本发明涉及医学
技术领域：
，尤其涉及一种异型莎草提取物在治疗溃疡性结肠炎中的应用。
背景技术：
：溃疡性结肠炎病变主要位于结肠的黏膜层，且以溃疡为主，多累及直肠和远端结肠，但可向近端扩展，以致遍及整个结肠。溃疡性结肠炎临床表现为持续或反复发作的腹泻、黏液脓血便伴腹痛、里急后重和不同程度的全身症状，病程多在4-6周以上，可有皮肤、黏膜、关节、眼、肝胆等肠外表现。结肠镜检查并活检是溃疡性结肠炎诊断的主要依据，结肠镜下溃疡性结肠炎病变多从直肠开始，呈连续性、弥漫性分布，表现为黏膜血管纹理模糊、紊乱或消失、充血、水肿、质脆、自发性或接触性出血和脓性分泌物附着，亦常见黏膜粗糙、呈细颗粒状；病变明显处可见弥漫性、多发性糜烂或溃疡；可见结肠袋变浅、变钝或消失以及假息肉、粘膜桥等。该常反复发作，与结肠癌的发病有关，临床上常常表现为反复发作而治愈难度大，被世界卫生组织列为现代难治病之一。我国传统医学中医学，对于本病的研巧和治疗有重要的指导价值，并在本病的防治中一直发挥着重要的作用。溃疡性结肠炎是现代医学的病名，中医古籍虽无明确的概念，但根据本病的临床特征，主要相当于中医内科学的“痴疾”、“泄泻”“久利”等病的范畴。在“天人相应”、“辨证论治”、“整体观念”等中医学的理论指导下，中医学认为，溃瘍性结肠炎的病位虽然在大肠，但与脾、肾、胃、肝等密切相关，病理因素主要有湿热、气滞、疲血，总属本虚标实；发病的机制是在先天禀赋不足，脾胃虚弱的基础上，感受湿热邪气，气血相搏，通降不利，血行疲滞，肠道脂膜受损，内溃为疡。本申请人在参照《溃疡性结肠炎中医诊疗共识意见》《溃疡性结肠炎中西医结合诊疗共识》等指南的基础上，灵活应用辨病、辨证相结合的诊疗模式和实践经验，提出了一种异型莎草提取物在治疗溃疡性结肠炎中的应用。技术实现要素：本发明的目的是提供一种异型莎草提取物在治疗溃疡性结肠炎中的应用。所述的应用是将异型莎草提取物与硫唑嘌呤作为有效活性成分与药学上可接受的辅料按传统方法制成药剂，应用到治疗溃疡性结肠炎中。所述药剂中异型莎草提取物与硫唑嘌呤的重量比为9:5。所述药剂中有效活性成分的含量在9-13%之间。所述药剂可为药学或食品领域或保健食品领域各种常用剂型，例如颗粒剂、粉剂、胶囊剂、片剂、汤剂、散剂或口服液等。所述可接受的载体是指药学或食品领域或保健食品领域常规的载体，选自填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、润湿剂、色素、香精、稀释剂、表面活性剂或矫味剂中的一种或几种。所述填充剂包括乳糖、淀粉、甘露醇、糊精、葡萄糖、蔗糖、或微晶纤维素中的一种或任意两种以上的组合。所述润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、硬脂酸富马酸钠、微粉硅胶中的一种或几种。所述助流剂包括微粉硅胶、滑石粉中的一种或两种组合。适量的助流剂能使填充剂具有更好的助流作用和润滑作用，为后面的压片也提供良好的基础。所述粘合剂包括羟丙基纤维素、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、乙基纤维素或羧甲基纤维素钠中的一种或任意两种以上的组合。所述崩解剂选自交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠中的一种或几种。所述表面活性剂选自十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐温)等。所述稀释剂选自无水乳糖、微晶纤维素、甘露醇、山梨醇、预胶化淀粉中的一种或多种。本发明的药剂还可以根据需要添加着色剂、矫味剂等辅料，以提高患者的适应性。其中，着色剂可使片剂美观且易于识别，矫味剂可改善片剂的口味，缓和或消除药物不良味道，增加适口性。所述异型莎草为一年生草本，根为须根。秆丛生，稍粗或细弱，高2-65厘米，扁三稜形，平滑。叶短于秆，宽2-6毫米，平张或折合；叶鞘稍长，褐色。苞片2枚，少3枚，叶状，长于花序；具3-9个辐射枝，辐射枝长短不等最长达2.5厘米，或有时近于无花梗；头状花序球形，具极多数小穗，直径5-15毫米；小穗密聚，披针形或线形，长2-8毫米，宽约1毫米，具8-28朵花；小穗轴无翅；鳞片排列稍松，膜质，近于扁圆形，顶端圆，长不及1毫米，中间淡黄色，两侧深红紫色或栗色边缘具白色透明的边，具3条不很明显的脉；雄蕊2，有时1枚，花药椭圆形，药隔不突出于花药顶端；花柱极短。小坚果倒卵状椭圆形，三稜形，几与鳞片等长，淡黄色。花果期7-10月。所述异型莎草提取物的制备方法：把洗净的异型莎草提取物自然风干后机械打碎，粉碎好的异型莎草加入到体积比为70％的乙醇水溶液中，超声波功率为600w，料液质量比为1∶25，在温度为45℃条件下超声提取60min后过滤，得含提取物的第一滤液及滤渣；将滤渣重新加入到体积比为70％的乙醇水溶液中，在60℃、超声波功率为1000w、料液质量比为1∶15的条件下，超声浸提120min后过滤得第二滤液；合并第一滤液和第二滤液；将合并所得的滤液采用高速离心的方法进一步分离，离心速度为5000r/min，离心30min，分离出上层清液和沉淀；上层清液通过减压蒸馏浓缩，低温烘干，得膏状粗制异型莎草提取物。将得到的膏状粗制异型莎草提取物用去离子水溶解，加入大孔吸附树脂柱，控制流速在3ml/min，待吸附饱和后，先以去离子水冲洗树脂柱，洗去杂质，再用ph值为4，体积比为75％的乙醇水溶液洗脱；得到的洗脱液进行减压蒸馏浓缩，得异型莎草提取物。本发明有益效果：将异型莎草提取物作为有效活性成分来治疗溃疡性结肠炎是其一项新用途，目前还未见报道，更未见将异型莎草提取物与硫唑嘌呤作为有效活性成分用来治疗溃疡性结肠炎的报道。本发明药剂无毒副作用，疗效显著，使用安全、方便。异型莎草提取物对溃疡性结肠炎模型大鼠炎症细胞因子的影响。1、实验动物sd大鼠70只，spf级雄性，体重（130±10）g，由山东中医药大学实验室饲养。动物室为清洁级，环境温度（25±4）摄氏度，相对湿度50-70％，普通饲料喂养，每天定时清洁、更换大鼠饮用水及添加饲料。适应性饲养１周后，大鼠活动、粪便等未见明显异常，进行正式实验。随机分为对照组10只和模型组60只。2、动物造模将模型组大鼠普通词料适应性饲养７天后，构建三硝基苯磺酸诱导的溃疡性结肠炎动物模型：造模前大鼠禁食不禁水12小时，模型组大鼠以５％水合氯醛0.6ml/100g腹腔注射麻醉后固定。将直径约２mm、长约13cm的输液软管用肥皂水润滑后，从大鼠肛口经肠道逆行较缓插入结肠深度约８cm处，按照体重100mg／kg三硝基苯磺酸加入等体积50％乙醇混合，将混合液用一次性注射器缓慢推入大鼠结肠内，然后注入约0.5ml空气。将大鼠头向下倾斜45o放置３min后，使大鼠保持平躺至自然清醒。第2周、第4周重复上述造模方法一次。正常组大鼠按上述方法给予等量生理盐水灌肠。造模后第5天，从模型组随机抽取２只大鼠，正常姐随机抽取２只大鼠，腹腔注射５％水合氯醛（0.6ml/100g）将大鼠麻醉后，颈椎脱白处死。切开腹腔，暴露腹腔内容物，分离结肠，距肛门２cm处向上剪取６cm结肠，沿肠系膜纵轴剖开肠管，肉眼观察结肠损伤情况。在肉眼观察损伤最明显处取长为1.5ｍ结肠，经生理盐水冲洗后置于10％的甲醛溶液中固定，观察模型是否成功。将造型成功的60只大鼠随机分为实验组、治疗组、观察组，每组20只。3、给药方法从证实造模成功后的第1天开始，治疗组每日给予本发明的药剂按照4mg/kg的量每天灌胃一次，实验组每日给予硫唑嘌呤按照4mg/kg的量每天灌胃一次，观察组给予异型莎草提取物按照4mg/kg的量每天灌胃一次，对照组每天灌胃生理盐水2ml。4、标本采集及处理治疗１周后，大鼠眼球取血一次，治疗２周结束后，实验动物禁食不禁水过夜，次日给予10％水合氯醛0.5mg／100ｇ腹腔注射麻醉后，迅速剖开大鼠胸腔，采血6-9ml，静置5小时后，离心取上清液，根据各检测指标分装后置于-80℃冰箱保存备用检测；切开腹腔，暴露腹腔内容物，分离结肠，距肛门2cm处向上剪取６cm结肠，沿肠系膜纵轴剖开肠管，肉眼观察结肠损伤情况。在肉眼观察损伤最明显处取长为1.5cm结肠，再截成长约1.2cm和0.3cm两段，其中1.2cm段经生理盐水冲洗后置于10％的甲醛溶液中固定，0.3cm段经生理盐水冲洗后置于３％的戊二醛溶液中固定。5、实验结果造模期间，与对照组相比，模型组大鼠24小时后出现黄色稀便，部分见血便伴精神萎靡，蜡缩懒动，扎堆现象，反应迟鈍，造模后２周，粪便质地开始恢复正常。第３周、第５周造模后，重复出现上述情况，伴毛色萎黄无光泽，后期甚至出现斑片状脱毛，体重增长缓慢。对照组大鼠状况良好，反应敏捷，活泼好动，毛色光泽，大便量色质正常，进食饮水如常，体重随饲养时间逐渐增加。给药2周后，模型组体重与对照组相比仍有明显偏轻；治疗组体重有很好恢复，实验结果见下表。组别日给药剂量雌鼠体重雄鼠体重对照组-278±16338±16治疗组4mg/kg276±15340±17实验组4mg/kg190±19243±19观察组4mg/kg168±12200±13给药期间，各组大鼠体重均呈现逐渐增加趋势，但观察组、实验组较对照组增长缓慢，有统计学差异；治疗组较对照组无统计学差异。在实验过程中实验组2只，观察组３只死亡。死亡主要原因为造模后体弱、消瘦，逐渐体力不支死亡，解剖后发现结肠严重粘连，考虑为肠梗阻导致死亡。治疗组无死亡现象。大鼠结肠组织病理学改变对照组：肉眼可见结肠表面光滑，血管纹理清晰，无充血水肿，与周围组织无粘连，容易分离，肠腔內无脓血样分泌物，结肠黏膜光滑，质地较初富有弹性，不易碎。结肠组织he染色可见粘膜柱状上皮、固有层及粘膜肌层结构完好，未见变性、坏死脱落，以及无増生肠化及鱗状化生。观察组：肉眼可见结肠腔内胀气，肠壁变薄，局部质地变硬，甚至与周围组织粘连，不易分离，肠腔内有化血稀便残留，血管纹理模糊，充血水肿，结肠黏膜散在点状糜烂，溃瘍，部分炎细胞扩展至粘膜下层，粘膜肌层轻度增厚。治疗组：治疗组与对照组大体形态学相似。实验组：结肠组织形态学与中药治疗组相似。he染色结肠粘膜固有层有少许炎细胞浸润，未见粘膜肌层增厚及粘膜下层充血水肿。大鼠结肠组织il-1β的表达（±s）结果显示，与对照组相比，观察组大鼠结肠组织il-1β表达明显增多；与对照组相比，治疗组大鼠结肠组织il-1β表达无明显变化；与对照组相比，实验组大鼠结肠组织il-1β表达有增加。具体实验数据如下表。大鼠结肠组织il-1β表达的变化（±s）组别只数od（±s）对照组10只0.1125±0.0107治疗组20只0.1431±0.0102实验组18只0.2317±0.0105观察组17只0.3540±0.0142大鼠结肠组织il-6的表达（±s）结果显示，与对照组相比，观察组大鼠结肠组织il-6表达明显升高；与对照组相比，治疗组大鼠结肠组织il-6表达无明显变化；与观察组相比，实验组大鼠结肠组织il-6表达降低。具体实验数据如下表。大鼠结肠组织il-6表达的变化（±s）组别只数od（±s）对照组10只0.1251±0.0134治疗组20只0.1289±0.0144实验组18只0.1899±0.0176观察组17只0.2824±0.0133大鼠结肠组织il-8的表达结果显示，与对照组相比，观察组大鼠结肠组织il-8表达明显升高；与对照组相比，治疗组大鼠结肠组织il-8表达无明显变化；与观察组相比，实验组大鼠结肠组织il-8表达降低。具体实验数据如下表。组别只数od（±s）对照组10只0.1890±0.0171治疗组20只0.1799±0.0275实验组18只0.2811±0.0155观察组17只0.4156±0.0179不同时间点大鼠血清tnf-a的含量表达。对照组大鼠血清中有一定量的tnf-a的表达；不同时间点治疗组tnf-a的表达较对照组无明显变化；与对照组比较，不同时间点实验组和观察组的tnf-a表达升高；观察组更为明显。组别只数第7天（pg/ml）第14天（pg/ml）对照组10只51.543±12.56854.896±13.875治疗组20只55.178±14.73656.342±14.257实验组18只115.783±14.863101.546±18.354观察组17只154.538±15.364138.752±16.324本实验过程中，对照组大鼠状况良好，反应敏捷，活泼好动，毛色光泽，大便量、色、质正常，进食饮水如常，体重随饲养时间逐渐增加。模型组大鼠造模后出现黄色稀便，部分见血便伴精神萎靡，滕缩懒动，礼堆现象，反应迟纯，伴毛色萎黄无光泽，后期甚至出现斑片状脱毛，体重增长缓慢。其中治疗组大鼠经过治疗，血便、腹泻逐渐好转，体重明显増加，精神、活动情况明显好转，说明经过治疗后，症状缓解，病情逐渐好转，说明本发明药剂具有良好控制炎症的作用，使肠粘膜炎症逐渐愈合。观察组与实验组无论是大鼠外部特征还是实验数据，都与对照组具有明显的差异，实验结果不理想。由此可知，单独使用异型莎草提取物或硫唑嘌呤，实验结果不理想；而治疗组中将异型莎草提取物与硫唑嘌呤按照一定比例混用取得了理想的使用效果；说明了异型莎草提取物与硫唑嘌呤具有协同增效作用。临床资料1、一般资料病例均为本院门诊及住院患者180例，其中男98例，女82例；年龄19-65岁，病程1-16个月。在患者知情和自愿的基础上，用本发明药剂加以治疗的为治疗组，只用市售硫唑嘌呤片加以治疗的为对照组，各组分别为90例。统计学对比各组患者年龄、性别、病程无显著性差异（p<0.05）可以进行对比研究。2、诊断标准西医诊断标准：参照1993年太原全国“慢性非感染性肠道疾病学术研讨会”标准。中医诊断标准：参照《中药新药临床研究指导原则》（2002年5月第1版）。3、治疗方法治疗组服用本发明制成的药剂，成人用剂量为一日2片，一日一次，每片含50mg有效成分。对照组服用市售硫唑嘌呤片，按照说明书口服。两组均2周为1个疗程，各组用两个疗程后统计疗效。4、疗效标准治愈：临床症状、体征完全消失，检查结肠黏膜病变恢复正常或遗留疤痕；显效：临床症状、体征基本消失，检查结肠黏膜病变有所减轻；无效：临床症状、体征无改善，检查结肠黏膜病变无变化或加重。5、疗效结果各组服药两个疗程后，比较结果。组别例数日服药量治愈显效无效复发率副作用总有效率（%）治疗组90100mg5832000100对照组90100mg253629619例67.77通过以上临床资料可知，治疗组总有效率明显高于对照组，而且毒性降低，没有出现毒副作用，无复发；对照组有6例复发，19例出现不同程度的副作用，严重影响患者的治疗和生活质量。由此可知，本发明的药剂具有协同增效作用，值得临床推广应用。具体实施方式一种异型莎草提取物在治疗溃疡性结肠炎中的应用，所述的应用是将异型莎草提取物与硫唑嘌呤按照重量比为9:5的比例，加入填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、润湿剂、色素、香精、稀释剂、表面活性剂或矫味剂中的一种或几种，按传统方法制成药剂，应用到治疗溃疡性结肠炎中。所述药剂中有效活性成分的含量在9-13%之间。所述异型莎草提取物制备，将异型莎草自然风干后机械打碎，粉碎好的异型莎草加入到体积比为70％的乙醇水溶液中，超声波功率为600w，料液质量比为1∶25，在温度为45℃条件下超声提取60min后过滤，得含提取物的第一滤液及滤渣；将滤渣重新加入到体积比为70％的乙醇水溶液中，在60℃、超声波功率为1000w、料液质量比为1∶15的条件下，超声浸提120min后过滤得第二滤液；合并第一滤液和第二滤液；将合并所得的滤液采用高速离心的方法进一步分离，离心速度为5000r/min，离心30min，分离出上层清液和沉淀；上层清液通过减压蒸馏浓缩，低温烘干，得膏状粗制异型莎草提取物。将得到的膏状粗制异型莎草提取物用去离子水溶解，加入大孔吸附树脂柱，控制流速在3ml/min，待吸附饱和后，先以去离子水冲洗树脂柱，洗去杂质，再用ph值为4，体积比为75％的乙醇水溶液洗脱；得到的洗脱液进行减压蒸馏浓缩，得异型莎草提取物。当前第1页12