靶向TSPO磁共振成像造影剂及其制备方法与流程

本发明涉及一种磁共振造影剂，特别是涉及一种靶向tspo磁共振成像造影剂及其制备方法。

背景技术：

磁共振成像（mri）具有空间分辨率高，软组织分辨率好，清晰地显示病灶周围软组织结，且重复性好等优点，已成为临床重要检查手段之一。目前临床上常用的钆造影剂因无靶向性，存在着特异性差等缺陷，因此研制靶向性mri造影剂已为该领域研究的热点。外周型苯二氮卓受体转运蛋白（tspo）在炎症细胞（活化巨噬细胞）中呈现高表达水平。tspo表达量在一定程度上可以反映巨噬细胞聚集及激活程度，进而反映出炎症活动的过程。目前靶向tspo的分子影像探针大多为放射性核素（¹⁸f或^99mtc）标记的行pet或spect显像，pet或spect显像存在着空间分辨率低，软组织分辨率差和放射性等缺陷，因此开发靶向tspo磁共振成像造影剂有着极其重要的意义。

技术实现要素：

本发明目的在于克服现有技术的上述缺陷，提供一种显像空间分辨率高，软组织分辨率好的靶向tspo磁共振成像造影剂，本发明目的还在于提供其制备方法。

为实现上述目的，本发明靶向tspo磁共振成像造影剂，其特别之处在于由下列步骤制成的cb86-dtpaa-gd。

步骤（一）cb86-dtpaa的制备：1）向置于磁力加热搅拌器上并用锡箔纸包住瓶身的茄形瓶加入dmso，并加入dtpaa，另将cb86分次缓慢加入茄形瓶，并且要边加边搅拌，必要时进行超声助溶；2）向茄形瓶加入三乙胺，用封口膜包紧瓶口或用瓶塞塞紧，并于磁力加热搅拌器上避光反应；3）冻干：先将茄形瓶放入冰箱冻干过夜，次日取出置于冻干机上脱水，待冻干后重新溶于纯水，继续冻干过夜，反复多次制得粉末；4.）纯化：活化c18小柱后，（1）将步骤3）中的粉末溶于naoh溶液，超声助溶，每次抽取，打入活化后的c18小柱，后用空气冲一次；（2）取na2co3溶液，冲洗前步骤的c18小柱；（3）纯水冲洗一次前步骤的c18小柱，再用空气冲一次，弃去滤液；（4）无水乙醇，冲洗前步骤的c18小柱，空气复冲，收集乙醇液体于离心管；（5）将收集到的乙醇淋洗液分批次加入青霉素小瓶，用旋蒸仪蒸干，得到cb86-dtpaa粉末。

步骤（二）纯化后的cb86-dtpaa连接钆：1）向上述制备的cb86-dtpaa粉末中加入三氯化钆，溶解于pbs中，搅拌过夜；2）经纯化后，旋蒸得到终产物cb86-dtpaa-gd。经纯化是经上述步骤（一）纯化方法纯化。具有显像空间分辨率高，软组织分辨率好，且无放射性的优点。

作为优化，所述cb86-dtpaa制备的步骤1）是：备50ml茄形瓶一个，并用锡箔纸包住瓶身，置于磁力加热搅拌器上；加入5mldmso，并避光下加入800mgdtpaa，另称量200mgcb86，分次缓慢倒入50ml茄形瓶，注意需缓慢地滴入，并且要边滴边旋转，必要时可以超声助溶。

所述纯化后的cb86-dtpaa连接钆的步骤1）是将上述制备的cb86-dtpaa粉末按5:1的比例向其中加入三氯化钆，溶解于ph为7.4-8.0的pbs中，1200rpm搅拌过夜。

作为优化，cb86-dtpaa制备的步骤2）是：向茄形瓶加入300ul的三乙胺，用封口膜包紧瓶口或用瓶塞塞紧，于磁力加热搅拌器上避光反应24h-36h。

作为优化，cb86-dtpaa制备的步骤3）是冻干:先将茄形瓶放入-80℃冰箱冻干过夜，次日取出置于冻干机上脱水，待冻干后重新溶于20ml纯水，继续冻干过夜，反复3次得粉末。

作为优化，cb86-dtpaa制备的步骤4）中的活化c18小柱是：10ml无水酒精一次，10ml水一次，空气一次，把水分冲出。

作为优化，所述cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（1）是：将步骤3）中的粉末按20mg：10ml的比例溶于1mmol/l的naoh，超声助溶，每次抽取5-10ml，打入活化后的c18小柱，后用空气冲一次。

作为优化，cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（2）是：注射器取1mmol/l的na2co3溶液10ml，冲洗前步骤的c18小柱。

作为优化，cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（3）是：纯水10ml冲洗一次前步骤的c18小柱，再用空气冲一次，弃去滤液。

作为优化，cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（4）是：无水乙醇5ml，冲洗前步骤的c18小柱，空气复冲，收集乙醇液体于50ml离心管。

作为优化，步骤（二）中的步骤2）经上述步骤一的纯化方法纯化是纯化步骤参照步骤（一）中的c、d、e，旋蒸后得到终产物cb86-dtpaa-gd。具体是：用注射器抽取50ml茄形瓶中cb86-dtpaa与gdcl3反应后的溶液5ml，注入到活化的c18小柱中，然后用10ml的纯水冲洗c18小柱一次，再用空气复冲一次，弃去滤液，再用5ml的无水乙醇接着冲洗c18小柱，用青霉素小瓶收集无水乙醇淋洗液，置于旋蒸仪上旋蒸，得到粉末即为终产物cb86-dtpaa-gd。

本发明所述靶向tspo磁共振成像造影剂的制备方法，其特别之处在于步骤如下。

（一）cb86-dtpaa的制备：1）向置于磁力加热搅拌器上并用锡箔纸包住瓶身的茄形瓶加入dmso，并加入dtpaa，另将cb86分次缓慢加入茄形瓶，并且要边加边搅拌，必要时进行超声助溶；2）向茄形瓶加入三乙胺，用封口膜包紧瓶口或用瓶塞塞紧，并于磁力加热搅拌器上避光反应；3）冻干：先将茄形瓶放入冰箱冻干过夜，次日取出置于冻干机上脱水，待冻干后重新溶于纯水，继续冻干过夜，反复多次得粉末；4.）纯化：活化c18小柱后，（1）将步骤3）中的粉末溶于naoh溶液，超声助溶，每次抽取，打入c18小柱，后用空气冲一次；（2）取na2co3溶液，冲洗前步骤的c18小柱；（3）纯水冲洗一次前步骤的c18小柱，再用空气冲一次，弃去滤液；（4）无水乙醇，冲洗前步骤的c18小柱，空气复冲，收集乙醇液体于离心管；（5）将收集到的乙醇淋洗液分批次加入青霉素小瓶，用旋蒸仪蒸干，得到cb86-dtpaa粉末。

（二）纯化后的cb86-dtpaa连接钆：1）向上述制备的cb86-dtpaa粉末中加入三氯化钆，溶解于pbs中，搅拌过夜；2）经纯化后，旋蒸得到终产物cb86-dtpaa-gd。经纯化是经上述步骤（一）纯化方法纯化。

作为优化，所述cb86-dtpaa制备的步骤1）是：备50ml茄形瓶一个，并用锡箔纸包住瓶身，置于磁力加热搅拌器上；加入5mldmso，并避光下加入800mgdtpaa，另称量200mgcb86，分次缓慢倒入50ml茄形瓶，注意需缓慢地滴入，并且要边滴边旋转，必要时可以超声助溶。

所述纯化后的cb86-dtpaa连接钆的步骤1）是将上述制备的cb86-dtpaa粉末按5:1的比例向其中加入三氯化钆，溶解于ph为7.4-8.0的pbs中，1200rpm搅拌过夜。

作为优化，cb86-dtpaa制备的步骤2）是：向茄形瓶加入300ul的三乙胺，用封口膜包紧瓶口或用瓶塞塞紧，于磁力加热搅拌器上避光反应24h-36h。

作为优化，cb86-dtpaa制备的步骤3）是冻干:先将茄形瓶放入-80℃冰箱冻干过夜，次日取出置于冻干机上脱水，待冻干后重新溶于20ml纯水，继续冻干过夜，反复3次得粉末。

作为优化，cb86-dtpaa制备的步骤4）中的活化c18小柱是：10ml无水酒精一次，10ml水一次，空气一次，把水分冲出。

作为优化，所述cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（1）是：将步骤3）中的粉末按20mg：10ml的比例溶于1mmol/l的naoh，超声助溶，每次抽取5-10ml，打入活化后的c18小柱，后用空气冲一次。

作为优化，cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（2）是：注射器取1mmol/l的na2co3溶液10ml，冲洗前步骤的c18小柱。

作为优化，cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（3）是：纯水10ml冲洗一次前步骤的c18小柱，再用空气冲一次，弃去滤液。

作为优化，cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（4）是：无水乙醇5ml，冲洗前步骤的c18小柱，空气复冲，收集乙醇液体于50ml离心管。

作为优化，步骤（二）中的步骤2）经上述步骤一的纯化方法纯化是纯化步骤参照步骤（一）中的c、d、e，旋蒸后得到终产物cb86-dtpaa-gd。具体是：用注射器抽取50ml茄形瓶中cb86-dtpaa与gdcl3反应后的溶液5ml，注入到活化的c18小柱中，然后用10ml的纯水冲洗c18小柱一次，再用空气复冲一次，弃去滤液，再用5ml的无水乙醇接着冲洗c18小柱，用青霉素小瓶收集无水乙醇淋洗液，置于旋蒸仪上旋蒸，得到粉末即为终产物cb86-dtpaa-gd。

采用上述技术方案后，本发明靶向tspo磁共振成像造影剂，可用于外周慢性炎症性疾病，如类风湿性关节炎，风湿性关节炎等早期诊断和疗效评估，具有显像空间分辨率高，软组织分辨率好，且无放射性的优点。

附图说明

图1是本发明靶向tspo磁共振成像造影剂的合成路线图；图2是本发明靶向tspo磁共振成像造影剂用hplc进行鉴定的色谱图；图3是本发明靶向tspo磁共振成像造影剂进行左侧关节炎症balb/c小鼠的micro-mri显像结果图。

具体实施方式

本发明靶向tspo磁共振成像造影剂是由下列步骤制成的cb86-dtpaa-gd。

步骤（一）cb86-dtpaa的制备：1）向置于磁力加热搅拌器上并用锡箔纸包住瓶身的茄形瓶加入dmso，并加入dtpaa，另将cb86分次缓慢加入茄形瓶，并且要边加边搅拌，必要时进行超声助溶；2）向茄形瓶加入三乙胺，用封口膜包紧瓶口或用瓶塞塞紧，并于磁力加热搅拌器上避光反应；3）冻干：先将茄形瓶放入冰箱冻干过夜，次日取出置于冻干机上脱水，待冻干后重新溶于纯水，继续冻干过夜，反复多次制得粉末；4.）纯化：活化c18小柱后，（1）将步骤3）中的粉末溶于naoh溶液，超声助溶，每次抽取，打入活化后的c18小柱，后用空气冲一次；（2）取na2co3溶液，冲洗前步骤的c18小柱；（3）纯水冲洗一次前步骤的c18小柱，再用空气冲一次，弃去滤液；（4）无水乙醇，冲洗前步骤的c18小柱，空气复冲，收集乙醇液体于离心管；（5）将收集到的乙醇淋洗液分批次加入青霉素小瓶，用旋蒸仪蒸干，得到cb86-dtpaa粉末。

步骤（二）纯化后的cb86-dtpaa连接钆：1）向上述制备的cb86-dtpaa粉末中加入三氯化钆，溶解于pbs中，搅拌过夜；2）经纯化后，旋蒸得到终产物cb86-dtpaa-gd。经纯化是经上述步骤（一）纯化方法纯化。具有显像空间分辨率高，软组织分辨率好，且无放射性的优点。

所述cb86-dtpaa制备的步骤1）是：备50ml茄形瓶一个，并用锡箔纸包住瓶身，置于磁力加热搅拌器上；加入5mldmso，并避光下加入800mgdtpaa，另称量200mgcb86，分次缓慢倒入50ml茄形瓶，注意需缓慢地滴入，并且要边滴边旋转，必要时可以超声助溶。cb86-dtpaa制备的步骤2）是：向茄形瓶加入300ul的三乙胺，用封口膜包紧瓶口或用瓶塞塞紧，于磁力加热搅拌器上避光反应24h-36h。cb86-dtpaa制备的步骤3）是冻干:先将茄形瓶放入-80℃冰箱冻干过夜，次日取出置于冻干机上脱水，待冻干后重新溶于20ml纯水，继续冻干过夜，反复3次得粉末。

所述纯化后的cb86-dtpaa连接钆的步骤1）是将上述制备的cb86-dtpaa粉末按5:1的比例向其中加入三氯化钆，溶解于ph为7.4-8.0的pbs中，1200rpm搅拌过夜。

cb86-dtpaa制备的步骤4）中的活化c18小柱是：10ml无水酒精一次，10ml水一次，空气一次，把水分冲出。

所述cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（1）是：将步骤3）中的粉末按20mg：10ml的比例溶于1mmol/l的naoh，超声助溶，每次抽取5-10ml，打入活化后的c18小柱，后用空气冲一次。cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（2）是：注射器取1mmol/l的na2co3溶液10ml，冲洗前步骤的c18小柱。cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（3）是：纯水10ml冲洗一次前步骤的c18小柱，再用空气冲一次，弃去滤液。cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（4）是：无水乙醇5ml，冲洗前步骤的c18小柱，空气复冲，收集乙醇液体于50ml离心管。

步骤（二）中的步骤2）经上述步骤一的纯化方法纯化是纯化步骤参照步骤（一）中的c、d、e，旋蒸后得到终产物cb86-dtpaa-gd。具体是：用注射器抽取50ml茄形瓶中cb86-dtpaa与gdcl3反应后的溶液5ml，注入到活化的c18小柱中，然后用10ml的纯水冲洗c18小柱一次，再用空气复冲一次，弃去滤液，再用5ml的无水乙醇接着冲洗c18小柱，用青霉素小瓶收集无水乙醇淋洗液，置于旋蒸仪上旋蒸，得到粉末即为终产物cb86-dtpaa-gd。

具有显像空间分辨率高，软组织分辨率好，且无放射性的优点。

本发明所述靶向tspo磁共振成像造影剂的制备方法的步骤如下。

（一）cb86-dtpaa的制备：1）向置于磁力加热搅拌器上并用锡箔纸包住瓶身的茄形瓶加入dmso，并加入dtpaa，另将cb86分次缓慢加入茄形瓶，并且要边加边搅拌，必要时进行超声助溶；2）向茄形瓶加入三乙胺，用封口膜包紧瓶口或用瓶塞塞紧，并于磁力加热搅拌器上避光反应；3）冻干：先将茄形瓶放入冰箱冻干过夜，次日取出置于冻干机上脱水，待冻干后重新溶于纯水，继续冻干过夜，反复多次得粉末；4.）纯化：活化c18小柱后，（1）将步骤3）中的粉末溶于naoh溶液，超声助溶，每次抽取，打入c18小柱，后用空气冲一次；（2）取na2co3溶液，冲洗前步骤的c18小柱；（3）纯水冲洗一次前步骤的c18小柱，再用空气冲一次，弃去滤液；（4）无水乙醇，冲洗前步骤的c18小柱，空气复冲，收集乙醇液体于离心管；（5）将收集到的乙醇淋洗液分批次加入青霉素小瓶，用旋蒸仪蒸干，得到cb86-dtpaa粉末。

（二）纯化后的cb86-dtpaa连接钆：1）向上述制备的cb86-dtpaa粉末中加入三氯化钆，溶解于pbs中，搅拌过夜；2）经纯化后，旋蒸得到终产物cb86-dtpaa-gd。经纯化是经上述步骤（一）纯化方法纯化。

所述cb86-dtpaa制备的步骤1）是：备50ml茄形瓶一个，并用锡箔纸包住瓶身，置于磁力加热搅拌器上；加入5mldmso，并避光下加入800mgdtpaa，另称量200mgcb86，分次缓慢倒入50ml茄形瓶，注意需缓慢地滴入，并且要边滴边旋转，必要时可以超声助溶。cb86-dtpaa制备的步骤2）是：向茄形瓶加入300ul的三乙胺，用封口膜包紧瓶口或用瓶塞塞紧，于磁力加热搅拌器上避光反应24h-36h。cb86-dtpaa制备的步骤3）是冻干:先将茄形瓶放入-80℃冰箱冻干过夜，次日取出置于冻干机上脱水，待冻干后重新溶于20ml纯水，继续冻干过夜，反复3次得粉末。cb86-dtpaa制备的步骤4）中的活化c18小柱是：10ml无水酒精一次，10ml水一次，空气一次，把水分冲出。

所述纯化后的cb86-dtpaa连接钆的步骤1）是将上述制备的cb86-dtpaa粉末按5:1的比例向其中加入三氯化钆，溶解于ph为7.4-8.0的pbs中，1200rpm搅拌过夜。

所述cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（1）是：将步骤3）中的粉末按20mg：10ml的比例溶于1mmol/l的naoh，超声助溶，每次抽取5-10ml，打入活化后的c18小柱，后用空气冲一次。cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（2）是：注射器取1mmol/l的na2co3溶液10ml，冲洗前步骤的c18小柱。cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（3）是：纯水10ml冲洗一次前步骤的c18小柱，再用空气冲一次，弃去滤液。cb86-dtpaa制备的步骤4）的步骤（4）是：无水乙醇5ml，冲洗前步骤的c18小柱，空气复冲，收集乙醇液体于50ml离心管。

步骤（二）中的步骤2）经上述步骤一的纯化方法纯化是纯化步骤参照步骤（一）中的c、d、e，旋蒸后得到终产物cb86-dtpaa-gd。具体是：用注射器抽取50ml茄形瓶中cb86-dtpaa与gdcl3反应后的溶液5ml，注入到活化的c18小柱中，然后用10ml的纯水冲洗c18小柱一次，再用空气复冲一次，弃去滤液，再用5ml的无水乙醇接着冲洗c18小柱，用青霉素小瓶收集无水乙醇淋洗液，置于旋蒸仪上旋蒸，得到粉末即为终产物cb86-dtpaa-gd。

本发明靶向tspo磁共振成像造影剂及制备方法更具体是。

（一）cb86-dtpaa的制备，1.备50ml茄形瓶一个，并用锡箔纸包住瓶身，置于磁力加热搅拌器上。加入5mldmso，并加入800mgdtpaa（最好避光），另称量200mgcb86，分次缓慢倒入50ml茄形瓶，注意需缓慢地滴入，并且要边滴边旋转。必要时可以超声助溶。

2.向茄形瓶加入300ul的三乙胺，用封口膜包紧瓶口（或用瓶塞塞紧），于磁力加热搅拌器上避光反应24h-36h。3.冻干，先将茄形瓶放入-80℃冰箱冻干过夜，次日取出置于冻干机上脱水，待冻干后重新溶于20ml纯水，继续冻干过夜，反复3次。4.纯化，先活化c18小柱（10ml无水酒精一次，10ml水一次，空气一次，把水分冲出）配制1mmol/l的naoh溶液和1mmol/l的na2co3溶液。a.将步骤3中的粉末按20mg：10ml的比例溶于1mmol/l的naoh，超声助溶，每次抽取5~10ml，打入c18小柱，后用空气冲一次。b.注射器取1mmol/l的na2co3溶液10ml，冲洗步骤a的c18小柱。c.纯水10ml冲洗一次步骤b的c18小柱，再用空气冲一次，弃去滤液。d.无水乙醇5ml，冲洗步骤c的c18小柱，空气复冲，收集乙醇液体于50ml离心管。e.将收集到的乙醇淋洗液分批次加入青霉素小瓶，用旋蒸仪蒸干，得到cb86-dtpaa粉末。

（二）纯化后的cb86-dtpaa连接钆：1.将上述制备的粉末按5:1的比例向其中加入三氯化钆（gdcl3），溶解于ph为7.4~8.0的pbs中，1200rpm搅拌过夜。2.经纯化后，纯化步骤参照步骤（一）中的c、d、e，旋蒸后得到终产物cb86-dtpaa-gd。步骤（二）中的步骤2）经上述步骤一的纯化方法纯化是纯化步骤参照步骤（一）中的c、d、e，旋蒸后得到终产物cb86-dtpaa-gd。具体是：用注射器抽取50ml茄形瓶中cb86-dtpaa与gdcl3反应后的溶液5ml，注入到活化的c18小柱中，然后用10ml的纯水冲洗c18小柱一次，再用空气复冲一次，弃去滤液，再用5ml的无水乙醇接着冲洗c18小柱，用青霉素小瓶收集无水乙醇淋洗液，置于旋蒸仪上旋蒸，得到粉末即为终产物cb86-dtpaa-gd。cb86-dtpaa-gd合成线路如图1所示。

用hplc对产物cb86-dtpaa-gd鉴定，所用的梯度条件（流速为0.5ml/min）如图2所示：该产物的出峰时间约为：25.7min。

关节炎动物模型mri显像：cb86-dtpaa-gd在左侧关节炎症balb/c小鼠的micro-mri显像结果如图3所示，从图3中可以看出，与马根维显（钆喷酸葡胺注射液）作为对照组，对于用同种造模方式构建的小鼠关节炎症模型，通过尾静脉注射相同浓度、相同剂量的cb86-dtpaa-gd和马根维显，比较它们的信噪比（snr），可以看出在t1加权图像上，cb86-dtpaa-gd在左侧关节炎症部位具有更强的信号增强功能。并且通过抑制试验可见cb86-dtpaa-gd对关节炎症部位具有较强的特异性靶向能力。这对于关节炎症的早期检查，分期评定、疗效监测、预后评价具有巨大的潜能。图3中a:cb86-dtpaa-gd,snr值为28；b:马根维显，snr值为19.5；c：抑制试验，snr值为10.8。

总之，采用上述技术方案后，本发明靶向tspo磁共振成像造影剂及制备方法可用于外周慢性炎症性疾病，如类风湿性关节炎，风湿性关节炎等早期诊断和疗效评估，具有显像空间分辨率高，软组织分辨率好，且无放射性的优点。