本发明涉及甘薯叶的深加工领域，尤其是涉及一种甘薯叶抗氧化活性物质。
技术背景
甘薯（学名：dioscoreaesculenta(lour.)burkill）：又名甜薯，旋花科薯蓣属缠绕草质藤本。地下块茎顶分枝末端膨大成卵球形的块茎，外皮淡黄色，光滑。茎左旋，基部有刺，被丁字形柔毛。单叶互生，阔心脏形；雄花序为穗状花序，单生，雄花无梗或具极短的梗；苞片卵形，顶端渐尖；花被浅杯状，被短柔毛；蒴果三棱形，顶端微凹，基部截形，每棱翅状；种子圆形，具翅。花期初夏。甘薯茎叶中含有较丰富的营养成分，是牲畜的上好饲料。据分析，甘薯干茎叶中含粗蛋白0.2%，比干花生秧含量稍高，比干谷草含量高1倍；甘薯秧中粗脂肪的含量为2.6%，比苜蓿草高0.3%，比谷草高0.7%。据报道，甘薯茎顶端15厘米的鲜茎叶，蛋白质含量为2.74%，胡萝卜素每100克为5580国际单位，维生素b2每千克含量为3.5毫克，维生素c每千克为41.07毫克，铁每100克为3.94毫克，钙每100克为74.4毫克，其蛋白质、胡萝卜素、维生素b的含量均比苋菜、莴苣、芥菜叶等为高，维生素的含量也比绿苋菜、莴苣丰富。
现有技术如授权公众号为cn101773593b的中国发明专利，公开了一种甘薯叶抗氧化活性提取物的制备方法，该发明方法将新鲜甘薯叶干燥粉碎，脱色脱脂处理后微波辅助浸提，提取液真空减压浓缩，然后通过柱层析，用大孔树脂进行吸附；收集洗脱液，洗脱液经真空减压浓缩得到甘薯叶提取液，再经喷雾干燥，得到粉末状甘薯叶提取物。终产品为粉末状，具有甘薯叶特有的香味，含有的总酚含量为65～75％，并含有绿原酸、3,5-二咖啡酰奎尼酸。该发明采用废弃的甘薯叶制备具有强抗氧化活性的提取物，变废为宝，是一种绿色产业。但是该发明方法中使用了真空减压、树脂吸附、喷雾干燥等技术，其制备方法繁冗复杂，而且将甘薯叶的抗氧化活性成分中占最高组分的甘薯多糖白白损失掉，不仅造成了浪费，而且其终产物的抗氧化活性也明显降低。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种甘薯叶抗氧化活性物质，甘薯叶抗氧化活性物质对dpph自由基、·oh和·o2-有较强的清除作用，可以作为一种抗氧化活性成分应用于清除体内多余自由基，提取过程可以有效避免活性物质被降解与被错误的分离除去，大大提高了抗氧化活性物质的有效效用成分含量。
本发明针对
背景技术：
中提到的问题，采取的技术方案为：
一种甘薯叶抗氧化活性物质，甘薯叶抗氧化活性物质中甘薯叶多糖含量为62.5～66.8%，多酚类含量为10.6～15.4%，黄酮类含量为5.8～10.2%，甘薯叶抗氧化活性物质对dpph自由基、·oh和·o2-有较强的清除作用，可以有效提高大鼠总抗氧能力、抗氧化酶活性和gsh含量，从而减少自由基对细胞膜脂质的过氧化作用，降低机体mda含量，对肝脏自发性脂质过氧化表现出抑制作用，因而甘薯叶抗氧化活性物质可以作为一种抗氧化活性成分应用于清除体内多余自由基。
作为优选，一种甘薯叶抗氧化活性物质，其制备方法包括：脱脂、提取、脱蛋白、脱色，具体包括以下步骤：
脱脂：选取健康、无腐、不黄的甘薯叶子，清洗干净后晾干，粉碎后过100～140目筛，加入甲醇于75～78℃回流3～5h进行脱脂，抽滤后取滤渣，自然挥干甲醇；按照料液比1:45～50加超纯水混合，在微波功率为350～400w、温度为65～70℃的条件下提取时间45～60min，取滤液即得甘薯叶溶液；以甲醇脱脂不仅大大提高甘薯叶溶液中抗氧化活性物质的含量，有利于其进一步的提取，还可以防止脂类物质对抗氧化物质的污染与降解；高料液比、微波辅助提取，不仅节约了能源，而且降低了提取液的黏度，叶中抗氧化活性物质向溶液扩散速度加快，对传质有利，利于提取；
提取：取甘薯叶溶液，设定超声频率20～25khz、功率400～500w、温度55～60℃的提取条件，每次提取35～45min，浸取三次后合并、蒸发、浓缩滤液；冷却后用无水乙醇稀释静置24～48h，滤出沉淀，干燥后得多糖粗品；超声波的空化效应可以大大强化甘薯叶溶液中组织的解离，可以加快多糖、多酚、黄酮、蛋白质等的扩散，以超声波辅助提取工艺稳定性好、操作简单、成本低、能耗少；
脱蛋白：多糖粗品按照料液比1:30～50与超纯水均匀混溶，在溶液中加入1.2～1.5%的三氯乙酸、0.5～0.6‰的10-樟脑磺酸（csa），振摇30～45min，于1～2℃温度下静置过夜，过滤取上清液低温干燥得甘薯叶多糖；在酸性条件下，三氯乙酸不仅仅具有脱色功能，而且三氯乙酸可以与蛋白质形成不溶性盐进而分离，三氯乙酸还可作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变，暴露出更多的疏水性基团，使之在水溶液中形成变性蛋白质凝胶团聚沉淀，与此同时，多糖、多酚、黄酮类物质可能进入变性蛋白质凝胶而被误分离，在三氯乙酸环境下，溶液中的csa可以作用于变性蛋白质凝胶团，可以有效阻止小分子物质如多糖、多酚、黄酮等抗氧化活性物质进入变性蛋白质凝胶团，降低了抗氧化活性物质随变性蛋白质凝胶被分离除去的量，提高了其含量与纯度；此外csa还可以防止多酚、黄酮被氧化降解，提高抗氧化活性物质的有效效用成分含量；
脱色：向多糖水溶液中加入8.5～10%的药用活性炭粉末与0.2～0.4‰的t-亮氨酸叔丁酯，其中t-亮氨酸叔丁酯中含有12.5～13.0%的l-t-亮氨酸叔丁酯；在30～32℃、3000～4500r/min振荡混合10～15min，脱色完成后，以10000～12000r/min高速离心30～45min，取上清液即得脱色后的多糖水溶液，经低温干燥后即得甘薯叶抗氧化活性物质；甘薯叶抗氧化活性物质中甘薯叶多糖含量为62.5～66.8%，多酚类含量为10.6～15.4%，黄酮类含量为5.8～10.2%；药用活性炭粉末属于亲油性材料，利用活性炭粉末中的毛细管的表面吸附原理来吸附有机色素，可以达到较好的脱色、除浊效果，同时，毛细管的表面吸附作用会吸附部分的甘薯叶多糖，多糖水溶液中的l-t-亮氨酸叔丁酯与d-t-亮氨酸叔丁酯可以与甘薯叶多糖形成共溶体系，通过一系列诸如氢键、团聚、吸附等作用可以大大降低多糖表面的极性、提高多糖的亲水性，使多糖与多糖聚集体远离活性炭的毛细管微孔，从而大大降低多糖被活性炭吸附的量，提高终产物薯叶抗氧化活性物质中的多糖含量。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
1）在酸性条件下，三氯乙酸具有脱色功能，三氯乙酸可以与蛋白质形成不溶性盐进而将其分离，三氯乙酸还可作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变，暴露出更多的疏水性基团，使之在水溶液中形成变性蛋白质凝胶团聚沉淀；
2）在三氯乙酸环境下，溶液中的csa可以有效阻止小分子物质如多糖、多酚、黄酮等进入变性蛋白质凝胶团，降低了抗氧化活性物质随变性蛋白质凝胶被分离除去的量，csa还可以防止多酚、黄酮被氧化降解，提高了其含量与纯度；
3）多糖水溶液中的l-t-亮氨酸叔丁酯与d-t-亮氨酸叔丁酯可以与甘薯叶多糖形成共溶体系，通过一系列诸如氢键、团聚、吸附等作用可以大大降低多糖表面的极性、提高多糖的亲水性，使多糖与多糖聚集体远离活性炭的毛细管微孔，从而大大降低多糖被活性炭吸附的量，提高终产物薯叶抗氧化活性物质中的多糖含量；
4）甘薯叶抗氧化活性物质对dpph自由基、·oh和·o2-有较强的清除作用，可以有效提高大鼠总抗氧能力、抗氧化酶活性和gsh含量，从而减少自由基对细胞膜脂质的过氧化作用，降低机体mda含量，对肝脏自发性脂质过氧化表现出抑制作用，可以作为一种抗氧化活性成分应用于清除体内多余自由基。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
一种甘薯叶抗氧化活性物质，甘薯叶抗氧化活性物质中甘薯叶多糖含量为64.5%，多酚类含量为12.8%，黄酮类含量为8.4%，甘薯叶抗氧化活性物质对dpph自由基、·oh和·o2-有较强的清除作用，可以有效提高大鼠总抗氧能力、抗氧化酶活性和gsh含量，从而减少自由基对细胞膜脂质的过氧化作用，降低机体mda含量，对肝脏自发性脂质过氧化表现出抑制作用，因而甘薯叶抗氧化活性物质可以作为一种抗氧化活性成分应用于清除体内多余自由基。
实施例2：
一种甘薯叶抗氧化活性物质，其制备方法包括以下步骤：
1）选取健康、无腐、不黄的甘薯叶子，清洗干净后晾干，粉碎后过100目筛，加入甲醇于75℃回流3h进行脱脂，抽滤后取滤渣，自然挥干甲醇；按照料液比1:45加超纯水混合，在微波功率为350w、温度为65℃的条件下提取时间45min，取滤液即得甘薯叶溶液；2）取甘薯叶溶液，设定超声频率20khz、功率400w、温度55℃的提取条件，每次提取35min，浸取三次后合并、蒸发、浓缩滤液；冷却后用无水乙醇稀释静置24h，滤出沉淀，干燥后得多糖粗品；3）多糖粗品按照料液比1:30与超纯水均匀混溶，在溶液中加入1.2%的三氯乙酸、0.5‰的10-樟脑磺酸（csa），振摇30min，于1℃温度下静置过夜，过滤取上清液低温干燥得甘薯叶多糖；4）向多糖水溶液中加入8.5%的药用活性炭粉末与0.2‰的t-亮氨酸叔丁酯，其中t-亮氨酸叔丁酯中含有12.5%的l-t-亮氨酸叔丁酯；在30℃、3000r/min振荡混合10min，脱色完成后，以10000r/min高速离心30min，取上清液即得脱色后的多糖水溶液，经低温干燥后即得甘薯叶抗氧化活性物质；甘薯叶抗氧化活性物质中甘薯叶多糖含量为62.5%，多酚类含量为10.6%，黄酮类含量为5.8%。
实施例3：
一种甘薯叶抗氧化活性物质，其制备方法包括以下步骤：
1）脱脂：选取健康、无腐、不黄的甘薯叶子，清洗干净后晾干，粉碎后过140目筛，加入甲醇于78℃回流5h进行脱脂，抽滤后取滤渣，自然挥干甲醇；按照料液比1:50加超纯水混合，在微波功率为400w、温度为70℃的条件下提取时间60min，取滤液即得甘薯叶溶液；以甲醇脱脂不仅大大提高甘薯叶溶液中抗氧化活性物质的含量，有利于其进一步的提取，还可以防止脂类物质对抗氧化物质的污染与降解；
2）提取：取甘薯叶溶液，设定超声频率25khz、功率500w、温度60℃的提取条件，每次提取45min，浸取三次后合并、蒸发、浓缩滤液；冷却后用无水乙醇稀释静置48h，滤出沉淀，干燥后得多糖粗品；以超声波辅助提取工艺稳定性好、操作简单、成本低、能耗少；
3）脱蛋白：多糖粗品按照料液比1:50与超纯水均匀混溶，在溶液中加入1.5%的三氯乙酸、0.6‰的10-樟脑磺酸（csa），振摇45min，于2℃温度下静置过夜，过滤取上清液低温干燥得甘薯叶多糖；在酸性条件下，三氯乙酸不仅仅具有脱色功能，而且三氯乙酸可以与蛋白质形成不溶性盐进而分离，三氯乙酸还可作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变，暴露出更多的疏水性基团，使之在水溶液中形成变性蛋白质凝胶团聚沉淀，与此同时，多糖、多酚、黄酮类物质可能进入变性蛋白质凝胶而被误分离，在三氯乙酸环境下，溶液中的csa可以作用于变性蛋白质凝胶团，可以有效阻止小分子物质如多糖、多酚、黄酮等抗氧化活性物质进入变性蛋白质凝胶团，降低了抗氧化活性物质随变性蛋白质凝胶被分离除去的量，提高了其含量与纯度；此外csa还可以防止多酚、黄酮被氧化降解，提高抗氧化活性物质的有效效用成分含量；
4）脱色：向多糖水溶液中加入10%的药用活性炭粉末与0.4‰的t-亮氨酸叔丁酯，其中t-亮氨酸叔丁酯中含有13.0%的l-t-亮氨酸叔丁酯；在32℃、4500r/min振荡混合15min，脱色完成后，以12000r/min高速离心45min，取上清液即得脱色后的多糖水溶液，经低温干燥后即得甘薯叶抗氧化活性物质；甘薯叶抗氧化活性物质中甘薯叶多糖含量为66.8%，多酚类含量为15.4%，黄酮类含量为10.2%；药用活性炭粉末属于亲油性材料，利用活性炭粉末中的毛细管的表面吸附原理来吸附有机色素，可以达到较好的脱色、除浊效果，同时，毛细管的表面吸附作用会吸附部分的甘薯叶多糖，多糖水溶液中的l-t-亮氨酸叔丁酯与d-t-亮氨酸叔丁酯可以与甘薯叶多糖形成共溶体系，通过一系列诸如氢键、团聚、吸附等作用可以大大降低多糖表面的极性、提高多糖的亲水性，使多糖与多糖聚集体远离活性炭的毛细管微孔，从而大大降低多糖被活性炭吸附的量，提高终产物薯叶抗氧化活性物质中的多糖含量。
实施例4：
一种甘薯叶抗氧化活性物质，甘薯叶抗氧化活性物质中甘薯叶多糖含量为66.2%，多酚类含量为14.5%，黄酮类含量为9.5%，甘薯叶抗氧化活性物质对dpph自由基、·oh和·o2-有较强的清除作用，可以有效提高大鼠总抗氧能力、抗氧化酶活性和gsh含量，从而减少自由基对细胞膜脂质的过氧化作用，降低机体mda含量，对肝脏自发性脂质过氧化表现出抑制作用，因而甘薯叶抗氧化活性物质可以作为一种抗氧化活性成分应用于清除体内多余自由基。
一种甘薯叶抗氧化活性物质，其制备方法包括：脱脂、提取、脱蛋白、脱色，具体包括以下步骤：
脱脂：选取健康、无腐、不黄的甘薯叶子，清洗干净后晾干，粉碎后过120目筛，加入甲醇于76℃回流4h进行脱脂，抽滤后取滤渣，自然挥干甲醇；按照料液比1:48加超纯水混合，在微波功率为360w、温度为68℃的条件下提取时间50min，取滤液即得甘薯叶溶液；以甲醇脱脂不仅大大提高甘薯叶溶液中抗氧化活性物质的含量，有利于其进一步的提取，还可以防止脂类物质对抗氧化物质的污染与降解；高料液比、微波辅助提取，不仅节约了能源，而且降低了提取液的黏度，叶中抗氧化活性物质向溶液扩散速度加快，对传质有利，利于提取；
提取：取甘薯叶溶液，设定超声频率24khz、功率450w、温度58℃的提取条件，每次提取40min，浸取三次后合并、蒸发、浓缩滤液；冷却后用无水乙醇稀释静置36h，滤出沉淀，干燥后得多糖粗品；超声波的空化效应可以大大强化甘薯叶溶液中组织的解离，可以加快多糖、多酚、黄酮、蛋白质等的扩散，以超声波辅助提取工艺稳定性好、操作简单、成本低、能耗少；
脱蛋白：多糖粗品按照料液比1:40与超纯水均匀混溶，在溶液中加入1.4%的三氯乙酸、0.55‰的10-樟脑磺酸（csa），振摇40min，于1℃温度下静置过夜，过滤取上清液低温干燥得甘薯叶多糖；在酸性条件下，三氯乙酸不仅仅具有脱色功能，而且三氯乙酸可以与蛋白质形成不溶性盐进而分离，三氯乙酸还可作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变，暴露出更多的疏水性基团，使之在水溶液中形成变性蛋白质凝胶团聚沉淀，与此同时，多糖、多酚、黄酮类物质可能进入变性蛋白质凝胶而被误分离，在三氯乙酸环境下，溶液中的csa可以作用于变性蛋白质凝胶团，可以有效阻止小分子物质如多糖、多酚、黄酮等抗氧化活性物质进入变性蛋白质凝胶团，降低了抗氧化活性物质随变性蛋白质凝胶被分离除去的量，提高了其含量与纯度；此外csa还可以防止多酚、黄酮被氧化降解，提高抗氧化活性物质的有效效用成分含量；
脱色：向多糖水溶液中加入9%的药用活性炭粉末与0.3‰的t-亮氨酸叔丁酯，其中t-亮氨酸叔丁酯中含有13%的l-t-亮氨酸叔丁酯；在30℃、3500r/min振荡混合12min，脱色完成后，以10500r/min高速离心30min，取上清液即得脱色后的多糖水溶液，经低温干燥后即得甘薯叶抗氧化活性物质；甘薯叶抗氧化活性物质中甘薯叶多糖含量为66.2%，多酚类含量为14.5%，黄酮类含量为9.5%；药用活性炭粉末属于亲油性材料，利用活性炭粉末中的毛细管的表面吸附原理来吸附有机色素，可以达到较好的脱色、除浊效果，同时，毛细管的表面吸附作用会吸附部分的甘薯叶多糖，多糖水溶液中的l-t-亮氨酸叔丁酯与d-t-亮氨酸叔丁酯可以与甘薯叶多糖形成共溶体系，通过一系列诸如氢键、团聚、吸附等作用可以大大降低多糖表面的极性、提高多糖的亲水性，使多糖与多糖聚集体远离活性炭的毛细管微孔，从而大大降低多糖被活性炭吸附的量，提高终产物薯叶抗氧化活性物质中的多糖含量。
实施例5：
dpph自由基清除率测定：
分别取实施例4中的甘薯叶抗氧化活性物质，配制适宜浓度1ml于试管中，配制浓度为1.2×10-4mol/ldpph92%乙醇溶液，加入试管中混合均匀，于黑暗处常温避光反应30min，另取对照组用等量蒸馏水代替样品，空白组用等量乙醇溶液代替dpph溶液，并用vc作为阳性对照，均在波长为517nm的紫外分光光度计下测定吸光度，按以下公式计算自由基清除率（d）：
其中是为ax加样组吸光度，ay为空白组吸光度，ac为对照组吸光度，计算dpph自由基清除率测定结果如表1所示，由表1可知，甘薯叶抗氧化活性物质对dpph自由基具有较强的清除作用，而且其清除率具有剂量依赖性。
表1.dpph自由基清除结果
实施例6：
清除羟自由基(·oh)能力测定：
取pbs缓冲溶液1.50ml，依次加入2.0mmol/l的edta-na-fe(ⅱ)溶液0.7ml，520μg/ml的番红花红t溶液0.20ml，加入实施例4中不同浓度的甘薯叶抗氧化活性物质1.00ml。6%的h2o2溶液0.40ml，用超纯水定容至5.00ml。混合均匀后在37℃水浴中保温30min。在波长520nm处，用分光光度计测其吸光度a。用1.00ml超纯水代替多糖溶液做空白，用1.70ml超纯水代替多糖溶液和edta-na-fe(ⅱ)溶液做对照，计算清除率e%算式如下：
羟自由基清除结果如表2所示，由表2可知，甘薯叶抗氧化活性物质对羟自由基具有较强的清除率，并且其清除效果具有剂量依赖性。
表2.羟自由基清除结果
本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。