具有抗病毒活性的一支蒿鼻用喷雾剂的制作方法

本发明属于中药制药领域，具体涉及一种鼻用药物的新型剂型-具有抗病毒活性的一支蒿鼻用喷雾剂，所述的鼻用喷雾剂其是一种含有粘膜黏附能力的一支蒿提取物水溶液，在常态下呈液体状态，以鼻腔给药使用后能迅速分布并黏附在鼻黏膜表面，从而延缓药物消除，提高生物利用度。

背景技术：

据报道，病毒感染性疾病仍是影响人类健康的危险性疾病之一。病毒感染引起多种疾病，严重危害人类的健康和生命。据不完全统计，约60％流行性传染病是由病毒感染引起的。迄今，全世界己发现的病毒超过3000种，而且新的病毒还在不断被发现，其中发病率高、危害大的病毒性感染，如流感病毒、乙/丙型肝炎、艾滋病病毒病、sars病毒等已经严重威胁着人们的健康和生命。研究显示，病毒性疾病的流行病学特征为发病率高、起病迅速、传播快、流行性广、变异性大、传染力强等。病毒及其变异品种对人类和社会的危害已使本领域研究者致力于抗病毒药物的研究，但实践表明，获得临床肯定的有关药物仅有五十多种。目前，抗乙肝病毒药物主要有干扰素类(如干扰素、聚乙二醇化干扰素等)，核苷(酸)类(如恩曲他滨、拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦等)，抗流感病毒药物(如肌苷单磷酸脱氧酶抑制药利巴韦林、干扰素诱导药盐酸阿比朵尔、酝圆蛋白离子通道抑制药金刚烷胺和金刚乙胺、神经氨酸酶抑制药奥司他韦和扎那米韦等)，抗人类免疫缺陷病毒药物(齐多夫定、奈韦拉平、地拉韦定、依非韦伦等)；虽然它们在减少患者的发病率和致死率方面发挥了积极的作用，但同时仍存在多方面的缺陷：1)大部分药物基于体内细胞和病毒的酶或蛋白为靶标，对正常人体细胞不可避免具有较大杀伤性；2)对于一些非自动免疫病毒疾病(如hiv.1，hbv和hcv)，由于无法彻底清除体内药物屏障区的病毒，只能长期甚至终身用药；3)临床实践显示多数药物生物利用度较低，若要达到一定的疗效则必须扩大用药剂量，长期高剂量的用药，使得目前临床应用的药物易耐产生药性，有时这种耐药性对患者是致命的；因此，寻求新的、安全有效的抗病毒药物具有十分重要的理论、经济和社会意义。

一枝蒿(artemisiarupestrisl.)为菊科(compositae)蒿属(artemisial.)植物，为新疆地产药材，维吾尔药名-孜伙艾密尼，主要分布于新疆，中亚、欧州等地亦有分布。一枝蒿具有较高的药用价值，民间多采用全草入药，具有抗过敏、抗氧化、抗病毒、保肝降酶、诱导癌细胞凋亡、免疫调节多方面的作用。新疆一枝蒿作为维吾尔医常用药材，对其植物来源、药材的性状、显微特征等均有明确详细的文献记载；化学成分研究表明，新疆一枝蒿全草含酮酸类、黄酮类、挥发油类、生物碱类、氨基酸类、内酯类等多种化学成分。有研究在化学分析的基础上比较了27个新疆一枝蒿不同提取物抗甲型流感病毒作用，结果发现4个新疆一枝蒿的提取物对流感病毒的抑制率达到50％以上；并且对一枝蒿提取物酮酸类及黄酮类进行深入研究，发现其对呼吸道合胞病毒(rsv)及副流感病毒(piv)的体外作用非常明显，表明新疆一枝蒿提取物对流感病毒、rsv及piv都具有抑制作用。有研究前期试验通过在体肠吸收和caco-2细胞模型对一枝蒿酮酸的小肠吸收动力学及大鼠体内药动学等生物药剂学性质的研究，结果表明一枝蒿酮酸口服吸收差，其绝对生物利用度小于5％，因此新疆一支蒿抗病毒有效部位口服给药途径的生物利用度较低，肠道黏膜低透过性直接影响其口服吸收，生物利用度低，导致疗效缓慢而不确切，临床应用受到一定限制。

业内知悉，黏膜给药系统具有其独特的优势。鼻黏膜作为药物吸收部位具有若干优点，包括(1)鼻腔总容积约15ml，鼻黏膜上纤毛众多，吸收面积比较大，约为150cm²(2)内皮细胞间存在亲水性孔道，水溶性药物膜透过性高；(3)内皮细胞下有丰富的毛细血管和淋巴网，使体液迅速通过血管壁，便于吸收；(4)与消化道比较,鼻腔中的代谢酶较少，活性较低，环境ph值为5.5-6.5,接近中性，药物稳定性提高；(5)可避开胃肠道的降解和首过效应等。因此，鼻腔给药制剂具有吸收迅速完全、生物利用度高、给药方便、易于被患者接受等优点；(6)鼻腔喷雾给药也可以通过吸入进入呼吸道，有利于药物在呼吸道组织的分布和吸收，有利于提高病毒感染性呼吸道疾病的治疗。

但由于鼻粘膜表明含有大量鼻纤毛和鼻黏液，它们的运动导致药物在鼻黏膜表面滞留时间短仅为约15-30min，造成药物尚未被完全吸收就被清除，使其生物利用度受到影响；某些生物黏附制剂如鼻用凝胶剂虽然能延长药物在鼻黏膜的滞留时间，但其黏度较高，制备存在一定困难，而且其黏稠性一定程度上影响给药剂量的准确性，并导致使用不便；等等。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供一种鼻用药物的新型剂型-具有抗病毒活性的一支蒿鼻用喷雾剂，本发明充分利用鼻腔给药的优点，并克服其缺点，进行制剂处方改良的研究，具有广阔的市场前景，对发展抗病毒中药制剂具有理论、经济和社会意义。

技术实现要素：

本发明的目的是基于现有技术的现状，为克服现有技术的一支蒿抗病毒有效成分口服吸收利用度低的问题，提供一种具有高生物利用度的一支蒿有效部位鼻用喷雾剂。尤其是一种含有粘膜黏附能力的一支蒿提取物水溶液，在常态下呈液体状态，以鼻腔给药使用后能迅速分布并黏附在鼻黏膜表面，从而延缓药物消除，提高生物利用度。本喷雾剂粘稠度合适、能较长时间滞留于鼻腔表面且无鼻纤毛毒性，具有较好喷雾特性。

本发明依据如下基础：将药物制备成鼻用喷雾制剂可充分利用鼻腔粘膜或吸入后肺部药物浓度高的特点，以液体形式给药，喷入或滴入鼻腔后转变为具有适宜生物黏附性黏附于鼻黏膜上，可以延长药物在鼻腔内的滞留时间，降低纤毛对药物的清除率，减少药液流失和对咽部的刺激，因而具有生物利用度高、给药剂量准确、病人依从性良好等优点。

本发明通过以下技术方案实现：

本发明的具有抗病毒活性的一支蒿鼻用喷雾剂由一支蒿提取物和具有一定黏膜粘附能力的亲水性药用高分子辅料，以及其他药剂学上必要的辅料制成。

本发明中，所述的一支蒿鼻用喷雾剂以一支蒿提取物中含量最高的活性单体一支蒿酮酸作为指标性活性成分，并加入其他药剂学上必要的辅料，如增稠剂、ph调节剂和/或防腐剂，所选用的辅料用量为药剂学上所规定的常规用量。

本发明将一支蒿提取物用适当浓度的增溶剂溶解后，加入具有生物黏附性泊洛沙姆和/或卡波普亲水性药用高分子溶液中，该制剂可延长药物与鼻黏膜的接触时间，有利于提高药物的生物利用度，具有较好的喷雾特性，同时又可避免高黏度的凝胶剂制备与患者使用的不便。

本发明所述的主药一支蒿提取物为新疆一支蒿药材50％的乙醇提取物干粉，制剂中一支蒿提取物含量为5-100mg/ml，优选含量为10-50mg/ml。

本发明所述的药用高分子溶液由下述一种或几种材料制备而成：泊洛沙姆407(pluronicf127)、泊洛沙姆188(pluronicf68)、丙烯酸聚合物卡波普(carbopol)中的一种或数种。其中泊洛沙姆407的浓度为5-30％(w/w)，泊洛沙姆188的浓度为5-20％，卡波普的浓度为0.02-5％。

本发明所述的卡波普的选择是卡波普934p、卡波普940、卡波普941、卡波普971p、卡波普974p。

本发明所述的增溶剂选自nahco3、吐温80、乙醇中的一种或数种，其中nahco3为0.1-2％，吐温80为0.5-5％，乙醇为2-5％。

本发明所述的防腐剂选自羟苯酯类、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇、醋酸洗必泰、苯扎氯铵、苯扎溴铵或硫柳汞及季铵化合物类阳离子表面活性剂。防腐剂不影响制剂的理化性质，在抑菌浓度范围内不产生或仅产生较小的鼻黏膜刺激性和纤毛毒性。

本发明所述的鼻用喷雾剂可以喷雾或滴鼻形式通过鼻腔给药。

本发明采用bohlingemini2-peltier平板旋转流变仪考察含0.1％、0.2％、0.3％的卡波姆940鼻用喷雾剂以及未加卡波姆的鼻用喷雾剂在剪切速率为0.1-1000s-1时的黏度变化，选用cp4/40mm锥板测量系统，间隙100μm，温度设为25℃。图1显示一支蒿鼻用喷雾剂黏度随剪切速率的增大呈明显下降趋势，表现出假塑性流体的特征，显示其为牛顿流体。随着剪切力作用的增加，体系的黏度越来越小，当体系黏度降低到一定值后，黏度的变化趋于平稳。说明制剂具有剪切变稀的特性，剪切速率增大破坏了高分子材料的空间结构，降低其黏度。此特性有利于制剂在鼻粘膜表面的均匀分布，药物在鼻纤毛运动下较易释放。以流变学特性为考察指标，优选最适增稠剂的浓度。

本发明采用采用在体蟾蜍上颚模型评价上述制剂纤毛毒性，通常认为试验组的蟾蜍上颚纤毛运动持续时间为生理盐水对照组的60％以上，则试验制剂的纤毛毒性较小。如表1所示，含0.1-0.5％卡波普940的一支蒿鼻用喷雾剂给药4h后，蟾蜍上颚黏膜面清晰完整，无纤毛脱落现象，纤毛活动非常活跃，呈流水状摆动，平均持续运动时间均大于生理盐水对照组的80％以上。扫描电镜观察显示黏膜完整，纤毛数量多，未见明显脱落，大多数运动活跃。偶尔可观察到静止的纤毛，估计与其黏度(或ph)相关，电镜结果见图2。结果显示所选卡波姆浓度均无明显毒性，0.1-0.5％的卡波姆940的纤毛活性与生理盐水组最相近。

表1一支蒿鼻用喷雾剂纤毛毒性试验结果

本发明进行了一枝蒿鼻用喷雾剂的大鼠体内药动学研究，实验结果表明，一支蒿主要活性成分一支蒿酮酸大鼠体内药动学特征符合二室模型，与大鼠灌胃给药制剂比较，鼻腔给药后，生物利用度分别提高了6.95倍，结果显示一枝蒿鼻用喷雾剂具有较高的生物利用度。

本发明进行了一枝蒿鼻用喷雾剂的药效学研究，采用体内实验方法，以流感病毒鼠肺适应株pr8滴鼻感染小鼠，观察14天，得出小鼠存活率及存活天数和肺指数。结果表明一枝蒿鼻用喷雾剂可明显延长甲型流感病毒感染小鼠存活天数，降低死亡率；可明显抑制肺指数值，抑制率分别为27.93％、19.30％，结果显示一枝蒿鼻用喷雾剂具有较强的抗流感病毒活性。

表2一支蒿鼻用喷雾剂对甲型流感病毒感染小鼠死亡率的影响

注：与对照组比较，^＊p<0.05，^＊＊p<0.01。

本发明考察了一支蒿鼻用喷雾剂的粒径分布，运用了helos/bf激光粒度仪对三种泵型的喷雾剂的粒径分布进行了分析比较，结果显示，vp6型喷雾剂的重现性与粒径大小较其他两种喷雾剂适合；分别选择3cm检测距离进行检测，结果表明，该喷雾剂的粒径分布符合药典法规的要求，dv10(24.13±1.16～27.91±0.83μm)，dv50(66.87±1.38～78.54±1.96μm)，dv90(138.76±9.32～179.39±7.12μm)，结果如图3所示。

本发明考察了一支蒿鼻用喷雾剂的喷雾模式，运用sprayview激光图像系统对三种喷雾剂的几何学和喷雾模式进行了考察，结果表明，一支蒿vp6泵型喷雾剂的喷射角度最大，易于增大药物在鼻腔内分布面积；喷雾模式呈近圆形，随着检测距离的增大，dmin、dmin及area都增加，但是检测距离对椭圆率的影响不大，结果如图4所示。

附图说明

图1：剪切速率对不同一支蒿鼻喷剂流变性的影响。

图2：一支蒿鼻用喷雾剂对蟾蜍上颚纤毛摆动的扫描电镜。

图3：一支蒿鼻用喷雾剂采用vp6泵的雾化激光散射粒径分布测定图。

图4：一支蒿鼻用喷雾剂采用vp6泵的喷雾模式图。

具体实施方式

通过下列描述和实施例进行说明，但本发明的保护范围，不局限于此。

实施例1

一枝蒿提取物每份称取0.2g，分别用不同浓度的乙醇、nahco3溶液、吐温-80溶液以及联合使用混合溶剂，分别按表3所示的配比制备一支蒿鼻用喷雾溶液，观察药物溶解情况；

表3一支蒿鼻用喷雾剂不同增溶方法的处方组成

续表3

上述表3所示处方1-14的溶解观察结果显示：一支蒿提取物在一定浓度范围的nahco3和吐温80溶解中可以完全溶解，也可以采用联合使用的方法增加一支蒿提取物的溶解度。

实施例2

制备含40mg/ml一支蒿提取物的0.1％、0.2％、0.3％、0.5％w/w卡波姆940鼻腔喷雾剂及0.15％、0.2％、0.25％、0.5％w/w卡波姆971p鼻腔喷雾剂，考察其ph、黏度，并以喷雾器喷出雾滴，考察粒度与黏附程度，评估形成制剂的可能性；结果显示，各卡波姆940制剂呈黄色溶液，卡波姆971p制剂呈黄色澄明溶液。0.3％、0.5％w/w卡波姆940制剂与0.25％、0.5％卡波姆971p制剂黏度较高，ph偏低，以喷雾器喷出雾滴时出现堵塞情况，未能制成理想的鼻腔制剂；0.1％、0.2％卡波姆940制剂与0.15％、0.2％卡波姆971p制剂黏度适中，ph比较适合鼻腔给药，并能够以喷雾器喷出雾滴。

实施例3

按表4所示处方，配制不同型号含泊洛沙姆的一支蒿鼻用喷雾剂；

表4不同粘附性药用辅料的一支蒿鼻用喷雾剂处方(w/w％)

将所述处方15-19中的亲水材料溶于适量的去离子水中，在磁力搅拌下加热至100℃使其分散均匀，然后置于4℃冰箱中完全冷却(24h以上)得到澄明溶液，另将药物溶液与其余辅料溶于去离子水中，两液混匀并定溶至全量，考察各制剂的温敏性和喷雾特性，结果显示，随着泊洛沙姆的用量增加，雾化溶液具有一定的温敏性特点，但也在一定程度上影响雾化雾滴大小和喷雾难度。

实施例4

将处方量尼泊金丙酯加入不同量的无水乙醇，制成预制液，然后逐步分散到水中，最终乙醇含量为溶液的2％、3％、4％、5％与6％，结果发现乙醇含量为2％与3％的溶液出现少量析出，4％、5％与6％的溶液无明显析出沉淀，因此，选用无水乙醇作为尼泊金丙酯的溶剂，最终乙醇含量为处方的4-6％。

实施例5

将处方量尼泊金乙酯加入不同量的无水乙醇，制成预制液，然后逐步分散到水中，最终乙醇含量为溶液的1％、1.5％、2％、3％与5％，结果发现乙醇含量为1％的溶液出现少量析出，1.5％、2％、3％与5％的溶液无明显析出沉淀。因此，可以考虑选用无水乙醇作为尼泊金丙酯的溶剂，最终乙醇含量为处方的2-5％。