一种党参炔苷类似化合物在制备治疗心率失常药物中的应用的制作方法

本发明属于中医药领域，具体涉及一种党参炔苷类似化合物在制备治疗心率失常药物中的应用。

背景技术：

心律失常是心血管系统最常见的病症之一，同时是心源性猝死的主要诱因。心律失常可独立发病，也可继发于各种心血管疾病，心衰患者常伴随有心律失常。心律失常是一类涉及多环节、多因素的复杂性疾病，现有的临床治疗方法以手术和药物为主。药物治疗主要应用抗心律失常药和抗凝药，其中抗心律失常药分为i、ii、iii、iv四类，主要为各类离子通道阻滞剂和β肾上腺素受体阻滞药。而常用的抗心律失常药物同时伴有致心律失常的副作用，因此临床使用的效率有限。中药党参是桔梗科植物党参codonopsispilosula(franch.)nannf.、素花党参codonopsispilosulanannf.var.modesta(nannf.)l.t.shen或川党参codonopsistangshenoliv.等的干燥根。党参始记载于《本草从新》，味甘，性平，归脾、肺经。补中益气，健脾益肺。主治脾肺虚弱，气短心悸，食少便溏，虚喘咳嗽，内热消渴，一般虚症可代替人参使用。据现代药学研究，党参中主要包含多种糖类、酚类、甾醇、皂苷及微量生物碱，具有增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用。但其主要的药效成分尚不明了，故相关研究工作亟待加强。

但到目前为止，国内外对该属党参植物的化学成分的提取和药理研究工作主要集中在多糖，皂苷等有效部位研究较多，而且对党参中单一有效化学成分的作用机制尚未揭示，以及有关其药理活性的物质基础还不明确。目前还没有发现任何有关党参炔苷类似化合物具有治疗心律失常功效的报道。

技术实现要素：

本发明目的在于提供一种党参炔苷类似化合物在制备治疗心率失常药物中的应用。本发明提供一种高效稳定的党参炔苷类似化合物的提取分离方法，采用该方法获得含量纯度较高的党参炔苷类似化合物。经药理实验证明，该化合物具有心肌保护和抗心律失常的作用。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明党参炔苷类似化合物在制备抗心律失常或心肌保护药物中的用途，所述类似化合物的结构式如式(i)所示。

本发明党参炔苷类似化合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤实现：

⑴、将党参苷提取物，加入纯水超声溶解提取，经中压反相硅胶柱层析系统分离制备，分别以纯水、20％、40％、60％、80％、100％乙醇-水洗脱3个柱体积，分别收集上述不同浓度的洗脱液，进行浓缩，备用；

⑵、再取步骤⑴中40％洗脱浓缩液，再经20％、22％、24％、26％、28％、30％、100％乙醇-水洗脱3个柱体积，分别收集洗脱液得到浓缩液，

⑶、再取步骤⑵中22％、24％、26％洗脱得到浓缩液，再以高效制备液相进行纯化，所采用水(a)-乙腈(b)为流动相梯度洗脱，随后经浓缩冻干，得到党参炔苷类似化合物。

所述的党参炔苷类似化合物的制备方法，所述制备方法步骤⑶中流动相梯度的色谱条件为：梯度系统比例为0-5min，20％b；5-30min，20-25％b；30-40min，25-27％b；40-50min，27-95％b；50-60min，95％b，流速6～10ml/min。

所述的炔醇类化合物在制备治疗心律失常中的应用，所述党参炔苷类似化合物按照常规制剂工艺制备得到的常规口服制剂包括滴丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂。

为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂、矫味剂、基质等。填充剂包括：淀粉、乳糖、甘露醇、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、滑石粉、二氧化硅等；粘合剂包括：淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠等；基质包括：peg6000，peg4000，硬脂酸等。

本发明党参炔苷类似化合物具体化学成分和结构如下：

本发明化合物lobetyolinin为淡黄色油状物。分子式为c26h38o13。紫外谱图显示λmax(ch3oh)为270nm。以上化合物，到目前为止，尚未发现相关的专利或者药理活性相关文献报道，是该化合物全新的活性研究。

本发明党参炔苷类似化合物的有益效果为：

本项目研究从传统的中药党参药材提取物中分离得到一种含量纯度较高的党参炔苷类似化合物。本发明还提供党参炔苷类似化合物的制备方法，通过不同纯水、20％、40％、60％、80％、100％乙醇进行梯度洗脱，从而优选确定40％乙醇洗脱浓缩液组分，又经22％、24％、26％乙醇进行洗脱，经过大量的试验条件摸索寻找到最佳的制备液相的色谱条件：梯度系统比例为0-5min，20％b；5-30min，20-25％b；30-40min，25-27％b；40-50min，27-95％b；50-60min，95％b，流速6～10ml/min。采用上述色谱条件分离而制得活性成分较高的lobetyolinin化合物，该有效成分结构明确，且药理药效试验研究表明，本发明所述的党参炔苷类似物(lobetyolinin)对斑马鱼造心律失常后的心率具有保护作用，从而进一步表明，其具有心肌保护和抗心律失常的作用。

本发明所提供的党参炔苷类似化合物制备方法，该方法操作简单可靠，可应用工艺化大生产中，并可以作为临床治疗心率失常的药物进行使用，具有广阔的市场应用前景。

为了更加充分理解本发明的实施，下面通过典型的实施例对本发明做进一步的说明。

以下及通过药效学试验，证明本发明中药活性成分的有益的治疗效果。

附图说明

图1，党参苷提取物质谱分析；

图2，党参苷提取物22％，24％，26％，28％洗脱部分色谱分析图；

图3，党参炔苷类似化合物质谱分析结果，上为总离子流(tic)谱图，下为提离子(603)(sim)谱图；

图4，特非那定对斑马鱼胚胎心率的影响，其中(a)cmlc2-gfp斑马鱼荧光拍摄下示意图，(b)不同浓度特非那定对斑马鱼胚胎心率的影响。

图5，党参炔苷和党参炔苷类似化合物对心脏损伤后斑马鱼胚胎心率的恢复活性示意图；

图6，党参炔苷类似化合物对斑马鱼成鱼经特非那定造模后ecg的影响。

具体实施方式

下面将结合附图和实施例进一步说明本发明的实质内容及有益效果，该实施例仅用于说明本发明而非对本发明的限制。

实施例1党参炔苷类似化合物(化合物lobetyolinin)的提取分离方法：

将市售党参苷提取物(道斯夫，南京)提取物8g，以40ml纯水超声溶解提取物，经中压反相硅胶柱层析(350ml柱体积)配瑞士buchi泵控制系统(pumpmanagerc-615，pumpmodulec-601)进行分离制备，分别以纯水、20％、40％、60％、80％、100％乙醇洗脱3个柱体积，分别收集并浓缩。其中40％洗脱液再经20％、22％、24％、26％、28％、30％、100％乙醇洗脱3个柱体积，分别收集浓缩得到浓缩液。根据液相谱图(参见附图1)，化合物lobetyolinin主要集中于22％、24％、26％洗脱部分，因此将22％、24％、26％洗脱部分再以高效制备液相(岛津，日本)配半制备柱(zobarxsb-c18，21.2×250mm，agilent)纯化，水(a)-乙腈(b)为流动相梯度洗脱，梯度为0-5min，20％b；5-30min，20-25％b；30-40，25-27％b；40-50，27-95％b；50-60min，95％b，流速8ml/min，根据紫外吸收峰收集，随后进行浓缩冻干，经质谱及核磁分析鉴定，得到化合物lobetyolinin10mg左右。

化合物lobetyolinin的¹h-nmr和¹³c-nmr数据见下表1：

表1化合物ⅰ的nmr数据(500和125mhz,meod，δppm)：

实施例2化合物党参炔苷和lobetyolinin在抗心律失常活性相关实验：

2.1、药品、试剂、动物及仪器：

上述分离所得的化合物lobetyolinin；cmlc2-gfp转基因斑马鱼；n-phenylthiourea(ptu)和tricaine；特非那定；leica3000b荧光倒置显微镜；ix-100f斑马鱼ecg记录系统。

2.2、斑马鱼心律失常模型建立

cmlc2-gfp转基因斑马鱼为心脏特异性标记绿色荧光蛋白的转基因品系。取杂合cmlc2-gfp转基因斑马鱼雌性和雄性数对，配种后收取胚胎，28℃恒温培养。发育24小时后在荧光显微镜下挑选带有荧光的胚胎，进行破膜和分组处理，每组胚胎8-10枚，加ptu抑制色斑生成，28℃恒温培养。发育48小时后，可选择水中加入化合物进行预孵育。发育72小时后，加入药物特非那定15μm处理2小时造模。化合物仍同时孵育。

2.3、心率记录

造模后，胚胎经tricaine麻醉后移入96孔黑板进行荧光下观察和记录，荧光设定参数为曝光时间0.05s，像素大小4×4。记录时间5s，记录连续图片100张。对心脏跳动次数进行计数，换算心率。

2.4、斑马鱼成鱼ecg记录

斑马鱼成鱼给与特非那定25μm泡水1小时后，经tricaine麻醉，仰卧位由ix-100f斑马鱼ecg记录系统记录心电图。

实验结果：

从附图4的实验结果可知，对72hpf(受精后72小时)的斑马鱼进行不同浓度特非那定处理，可观察到心脏的结构没有收到影响，而心率随着浓度的增加而降低。造模浓度选择了15μm。

由附图5中所显示的实验结果可知，对于斑马鱼胚胎而言，采用党参炔苷和lobetyolinin予以给药预保护，于48hpf时加药孵育，直到造模损伤结束。结果显示，经药物保护后，斑马鱼胚胎的心率与造模组相比得到一定恢复。lobetyolinin的效果稍好于党参炔苷。每组统计8枚胚胎。

本实验采用本发明党参炔苷类似物lobetyolinin采取共同孵育，与造模药特非那定同时孵育。造模2小时后对斑马鱼进行ecg的测定。从附图6结果显示，特非那定显著降低了心率，化合物孵育后能一定程度恢复。统计至少3条鱼。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。