丙草胺的免疫胶体金检测卡及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及谷物食品中农药残留检测技术领域，特别是涉及丙草胺的免疫胶体金 检测卡及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 丙草胺是具有高温选择性的水稻田专用除草剂。对水稻安全，杀草谱广。杂草种 子在发芽过程中吸收药剂，根部吸收较差。该品为芽前除草剂，主要用于防除禾本科杂草。 产品属2-氯化乙酰替苯胺类除草剂，是细胞分裂抑制剂，用于土壤处理可防除稻田稗草、 异型莎草、牛毛毡、鸭舌草、窄叶泽泻等。具有一定的毒性，因此安全问题受到高度重视。国 标中规定大米中为0.1 mg/kg。因此定期对丙草胺残留进行检测成为许多国家的监控的必 要手段。
[0003] 现有技术对于丙草胺的检测主要是气相色谱-质谱法、高效液相色谱法等检测方 法，但这些技术的缺陷明显：设备昂贵、操作复杂、难以推广。所以，建立一种简单、有效、适 合基层使用的测定方法是极其必要的。本发明的目的是研制一种更适合企业进行现场检测 且快捷简便、成本低廉的定性检测方法。
【发明内容】
[0004] 针对以上情况，本发明的目的就是为了克服现有技术存在的缺陷而提供一种丙草 胺的免疫胶体金检测卡及其制备方法，可有效解决能快速、简便地检测出丙草胺的问题。
[0005] 本发明的丙草胺胶体金检测卡，包括包被了单克隆抗体胶体金标记物的胶体金结 合垫、包被了丙草胺-BSA和羊抗鼠 IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、PVC胶板和塑料 模具组成，在PVC胶板的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜，另一端粘 附吸水垫。
[0006] 本发明的丙草胺胶体金检测卡的制备方法，是由以下步骤实现： (1) 胶体金溶液制备：取1 L三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸 (HAuC14*3H20) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况 下加入1%柠檬酸三钠（Na3C6H 507 · 2H20)溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变 为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8°C保存备用； (2) 抗体的预处理：将要标记的丙草胺抗体在1000 r/min, 4°C条件下，离心20 min, 取上清，用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/mL;或者用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/ml，过 0. 22 Mm 滤膜； ⑶胶体金标记物的制备：取步骤⑴中的胶体金溶液40 mL，用0. 25 mol/L K2C03调 节胶体金溶液pH至8. 5,电磁搅拌器250 r/min搅拌，逐滴加入4 mL含0.3 mg抗体蛋白 的蛋白溶液，反应10 min;逐滴加入4 mL 10% BSA，继续搅拌反应10 min;金标抗体溶液常 温低速（1500 r/min)离心10 min,弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4°C, 12000 r/min离心20 min,弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1 mL,制备 成丙草胺单克隆抗体胶体金标记物； (4) 胶体金膜的制备：将步骤（3)丙草胺蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划 膜仪以5 PL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37°C烘干3 h，制 成含丙草胺蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜； (5) 包被膜制备：将羊抗鼠 IgG抗体、丙草胺蛋白质偶联物稀释成1 mg/mL，用划膜仪依 次以1 PL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37°C包被2 h后，室温自然晾 干或者37 °C烘干； (6) 样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60% 的条件下，室温自然晾干； (7) 检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组 装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。
[0007] 所述步骤（5)中所包被的检测线T设在质控线C的下方； 所述步骤（6)中的样品垫处理液是由1 g小牛血清蛋白（BSA)和0. 8 g氯化钠（NaCl), 用含有 0· 5%TRIT0N-100 的 0· 01 mol/L PBS 定容至 100 mL ; 本发明可有效用于测定丙草胺，方法简单，方便、快捷，结果准确。
【附图说明】
[0008] 图1为本发明丙草胺的免疫胶体金检测卡的结构图：图中1.加样孔 2.检测线 3.质控线4.检测孔5.试纸条6.检测卡外壳。
[0009] 图2为本发明丙草胺的免疫胶体金检测卡内的试纸条的剖视结构图，图中7.样品 垫8.胶体金结合垫9. PVC胶板10.硝酸纤维素膜11.吸水垫。
【具体实施方式】
[0010] 实施例1 图1、图2所示的实施例：图中9为PVC胶板；7为样品垫；8为胶体金结合垫，该胶体金 结合垫上包被了单克隆抗体胶体金标记物；10为包被膜，即硝酸纤维素膜，该硝酸纤维素 膜上包被了丙草胺-BSA和羊抗鼠 IgG ;11为吸水垫，由吸水材料如滤纸制成。
[0011] 在PVC胶板9的一端上（样品端）粘附样品垫7、结合垫8,样品垫7和结合垫8 为并排结构。
[0012] 在PVC胶板9的中间粘附硝酸纤维素膜10。在硝酸纤维素膜10上设置有羊抗鼠 IgG质控线3和丙草胺-BSA检测线2。
[0013] 在PVC胶板9的另一端粘附吸水垫11。硝酸纤维素膜10的一端与结合垫8略交 叉，另一端与吸水垫11略交叉。该试纸条5可装入有塑料模具制成的检测卡外壳6中，制 成检测卡，在检测卡外壳6的上盖上设有加样孔1和检测孔4,样品垫7正对加样孔1，硝酸 纤维素膜10正对检测孔4。
[0014] 实施例2 丙草胺胶体金检测卡制备，是由以下步骤具体实现： 胶体金溶液制备：取1 L三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸 (HAuC14*3H20) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况 下加入1%柠檬酸三钠（Na3C6H507 · 2H20)溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变 为透明的紫红色时，维持5 mi