Cordyrrole-A及其在创面愈合中的应用的制作方法

本发明属于化学药物领域，涉及cordyrrole-a及其在治疗包括溃疡在内的创面愈合中的应用。

背景技术：

创伤包括溃疡在内的成因、危害及治疗在以往申请专利cn105434450a中已经述及。创伤的组织重建过程复杂，但细胞的增殖、迁移和血管形成是其重要环节，目前huvec(人脐静脉内皮细胞)已经成为研究促创伤愈合的重要模型。本发明采用此方法发现的活性化合物未见报道。

美洲大蠊(periplanetaamericana)为昆虫纲有翅亚纲蜚蠊目蜚蠊科大蠊属昆虫，由其制备的康复新液临床上治疗各种创伤包括溃疡效果肯定，我们的研究结果提示美洲大蠊促创面愈合的成分具有结构多样性和活性多样性，其整体疗效是多个不同结构类型协同和拮抗的共同结果。同时这一辨证关系也决定了从美洲大蠊中发现促创面愈合的活性成分或药物是可能的。

技术实现要素：

本发明提供了一种化合物在制备促进创面愈合药物中的应用，所述创面为溃疡创面。

进一步的，所述化合物cordyrrole-a结构式为

进一步的，所述的cordyrrole-a是通过从美洲大蠊中提取获得或通过人工合成获得。

再进一步的，所述cordyrrole-a具有促进细胞迁移活性。

另外，化合物cordyrrole-a的制备步骤如下：

取美洲大蠊干燥虫体，粉碎后用热水提取2～3次，每次1～2h，提取液减压回收溶剂得总提物，总提取液经mcigelchp20p柱采用甲醇-水按0％～100％比例梯度洗脱得11个组分，分别为f1～f11，其中f7经rp-18柱采用甲醇-水0％～100％比例梯度洗脱得13个组分，分别为f7.1～f7.13，其中f7.6经sephadexlh-20凝胶过滤，再行hplc得化合物cordyrrole-a，hplc洗脱剂为甲醇-水，甲醇体积：水体积＝15:85。

本发明的有益效果：

1.本发明所述的cordyrrole-a是首次从美洲大蠊中分离鉴定得到的。

2.本发明所述的cordyrrole-a具有显著促进huvec细胞迁移的功效。

附图说明

图1和2化合物促进huvecs细胞迁移活性试验结果(n＝3)。,*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步描述。

实施例1本发明所述cordyrrole-a的提取分离及结构鉴定

美洲大蠊来源于四川好医生攀西药业有限责任公司美洲大蠊gap基地，美洲大蠊提取物是康复新液的主要成分。

取美洲大蠊干燥虫体25kg，粉碎后用热水提取2～3次，每次1～2h，提取液减压回收溶剂得总提物(约2kg)，总提取液经mcigelchp20p柱采用甲醇-水按0％～100％比例梯度洗脱得11个组分，分别为f1～f11，其中f7(18g)经rp-18柱采用甲醇-水0％～100％比例梯度洗脱得13个组分，分别为f7.1～f7.13，其中f7.6(1.1g)经sephadexlh-20凝胶过滤，再行hplc得化合物cordyrrole-a(18.4mg)，hplc洗脱剂为甲醇-水，甲醇体积：水体积＝15:85。

化合物结果鉴定如下：

化合物cordyrrole-a：¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:9.30(1h,s,h-1),7.51(1h,s,h-5′),7.00(1h,d,j＝3.5hz,h-3),6.19(1h,d,j＝3.5hz,h-4),5.36(1h,m,h-1′),4.84(1h,m,ha-4′),4.50(2h,m,h-6),3.16(1h,m,hb-4′),2.10(2h,m,h-2′),1.87(2h,m,h-3′)；¹³cnmr(150mhz,dmso-d6)δ:178.5(c-1),168.4(c-6′),144.5(c-2),132.1(c-5),125.4(c-3),109.5(c-4),56.6(c-1′),55.5(c-6),41.7(c-4′),29.4(c-2′),22.7(c-3′)。

实施例2本发明所述cordyrrole-a(mdl-26)促huvec细胞迁移活性测试

人脐静脉内皮细胞(huvecs)来自深圳大学医学部，由刘宝华教授研究组馈赠。m199培养基和胎牛血清购自gibco公司。收集对数期huvecs细胞，接种于24孔培养板中，每孔14×10⁴个细胞。置于37℃、5％co2条件下培养24h待细胞贴壁后，用1×pbs清洗3次，然后用含0.5％fbs的m199培养基饥饿6小时。饥饿结束后，用p10枪头进行划痕，实验组加入溶有不同药物(终浓度20μm)的m199培养基，空白组加入新鲜的m199培养基，并进行拍照。在37℃、5％co2条件下孵育6h后，用1×pbs清洗3次，加入新鲜的m199培养基，并进行拍照。划痕面积计算用imageproplus6进行。

迁移面积％＝(实验组0h划痕面积-实验组6h划痕面积/空白对照组0h划痕面积-空白组6h划痕面积)×100％

由图1和2可知，化合物cordyrrole-a(mdl-26)在20μm时可显著促进huvecs细胞迁移，表明具有促进创面愈合作用。

技术特征：

技术总结
Cordyrrole‑A及其在创面愈合中的应用，本发明提供了一种促进伤口愈合的Cordyrrole‑A，该化合物为首次从美洲大蠊中分离得到。本发明还提供了一种该化合物从美洲大蠊中提取出来的方法及该化合物的用途；本发明进一步提供了该化合物促进HUVEC细胞迁移方面的活性。

技术研发人员：程永现;刘越飞;向斌;王心龙
受保护的技术使用者：四川好医生攀西药业有限责任公司
技术研发日：2018.10.09
技术公布日：2019.04.19