氯金酸 (HAuCl4'3H2〇) 5血，配制成500血0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续揽拌的情况 下加入1%巧樣酸Η钢（NasOftOy· 2&0)溶液5-7mU继续揽拌加热，当溶液的颜色完全变 为透明的紫红色时，维持5min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8°C保存备用； 抗体的预处理：将要标记的盐酸赛庚巧抗体在1000r/min, 4°C条件下，离必20min, 取上清，用0. 01mol/LPBS稀释成1mg/mL;或者用0. 01mol/LPBS稀释成1mg/ml，过 0.22Mm滤膜； 胶体金标记物的制备；取步骤（1)中的胶体金溶液40血，用0.25mol/LK2C03调节胶 体金溶液抑至8. 5,电磁揽拌器250r/min揽拌，逐滴加入4血含0.3mg抗体蛋白的蛋 白溶液，反应10min;逐滴加入4血10%BSA，继续揽拌反应10min;金标抗体溶液常温低 速（1500r/min)离必10min,弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4°C，12000 r/min离必20min,弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1血，制备成盐酸 赛庚巧单克隆抗体胶体金标记物； 胶体金膜的制备：将步骤（3)盐酸赛庚巧蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划 膜仪W5化/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然瞭干或者37°C烘干3h，制 成含盐酸赛庚巧蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜； 包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、盐酸赛庚巧蛋白质偶联物稀释成1111邑/1^，用划膜仪 依次化/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37°C包被2h后，室温自然 瞭干或者37 °C烘干； 样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的 条件下，室温自然瞭干； 检测卡的组装；PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装 成试纸条，切割成一定宽度长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。
[001引 实施例3 盐酸赛庚巧最低检出限量试验 准确称量0. 500g盐酸赛庚巧抗原溶于超纯水并定容至100 mU标为Ai溶液，取Ai溶 液1 mL于容量瓶加超纯水并定容至1000 mU形成Az溶液，取Az溶液1 mL于容量瓶加超 纯水并定容至1000 mU形成As溶液，则A3溶液的浓度为5 ng/mU5ppb)。取As溶液1 mL 于4支试管中，并分别标号广4,往试管中分别加入往9 mL、4 mL、l mL、0 mL超纯水，配成 盐酸赛庚巧抗原溶液浓度分别是；0.5 ng/mL、l ng/mL、2. 5 ng/mL、5 ng/mL;另取一支空试 管，加入5 mL超纯水，标为5号试管。取上述广5号试管中液体作为样品滴加到盐酸赛庚 巧检测卡上，加样后5 min观察结果，检测线2和质控线3的显色结果见表1。
[0016]表1盐酸赛庚巧最低检出限量试验
经多次检验，盐酸赛庚巧的检出率达99%，最低检出限量为5 ng/血。
【主权项】
1. 盐酸赛庚啶胶体金检测卡，其特征在于按照下述步骤制备得到： (1) 胶体金溶液制备：取1L三角烧瓶1个，加入超纯水495mL，而后加入1%氯金酸HAuC14*3H20)5mL，配制成500mL0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下 加入1%柠檬酸三钠Na3C6H507 · 2H20溶液5-7mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透 明的紫红色时，维持5min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8°C保存备用； (2) 抗体的预处理：将要标记的盐酸赛庚啶抗体在1000r/min，4°C条件下，离心20 min,取上清，用 0.01mol/LPBS稀释成 1mg/mL;或者用 0.01mol/LPBS稀释成 1mg/ml， 过0. 22Mm滤膜； ⑶胶体金标记物的制备：取步骤⑴中的胶体金溶液40mL，用0. 25mol/L1(20)3调 节胶体金溶液pH至8. 5,电磁搅拌器250r/min搅拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白 的蛋白溶液，反应10min;逐滴加入4mL10%BSA，继续搅拌反应10min;金标抗体溶液常 温1500r/min离心10min,弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4°C，12000r/ min离心20min,弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1mL,制备成盐酸赛 庚啶单克隆抗体胶体金标记物； (4) 胶体金膜的制备：将步骤（3)盐酸赛庚啶蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物 用划膜仪以5PL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37°C烘干3 h，制成含盐酸赛庚啶蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜； (5) 包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、盐酸赛庚啶蛋白质偶联物稀释成1mg/mL，用划膜 仪依次以1KL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37°C包被2h后，室温自 然晾干或者37 °C烘干； (6) 样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60% 的条件下，室温自然晾干； (7) 检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组 装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。2. 根据权利要求1所述的盐酸赛庚啶胶体金检测卡，其特征在于所述步骤（5)中所包 被的检测线T设在质控线C的下方； 所述步骤（6)中的样品垫处理液是由1g小牛血清蛋白（BSA)和0. 8g氯化钠（NaCl), 用含有 0· 5%TRIT0N-100 的 0· 01mol/LPBS定容至 100mL。
【专利摘要】本发明盐酸赛庚啶的免疫胶体金检测卡及其制备方法,涉及β-肾上腺素受体激动剂检测技术领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含盐酸赛庚啶单克隆抗体的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线，T线包被有盐酸赛庚啶蛋白质偶联物，C线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明有效用于快速检测盐酸赛庚啶，方便、快捷、结果准确。
【IPC分类】G01N33/577
【公开号】CN105277706
【申请号】CN201410356401
【发明人】洪霞, 薛永来
【申请人】江苏维赛科技生物发展有限公司
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2014年7月25日