试验报告。

赤苍藤嫩枝条如图1所示；赤苍藤长出果实如图2所示。

实施例1

赤苍藤的提取方法，包括以下步骤：

1.赤苍藤粗粉，以水为溶剂，料液比5倍，浸渍10min，置电炉上加热煎煮1次，煎煮时间240min，滤取合并药液，浓缩为赤苍藤水提浸膏。

2.将赤苍藤水提浸膏加入医学上许可的辅料，制成赤苍藤水提物口服制剂。

实施例2

赤苍藤的提取方法，包括以下步骤：

1.赤苍藤粗粉，以水为溶剂，料液比50倍，浸渍200min，置电炉上加热煎煮3次，每次30min，滤取合并药液，浓缩为赤苍藤水提浸膏。

2.将赤苍藤水提浸膏加入医学上许可的辅料，制成赤苍藤水提物口服制剂。

实施例3

赤苍藤的提取方法，包括以下步骤：

1.赤苍藤粗粉，以体积百分浓度为20％的乙醇为溶剂，料液比5倍，回流提取1次，回流时间240min，过滤合并滤液，浓缩为赤苍藤醇提浸膏。

2.将赤苍藤醇提浸膏加入医学上许可的辅料，制成赤苍藤醇提物口服制剂。

实施例4

赤苍藤的提取方法，包括以下步骤：

1.赤苍藤粗粉，以体积百分浓度为100％的乙醇为溶剂，料液比50倍，回流提取3次，每次30min，过滤合并滤液，浓缩为赤苍藤醇提浸膏。

2.将赤苍藤醇提浸膏加入医学上许可的辅料，制成赤苍藤醇提物口服制剂。

3本发明赤苍藤水提物口服制剂、醇提物物口服制剂的具有利尿作用。实验情况如下：

1实验材料

1.1实验动物

昆明健康雄性小鼠(sd清洁级)，体重18～22g，购自广西医科大学实验动物中心，许可证号：scxk(桂)2012-0002。

1.2仪器、药物与试剂

1.2.1仪器

自制小鼠代谢笼，小鼠灌胃器，电子天平(德国赛多利斯，型号：bt125d)。1.2.2药物与试剂

赤苍藤药材，为2014年采自广西南宁郊区，经广西中医药大学中药鉴定教研室田慧教授鉴定为铁青树科赤苍藤属植物赤苍藤(erythropalumscandensbl.)的根茎。氢氯噻嗪片(生产厂商：山西云鹏制药有限公司，产品批号：a131204)，吐温-80溶剂为分析纯(生产厂商：西陇化工股份有限公司，产品批号：20140908)，生理盐水(生产厂商：成都市保益康医药保健品有限公司，产品批号：ok74a1)，纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司，产品批号：20150102)，乙醇为分析纯(生产厂商：国药集团化学试剂有限公司，产品批号：10009171)。

2实验方法

2.1筛选合格实验动物

取健康雄性小鼠，随机放入代谢笼(12只/笼)，饲养2天，实验前18h禁食不禁水。正式实验前按20ml/kg灌胃生理盐水形成水负荷，测定2小时内的尿量，将排尿量不足水负荷40％的动物予以剔除。

2.2提取物的制备

2.2.1对照品的制备

取氢氯噻嗪片研成细粉，用蒸馏水配成0.5mg/ml；吐温-80试剂，加蒸馏水配成体积分数(v/v，％)＝0.2％的溶媒溶剂。

2.2.2赤苍藤水提物的制备

赤苍藤粗粉(过筛24目后过65目)50g，加水500ml，浸渍45min，置电炉上加热煎煮两次每次45min，滤取合并药液，于水浴上蒸干，称重4.61g，得膏率9.22％。后以0.2％的吐温-80试剂将所得纯水提取浸膏分别配置成低、中、高浓度(5.53mg/ml、11.06mg/ml、22.13mg/ml)的药液冷藏备用。

2.2.3赤苍藤醇提物的制备

赤苍藤粗粉(过筛24目后过65目)50g，分别加500ml的95％，70％和50％乙醇依次回流提取1小时，过滤合并滤液，于水浴上蒸干，称重5.46g，得膏率10.91％。后以0.2％的吐温-80试剂将所得乙醇提取浸膏分别配置成低、中、高浓度(6.55mg/ml、13.09mg/ml、26.18mg/ml)的药液冷藏备用。

2.3实验动物分组及给药

取合格小鼠90只，随机分为9组，每组10只，即组1空白对照(生理盐水)、组2溶媒对照(0.2％吐温-80)、组3西药阳性对照(0.5mg/ml氢氯噻嗪药液)、组4、组5、组6(药材水提物低、中、高浓度)、组7、组8、组9(药材醇提物低、中、高浓度)。每天灌胃(ig)给药1次，给药容量20ml/kg，连续8天。

2.4排尿量的测定

末次灌胃(即第8天)前小鼠禁食不禁水18小时，轻压每只小鼠下腹部，排尽余尿，先灌胃生理盐水20ml/kg作为水负荷，半小时后，再各组小鼠灌胃相应药物，将灌胃后的小鼠放入相应的代谢笼中，开始计时，每小时更换离心管，连续观察记录6小时，并记录6小时内排尿总量。

2.5统计学处理

排尿量的测定结果见表1，实验结果数据均以表示，采用spss软件统计处理，组间比较采用经t检验，p<0.05认为有统计学意义，p<0.01认为差异尤为显著。

3实验结果

溶媒对照组与空白对照组比较结果为p>0.05，西药阳性对照组与空白对照组比较结果为**p<0.01，水提物低剂量、中剂量、高剂量组与溶媒对照组比较结果为^△p<0.05，醇提物各剂量组分别与溶媒对照组比较显示低剂量组^△p<0.05、中剂量组^△△p<0.01、高剂量组^△△p<0.01，且将水提物与醇提物的各个剂量组分别与阳性对照组进行比较显示^#p<0.05。

表1小鼠排尿量的测定(n＝10)

注:与空白组比较,*p<0.05，**p<0.01；与溶媒组比较,^△p<0.05,^△△p<0.01；与阳性对照组^#p<0.05，^##p<0.01

4讨论

溶媒对照组无显著性利尿药效，而西药阳性对照组，水提物低、中、高剂量组，醇提物低、中、高剂量组均有显著的利尿作用，且醇提物的中剂量以及高剂量利尿作用尤为显著(但两组利尿作用强度较西药阳性对照组均弱)。由于赤苍藤醇提物较水提物药效更为明显，且醇提物方便临床用药制剂以及贮存，符合药物高效性的特点及节约资源的需求，因此后续实验将对赤苍藤醇提物所含化学成分进行分析。