本发明涉及一种药物组合物，尤其是治疗冠心病的药物组合物，还涉及该组合物的制备方法和用途。
背景技术：
冠心病是是严重威胁人类健康和生命的常见病、多发病，其是由于脂质代谢不正常，血液中的脂质沉着在原本光滑的动脉内膜上，在动脉内膜一些类似粥样的脂类物质堆积而成白色斑块；这些斑块渐渐增多造成动脉腔狭窄，使血流受阻导致心肌缺血。缺血性心脏病是因为冠脉循环改变引起冠脉血流和心肌需求之间不平衡而导致的心肌损害，其中最常见的原因是冠状动脉粥样硬化引起的冠状动脉狭窄和闭塞，约占缺血性心脏病的90％左右，因此，冠心病隶属于缺血性心脏病，习惯上也将缺血性心脏病成为冠状动脉粥样硬化性心脏病。持续而严重的心肌缺血可导致部分心肌急性坏死，即造成心肌梗死。流行病学研究证实，冠心病是发达国家人口发病与死亡的主要原因，近年来在发展中国家特别是在我国呈现迅速增长的趋势，己成为人群中主要的死亡原因之一。因此，研发药物对本病进行早期预防和治疗，愈显其重要性。
三七总皂苷和红花总黄酮分别单独使用和配伍使用具有抗心肌缺血作用。当三七总皂苷50mg/kg和红花总黄酮200mg/kg配伍时具有更显著的心肌缺血保护作用。韩淑燕等(韩淑燕等，三七总皂苷和红花总黄酮配伍对急性血瘀大鼠血液流变学的改善作用，中国药理学与毒理学杂志，2011年2月第25卷第1期，第62～67页)公开了三七总皂苷50mg/kg和红花总黄酮200mg/kg配伍时对急性血瘀大鼠血液流变学具有改善作用，可用于预防或治疗心肌缺血时血液黏度对心脏所致的损伤。
技术实现要素：
本申请的发明人在研究中发现，在现有的三七总皂苷和红花总黄酮的配比和用量下，对于冠心病的治疗仍然存在诸多问题，如量效关系不好，体内药代动力学参数不理想等。本申请的发明人意外地发现，当降低红花提取物与三七总皂苷的重量配比后，能够实现在更低的剂量下达到更佳的防治冠心病的效果，并且体内药代动力学研究表明该配比能够明显提高三七皂苷中主要成分人参皂苷rb1和人参皂苷rd的体内暴露量，降低其排泄量。在此基础上完成了本发明。
本发明的目的在于提供一种药物组合物，其具有显著的预防或治疗冠心病的作用。
本发明的另一目的在于提供所述药物组合物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供一种预防或治疗冠心病的药物制剂，其包括所述的药物组合物。
本发明的再一目的在于提供所述药物组合物的制药用途。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的。
本发明提供一种用于预防或治疗冠心病的药物组合物，其由红花提取物1重量份和三七总皂苷1.2～1.6重量份组成。
本发明中，优选地，所述药物组合物由红花提取物1重量份和三七总皂苷1.2重量份组成；或者
所述药物组合物由红花提取物1重量份和三七总皂苷1.4重量份组成；或者
所述药物组合物由红花提取物1重量份和三七总皂苷1.6重量份组成。
本发明中，优选地，所述红花提取物中羟基红花黄色素a的含量不低于10wt％，且山奈酚-3-o-芸香糖苷的含量不低于0.2wt％。
本发明还提供所述药物组合物的制备方法，包括将所述红花提取物与所述三七总皂苷混合均匀；
其中，所述红花提取物的制备方法包括如下步骤：
(1)取红花药材，用水作为溶剂提取，得到水提取液；
(2)将所述水提取液浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液上大孔吸附树脂柱；用1～3倍柱体积量的水作为第一洗脱剂洗脱，洗脱液弃去；
(3)用1～4倍柱体积量的30～70vol％的乙醇水溶液作为第二洗脱剂洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到所述红花提取物。
本发明中，优选地，步骤(2)中，所述大孔吸附树脂柱为中等极性或弱极性的大孔吸附树脂柱，所述浓缩液的生药当量与所述大孔吸附树脂的重量比为1:4～8，所述第一洗脱剂的用量为1～3倍柱体积。
本发明中，优选地，步骤(3)中，所述第二洗脱剂为40～60vol％的乙醇水溶液，所述第二洗脱剂的用量为1.5～3倍柱体积。
本发明中，优选地，步骤(1)中，所述提取的方法为加热回流提取法；步骤(2)中，所述浓缩液的生药当量与所述大孔吸附树脂的重量比为1:5，所述第一洗脱剂的用量为1.5倍柱体积；步骤(3)中，所述第二洗脱剂为50vol％的乙醇水溶液，所述第二洗脱剂的用量为2倍柱体积。
本发明还提供一种预防或治疗冠心病的药物制剂，其包括上述的药物组合物和药学上可接受的辅料。
本发明中，优选地，单位剂量的所述药物制剂中包括18～85mg红花提取物和22～100mg三七总皂苷。
本发明还提供所述药物组合物用于制备预防或治疗冠心病的药物的用途。
本发明将红花提取物与三七总皂苷的用量配比控制在合适的范围，能够明显促进有效成分的吸收，并实现在更低的剂量下达到更佳的防治冠心病的效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
＜药物组合物＞
本发明中，三七总皂苷的含量略高于红花提取物的含量。本发明的药物组合物由红花提取物1重量份和三七总皂苷1.2～1.6重量份组成。本发明中，优选地，所述药物组合物由红花提取物1重量份和三七总皂苷1.2重量份组成；或者所述药物组合物由红花提取物1重量份和三七总皂苷1.4重量份组成；或者所述药物组合物由红花提取物1重量份和三七总皂苷1.6重量份组成。
本发明中，所述三七总皂苷符合《中国药典》2015版一部“三七总皂苷”项下的规定；所述红花提取物中羟基红花黄色素a的含量不低于10wt％，且山奈酚-3-o-芸香糖苷的含量不低于0.2wt％。
在本发明药物组合物的配比范围内，能够明显促进有效成分的吸收，对冠心病的治疗效果更佳；更为重要的是，在本发明的药物组合物的配比下，采用更低的剂量即可达到更好的治疗冠心病的效果，即药效剂量得到了显著降低。
＜药物组合物的制备方法＞
本发明的药物组合物的制备方法，包括将所述红花提取物与所述三七总皂苷混合均匀。
本发明中，红花提取物的制备方法也在原有方法基础上进行了改进，特别是能够保证其中山奈酚-3-o-芸香糖苷的含量不低于0.2wt％。具体地，本发明的红花提取物的制备方法包括如下步骤：
(1)取红花药材，用水作为溶剂提取，得到水提取液；
(2)将所述水提取液浓缩，得到浓缩液，将所述浓缩液上大孔吸附树脂柱；用1～3倍柱体积量的水作为第一洗脱剂洗脱，洗脱液弃去；
(3)用1～4倍柱体积量的30～70vol％的乙醇水溶液作为第二洗脱剂洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到所述红花提取物。
本发明中，优选地，步骤(1)中，所述提取选自加热回流提取法、超声提取法或水煎煮法，并优选为加热回流提取法。优选地，提取次数为1～4次，每次提取时间为0.5～2小时，每次加水量为红花药材重量的5～15倍。优选地，提取次数为2～3次，每次提取时间为0.5～1小时，每次加水量为红花药材重量的8～12倍。
本发明中，优选地，步骤(2)中，所述大孔树脂树脂柱为中等极性或弱极性的大孔吸附树脂柱，例如为d101型、ab-8型、nka9型、d201型大孔吸附树脂柱等。根据本发明特别优选的实施方式，所述大孔吸附树脂柱为d101型大孔吸附树脂柱或ab-8型大孔吸附树脂柱。优选地，所述浓缩液的生药当量与所述大孔吸附树脂的重量比为1:4～8，更优选为1:4～6，更优选为1:4.5～5.5。所述第一洗脱剂的用量为1～3倍柱体积，更优选为1.2～2.5倍柱体积，再优选为1.5～2倍柱体积。本发明中，所述浓缩液的生药当量是指所述浓缩液相当于生药的重量。
本发明中，优选地，步骤(3)中，所述第二洗脱剂为40～60vol％的乙醇水溶液，更优选为45～55vol％的乙醇水溶液。所述第二洗脱剂的用量为1.5～3倍柱体积，更优选为1.5～2.5倍柱体积，再优选为2～2.5倍柱体积。优选地，所述干燥的方法为喷雾干燥。
采用本发明的上述制备方法，能够保证制得的红花提取物中羟基红花黄色素a的含量不低于10wt％，且同时山奈酚-3-o-芸香糖苷的含量不低于0.2wt％。
＜药物制剂＞
本发明的预防或治疗冠心病的药物制剂包括上述的药物组合物和药学上可接受的辅料。根据本发明的一个实施方式，所述药物制剂中仅包含所述中药组合物作为药用活性组分，而不包含其他药用活性组分。所述制剂的剂型不限，例如可以为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、液体口服制剂、注射剂、喷雾剂、栓剂等。
本发明中，优选地，每单位剂量的药物制剂中包括18～85mg红花提取物和22～100mg三七总皂苷，且红花提取物与三七总皂苷的重量比为1：1.2～1.6。更优选地，每单位剂量的药物制剂中包括20.5～82mg红花提取物和24.5～98mg三七总皂苷，更优选每单位剂量的药物制剂中包括41～82mg红花提取物和49～98mg三七总皂苷。根据本发明一个优选的实施方式，每单位剂量的药物制剂中包括20.5mg红花提取物和24.5mg三七总皂苷。根据本发明另一个优选的实施方式，每单位剂量的药物制剂中包括41mg红花提取物和49mg三七总皂苷。根据本发明再一个优选的实施方式，每单位剂量的药物制剂中包括82mg红花提取物和98mg三七总皂苷。本发明中，所述每单位剂量的药物制剂是指例如每个片剂、每个胶囊剂、每包颗粒剂等。根据本发明的研究成果，采用本发明的单位剂量时，计量精确且更便于患者服用。
＜制药用途＞
缺血性心脏病是由于冠脉循环改变引起冠脉血流和心肌需求之间不平衡而导致的心肌损害，其中最常见的原因是冠状动脉粥样硬化引起的冠状动脉狭窄和闭塞，约占缺血性心脏病的90％左右，因此，冠心病隶属于缺血性心脏病，习惯上也将缺血性心脏病作为冠状动脉粥样硬化性心脏病。本发明还提供所述中药组合物用于制备预防或治疗缺血性心脏病的药物的用途。优选地，本发明提供所述中药组合物用于制备预防或治疗冠心病的药物的用途。
以下通过具体实施例和实验例来详细说明本发明的实施方式和技术效果。以下实施例中，三七总皂苷的质量标准符合《中国药典》2015版一部“三七总皂苷”项下规定。
制备例1-红花提取物的制备
(1)取红花药材，用水作为溶剂加热回流提取2次，每次加水量依次为红花药材重量的15倍量、10倍量，每次提取时间依次为2小时、1小时，过滤，合并滤液，得到水提取液；
(2)将所述水提取液浓缩，得到浓缩液；将所述浓缩液上ab-8型大孔吸附树脂柱，浓缩液按照生药量计与大孔吸附树脂的重量比为1:7；然后用3倍柱体积量的水作为第一洗脱剂洗脱，洗脱液弃去；
(3)再用3倍柱体积的70vol％的乙醇水溶液作为第二洗脱剂洗脱，收集洗脱液，浓缩，喷雾干燥，得到红花提取物，含羟基红花黄色素a为13.5％，且含山奈酚-3-o-芸香糖苷的含量为0.27wt％。
制备例2-红花提取物的制备
(1)取红花药材，用水作为溶剂加热回流提取3次，每次加水量依次为红花药材重量的10倍量、8倍量、8倍量，每次提取时间依次为1.5小时、1小时、1小时，过滤，合并滤液，得到水提取液；
(2)将所述水提取液浓缩，得到浓缩液；将所述浓缩液上d101型大孔吸附树脂柱，浓缩液按照生药量计与d101型大孔吸附树脂的重量比为1:5；然后用1.5倍柱体积量的水作为第一洗脱剂洗脱，洗脱液弃去；
(3)再用2倍柱体积的50vol％的乙醇水溶液作为第二洗脱剂洗脱，收集洗脱液，浓缩，喷雾干燥，得到红花提取物，含羟基红花黄色素a为11.2％，且含山奈酚-3-o-芸香糖苷的含量为0.21wt％。
制备例3-红花提取物的制备
(1)取红花药材，用水作为溶剂加热回流提取2次，每次加水量依次为红花药材重量的12倍量、10倍量，每次提取时间依次为2小时、1小时，过滤，合并滤液，得到水提取液；
(2)将所述水提取液浓缩，得到浓缩液；将所述浓缩液上ab-8型大孔吸附树脂柱，浓缩液按照生药量计与大孔吸附树脂的重量比为1:5.5；然后用2倍柱体积量的水作为第一洗脱剂洗脱，洗脱液弃去；
(3)再用2.5倍柱体积的55vol％的乙醇水溶液作为第二洗脱剂洗脱，收集洗脱液，浓缩，喷雾干燥，得到红花提取物，含羟基红花黄色素a为12.8％，且含山奈酚-3-o-芸香糖苷的含量为0.24wt％。
实施例1
取制备例2的红花提取物1重量份与三七总皂苷1.2重量份，混合均匀，得到药物组合物a。
实施例2
取制备例3的红花提取物1重量份与三七总皂苷1.4重量份，混合均匀，得到药物组合物b。
实施例3
取制备例1的红花提取物1重量份与三七总皂苷1.6重量份，混合均匀，得到药物组合物c。
实施例4
取实施例1的药物组合物a，加入麦芽糊精、糖粉及淀粉适量，制成颗粒剂，每包颗粒剂含有90mg的实施例1的药物组合物。
实施例5
取实施例1的药物组合物a，加入麦芽糊精、糖粉及淀粉适量，制成颗粒剂，每包颗粒剂含有45mg的实施例1的药物组合物。
实施例6
取实施例1的药物组合物a，加入麦芽糊精、糖粉及淀粉适量，制成颗粒剂，每包颗粒剂含有180mg的实施例1的药物组合物。
实施例7
取实施例2的药物组合物b，加入可压性淀粉、微晶纤维素和少量硬脂酸镁，压片，得到片剂，每片含有98.4mg所述药物组合物。
实施例8
取实施例2的药物组合物b，加入可压性淀粉、微晶纤维素和少量硬脂酸镁，压片，得到片剂，每片含有60mg所述药物组合物。
实施例9
取实施例3的药物组合物c，加入可压性淀粉、微晶纤维素和少量硬脂酸镁，压片，得到片剂，每片含有106.6mg所述药物组合物。
实施例10
取实施例3的药物组合物c，加入可压性淀粉、微晶纤维素和少量硬脂酸镁，压片，得到片剂，每片含有110mg所述药物组合物。
对比例1
取制备例2的红花提取物200重量份与三七总皂苷50重量份，混合均匀，得到药物组合物d1。
实验例1
通过如下药理试验验证了本发明药物组合物的治疗冠心病的作用。
1.试验方法
1.1试验动物及造模方法
试验动物采用sd大鼠，体重200±20g，购于北京大学医学部实验动物中心。采用冠脉结扎致大鼠急性心肌缺血模型。造模方法为：大鼠灌胃给药后，用10％水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，经口插气管，连接动物呼吸机，呼吸频率60次/min，潮气量6ml。于左侧第四肋间开胸，用6/0丝线在肺动脉圆锥和左心耳交界下缘1～2mm结扎。假手术组的制备方法为：仅在左前降支相应位置穿针而不打结，其余操作与上述手术组相同。手术后观察10min，挤出胸腔内空气并逐层关胸，恢复大鼠自主呼吸，拔出气管插管并清除气管内分泌物，给予饲料和水喂养24h。
1.2试验动物分组
将52只sd大鼠随机分为5组，分别为模型组、地尔硫卓组、本发明药物组合物a组(以下简称a组)、本发明药物组合物c组(以下简称c组)和对比例1药物组合物d1组(以下简称d1组)，其中模型组12只，其他各组每组10只，雌雄各半。另设假手术组作为对照组，10只，雌雄各半。上述地尔硫卓组、a组、c组和d1组分别于造模前30min按剂量分别灌胃给药一次，造模后6小时再灌胃给药一次。模型组、假手术组灌胃给予等量饮用水。
给药剂量如下：地尔硫卓组每次灌胃地尔硫卓36mg/kg、a组每次灌胃实施例1的本发明药物组合物a110mg/kg，c组每次灌胃实施例3的本发明药物组合物c130mg/kg，d1组每次灌胃对比例1的药物组合物d1250mg/kg。给药容积均为1ml/100g体重。
1.3观察指标
1.3.1心肌梗死范围的测量
试验结束后，动物处死，取出心脏，用生理盐水洗净称重，将心肌从结扎线下切成5份，用1％ttc磷酸盐缓冲液在空气震荡浴中37℃染色，非梗塞区呈鲜红色，梗塞区呈黄白色。用图像分析软件image-pro分析，心肌梗死体积占心肌总体积的百分比表示心肌梗塞的范围。
1.3.2心肌酶活性检测
经腹主动脉取血后，将血液静置约2h，4℃低温离心(3000r/min)15min，取血清，-20℃保存。按试剂盒说明书测定ldh、ck、alt、ast活性。
1.4试验结果
相比于模型组，地尔硫卓组、本发明a组和c组的大鼠脑梗死体积明显减小。本发明a组和c组能够在更低的药效剂量下显示更好的改善急性心肌缺血的作用。结果见表1。
表1各组对冠脉结扎大鼠心梗范围的影响
注：与对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01
实验例2
在实验例1的基础上，进一步对本发明药物组合物a的量效关系进行了考察。
将52只sd大鼠随机分为5组，分别为模型组、通心络胶囊组、本发明实施例1的药物组合物a1～a3组(以下简称a1～a3组)，每组雌雄各半。另设假手术组作为对照，雌雄各半。上述地尔硫卓组、a1～a3组分别于造模前30min按剂量分别灌胃给药一次，造模后6小时再灌胃给药一次。模型组、假手术组灌胃给予等量饮用水。
给药剂量如下：通心络胶囊组每次灌胃通心络胶囊312mg/kg、a1组每次灌胃实施例1的本发明药物组合物a110mg/kg，a2组每次灌胃实施例1的本发明药物组合物a55mg/kg，a3组每次灌胃实施例1的本发明药物组合物a27.5mg/kg。给药容积均为1ml/100g体重。
本实验例中，试验动物、造模方法、观察指标与实验例1相同。
试验结果见表2。由表2可以看出，本发明药物组合物a的各剂量组均可不同程度地减少大鼠心脏梗塞范围，其中a1、a2两个剂量组效果明显。
表2不同剂量组对冠脉结扎大鼠心梗范围的影响
注:与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01
实验例3
1.试验方法
1.1试验动物
雄性sd大鼠，体重200g±20g，购于北京大学医学部实验动物中心。雄性sd大鼠12只，随机分为两组，每组6只。正常饲养3天，实验前24h禁食，自由饮水。
1.2试验方法
将试验动物灌胃给予上述试验药品，试验组给药量为92mg/kg(三七总皂苷50mg/kg+红花提取物42mg/kg)，对照组给药量为250mg/kg(三七总皂苷50mg/kg+红花提取物200mg/kg)。分别于给药后0.083h、0.25h、0.5h、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h、36h、48h进行眼底静脉丛取血0.5ml。血样置于10％肝素钠溶液浸润后的离心管中，于4℃离心，离心速度为6000rpm，离心时间为10min，分离血浆，储存于-70℃，备用。采用rplc-mrm-ms法同时测定大鼠血浆中人参皂苷rb1和人参皂苷rd的浓度。
1.3试验结果
对血浆中人参皂苷rb1和人参皂苷rd的浓度采用das药学与统计软件进行处理，计算药动学参数。人参皂苷rb1和人参皂苷rd在大鼠体内的药代动力学参数分别见表3和表4。
表3人参皂苷rb1在大鼠体内的药代动力学参数
注：与对照组比较，*p＜0.05。
表4人参皂苷rd在大鼠体内的药代动力学参数
注：与对照组比较，*p＜0.05
结果显示，试验组给药后，人参皂苷rb1的auc值显著提高(p<0.05)，mrt值相对增高，vz和clz降低；而人参皂苷rd的auc、mrt均显著提高(p<0.05)，vz和clz均显著降低(p<0.05)，说明试验组给药减弱了人参皂苷rb1和人参皂苷rd的消除，增加了机体对人参皂苷rb1和人参皂苷rd的吸收。
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。