一种用于预防和/或治疗多发性脑梗塞性痴呆的药物组合物及其制备方法和用途与流程

本发明涉及一种用于预防和/或治疗多发性脑梗塞性痴呆的药物组合物及其制备方法和用途，属于药物领域。

背景技术：

多发性脑梗塞性痴呆(multi-infarctdementia,mid)是一种因缺血性或脑血管疾病而造成的认知功能障碍综合征，其发病机制涉及兴奋性氨基酸毒性、线粒体功能紊乱、能量代谢障碍、氧化应激、细胞凋亡等。它是继阿尔茨海默症(alzheimer'sdisease,ad)后第二大痴呆症型，也被认为是目前唯一可以防治的痴呆类型。血管系统受阻或病变引起脑内尤其是认知区域供血不足是mid患者认知下降的重要原因。脑内能量主要源于葡萄糖的外周摄入，供血不足导致脑内能量低下，线粒体是成直接能源物质三磷酸腺苷(atp)的主要场所，同时参与细胞分化、信息传递生理活动。当机体线粒体功能障碍时，除可引起产能不足外，它还诱发氧化应激、线粒体自噬、细胞凋亡等这些病变反过来加剧了mid病变程度及认知下降。本发明专利申请保护的处方来源于古方《外台秘要》黄芩人参汤，原方主治“伤寒吐下后，内外有热，烦渴不安”，但未见关于是否可以用于干预多发性脑梗塞性痴呆的治疗。对此，本研究先后在四川省教育厅重点研发项目(项目编号：17za0149)；四川省中医药管理局基础研发项目(项目编号：2018jc013)；成都中医药大学重点技术项目(项目编号：zrqn1611)及四川省中央引导地方科技发展专项(2018szyd0003)等科研课题资助下，对本方的剂量及药效进行筛选，最终确定本发明的药物组成及剂量配比。

技术实现要素：

为解决上述问题，本发明提供了一种用于预防和/或治疗多发性脑梗塞性痴呆的药物组合物及其制备方法和用途。

本发明提供了一种组合物，它是由如下重量配比的原料制备而成：人参8～60份、黄芩3～30份。

优选地，所述组合物是由下述重量配比的原料制备而成：人参10～40份、黄芩5～25份。

优选地，所述组合物是由下述重量配比的原料制备而成：人参15～30份、黄芩8～20份。

优选地，所述组合物是由下述重量配比的原料制备而成：人参50份、黄芩10份。

本发明所述的组合物，它是由所述原料的原生粉末，或水或有机溶剂提取物为活性成分，加入药用辅料制备成常用的制剂。

本发明所述的制剂为口服制剂，优选汤剂、丸剂、片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、糖浆或口服液。

本发明提供了一种制备前述的组合物的方法，它包括如下步骤：

a)称取重量配比的原料药；

b)加入5～6倍原料重量的水浸泡1～2h，煎煮3次，每次1～1.5h，合并滤液；

c)浓缩成浸膏，加入药用辅料即得。

本发明还提供了前述的组合物在制备用于预防和/或治疗多发性脑梗塞性痴呆的药物中的用途。

其中，所述药物是修复神经元线粒体的药物。

其中，所述药物是改善脑组织中细胞的能量代谢的药物。

为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：peg6000，peg4000，虫蜡等。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其他多种形式的修改、替换或者变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1人参黄芩配伍对mid模型大鼠学习记忆能力的影响

图2人参黄芩配伍对mid模型大鼠海马ca1区病理形态学影响

图3人参黄芩配伍对mid模型大鼠海马线粒体功能的影响

图4人参黄芩配伍对mid模型海马脑能荷的影响

具体实施方式

实施例1、本发明组合物的制备

1.原料：人参8g、黄芩3g。

2.制备方法：按照比例取药材，用5-6倍量的蒸馏水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合并3次提取液粗滤，60℃浓缩至浸膏，加入辅料淀粉、硬脂酸镁、微晶纤维素，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例2、本发明组合物的制备

1.原料：人参50g、黄芩10g。

2.制备方法：按照比例取药材，用5-6倍量的蒸馏水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合并3次提取液粗滤，60℃浓缩至浸膏，加入辅料淀粉、硬脂酸镁、微晶纤维素，均匀制得颗粒，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例3、本发明组合物的制备

1.原料：人参10g、黄芩5g。

2.制备方法：按照比例取药材，用5-6倍量的蒸馏水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合并3次提取液粗滤，60℃浓缩至浸膏，加入辅料淀粉、硬脂酸镁、微晶纤维素，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例4、本发明组合物的制备

1.原料：人参40g、黄芩25g。

2.制备方法：按照比例取药材，用5-6倍量的蒸馏水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合并3次提取液粗滤，60℃浓缩至浸膏，加入辅料淀粉、硬脂酸镁、微晶纤维素，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例5、本发明组合物的制备

1.原料：人参15g、黄芩8g。

2.制备方法：按照比例取药材，用5-6倍量的蒸馏水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合并3次提取液粗滤，60℃浓缩至浸膏，加入辅料淀粉、硬脂酸镁、微晶纤维素，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例6、本发明组合物的制备

1.原料：人参30g、黄芩20g。

2.制备方法：按照比例取药材，用5-6倍量的蒸馏水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合并3次提取液粗滤，60℃浓缩至浸膏，加入辅料淀粉、硬脂酸镁、微晶纤维素，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例7、本发明组合物的制备

1.原料：人参20g、黄芩12g。

2.制备方法：按照比例取药材，用5-6倍量的蒸馏水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合并3次提取液粗滤，60℃浓缩至浸膏，加入辅料淀粉、硬脂酸镁、微晶纤维素，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例8、本发明组合物的制备

1.原料：人参50g、黄芩10g。

2.制备方法：按照比例取药材，用5-6倍量的蒸馏水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合并3次提取液粗滤，60℃浓缩至浸膏，加入常规辅料制备成颗粒剂。

实施例9、本发明组合物的制备

1.原料：人参50g、黄芩5g。

2.制备方法：按照比例取药材，用5-6倍量的蒸馏水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合并3次提取液粗滤，60℃浓缩至浸膏，加入常规辅料制备成颗粒剂。

实施例10、本发明组合物的制备

1.原料：人参10g、黄芩30g。

2.制备方法：按照比例取药材，用5-6倍量的蒸馏水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合并3次提取液粗滤，60℃浓缩至浸膏，加入常规辅料制备成膏剂。

实施例11、本发明组合物的制备

1.原料：人参10g、黄芩20g。

2.制备方法：按照比例取药材，用5-6倍量的蒸馏水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合并3次提取液粗滤，60℃浓缩至浸膏，加入常规辅料制备成丸剂。

实施例12、本发明组合物的制备

1.原料：人参10g、黄芩25g。

2.制备方法：按照比例取药材，用5-6倍量的蒸馏水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合并3次提取液粗滤，60℃浓缩至浸膏，加入常规辅料制备成粉剂。

下面通过具体的药学试验来验证本发明的有益效果：

试验例一、本发明药物组合物对血管性痴呆模型大鼠学习记忆及脑能量代谢的影响

1材料与仪器

1.1实验动物

sd大鼠，雄性，spf级，50只，体重(200±20)g，由成都达硕实验动物有限公司提供，实验动物合格证编号：no.51203500003215。

1.2药物与试剂

黄芩、人参等比配伍，加6倍量水浸泡1h后煎煮3次，每次煎煮1.5h，合煎液，粗滤后80℃浓缩至0.22g/ml，4℃保存备用。甲磺酸双氢麦角毒碱片(喜得镇)，天津华津制药有限公司制造，批号：7c883t；三磷酸腺苷二钠盐、二磷酸腺苷二钠盐、单磷酸腺苷二钠盐均购置自sigma公司。

1.4主要仪器

morris水迷宫分析系统(wmt-100，成都泰盟科技有限公司)，agilent高效液相色谱仪(1260，agilent公司)，流式细胞仪(ze5，bio-rad公司)，dm1000徕卡显微成像系统(德国，leica)。

2方法

2.1模型制备及分组

取健康spf级sd大鼠，适应性喂养3d，采用微血栓栓塞法制备mid模型，假手术组注射等体积的生理盐水。造模2周后，根据体重和“y”迷宫评价的学习记忆水平将模型大鼠随机分为4组，即模型组(model)、喜得镇组(hydergine)(0.7mg/kg)、人参黄芩高剂量组(crhg，2.22g/kg)和人参黄芩低剂量组(crhd，1.11g/kg)，每组10只，10只假手术大鼠作为对照组，分组后按照10ml/kg每天1次灌胃给予相应药物，假手术组(sham)和模型组给予等体积的生理盐水，连续灌胃45天。

2.3morris水迷宫检测学大鼠习记忆功能

定位航行实验：给药第40天开始进行为期5天的连续定位航行训练，每天训练2次，记录其在60s内找到平台的时间(逃避潜伏期)。超过60s找不到平台，引导其找到平台并在平台停留10s，逃避潜伏期记成60s。

空间探索实验：定向航行实验结束24h后，撤除平台，将大鼠从相同位置放入迷宫，系统同步记录60s内大鼠的运动轨迹，记录穿越平台次数。

2.4海马病理形态学检测

空间探索结束后处死大鼠，冰浴取脑，左半脑用4％多聚甲醛固定，常规脱水、包埋、切片、he染色、封片，显微镜观察大鼠海马ca1区神经细胞形态。

2.5线粒体肿胀度和膜电位检测

采用流式细胞仪检测线粒体肿胀度和膜电位。将适量脑组织制成单细胞悬液并调整为10⁵个/ml；取1ml的细胞悬液离心，弃上清液后每管加入500μl的jc-1工作液重悬，37℃孵育15min后清洗两次并收集沉淀，然后再加入500μl缓冲液重悬混匀后上机检测检测线粒体肿胀度；取适量脑组织单细胞悬液，调整为10⁶个/ml，加入5μljc-1染液至100μl样本中，37℃孵育15min，pbs清洗后收集沉淀物，然后加入300-400μljc-1专用稀释液重悬混匀后上机检测线粒体膜电位，采用kaluza软件分析检测结果。

2.6海马atp、adp、amp测定

取适量海马组织，加入生理盐水(海马重：生理盐水体积＝1:10)，冰浴匀浆，取0.6ml匀浆液，加入等体积0.5mol/l高氯酸涡旋仪涡旋混匀，4℃12000xg离心10min。取上清液0.8ml，用naoh(5mol/l)调ph至中性，静置30min，4℃12000xg离心10min。取上清液直接进样，hplc梯度洗脱，测定amp、adp、atp的含量。色谱条件：odshypersilc18色谱柱(5μm，250mm×4.6mm)，柱温25℃；流动相0.05mol/l磷酸缓冲盐溶液(ph＝6.5)；流速1.0ml/min；样品室温10℃；进样体积10μl；紫外检测波长254nm。根据公式计算能荷值：ec＝([atp]+0.5[adp])/([atp]+[adp]+[amp])。

2.7数据统计与分析

数据以“均数±标准差”表示，morris水迷宫逃避潜伏期用双因素(two-wayanova)tukey’s多重比较分析，符合正态分布的数据采用单因素方差分析(one-wayanova)，不符合正态分布的数据采用非参数秩和检验。

3结果

3.1人参黄芩配伍对模型大鼠学习记忆能力的影响

如图1所示，随着训练时间的增加，各组大鼠逃避潜伏期均有不同程度的缩短。与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期明显延长，穿越平台次数则明显减少(p<0.05)；与模型组比较，人参黄芩配伍组逃避潜伏期显著缩短(p<0.05)，穿越平台次数显著增多(p<0.05)。

3.2人参黄芩配伍对模型大鼠海马ca1区病理形态学的影响

如图2所示，与假手术组比较，模型组海马ca1区椎体神经细胞排列稀疏，细胞数目减少，结构不完整，可见明显的神经细胞坏死及细胞变性(p<0.05)；与模型组比较，人参黄芩配伍组神经细胞排列稀疏有明显改善，神经细胞坏死和细胞变性明显改减轻(p<0.05)。

3.3人参黄芩配伍对模型大鼠海马线粒体功能的影响

如图3所示，与假手术组比较，模型组海马线粒体明显肿胀，线粒体膜电位显著下降(p<0.05)；与模型组比较，人参黄芩配伍低剂量组线粒体肿胀度明显下降，人参黄芩配伍高低剂量组线粒体膜电位均显著增高(p<0.05)。

3.4人参黄芩配伍对mid大鼠脑能量的影响

如图4所示，与假手术相比较，模型组脑组织atp含量显著降低(p<0.05)，但amp和adp含量无明显变化(p>0.05)，脑能荷值显著降低(p<0.05)；与模型组比较，人参黄芩配伍高剂量组大鼠脑组织中atp含量显著升高(p<0.05)，amp和adp的含量无显著差异(p>0.05)，脑能荷值显著升高(p<0.05)。

4讨论

慢性脑缺血引起的低灌注导致皮层与海马神经元损伤，破坏空间学习记忆形成过程，被认为是mid认知障碍的病理学基础。mid认知功能的下降与脑组织中广泛的小缺血灶或微梗死灶相关，自体血栓栓塞法能更好的模拟脑组织广泛微梗死灶，与临床具有较高的一致性。本次研究发现，微血栓颈总动脉注射后可以导致大鼠逃避潜伏期显著延长，穿越平台次数减少，海马ca1区椎体细胞排列紊乱、细胞稀疏，提示造模成功。人参黄芩配伍干预后，大鼠逃避潜伏期缩短，穿越平台次数增多，海马ca1区病理形态学不同程度减轻，说明人参黄芩配伍具有改善mid学习记忆功能的作用。脑是机体能量代谢最活跃的部位，稳定而协调的脑能量代谢对脑正常状态的保持至关重要。脑，特别是神经元，对缺血缺氧的敏感性在整个机体中最高。多发梗死性痴呆存在多发性局限性脑血流降低或脑血管阻塞，首先影响了神经细胞的能量供应。已有研究表明脑能量代谢障碍是mid病变的中心环节，临床实验也表明线粒体功能下降、能量代谢衰减可能是神经退变病发病的早期信号。能荷是代表总的腺苷酸系统中所负荷的高能磷酸基数量，是反应脑能量水平的最直接指标，本次研究发现，mid模型大鼠海马能荷显著低下，提示脑供能不足或低下，经人参黄芩干预后，模型大鼠海马能荷水平显著提高，说明人参黄芩配伍可以改善因脑梗造成脑供能不足。脑组织供能主要依赖atp，atp生成场所是线粒体，通过不断进行adp-atp再循环完成能量的穿梭转换，但并不能在细胞中储存。因此线粒体供能正常与否与atp生成和水平密切相关。线粒体肿胀度和膜电位水平可以反应线粒体供能和结构是否正常。已有研究表明mid模型大鼠存在明显的线粒体功能障碍，表现为线粒体肿胀和线粒体膜电位下降，这与本研究的结果一致，人参黄芩配伍可以改善多发性腔梗所致的脑组织线粒体肿胀度和膜电位的下降，提示其促进脑能荷的提高与线粒体损伤保护有关。综上，保护线粒体功能，改善脑能量进而保护神经细胞损害是人参黄芩配伍改善mid学习记忆功能的主要作用机制之一。

试验例二、本发明药物组合物不同配比对血管性痴呆模型大鼠的益智作用

1材料与仪器

1.1实验动物

同实验一。

1.2药物与试剂

同实验一。

1.3主要仪器

同实验一。

2方法

2.1模型制备及分组

取健康spf级sd大鼠，适应性喂养3d，采用微血栓栓塞法制备mid模型，假手术组注射等体积的生理盐水。造模2周后，根据体重和“y”迷宫评价的学习记忆水平将模型大鼠随机分为9组，即模型组(model)、喜得镇组(hydergine)(0.7mg/kg)、人参组、黄芩组、实验a(人参：黄芩＝1:1)组，实验b(人参：黄芩＝5:1)组，实验c(人参：黄芩＝10:1)组，实验d(人参：黄芩＝1:5)组，实验e(人参：黄芩＝1:10)组，每组10只,给药量按1.11g/kg/d，10只假手术大鼠作为对照组，分组后按照10ml/kg每天1次灌胃给予相应药物，假手术组(sham)和模型组给予等体积的生理盐水，连续灌胃45天。

2.3morris水迷宫检测学大鼠习记忆功能。

定位航行实验：给药第40天开始进行为期5天的连续定位航行训练，每天训练2次，将大鼠面向并靠近池壁放入水中，记录其在60s内找到平台的时间(逃避潜伏期)。超过60s找不到平台，可引导其找到平台，每只大鼠在平台滞留10s，逃避潜伏期记成60s，每天进行2次测量，并以两次所得逃避潜伏期数据的平均值作为这一天的成绩进行统计分析。

3.结果

定位航行实验中，各组小鼠找到平台的潜伏期都在逐渐缩短，表明经训练学习后大鼠空间记忆力加强。与假手术组相比较，模型组第五天的逃避潜伏期显著延长(p<0.05)；与模型组比较,实验a、实验b、实验d组逃避潜伏期显著缩短，实验各组组间比较无差异。见表1。

表1对mid模型大鼠逃避潜伏期的影响(n＝10)

注：与模型对照组比较*p<0.05

上述实验结果表明，在相同给药剂量的条件下，单独使用人参或黄芩时，具有一定的益智作用，将两者配伍使用后能明确增强益智作用，实验表明人参和黄芩配伍具有协同增效的作用。另外，通过实验证明，单独使用人参或黄芩时，无法修复mid模型大鼠的神经元线粒体，不能改善脑组织中细胞的能量代谢，但是将人参和黄芩等比配伍、1:5—5:1区间的配伍则具有明显改善mid模型大鼠的神经元线粒体，改善脑组织中细胞的能量代谢作用。