本发明涉及化妆品领域,具体涉及一种具有抗过敏功效的植物提取物及其应用。
背景技术：
黄酮广泛存在自然界的某些植物和浆果中，总数大约有4千多种，其分子结构不尽相同，如芸香苷、橘皮苷、栎素、绿茶多酚、花色糖苷、花色苷酸等都属黄酮。
黄酮的功效是多方面的，有些黄酮是强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，如花青素可以抑制油脂性过氧化物的全阶段溢出，这种阻止氧化的能力是维生素e的十倍以上，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。有些黄酮可以改善血液循环，可以降低胆固醇，向天果中的黄酮还含有一种paf抗凝因子，这些作用大大降低了心脑血管疾病的发病率，也可改善心脑血管疾病的症状。被称为花色苷酸的黄酮化合物在动物实验中被证明可以降低26%的血糖和39%的三元脂肪酸丙酯，这种降低血糖的功效是很神奇的，但更重要的是它对稳定胶原质的作用，因此它对糖尿病引起的视网膜病及毛细血管脆化有很好的作用。有些黄酮可以抑制炎性生物酶的渗出，可以增进伤口愈合和止痛，栎素由于具有强抗组织胺性，可以用于各类敏感症。
马钱科醉鱼草属植物大叶醉鱼草buddleiadavidiifranch.，多分布于海拔800～2200m的山坡、沟边灌丛中，在我国陕西、江苏、浙江、江西、湖北等省区均有分布。其味辛、微苦，温，有毒。大叶醉鱼草叶含醉鱼草甙等多种黄酮类。具有祛风散寒、活血止痛、解毒杀虫之功效。临床上常将其用于祛风散寒，活血止痛，风湿关节疼痛，跌打损伤，骨折；外用治脚藓。
黄酮苷一般易溶于水、乙醇、甲醇等极性强的溶剂中；但难溶于或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。传统黄酮提取方法多用乙醇提取，经大孔树脂脱色，然后洗脱干燥制备而得。黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。此外，它还常与糖结合成苷。天然黄酮类化合物多以苷类形式存在，并且由于糖的种类、数量、联接位置及联接方式不同可以组成各种各样黄酮苷类。组成黄酮苷的糖类包括单糖、双糖、三糖和酰化糖。黄酮类化合物糖链越长则水溶度越大。黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性。因此，常规醇提方法在提取黄酮类化合物时，会因酚羟基数目、位置不同，无法提取得到某些黄酮化合物。
因此，需要提出一种新的方案来解决上述问题。
技术实现要素：
本发明的首要目的是提供一种大叶醉鱼草黄酮提取方法，本发明提供的大叶醉鱼草黄酮提取方法中提取原料为大叶醉鱼草叶。
一种大叶醉鱼草黄酮提取方法，包括以下步骤：
(1)取大叶醉鱼草干燥，粉碎成粉末，过筛得大叶醉鱼草粉末；
(2)加入乙醇水溶液到大叶醉鱼草粉末中，调节ph值，然后进行升温提取，得到提取液；
(3)提取液冷却至室温后过滤，得滤液，柠檬酸调节滤液ph值；
(4)滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用2-3倍柱体积的水洗脱；然后用3-5倍30～60％乙醇(v/v)洗脱；
(5)收集30～60％乙醇(v/v)洗脱液，真空冷冻干燥得到含水量1-4%的干制大叶醉鱼草黄酮提取物。
在其中一些实施例中，步骤(1)中所述干燥为置烘箱中60℃烘干至恒重；所述过筛为过10-40目筛。
在其中一些实施例中，步骤(2)中所述加入乙醇水溶液为大叶醉鱼草粉末重量的2-5倍，其中乙醇在溶液中的体积分数为60-80%，所述调节ph值为加入氨水使得溶液中的ph值为8.0-8.5；所述提取为在80-90℃，提取40～60min。
在其中一些实施例中，步骤(3)中所述过滤为200目过滤；所述柠檬酸调节滤液ph值至6-6.5。
在其中一些实施例中，步骤(4)中所述的大孔吸附树脂为d101型、ab-8型、hpd100型、hpd200型中的一种。
本发明的另一目的在于提供所述大叶醉鱼草黄酮提取方法得到的黄酮提取物在制备化妆品中的应用，所述黄酮提取物的用量，按质量百分比计算，其添加量占化妆品总质量的0.1-0.5wt％。
一种含有本发明所述大叶醉鱼草黄酮提取物的化妆水，由如下质量百分含量的组分组成：
peg/ppg-17/6共聚物0.1-1%,
丁二醇1-5%,
水前寺紫菜（aphanothecesacrum）多糖0.1-1%,
甘油1-5%,
β-葡聚糖1-5%,
异戊二醇1-3%,
1,2-己二醇0.1-1%,
甘油磷酸肌醇胆碱盐0.1-0.5%,
羟苯基丙酰胺苯甲酸0.1-0.5%,
丙烯酸（酯）类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.1-0.5%,
c12-13链烷醇聚醚-90.1-0.5%,
精氨酸0.1-0.5%,
edta二钠0.01-0.05%,
透明质酸钠0.01-0.05%,
糖类同分异构体0.1-1%,
本发明所述大叶醉鱼草黄酮提取物0.1-0.5%，
水余量。
本发明具有如下的优点及有益效果：
1.本发明所述的黄酮提取方法比现有醇提黄酮方法，具有如下优势：辅助加入氨水，可以提高黄酮类化合物的溶出，也提升提取物的得率，并且加入的氨水容易去除，对产品分子结构和产品性能没有影响。
2.本发明所述的大叶醉鱼草黄酮提取方法得到的黄酮提取物应用到抗过敏化妆品中，具有强抗组织胺性，可以用于各类敏感炎症，对过敏性皮炎、接触性皮炎、蚊虫叮咬、药物性皮炎、湿疹、痱子等都有良好的疗效，对皮肤温和无刺激，能够清热解毒，舒敏止痒。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明实施方式作进一步地详细描述,但本发明的实施方式不限于此,对于未特别注明的工艺参数或条件,可参照常规技术进行。
本发明所述的大叶醉鱼草黄酮提取物的化妆品标准中文名可以为：大叶醉鱼草（buddlejadavidii）提取物。
实施例1
一种大叶醉鱼草黄酮提取物，选取大叶醉鱼草叶作为原料，经过以下步骤提取得到：
(1)取大叶醉鱼草置烘箱中60℃烘干至恒重，粉碎成粉末，过10目筛得大叶醉鱼草粉末；
(2)加入大叶醉鱼草粉末重量5倍的乙醇水溶液到大叶醉鱼草粉
末中，在80℃，提取60min，得到提取液；其中乙醇在溶液中的体积
分数为60%，加入氨水使得溶液中的ph值为8.5；
(3)提取液冷却至室温后，200目过滤，得滤液，滤液用柠檬酸调节ph值为6；
(4)滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用2倍柱体积的水洗脱；然后用5倍30％乙醇(v/v)洗脱；其中所述的大孔吸附树脂为d101型；
(5)收集30％乙醇(v/v)洗脱液，真空冷冻干燥得到含水量1%的干制大叶醉鱼草黄酮提取物，经此实施例得到的黄酮提取物，得率为7.1％。
实施例2
一种大叶醉鱼草黄酮提取物，选取大叶醉鱼草叶作为原料，经过以下步骤提取得到：
(1)取大叶醉鱼草置烘箱中60℃烘干至恒重，粉碎成粉末，过40目筛得大叶醉鱼草粉末；
(2)加入大叶醉鱼草粉末重量2倍的乙醇水溶液到大叶醉鱼草粉末中，在90℃，提取40min，得到提取液；其中乙醇在溶液中的体积分数为80%，加入氨水使得溶液中的ph值为8.0；
(3)提取液冷却至室温后，200目过滤，得滤液，滤液用柠檬酸调节ph值为6.5；
(4)滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用3倍柱体积的水洗脱；然后用3倍60％乙醇(v/v)洗脱；其中所述的大孔吸附树脂ab-8型；
(5)收集60％乙醇(v/v)洗脱液，真空冷冻干燥得到含水量4%的干制大叶醉鱼草黄酮提取物，经此实施例得到的黄酮提取物，得率为7.9％。
实施例3
一种大叶醉鱼草黄酮提取物，选取大叶醉鱼草叶作为原料，经过
以下步骤提取得到：
(1)取大叶醉鱼草置烘箱中60℃烘干至恒重，粉碎成粉末，过20目筛得大叶醉鱼草粉末；
(2)加入大叶醉鱼草粉末重量3倍的乙醇水溶液到大叶醉鱼草粉末中，在85℃，提取50min，得到提取液；其中乙醇在溶液中的体积分数为70%，加入氨水使得溶液中的ph值为8.2；
(3)提取液冷却至室温后，200目过滤，得滤液，滤液用柠檬酸调节ph值为6.3；
(4)滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用3倍柱体积的水洗脱；然后用4倍45％乙醇(v/v)洗脱；其中所述的大孔吸附树脂为hpd200型；
(5)收集45％乙醇(v/v)洗脱液，真空冷冻干燥得到含水量2%的干制大叶醉鱼草黄酮提取物，经此实施例得到的黄酮提取物，得率为8.2％。
对比例1
一种大叶醉鱼草黄酮提取物，选取大叶醉鱼草叶作为原料，经过以下步骤提取得到：
(1)取大叶醉鱼草置烘箱中60℃烘干至恒重，粉碎成粉末，过20目筛得大叶醉鱼草粉末；
(2)加入大叶醉鱼草粉末重量3倍的乙醇溶液到大叶醉鱼草粉末中，在85℃，提取50min，得到提取液；其中乙醇在溶液中的体积分数为70%；
(3)提取液冷却至室温后，200目过滤，得滤液，滤液用柠檬酸调节ph值为6.3；
(4)滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用3倍柱体积的水洗脱；然
后用4倍45％乙醇(v/v)洗脱；其中所述的大孔吸附树脂为hpd200型；
(5)收集45％乙醇(v/v)洗脱液，真空冷冻干燥得到含水量2%的干制大叶醉鱼草黄酮提取物，经此方法得到的黄酮提取物，得率为5.4％。
对比例2
一种大叶醉鱼草黄酮提取物，选取大叶醉鱼草全草作为原料，经过以下步骤提取得到：
大叶醉鱼草置烘箱中60℃烘干至恒重，粉碎成粉末，过20目筛，大叶醉鱼草粉末用95%乙醇回流4次，合并提取液，回收溶剂后得浸膏，将浸膏混悬于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，分别得到石油醚萃取物(a部分)、乙酸乙酯萃取物(b部分)。剩余部分经水溶解，过滤，滤液经hpd200型大孔吸附树脂柱，用95%乙醇洗脱得到乙醇洗脱物(c部分)。用硅胶柱色谱粗分b、c部分，经聚酰胺柱层析和硅胶柱层析交替纯化，水复溶后直接真空冷冻干燥得到含水量2%的干制大叶醉鱼草黄酮，经此方法得到的黄酮，得率为5.6％。
实验1总黄酮纯度检测
1.对照品溶液的配制
精密称取芦丁对照品5mg，置25ml棕色容量瓶中，用少量甲醇溶液溶解后稀释至刻度，得浓度为0.2mg/ml的芦丁对照溶液。
2.标准曲线的制备
精密量取芦丁对照品溶液0ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置于25ml容量瓶中，各加水至6.0ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6min后加1％氢氧化钠试液10ml，最后加水至刻度，摇匀，放置15min。于510nm处测定吸光度值，以吸光度值为纵坐标，对照品浓度(mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准方程。
3.样品测定
分别精密量取1.0ml实施例1-3和对比例1-2所得黄酮提取物
100倍稀释液(如果试样中的黄酮浓度高则应适当稀释再取1.0ml用于显色测定)，置25ml容量瓶中，按照“标准曲线的制备”项下的方法，自“加水至6.0ml”起，依法测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的浓度(mg/ml)，通过计算公式计算即得样品中总黄酮纯度，结果如表1所示，计算公式：
x＝c×v2/v1
x为样品中总黄酮含量，单位为mg/ml
c为从标准曲线上查得供试品溶液中总黄酮的浓度，单位为mg/ml；
v1为样品测定体积，单位为ml；
v2为样品定容体积，单位为ml。
表1不同实施例中总黄酮纯度
实验结论：实施例1-3的总黄酮纯度与对比例1-2相比，纯度更高。
实验2大叶醉鱼草黄酮提取物抗氧化活性能力
采用dpph法测定实施例1-3和对比例1-2制得黄酮提取物的抗氧化活性能力。配制一系列vc溶液，分别取1ml不同浓度的vc溶液，加入5mldpph试剂，在室温下反应30min，然后在500nm下测定dpph溶液的吸光度减少率，绘制vc浓度和dpph消除率的对应曲线，吸光度的减少对应了vc对dpph的去除率。对同样稀释不同浓度的实施例1-3和对比例1-2制得黄酮提取物，测定其dpph消除率，通过消除率换算实施例1-3和对比例1-2制得黄酮对应的vc含量。数据处理每组实验均重复三次，实验数据表示为平均值。实验结果如表2所示：
表2dpph去除率记录表
实验结论：实施例1-3和对比例1-2制得的黄酮提取物都有良好的dpph去除率，说明具有良好的抗衰老功效。其中实施例1-3制得黄酮提取物的dpph去除率相对更好。
实施例4
制备如表3所示组成的化妆水1-3和对照组1-2，由以下质量百分含量的组分组成：
表3化妆水配方表
实验3人群试用测试
人群入选标准:临床主要表现过敏性皮炎、接触性皮炎、蚊虫叮咬、药物性皮炎、湿疹、痱子等，尤其使用化妆品后，出现一系列的症状，反复难愈（仅针对敏感人群的以面部、手、脚为主的人群；排除严重过敏、全身过敏及其他具有医疗体征疾病的患者）。
按照以上人群入选标准，选择志愿受试者250例。男88例，女162例；年龄在16～45岁，均分为5组，每组50人。
临床观察方法及疗效标准
1、样品使用方法：
每日洁面后，在敏感部位涂化妆水1-3和对照组1-2所制得样品，早晚各一次，每次用量为0.1g/10cm2,1周后统计数据。
2、疗效判定标准(1)治愈：临床症状消失、皮肤恢复至正常状态，有干净和光滑的表面，没有角质层。(2)有效：临床症状减轻、瘙痒症状减轻，皮肤有所改善；(3)无效：临床症状、瘙痒症状未见好转。
3、结果
化妆水1-3和对照组1-2的使用观察情况详见表4。
表4测试记录表
2、结果分析
(1)使用化妆水1-3的样品1周后对各类炎症、瘙痒有效率可达90％以上(47例)。与对照组1-2对比可知，本发明制备方法制得的大叶醉鱼草黄酮提取物有更好的抗过敏，止瘙痒和去炎症效果；尤其是对过敏性皮炎、接触性皮炎、蚊虫叮咬、药物性皮炎、湿疹、痱子等引起的各类症状均有不错的效果，对皮肤温和无刺激，能够清热解毒，舒敏止痒。
统计受试者试用情况发现，患有严重过敏性皮炎的受试者使用化妆水1-3样品1周后，已经观察到皮肤恢复至正常状态，具有干净和光滑的表面，没有角质层，说明本发明化妆水有抗衰老功效。并且，经检测，使用化妆水1-3的受试者血液中的免疫球蛋白e和组胺的水平分别显著降低57.80％和59.41％。使用化妆水1-3的受试者具有厚度恒定且表面光滑的表皮，且具有在更恒定的方向上形成的结蹄组织，表明过敏炎症患者恢复正常。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。