盐酸赛庚啶的免疫胶体金检测卡及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及动物源食品添加剂检测技术领域，特别是涉及盐酸赛庚巧的免疫胶体 金检测卡及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 盐酸赛庚巧（切proheptadinehy化ochloride,分子式；C21H21N·肥1)是一种抗组 胺药，具有抗5-HT、阻断H1受体及抗胆碱作用，主要用于治疗専麻疹、湿疹、 接触性皮炎、皮肤瘦痒、过敏性鼻炎等，其常见的副作用为轻、中度的嗜睡、头昏、乏力、口干 等。食用含有盐酸可乐定和盐酸赛庚巧残留的动物源性产品，对人体健康具有一定的危害 性。农业部于2010年12月27日发布1519号公告，禁止在饲料和动物饮水中使用盐酸可乐 定和盐酸赛庚巧。但在饲料安全预警预测监测工作中，发现国内某些饲料产品添加盐酸赛 庚巧。因此，加强对盐酸赛庚巧残留的检测迫在眉睫。目前对它们的研究主要在医药领域， 仅有饲料中盐酸赛庚巧的检测标准方法，而动物尿液和动物组织中残留的相应检测方法和 限制标准未见研究报道，由此造成了食品安全监测的盲区。检测动物尿液中盐酸赛庚巧的 含量显得更直接、方便，且可实现宰前检测，为及时排除食品安全隐患，保障食品的质量安 全，特开展本试验方法研究。
[0003] 现有技术对于盐酸赛庚巧的检测主要是高效液相色谱-串联质谱法、高效液相色 谱法等检测方法，但送些技术的缺陷明显；设备昂贵、操作复杂、难W推广。所W，建立一种 简单、有效、适合基层使用的测定方法是极其必要的。本发明的目的是研制一种更适合企业 进行现场检测且快捷简便、成本低廉的定性检测方法。
【发明内容】
[0004] 针对W上情况，本发明的目的就是为了克服现有技术存在的缺陷而提供一种盐酸 赛庚巧的免疫胶体金检测卡及其制备方法，可有效解决能快速、简便地检测出目-肾上腺 素受体激动剂盐酸赛庚巧的问题。
[0005] 本发明的盐酸赛庚巧胶体金检测卡，包括包被了单克隆抗体胶体金标记物的胶体 金结合垫、包被了盐酸赛庚巧-BSA和羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、PVC胶 板和塑料模具组成，在PVC胶板的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜， 另一端粘附吸水垫。
[0006] 本发明的盐酸赛庚巧胶体金检测卡的制备方法，是由W下步骤实现： (1) 胶体金溶液制备：取1LΗ角烧瓶1个，加入超纯水495血，而后加入1%氯金酸 (HAuCl4'3H2〇) 5血，配制成500血0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续揽拌的情况 下加入1%巧樣酸Η钢（NasOftOy· 2&0)溶液5-7mU继续揽拌加热，当溶液的颜色完全变 为透明的紫红色时，维持5min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8°C保存备用； (2) 抗体的预处理：将要标记的盐酸赛庚巧抗体在1000r/min, 4°C条件下，离必20 min,取上清，用 0. 01mol/LPBS稀释成 1mg/mL;或者用 0. 01mol/LPBS稀释成 1mg/ml, 过0.22化滤膜； 做胶体金标记物的制备；取步骤（1)中的胶体金溶液40mL，用0. 25mol/LK2C03调 节胶体金溶液抑至8. 5,电磁揽拌器250r/min揽拌，逐滴加入4血含0.3mg抗体蛋白 的蛋白溶液，反应10min;逐滴加入4血10%BSA，继续揽拌反应10min;金标抗体溶液常 温低速（1500r/min)离必10min,弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4°C， 12000r/min离必20min,弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1血，制备 成盐酸赛庚巧单克隆抗体胶体金标记物； (4) 胶体金膜的制备；将步骤（3)盐酸赛庚巧蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物 用划膜仪W5化/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然瞭干或者37Γ烘干3 h，制成含盐酸赛庚巧蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜； (5) 包被膜制备；将羊抗鼠IgG抗体、盐酸赛庚巧蛋白质偶联物稀释成1mg/mU用划膜 仪依次W1化/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37°C包被2h后，室温自 然瞭干或者37 °C烘干； (6) 样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60% 的条件下，室温自然瞭干； (7) 检测卡的组装；PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组 装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。
[0007] 所述步骤巧）中所包被的检测线T设在质控线C的下方； 所述步骤（6)中的样品垫处理液是由1g小牛血清蛋白度SA)和0.8g氯化钢（化C1)， 用含有0. 5%TRIT0N-100的0. 01 mol/L PBS定容至100血； 本发明可有效用于测定β-肾上腺素受体激动剂盐酸赛庚巧，方法简单，方便、快捷， 结果准确。
【附图说明】
[000引图1为本发明盐酸赛庚巧的免疫胶体金检测卡的结构图；图中1.加样孔2.检 测线3.质控线4.检测孔5.试纸条6.检测卡外壳。
[0009]图2为本发明盐酸赛庚巧的免疫胶体金检测卡内的试纸条的剖视结构图，图中 7.样品垫8.胶体金结合垫9.PVC胶板10.硝酸纤维素膜11.吸水垫。
【具体实施方式】
[0010] 实施例1 图1、图2所示的实施例：图中9为PVC胶板；7为样品垫；8为胶体金结合垫，该胶体金 结合垫上包被了单克隆抗体胶体金标记物；10为包被膜，即硝酸纤维素膜，该硝酸纤维素 膜上包被了盐酸赛庚巧-BSA和羊抗鼠IgG;11为吸水垫，由吸水材料如滤纸制成。
[0011] 在PVC胶板9的一端上（样品端）粘附样品垫7、结合垫8,样品垫7和结合垫8 为并排结构。
[0012] 在PVC胶板9的中间粘附硝酸纤维素膜10。在硝酸纤维素膜10上设置有羊抗鼠 IgG质控线3和盐酸赛庚巧-BSA检测线2。
[0013] 在PVC胶板9的另一端粘附吸水垫11。硝酸纤维素膜10的一端与结合垫8略交 叉，另一端与吸水垫11略交叉。该试纸条5可装入有塑料模具制成的检测卡外壳6中，制 成检测卡，在检测卡外壳6的上盖上设有加样孔1和检测孔4,样品垫7正对加样孔1，硝酸 纤维素膜10正对检测孔4。
[0014]实施例2 盐酸赛庚巧胶体金检测卡制备，是由W下步骤具体实现： 胶体金溶液制备：取1LΗ角烧瓶1个，加入超纯水495111以而后加入1%